全 文 ：2.4箭麻自身蓄积养分对种子形成的作用 天麻正常株开
花授粉后,从其种子形成动态可看出三个问题:一是天麻上、中、
下整株蒴果大小基本相同,最终均能正常成熟,即使顶端也能形
成一定大小且正常成熟的蒴果,说明天麻属有限花序植物,在栽
植繁种管理中无需打顶。二是蒴果采收后挖出植株观察,地下箭
麻仅部分变空,仍留有40%~50%的新鲜麻肉,说明箭麻生理成
熟后,其自身蓄积养分,供给整株种子正常成熟后还有富余。三
是试验是在未伴栽蜜环菌条件下进行的,由此表明,箭麻栽植后
供给种子形成的养分已不再与蜜环菌的活动有关。
2.5天麻种子和种胚的形态观察及大小测量 镜下观察天
麻种子长纺锤形,胚桃核形,上端尖,无胚乳;种皮膜质透明,
为单细胞组成,细胞略显呈长方形。成熟的蒴果将种子脱出堆
积肉眼观察,可见膨大果有胚种子为棕红色,瘦果无胚种子则
显乳白色。据此认为,种子颜色应可作为判定种子质量的外观
标准。镜检种胚,可见初收下种子的种胚有棕红色和近黑色两
种,随着贮藏时间的拖长,均变成棕红色。此种现象能否作为
判定种子新鲜程度的根据,有待进一步研究。
镜下显微测量天麻种子及种胚的大小,有胚种子长宽变
幅(473~851)μm×(149～270)μm,平均 637μm×192μm,无胚
种子偏小,长宽变幅 (338~540)μm×(135~189)μm,平均
449μm×156μm;测量种胚的大小,长宽变幅(148~222)μm×
(68~109)μm,平均183μm×82μm。
2.6天麻产种量的测定 测定正常成熟蒴果的单果产籽数,
变幅 10953~32742粒,平均 1742粒;测定单果产籽重量,
平均单果重 17.4mg,按平均单株成彭大果 58个/株计,则每
株可产种子1g。
柞蚕蛹虫草栽培技术
马文石 李凤芹 金 英
(吉林省蚕业科学研究所,吉林永吉132200)
文章编号 1000-8357(2008)04-0045-02
蛹虫草(Cordceps militarisc(L)Linr又称北冬虫夏草,
是麦角菌科虫草属的模式种。经研究证明蛹虫草的化学
成分与冬虫草基本相同,并具有抗疲劳、提高机体免疫
力、抑制肿瘤等作用。因此,国内外有关单位争相研究开
发和利用。
用柞蚕蛹成功培育出蛹虫草,有自然感染法(吉林省蚕业
科学研究所1993年获国家发明专利)和人工注射法。注射法
的栽培工艺繁杂,条件要求严格,绝大多数厂家还是用自然感
染法进行小批量生产。经4年(1994-1997年)生产实践,出草
率低 (不足 30%),产草量远远满足不了制药生产的需要。
1998年笔者进行提高出草率的研究,依据柞蚕蛹不同阶段的
生理状态,真菌致使柞蚕罹病原理,蛹虫草的生长特性,以注
射法为基准,对蚕蛹的选择,菌种制作,注射方法,发菌出草的
条件等,进行了深入的研究,取得了一些行之有效的技术参
数。于2001年在吉林东北虎制药厂进行中间试验,用注射法
接种柞蚕蛹 143.3万粒,获得蛹虫草 72.87万株(一粒蛹为一
株草),出草率为50.9%,比自然感染法(30%)提高 20.9%。从
接种到采草仅用 45d,比自然感染法(65 d)缩短 20 d。又经
6年(2002-2007年)实践和完善,目前出草率达 75%以上,达
到了高产、节能、增效之目的。现将柞蚕蛹虫草栽培技术总结
如下,以供大家参考。
1 栽培模式
柞蚕蛹虫草的栽培,所用的蚕蛹必须是柞蚕滞育蛹,在保
蛹期间不能发育。注射接种,是用针刺破几丁质的蛹皮,注入
蛹虫草菌,这就要求液体菌种不能有杂菌和过多固形物,因此
培养基要彻底的灭菌和澄清。蛹虫草菌又是低温型的真菌,根
据它的生物学特性,运用控温、调湿、补光等措施,使之适合于
蛹虫草生长的需要。分批接种、发菌、出草,往复循环。这样从
翌 12月 15日-翌年 3月 15日用柞蚕蛹生产柞蚕蛹虫草,
6月 15日-10月 15日用培养基生产蛹虫草,既提高了房屋
的利用率,又达到长年栽培蛹虫草之目的。
2 栽培设备
2.1栽培房屋 栽培用房的位置应座北向南,地势高燥,通
风良好,采光时间长,有利保温、调湿与通风,上下水道贯通,
