全 文 ：中国特有种爆杖花的微卫星分子标记开发与评价∗
严丽君１ꎬ２ꎬ３ꎬ 张志荣２ꎬ 李德铢１ꎬ２ꎬ 高连明１∗∗
(１ 中国科学院昆明植物研究所东亚植物多样性与生物地理学重点实验室ꎬ 云南 昆明 ６５０２０１ꎻ ２ 中国科学院
西南野生生物种质资源库ꎬ 云南 昆明 ６５０２０１ꎻ ３ 中国科学院大学ꎬ 北京 １０００４９)
摘要: 爆杖花 (Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ) 是中国西南地区特有的观赏和药用植物ꎮ 为了研究爆杖花和碎
米花之间的杂交物种形成过程ꎬ 本研究利用 ＦＩＡＳＣＯ方法对爆杖花进行微卫星引物开发ꎬ 从 １００对引物中
筛选出 ２８个微卫星标记ꎬ 其中 ２２个为多态ꎮ 利用爆杖花两个居群共 ２４个个体对 ２２个多态性位点进行分
析ꎬ 结果显示: 每个位点具有 ２~５个等位基因ꎬ 平均为 ３ ４个ꎬ 其观测杂合度和期望杂合度分别为 ０ ０８３
~０ ７９２和 ０ １５３~０ ７４４ꎮ 对筛出的 ２８个微卫星标记在碎米花的两个自然居群中也做了检测ꎬ 结果显示:
有 ２２个微卫星标记成功扩增ꎬ 其中 ２０个有多态性ꎻ 每个多态位点有 ２~６个等位基因ꎬ 平均为 ３ ２个ꎬ 其
观测杂合度和期望杂合度分别为 ０ ０００~０ ８３３和 ０ １１７~０ ７３６ꎮ 开发的微卫星标记可用于爆杖花及其近缘
物种的居群遗传学分析和杂交物种形成研究ꎮ
关键词: 微卫星标记ꎻ 爆杖花ꎻ 碎米花ꎻ ＦＩＡＳＣＯꎻ 多态性
中图分类号: Ｑ ９４３ 文献标识码: Ａ 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１４)０１－０４１－０６
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｍａｒｋｅｒｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｅｎｄｅｍｉｃ Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ
ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ (Ｅｒｉｃａｃｅａｅ)
ＹＡＮ Ｌｉ￣Ｊｕｎ１ꎬ２ꎬ３ꎬ ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ￣Ｒｏｎｇ２ꎬ ＬＩ Ｄｅ￣Ｚｈｕ１ꎬ２ꎬ ＧＡＯ Ｌｉａｎ￣Ｍｉｎｇ１∗
(１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｂｉｏｇｅｏｇｒａｐｈｙ ｏｆ Ｅａｓｔ Ａｓｉａꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０１ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｂａｎｋ ｏｆ Ｗｉｌｄ Ｓｐｅｃｉｅｓꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２０１ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ３ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４９ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ (Ｅｒｉｃａｃｅａｅ) ｉｓ ａｎ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ ｅｎｄｅｍｉｃ ｔｏ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉ￣
ｎａ. Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍꎬ ａ ＦＩＡＳＣＯ (Ｆａｓｔ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＡＦＬＰ ｏｆ
Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｒｅｐｅａｔｓ) ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ. Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２８
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ １００ ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓꎬ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ２２ ｗｅｒｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ. Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ
２２ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ ｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ ｉｎ ２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｗｉｌｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ. Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌ￣
ｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ５ꎬ ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ３ ４ꎬ ｗｈｉｌｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ (ＨＯ) ａｎｄ ｅｘｐｅｃｔｅｄ (ＨＥ) ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉ￣
ｔｉｅｓ ｖａｒｉｅｄ ｆｒｏｍ ０ ０８３ ｔｏ ０ ７９２ ａｎｄ ｆｒｏｍ ０ １５３ ｔｏ ０ ７４４ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ２８ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｌ￣
ｓｏ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ｔｗｏ ｗｉｌｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ (１２ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ) ｏｆ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ. Ｔｗｅｎｔｙ ｔｗｏ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｕｃ￣
ｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄꎬ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ２０ ｗｅｒｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ. Ｅｓｔｉｍａｔｅｓ ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｉｎ ｔｗｏ ｎａｔｕｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ
ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ２０ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ６ꎬ ｗｉｔｈ ａ ｍｅａｎ ｏｆ
３ ２ꎬ ｗｈｉｌｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ (ＨＯ ) ａｎｄ ｅｘｐｅｃｔｅｄ (ＨＥ ) ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｉｅｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０ ０００ ｔｏ ０ ８３３ ａｎｄ ｆｒｏｍ ０ １１７ ｔｏ
植 物 分 类 与 资 源 学 报 ２０１４ꎬ ３６ (１): ４１~４６
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１４１３０１９
∗
∗∗
Ｆｕｎｄｉｎｇ: Ｔｈｅ Ｋｅｙ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (ＫＳＣＸ２￣ＥＷ￣Ｑ￣１０ꎬ ＫＳＣＸ２￣ＥＷ￣Ｚ￣２) ａｎｄ Ｋｅｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｔｈｅ
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ (ＫＪＺＤ￣ＥＷ￣Ｌ０７)
Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｇａｏｌｍ＠ ｍａｉｌ. ｋｉｂ. ａｃ. ｃｎ
Ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄａｔｅ: ２０１３－０２－２０ꎬ Ａｃｃｅｐｔｅｄ ｄａｔｅ: ２０１３－０４－１１
作者简介: 严丽君 (１９８８－) 女ꎬ 博士研究生ꎬ 主要从事杜鹃花属系统发育与物种形成研究ꎮ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｙａｎｌｉｊｕｎ＠ ｍａｉｌ. ｋｉｂ. ａｃ. ｃｎ