电力充足。栽培蛹虫草所需主要房间,按工作先后次序一字排
开,即器具洗刷室(内设水槽、臭氧机)、菌种制作室(内设高压
灭菌器、摇床、恒温箱)、消毒室(消毒蚕蛹、塑料盘、罐头瓶
等)、接种室(内设紫外灯、超净工作台)、发菌室(内设空调、栽
培架)、出草室(内设空调、栽培架)、库房等。各室之间有内隔
门相连,两室之间应有缓冲间,地面铺设地面砖,四周用水泥
瓷砖贴墙,便于洗刷和消毒。
2.2栽培架 要求坚固结实,既能承重,又便于拆卸、搬运和
消毒。规格内径长140cm,宽60cm,高155cm,分4层,每层
间隔33cm,底层离地面 20cm。四周和间隔的框架用三角铁
制作,用活动螺丝固定,用铁丝网代替隔板,焊在隔板框之内,
每层铁丝网下安装 40 W日光灯 1个。每个架子占地面积
0.84m2,每 100m2面积放架子 90个(包括作业道在内),每个
架子放硬质塑料盘32个或摆罐头瓶300个。
2.3硬质塑料盘 (育水稻苗用的)长 60 cm,宽 35 cm,
边高 6 cm,底面积 2 100 cm2,每盘装蚕蛹 300个左右(雌雄
随机)。
2.4罐头瓶 规格500mL,每瓶装蚕蛹8个(雌雄随机)。
2.5柞蚕蛹茧的准备 栽培蚕蛹虫草所用的蚕蛹必须是滞
育蛹。一化蚕化蛹后直接使用。二化蚕茧自10月上旬采摘回
家,要在20℃温度、17℃温度、13℃温度中各保护20d。经过摇
选将蛹茧放在0℃以上,4℃以下的变温中保护,加深蛹体滞育
程度,延长解除滞育时间。作虫草用茧的标准:千粒茧重10kg
以上(含 10kg),死笼茧率在 1%以下(含 1%),健蛹率达 95%
以上,内染茧 5%以下,目检微粒子 1%以下(含 1%),没有发
育蛹和不成熟蛹。收稿日期:2007-12-28
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食用菌 EDIBLE FUNGI 2008(4)
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3 菌种的选择
选用长势优良、无病虫侵染的子座(子实体),分离提纯,
做出草鉴定后挑选优良菌株,进行栽培;也可到信得过的科研
单位或菌种厂引进优良菌种栽培。
4 室内栽培技术
4.1注射菌种制作
4.1.1培养基配方 葡萄糖 1%,蛋白胨 1%,全脂奶粉 1%,
磷酸氢二钠 0.1%,磷酸二氢钾 0.15%,硫酸镁 0.3%,活蚕蛹
12%,维生素B120mg/L,加水1000mL,pH自然。
4.1.2培养基制作 取活蚕蛹120g,把每个蚕蛹用手撕开,
放入 1000mL冷水中,煮沸后微沸保持 20min,用 4层纱布
过滤,弃去蛹渣留下滤液,用开水定溶1000mL。依次加入硫
酸镁 3g,磷酸二氢钾 1.5g,磷酸氢二钠 1g,蛋白胨 10g,奶
粉10g,充分溶解。然后澄清:作好的液体培养基放在一旁冷
却,打一个鸡蛋清于烧杯中,用筷子搅成泡沫,当培养基冷却
到30℃左右时,把鸡蛋清倒入培养液中,充分搅拌均匀,装
入 2 000mL三角瓶中,塞棉塞,加牛皮纸扎紧瓶口,放入高压
灭菌器,用 0.137MPa125℃保持 0min。打开灭菌器用双层
纱布将澄清液滤出,放入研碎的维生素 B120mg,葡萄糖 10g
搅拌溶解。装瓶灭菌:取500mL三角瓶,装入上述培养基150mL,
放入玻璃球 20粒,加棉塞盖牛皮纸札紧瓶口,放入高压灭菌
器,用0.137MPa125℃灭菌30min。
4.1.3接种培养 灭菌后的培养基,在无菌室内,按无菌操作
规程,用移植铲将斜面母种接入瓶中约 2cm2菌片菌丝面朝
上,放在恒温箱内(25℃)静止培养 24h后,用 150r/min往复
式摇床进行振荡培养。培养96h取样对菌种进行分析检测。
4.1.4合格菌种标准 醪液澄清不混浊,菌球多,形状一致,
发育齐一。用手晃动三角瓶,浮起的菌球 5min不下沉,能嗅
到虫草香味。菌种制成玻片标本,用显微镜检查,有无与虫草
菌丝不一样的微生物。经过一系列的检测,将不被污染的菌种
于第5d(发酵终了前一天)对蚕蛹进行注射接种。