０ ７３６ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅｓｅ ｎｅｗｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｔｈｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓꎻ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍꎻ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍꎻ ＦＩＡＳＣＯꎻ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ
Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ Ｌ. ｉｓ ｔｈｅ ｌａｒｇｅｓｔ ｇｅｎｕｓ ｉｎ Ｅｒｉｃａｃｅ￣
ａｅ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ａｂｏｕｔ １ ０２５ ｓｐｅｃｉｅｓꎬ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ
ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｅ ｚｏｎｅｓꎬ ｔｈｒｏｕｇｈｏｕｔ ｔｒｏｐｉｃａｌ ｓｏｕｔｈ￣
ｅａｓｔｅｒｎ Ａｓｉａ ｔｏ ｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎ Ａｕｓｔｒａｌｉａ (Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ
ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９６). Ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ５７１ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａꎬ ｏｆ
ｗｈｉｃｈ ４０５ ａｒｅ ｅｎｄｅｍｉｃ (Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００５). Ｔｈｅｒｅ ｉｓ
ａ ｌｏｎｇ ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎꎬ ａｎｄ ｌｏｔｓ
ｏｆ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｇｅｎｕｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｕｓｅｄ ａｓ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ
ｐｌａｎｔｓ (Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９９). Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅ￣
ｒｕｍ Ｆｒａｎｃｈ. ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｏｒｎａｍｅｎｔａｌ ｓｐｅ￣
ｃｉｅｓꎬ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｎｄｅｍｉｃ ｔｏ ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｃｈｉｎａ. Ｔｈｅ
ｄｒｉｅｄ ｓｔｅｍｓꎬ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｆｌｏｗｅｒｓ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ
ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｆｏｌｋ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｆｏｒ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｎｇ
ｐｈｌｅｇｍꎬ ｄｉｍｉｎｉｓｈｉｎｇ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬ ｒｅｌｉｅｖｉｎｇ ｃｏｕｇｈ
ａｎｄ ａｓｔｈｍａ (Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９６).
Ｎａｔｕｒａｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ ａｎ
ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｗｉｔｈｉｎ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ (Ｍｉｌｎｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０). Ｎｕｍｅｒ￣
ｏｕｓ ｉｎｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｒｅ￣
ｐｏｒｔｅｄ ｉｎ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ｉｎ ｐｒｅｖｉｏｕｓ ｓｔｕｄｉｅｓ (Ｋｒｏｎ ｅｔ
ａｌ.ꎬ １９９３ꎻ Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７ꎻ Ｍｉｌｎｅ ａｎｄ Ａｂｂｏｔｔꎬ
２００８ꎻ Ｍａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０ꎻ Ｚｈａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０). Ｒｈｏｄｏ￣
ｄｅｎｄｒｏｎ × ｄｕｃｌｏｕｘｉｉ ｉｓ ａｎ ｉｎｆｅｒｒｅｄ ｎａｔｕｒａｌ ｈｙｂｒｉｄ ｓｐｅ￣
ｃｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ
Ｆｒａｎｃｈ. ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ (Ｈａｎｄｅｌ￣
Ｍａｚｚｅｔｔｉꎬ １９３６). Ｔｈｉｓ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ｍｏ￣
ｌｅｃｕｌａｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｄａｔａ ｒｅｃｅｎｔｌｙ (Ｙａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３).
Ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ
Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍꎬ ｃｏｄｏｍｉｎａｎｔ ｍｉｃｒｏ￣
ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｉｌｌ ｂｅ ｕｓｅｄ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｗｅ ｔｒｉｅｄ
ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ
ｍａｒｋｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍꎬ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｔｈｅｉｒ ｆｅａｓｉｂｉｌｉ￣
ｔｙ ｉｎ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ ｓａｍｐｌｅｓ.
１ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ
１ １ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ
Ｌｅａｆ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ
ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｎａｔｕ￣
ｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｙｕｎｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｃｈｉｎａ. Ｔｏｔａｌ ｏｆ
２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ
(１２ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ) ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋ￣
ｅｒｓ (Ｔａｂｌｅ １). Ｔｈｅ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｍｉｃ￣
ｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗａｓ ａｌｓｏ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｉｎ ２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕ￣
ａｌｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ ｎａｔｕｒａｌ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ( １２
ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ) (Ｔａｂｌｅ １). Ｖｏｕｃｈｅｒ ｓｐｅｃｉ￣
ｍｅｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅｒｂａｒｉｕｍ ｏｆ ｔｈｅ Ｋｕｎ￣
ｍｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉ￣
ｅｎｃｅｓ (ＫＵＮ).
１ ２ Ｍｅｔｈｏｄｓ
１ ２ １ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
Ｔｏｔａｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｉｌｉｃａ￣ｇｅｌ￣
ｄｒｉｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｕｓｉｎｇ ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＣＴＡＢ (ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌ
ａｍｍｏｎｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ) ｍｅｔｈｏｄ (Ｌｉｕ ａｎｄ Ｇａｏꎬ ２０１１).
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｅｔａｉｌｓ ｏｆ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
Ｔａｘｏｎ Ｌｏｃａｌｉｔｙ Ｇｅｐｇｒａｐｈｉｃ Ａｌｔｉｔｕｄｅ / ｍ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ
Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ Ｋｕｎｍｉｎｇꎬ Ｐａｎｌｏｎｇ ａｒｅａꎬＳｈｕａｎｇｌｏｎｇ ｔｏｗｎ
Ｎ ２５ １０°
Ｅ １０２ ８０° ２０７０
ＹＬＪ￣１２００８ꎬ ＹＬＪ￣１２００９ꎬ ＹＬＪ￣１２００１０ꎬ ＹＬＪ￣１２０１１ꎬ
ＹＬＪ￣１２０１２ꎬ ＹＬＪ￣１２０１３ꎬ ＹＬＪ￣１２０１４ꎬ ＹＬＪ￣１２０１５ꎬ
ＹＬＪ￣１２０１６ꎬ ＹＬＪ￣１２０１７ꎬ ＹＬＪ￣１２０２３ꎬ ＹＬＪ￣１２０３１
Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ Ｃｈｕｘｉｏｎｇꎬ Ｓｈｕａｎｇｂａｉｃｏｕｎｔｙꎬ Ｔｕｏｄｉａｎ ｔｏｗｎ
Ｎ ２４ ６８°
Ｅ １０１ ６６° １７７５
ＹＬＪ￣１２８０２ꎬ ＹＬＪ￣１２８０３ꎬ ＹＬＪ￣１２８０４ꎬ ＹＬＪ￣１２８０５ꎬ
ＹＬＪ￣１２８０６ꎬ ＹＬＪ￣１２８０７ꎬ ＹＬＪ￣１２８０８ꎬ ＹＬＪ￣１２８０９ꎬ
ＹＬＪ￣１２８１０ꎬ ＹＬＪ￣１２８１１ꎬ ＹＬＪ￣１２８１３ꎬ ＹＬＪ￣１２８１７
Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ Ｋｕｎｍｉｎｇꎬ Ｐａｎｌｏｎｇ ａｒｅａꎬＳｈｕａｎｇｌｏｎｇ ｔｏｗｎ
Ｎ ２５ １０°
Ｅ １０２ ８０° ２０７０
ＹＬＪ￣１２００１ꎬ ＹＬＪ￣１２０１８ꎬ ＹＬＪ￣１２０１９ꎬ ＹＬＪ￣１２０２０ꎬ
ＹＬＪ￣１２０２５ꎬ ＹＬＪ￣１２０２７ꎬ ＹＬＪ￣１２０２９ꎬ ＹＬＪ￣１２０３０ꎬ
ＹＬＪ￣１２０３６ꎬ ＹＬＪ￣１２０３７ꎬ ＹＬＪ￣１２０４３ꎬ ＹＬＪ￣１２０５１
Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ Ｙｕｘｉꎬ Ｅｓｈａｎ ｃｏｕｎｔｙꎬＧａｏｐｉｎｇ ｔｏｗｎ
Ｎ ２４ ２２°
Ｅ １０２ ３２° １８３０
ＹＬＪ￣１２１０８９ꎬ ＹＬＪ￣１２１０９３ꎬ ＹＬＪ￣１２１０９７ꎬ ＹＬＪ￣１２１１１１ꎬ
ＹＬＪ￣１２１１２０ꎬ ＹＬＪ￣１２１１２２ꎬ ＹＬＪ￣１２１１２３ꎬ ＹＬＪ￣１２１１２４ꎬ
ＹＬＪ￣１２１１２６ꎬ ＹＬＪ￣１２１１２７ꎬ ＹＬＪ￣１２１１２８ꎬ ＹＬＪ￣１２１１３０
２４ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３６卷
１ ２ ２ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｉｓｏｌａｔｉｏｎꎬ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａ￣
ｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ
Ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ
ｔｈｅ ＦＩＡＳＣＯ ｐｒｏｔｏｃｏｌ ( Ｚａｎｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００２). Ａｂｏｕｔ
３００－ ５００ ｎｇ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｗａｓ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＭｓｅＩ
(Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓꎬ Ｂｅｖｅｒｌｙꎬ Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓꎬ ＵＳＡ)ꎬ
ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｏ ａｎ
ＭｓｅＩ ＡＦＬＰ ａｄａｐｔｏｒ ｐａｉｒ ( ５′￣ＴＡＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＡＴ￣
３′ / ５′￣ＧＡＣＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧ￣３′) ａｔ ３７ ℃ ｆｏｒ ２ ｈ
ｗｉｔｈ Ｔ４ ＤＮＡ ｌｉｇａｓｅ (Ｆｅｒｍｅｎｔａｓꎬ Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎꎬ Ｏｎｔａｒ￣
ｉｏꎬ Ｃａｎａｄａ). Ｔｏｔａｌ ｏｆ ５ μＬ ｏｆ ａ ｄｉｌｕｔｅｄ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ￣
ｌｉｇａｔｉｏｎ ｍｉｘｔｕｒｅ (１ ∶ １０) ｗａｓ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｄａｐｔｏｒ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ＭｓｅＩ￣Ｎ
(５′￣ＧＡＴＧＡＧＴＣＣＴＧＡＧＴＡＡＮ￣３′)ꎬ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｏｌｌｏｗ￣
ｉｎｇ ｃｙｃｌｅ ｐｒｏｇｒａｍ: ９５ ℃ ｆｏｒ ３ ｍｉｎꎬ ３０ ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ９４ ℃
ｆｏｒ ４５ ｓꎬ ５０ ℃ ｆｏｒ ６０ ｓꎬ ７２ ℃ ｆｏｒ ６０ ｓꎬ ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ
ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｓｔｅｐ ｏｆ ７ ｍｉｎ ａｔ ７２ ℃ . Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇ￣
ｍｅｎｔｓ (２００－８００ ｂｐ) ｗｅｒｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌ￣
ｌｉｔｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｂｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ５′￣ｂｉｏｔｉ￣
ｎｙｌａｔｅｄ (ＡＣ) １５ ａｎｄ (ＡＧ) １５ . Ｔｈｅｓｅ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｆｒａｇ￣
ｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｇａｉｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＭｓｅＩ￣Ｎ ｐｒｉｍｅｒｓ.
Ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ａｎ ＥＺＮＡ Ｇｅｌ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ (Ｏｍｅｇａ Ｂｉｏ￣Ｔｅｋꎬ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕꎬ Ｃｈｉ￣
ｎａ). Ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｉｔｈ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｍｉｃｒｏ￣
ｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｗｅｒｅ ｌｉｇａｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｐＧＥＭ￣Ｔ ｖｅｃｔｏｒ
(Ｐｒｏｍｅｇａꎬ Ｍａｄｉｓｏｎꎬ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎꎬ ＵＳＡ) ａｎｄ ｔｒａｎｓ￣
ｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ＤＨ５α ｃｅｌｌｓ (ＴａＫａＲａꎬ Ｄａｌｉａｎꎬ Ｃｈｉｎａ).
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｃｌｏｎｅｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ
ａ ｂｌｕｅ / ｗｈｉｔｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｓｓａｙ. Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ
ｔｈｅｎ ｔｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｉｎｓｅｒｔｓ ｂｙ ＰＣＲ ｗｉｔｈ
(ＡＣ)１０ / (ＡＧ)１０ ａｎｄ Ｔ７ / Ｓｐ６ ｐｒｉｍｅｒｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ.
Ｃｌｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｓｅｒｔｓ ａｎｄ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｉｚｅ (３００
－７００ ｂｐ) ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ. Ｔｈｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
ｗｈｉｃｈ ｃｏｎｔａｉｎ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｒｅｐｅａｔｓ ( ＳＳＲｓ)ꎬ ａｎｄ
ｗｉｔｈ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｌａｎｋｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅ￣
ｓｉｇｎｉｎｇ ｌｏｃｕｓ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｇｒａｍ Ｏｌｉｇｏ
６ ０ (Ｏｆｆｅｒｍａｎ ａｎｄ Ｒｙｃｈｌｉｋꎬ ２００３).
Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ ａｌｌ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ
ｗｅｒｅ ｔｈｅｎ ａｓｓｅｓｓｅｄ ｉｎ ２４ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｔｗｏ ｎａｔｕｒａｌ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ (１２ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ) ｏｆ Ｒ. ｓｐｉｎｕ￣
ｌｉｆｅｒｕｍ (Ｔａｂｌｅ １). ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｉｎ
２０ μＬ ｖｏｌｕｍｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５０－１００ ｎｇ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡꎬ
０ ６ μＭ ｏｆ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒꎬ ７ ５ μＬ ２× Ｔａｑ ＰＣＲ Ｍａｓ￣
ｔｅｒＭｉｘ (ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０ １ Ｕ Ｔａｑ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ / μＬꎬ ０ ５
ｍＭ ｄＮＴＰ ｅａｃｈꎬ ２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ￣ＨＣｌ (ｐＨ＝ ８ ３)ꎬ １００
ｍＭ ＫＣｌꎬ ３ ｍＭ ＭｇＣｌ２ (Ｔｉａｎｇｅｎꎬ Ｂｅｉｊｉｎꎬ Ｃｈｉｎａ).