4.2注射接种
4.2.1接种前准备 依据发菌室面积大小,按 1m2摆栽培架
1个,硬质塑料盘32个,装蚕蛹9600粒计算出一次栽培数
量,剖开蚕茧,倒出蚕蛹,剔出头部变色蛹、缩膛蛹、软蛹、翅盖
不严蛹、伤蛹、死蛹一同埋掉,剩下的好蛹备用。将发菌室墙壁
和天棚用石灰浆粉刷一遍。根据需要,栽培架、塑料盘、罐头瓶
经过洗刷摆在室内,再用3%甲醛喷洒,加温25℃密闭消毒24h
备用。依据接种人员数目,每人准备5套一次性1mL的针管
(带 6.5号针头),100mL三角瓶 4个,洗刷干净,瓶口用高压
塑料包好扎紧,将上述用品用牛皮纸包好,用 0.137MPa灭菌
30min备用。
4.2.2注射接种 在消毒室内,将选好的蚕蛹用臭氧水洗
2次,待蛹体表面水稍干,送入接种室。接种者在超净工作台
内,将大三角瓶内液体菌种倒入小三角瓶内,用带针头的针管
吸取菌种,在蚕蛹翅膀和腹部环节交界处,与蛹体平行进针
(向头部),针尖稍向下倾斜,注入 0.1mL菌种, (不可少于
0.08mL大于 0.15mL),迅速与蛹体平行向后抽出针体(后手
不可高抬,否则出血多)。然后把接种后蚕蛹放在消过毒的塑
料盘中。每人每小时约接种蚕蛹350个,接完种后将塑料盘送
发菌室内发菌。
4.3菌丝培养
4.3.1低温避光培养 发菌室在使用前三天,用 3%甲醛进
行消毒,室外过道用石灰封闭地面,发菌室的门窗用黑色塑料
薄膜或窗帘(黑红布做)遮挡。将装蛹的塑料盘分层放在栽培
架上发菌。控制发菌室的温度在16℃左右,湿度60%以上。经
7d培养以后,蚕蛹逐渐开始僵化,把僵化好的蚕蛹随时挑出,
集中放在塑料盘中,转入下一个室内继续培养,未僵化好的蚕
蛹放在原发菌室。
4.3.2提温增菌 促进后熟 挑出来的僵化蛹,送进另外一
个发菌室,继续在避光的条件下发菌。所不同的是,温度提高,
控制在23~24℃,湿度不变,这样再经过7~8d,促使菌丝后
熟,尽早结束菌丝营养生长期,转向生殖生长阶段。判断营养
生长转向生殖生长的主要标志:菌龄达 15~17d;蛹体和环节
间膜处长出白色菌丝;蛹顶由白色变成淡褐色。以上三个指
标,菌龄为参数,后两条必须具备,标志着营养生长结束,转向
生殖生长阶段,就可转入诱导原基形成阶段。
4.4诱导原基与出草管理
4.4.1诱导原基形成 将菌丝营养生长结束的蚕蛹装入瓶
内,通过温差刺激,补光诱发原基尽早形成。首先依据发菌室
的蚕蛹数(每盘蛹约 300个,每个罐头瓶放蚕蛹 7~8个,每个
培养架放罐头瓶300个)准备足够数量的罐头瓶。将罐头瓶洗
刷干净,放在消毒室内(包括扎瓶口的塑料薄膜、绳等),用甲
醛加高锰酸钾熏蒸消毒后备用。其次在上瓶前将长满白点的
蚕蛹,用臭氧机水消毒5min。控净表面多余的水,在超净工作
台内,装入罐头瓶(平摆一层)中,用塑料膜复盖瓶口,用线绳
扎紧瓶口。送入消毒、光线充足的屋内,摆在栽培架上。温度控
制:白天保持 20~22℃,夜间降温 15~17℃;白天以自然光为
主,傍晚用日光灯补助照明 3~4h,湿度保持在 65%,湿度不
可过高,防止菌丝徒长;每天9:00通风1次,每次 30min。这
样经过5~8d培养,长出黄色的小芽形成了原基,转入出草阶
段。
4.4.2恒温出草 原基形成后室内温度控制在 19~22℃,不
可高过 22℃或低于 19℃;室内要有充足的散射光,傍晚可加
补助光 3~4h,调整瓶子及光源方向,以免蛹虫草在瓶内弯曲
生长;待蛹虫草长到 1㎝高时,可将室内的相对湿度调高到
75%,用喷雾器向四周墙壁及地面喷水(水中加消毒剂)调湿,
并进行适当的通风换气,以保证空气新鲜。这样经过15~17d,
蛹虫草生长高度已接近瓶口,即可采收。
5 采收加工保藏
当子实体长到9~10cm高,表面出现许多小疙瘩和黄粉
时,用镊子连蛹带草一起从瓶中提出,经过整理,放入不锈钢
盘中,及时放入鼓风干燥箱或真空干燥箱内,用(50±2)℃的温
度进行烘干,整理平直后用塑料袋真空包装,置于通风、低温、
干燥、避光条件下保存。
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