Ｔｈｅ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ: ９５ ℃ ｆｏｒ ３ ｍｉｎ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ３２
ｃｙｃｌｅｓ ａｔ ９４ ℃ ｆｏｒ ３０ ｓꎬ ａｎ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｐ￣
ｔｉｍｉｚｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒ (Ｔａｂｌｅ ２) ｆｏｒ
４５ ｓꎬ ７２℃ ｆｏｒ ６０ ｓꎬ ａｎｄ ａ ｆｉｎａｌ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ ｓｔｅｐ ａｔ ７２℃
ｆｏｒ ７ ｍｉｎ. Ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｏｎ
８％ ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ ｇｅｌｓ ｗｉｔｈ ａ ２０ ｂｐ ｍｏ￣
ｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｚｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｌａｄｄｅｒ (Ｆｅｒｍｅｎｔａｓꎬ Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎꎬ
Ｏｎｔａｒｉｏꎬ Ｃａｎａｄａ) ａｎｄ ｖｉｓｕａｌｉｚｅｄ ｂｙ ｓｉｌｖｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ.
Ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ
ｂｙ ＰＩＣ Ｃａｌｃｕｌａｔｏｒ. Ｓｔａｎｄａｒｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｐａｒａｍ￣
ｅｔｅｒｓ ａｎｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉ￣
ｌｉｂｒｉｕｍ ｗｅｒｅ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｉｎ ＧＥＮＥＰＯＰ ｖｅｒｓｉｏｎ ４ ０ １０
(Ｒｏｕｓｓｅｔꎬ ２００８) ｆｏｒ ａｌｌ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ. Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｌｏｃｉ ｗａｓ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｌｓｏ ｉｎ ＧＥＮＥＰＯＰ ｖｅｒｓｉｏｎ ４ ０ １０.
２ Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ
Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２９４ ｃｌｏｎｅｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｉｎｓｅｒｔｓ ａｎｄ
ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｓｉｚｅ ｗｅｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ. Ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ｓｅ￣
ｑｕｅｎｃｅｓꎬ ２１７ ( ７３ ８％) ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｔｏ
ｃｏｎｔａｉｎ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｒｅｐｅａｔｓ ( ＳＳＲｓ)ꎬ ａｎｄ １３３ ｏｆ
ｔｈｅｓｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｆｌａｎｋｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ ｗｅｒｅ
ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ ｌｏｃｕｓ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ. Ｆｉｎａｌ￣
ｌｙꎬ ｔｏｔａｌ ｏｆ １００ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏ￣
ｐｉｎｇ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ.
Ｔｈｅ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｕｃ￣
ｃｅｓｓ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏｃｉ ｆｏｌｌｏｗｅｄ Ｇａｏ ｅｔ ａｌ. (２０１２). Ｏｆ
ｔｈｅ １００ ｐｒｉｍｅｒ ｐａｉｒｓ ｔｅｓｔｅｄꎬ ２８ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ￣
ｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄꎬ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ２２ ｓｈｏｗｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓꎬ
ａｎｄ ｓｉｘ ｗｅｒｅ ｍｏｎｏｍｏｒｐｈｉｃ (Ｔａｂｌｅ ２). Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ
ｔｈｅｓｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｐｏｓｉｔｅｄ ｉｎ ＧｅｎＢａｎｋ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒｓ ＫＣ１５５５９６ ｔｏ ＫＣ１５５６２３. Ｆｏｒ ｔｈｅｓｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓꎬ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ
(Ａ) ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ５ꎬ ｗｉｔｈ ａｎ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ３ ４ꎬ ａｎｄ
ｔｈｅ ｖａｌｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ( ＨＯ ) ａｎｄ ｅｘｐｅｃｔｅｄ
(ＨＥ) ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｉｅｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０ ０８３ ｔｏ ０ ７９２
ａｎｄ ｆｒｏｍ ０ １５３ ｔｏ ０ ７４４ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｆｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ
３４１期 ＹＡＮ Ｌｉ￣Ｊｕｎ ｅｔ ａｌ.: Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｅｎｄｅｍｉｃ
２２ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｄｅｖｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｈａｒ￣
ｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ( Ｐ < ０ ０１) ( Ｔａｂｌｅ ３)ꎬ
ｌｉｋｅｌｙ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｎｕｌｌ ａｌｌｅｌｅｓ ｏｒ ｆｅｗ ｔｅｓｔ￣
ｅｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｎｃｌｕｄｅｄ. Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｇｅｎｏ￣
ｔｙｐｉｃ ｌｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ (ＬＤ) ｂｅｔｗｅｅｎ ａｎｙ ｐａｉｒ
ｏｆ ｌｏｃｉ ａｔ Ｐ<０ ００１.
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ２８ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ Ｒ. ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ
Ｌｏｃｕｓ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′) Ｒｅｐｅａｔ ｍｏｔｉｆ Ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ / ｂｐ Ｔａ / ℃
ＧｅｎＢａｎｋ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ.
Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ
Ｒｈ００３∗
Ｆ: ＴＣＴＴＣＧＴＣＴＣＣＣＴＣＴＡＴＣＴＴＴ
Ｒ: ＡＡＣＡＣＡＣＡＣＡＧＡＣＣＴＣＡＡＡＴＣ
(ＴＣ)８ １５２－１７６ ５８ ＫＣ１５５５９６
Ｒｈ００５∗
Ｆ: ＡＴＣＡＴＴＧＣＴＴＣＴＴＴＴＴＣＣＣＴ
Ｒ: ＴＣＣＡＣＣＣＴＣＴＧＴＣＴＣＡＣＴＣＴ
(ＡＧ)１２ １６４－１８２ ５５ ＫＣ１５５５９７
Ｒｈ００８∗
Ｆ: ＴＴＧＧＡＧＴＧＡＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧＧ
Ｒ: ＴＡＡＴＡＧＧＣＡＧＣＡＴＣＴＣＣＣＡＴ
(ＡＧ)１４ ２０２－２３４ ５５ ＫＣ１５５５９８
Ｒｈ００９∗
Ｆ: ＧＧＴＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＴＴＧＡＡＡＴ
Ｒ: ＣＴＴＣＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＴＧＴＴＣＴ
(ＡＧ)８ ２１６－２３０ ５４ ＫＣ１５５５９９
Ｒｈ０１７∗
Ｆ: ＴＴＴＧＧＣＴＣＡＴＣＧＣＴＴＴＴＡＧＴ
Ｒ: ＧＡＧＡＧＣＡＴＣＣＡＡＧＴＣＣＣＴＡＴ
(ＴＣ)１０ １５１－１７５ ５４ ＫＣ１５５６００
Ｒｈ０２０∗
Ｆ: ＧＣＡＴＣＴＣＡＡＧＡＡＣＡＣＡＡＴＡ
Ｒ: ＴＣＡＡＧＡＡＧＧＴＣＣＴＣＣＣＡＧＴＣ
(ＡＧ)９ １０９－１４３ ５１ ＫＣ１５５６０１
Ｒｈ０３１∗
Ｆ: ＧＡＧＧＡＧＡＧＡＡＡＡＧＧＡＣＡＡＧ
Ｒ: ＡＧＴＣＴＴＣＴＴＣＣＴＴＡＣＣＡＡＣＧ
(ＡＧ)１４ ２３１－２３７ ４９ ＫＣ１５５６０３
Ｒｈ０３２∗
Ｆ: ＧＧＧＣＡＡＡＣＡＴＴＣＡＴＡＣＡＴＡＡ
Ｒ: ＡＧＧＣＡＧＧＣＡＧＧＣＡＣＣＡＧＡＡＧ
(ＴＣ)１６ ２９６－３０８ ５９ ＫＣ１５５６０４
Ｒｈ０３４∗
Ｆ: ＣＡＡＡＡＡＡＣＡＣＡＣＣＧＣＡＧＡＣＧ
Ｒ: ＴＧＡＴＧＧＧＴＧＧＡＴＧＧＡＴＡＡＴ
(ＡＧ)９ １９３－２０３ ５２ ＫＣ１５５６０５
Ｒｈ０３７
Ｆ: ＣＣＴＧＧＧＣＡＡＧＡＧＡＧＡＡＡＡＣＴ
Ｒ: ＡＣＡＧＣＧＡＴＧＧＣＧＡＴＴＴＧＡＡＣ
(ＡＧ)８(ＡＧ)１１ ２７９－２８７ ５５ ＫＣ１５５６０６
Ｒｈ０３９∗
Ｆ: ＴＣＣＴＡＡＴＣＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣ
Ｒ: ＧＣＣＧＴＴＣＣＡＴＡＣＡＧＴＡＣＣＡＡ
(ＴＣ)１０ １５６－１６８ ５７ ＫＣ１５５６０７
Ｒｈ０４１∗
Ｆ: ＣＧＡＴＴＧＣＣＡＴＴＴＧＣＣＡＣＴＡＣＣＴ
Ｒ: ＣＣＡＣＡＡＣＴＣＣＧＣＴＧＣＴＡＣＴＧ
(ＴＣ)７ １４８－１７８ ５５ ＫＣ１５５６０８
Ｒｈ０４３∗
Ｆ: ＡＧＴＴＣＣＣＣＡＡＡＴＣＴＣＴＴＣＴＣ
Ｒ: ＴＣＡＴＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＣＴＧＣＣＴ
(ＡＧ)２３ １４９－１７５ ５３ ＫＣ１５５６１０
Ｒｈ０５４
Ｆ: ＴＧＴＡＧＣＡＡＡＣＣＣＡＴＣＴＣＡＣＣ
Ｒ: ＴＣＡＣＣＴＧＧＧＣＡＴＡＡＣＴＡＡＴＣ
(ＴＣ)８ ２６１－２７５ ５８ ＫＣ１５５６１１
Ｒｈ０５８∗
Ｆ: ＧＡＴＡＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＡＡＧＧＴ
Ｒ: ＧＧＣＧＡＧＡＴＣＧＴＧＧＡＧＡＡＡＡＴ
(ＴＣ)９ １７４－１８０ ５８ ＫＣ１５５６１２
Ｒｈ０６０∗
Ｆ: ＡＡＧＡＧＡＴＴＧＧＡＡＧＧＧＴＴＧＡＴ
Ｒ: ＴＣＡＴＡＧＴＧＴＧＧＣＡＡＡＡＣＧＡＣ
(ＡＧ)７(ＡＧ)７ １６６－１７２ ５４ ＫＣ１５５６１３
Ｒｈ０６３
Ｆ: ＴＧＡＣＧＡＣＡＴＧＧＧＡＣＴＴＴＡＧＡ
Ｒ: ＡＣＣＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧ
(ＴＣ)２０ １６４－１７２ ５２ ＫＣ１５５６１４
Ｒｈ０６５
Ｆ: ＴＡＡＡＡＡＡＡＴＧＧＧＧＣＴＡＡＡＧＴ
Ｒ: ＧＡＣＡＴＴＧＡＣＧＣＡＧＣＣＧＡＡＣＣ
(ＡＧ)１６ ２６１－２８３ ５０ ＫＣ１５５６１６
Ｒｈ０７２∗
Ｆ: ＧＣＴＣＴＡＣＣＣＴＴＡＴＣＡＴＴＴＴＡ
Ｒ: ＡＡＧＡＣＧＧＡＣＧＡＡＡＣＡＣＡＴＣ
(ＴＣ)２５ １６９－１８１ ５７ ＫＣ１５５６１７
Ｒｈ０７６∗
Ｆ: ＡＴＡＣＡＣＣＡＣＣＡＴＴＣＡＴＡＣＧＣ
Ｒ: ＴＡＧＡＧＡＧＴＧＧＧＧＴＴＧＡＴＴＡＧ
(ＡＧ)１７Ｇ(ＡＧ)６(ＡＧ)８ ２５８－３１０ ２０ ＫＣ１５５６１８
Ｒｈ０７８∗
Ｆ: ＣＡＡＴＧＡＴＧＴＧＡＡＡＧＣＣＣＴＧＧ
Ｒ: ＡＧＧＡＴＴＣＣＡＡＴＴＡＧＴＡＡＡＣＧ
(ＴＧ)８ ２８４－３００ ５０ ＫＣ１５５６１９
４４ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３６卷
Ｔａｂｌｅ ２ ｃｏｎｔｉｎｕｅｄ
Ｌｏｃｕｓ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′) Ｒｅｐｅａｔ ｍｏｔｉｆ Ｓｉｚｅ ｒａｎｇｅ / ｂｐ Ｔａ / ℃
ＧｅｎＢａｎｋ
ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ.
Ｒｈ０８６∗
Ｆ: ＡＴＣＡＣＣＣＡＡＧＣＡＡＴＡＧＴＣＴＧ
Ｒ: ＡＴＴＴＴＣＣＡＣＡＣＧＡＴＡＣＡＧＧＣ
(ＴＣ) ９ (ＴＧ) ８ ２６９－２８１ ５７ ＫＣ１５５６２０
Ｍｏｎｏｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅｓ
Ｒｈ０２３∗
Ｆ: ＣＴＡＣＣＡＴＣＡＡＣＡＴＣＡＣＡＣＴＧ
Ｒ: ＡＧＴＡＡＡＡＡＧＡＧＡＡＧＧＧＧＡＧＴ
(ＴＣ)８ １３１ ５２ ＫＣ１５５６０２
Ｒｈ０４２∗
Ｆ: ＣＡＣＡＡＧＴＧＴＴＣＣＡＡＧＡＴＴＣＧ
Ｒ: ＧＡＣＧＧＧＡＧＴＴＡＴＣＧＧＴＧＡＡＧ
(ＴＣ)７Ｃ(ＴＣ)９ １６５ ５５ ＫＣ１５５６０９
Ｒｈ０６４∗
Ｆ: ＧＡＴＧＧＴＡＧＴＴＴＣＡＡＣＧＣＡＡＧ
Ｒ: ＡＣＴＣＣＴＴＴＣＴＴＴＴＣＴＣＡＣＣＴ
(ＡＧ)９ １９３ ５２ ＫＣ１５５６１５
Ｒｈ０８７
Ｆ: ＡＧＡＡＴＡＧＡＡＧＧＴＴＧＡＡＧＧＧＴ
Ｒ: ＡＡＧＧＣＴＴＧＡＡＴＧＡＧＧＴＴＧＡＴ
(ＴＣ)１３ ２１７ ５２ ＫＣ１５５６２１
Ｒｈ０９６∗
Ｆ: ＣＣＣＴＣＣＴＣＴＣＴＣＡＡＣＡＡＡＡＧ
Ｒ: ＴＣＡＧＡＧＴＴＧＴＴＣＧＧＴＧＴＧＴＧ
(ＴＣ)１０ １５７ ５４ ＫＣ１５５６２２
Ｒｈ０９８
Ｆ: ＡＡＡＣＣＣＣＡＴＴＡＣＡＧＴＡＧＡＴＴ
Ｒ: ＡＣＴＧＧＡＣＣＣＴＴＧＡＡＡＣＣＴＡＡＣ
(ＡＧ)９ １８９ ５０ ＫＣ１５５６２３
Ｎｏｔｅ: Ｔａꎬ ＰＣＲ ａｎｎｅａｌｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅꎻ ∗ꎬ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ
Ｔａｂｌｅ ３ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｉｎ ｔｗｏ ｗｉｌｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ (１２ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ｆｒｏｍ ｅａｃｈ)
ｏｆ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｕｍ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ
Ｌｏｃｕｓ
Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ
ＮＡ ＨＯ ＨＥ ＰＨＷ
Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｕｍ
ＮＡ ＨＯ ＨＥ ＰＨＷ
Ｒｈ００３ ４ ０００ ０ ７３９ ０ ６１６ ０ １１３ ３ ０００ ０ ８３３ ０ ５４２ ０ ００５∗
Ｒｈ００５ ４ ０００ ０ ３７５ ０ ３１８ １ ０００ ２ ０００ ０ ２５０ ０ ２７８ ０ ５０２
Ｒｈ００８ ４ ０００ ０ ４１７ ０ ３５７ １ ０００ ４ ０００ ０ ６６７ ０ ５８７ ０ １４２
Ｒｈ００９ ２ ０００ ０ ０８３ ０ １５３ ０ １２８ ２ ０００ ０ ５４５ ０ ４９６ １ ０００
Ｒｈ０１７ ５ ０００ ０ ７５０ ０ ７２４ ０ ２５４ ２ ０００ ０ ５００ ０ ４６９ １ ０００
Ｒｈ０２０ ４ ０００ ０ ７９２ ０ ７４４ ０ ０９０ ２ ０００ ０ ５４２ ０ ４３０ ０ ３５５
Ｒｈ０２３ ２ ０００ ０ ０４２ ０ １１７ ０ ０６３
Ｒｈ０３１ ４ ０００ ０ ３３３ ０ ５１０ ０ ０１１ ４ ０００ ０ ５００ ０ ６８８ ０ １４８
Ｒｈ０３２ ３ ０００ ０ ５６５ ０ ６３８ ０ ３３６ ４ ０００ ０ ３３３ ０ ６４１ ０ ００１∗
Ｒｈ０３４ ３ ０００ ０ ２５０ ０ ２２７ １ ０００ ４ ０００ ０ ７０８ ０ ７３６ ０ ０２３
Ｒｈ０３７ ４ ０００ ０ ２２７ ０ ７１４ ０ ０００∗
Ｒｈ０３９ ４ ０００ ０ ６６７ ０ ６４３ ０ ５６５ ３ ０００ ０ ５４２ ０ ５９４ ０ ４７７
Ｒｈ０４１ ４ ０００ ０ ５８３ ０ ５１３ １ ０００ ３ ０００ ０ ５００ ０ ４９２ ０ ３０１
Ｒｈ０４３ ２ ０００ ０ ４５８ ０ ４３０ １ ０００ ３ ０００ ０ ２５０ ０ ６２４ ０ ０００∗
Ｒｈ０５４ ２ ０００ ０ １７４ ０ ４７６ ０ ００２∗
Ｒｈ０５８ ４ ０００ ０ ４１７ ０ ５０６ ０ ０９１ ４ ０００ ０ ７９２ ０ ７１１ ０ １０４
Ｒｈ０６０ ３ ０００ ０ ２５０ ０ ４７３ ０ ００１∗ ３ ０００ ０ ３３３ ０ ６４５ ０ ００８∗
Ｒｈ０６３ ３ ０００ ０ ６２５ ０ ５５５ １ ０００
Ｒｈ０６５ ３ ０００ ０ ７０８ ０ ６６１ ０ ６７０
Ｒｈ０７２ ３ ０００ ０ ２０８ ０ ６５９ ０ ０００∗ ５ ０００ ０ ７０８ ０ ７２８ ０ ５２３
Ｒｈ０７６ ４ ０００ ０ ３７５ ０ ７０４ ０ ０００∗ ６ ０００ ０ ３３３ ０ ５３８ ０ ０１６
Ｒｈ０７８ ３ ０００ ０ ３３３ ０ ３５１ ０ １５７ ３ ０００ ０ ３３３ ０ ５８６ ０ ０１５
Ｒｈ０８６ ３ ０００ ０ ２０８ ０ ３２０ ０ ０５６ ２ ０００ ０ ０００ ０ ２８７ ０ ０００∗
Ｒｈ０９６ ２ ０００ ０ ２０８ ０ ４９２ ０ ００６∗
Ｎｏｔｅ: ＮＡꎬ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｒｅｖｅａｌｅｄꎻ ＨＯꎬ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎻ ＨＥꎬ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙꎻ ∗ꎬ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｄｅｖｉａｔｉｎｇ
ｆｒｏｍ Ｈａｒｄｙ￣Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ (Ｐ<０ ０１) .
５４１期 ＹＡＮ Ｌｉ￣Ｊｕｎ ｅｔ ａｌ.: Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ Ｍａｒｋｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｅｎｄｅｍｉｃ
Ｔｈｅ ２８ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｔｅｓｔｅｄ
ｉｎ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓａｍｅ ＰＣＲ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｓ ｉｎ
Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ. Ｏｆ ｔｈｅ ２８ ｌｏｃｉ ｔｅｓｔｅｄꎬ ２２ ＳＳＲ ｍａｒｋ￣
ｅｒｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙꎬ ｏｆ ｗｈｉｃｈ ２０ ｌｏｃｉ
ｓｈｏｗｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ａｎｄ ｔｗｏ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｍｏｎｏｍｏｒ￣
ｐｈｉｃ (Ｒｈ０４２ ａｎｄ Ｒｈ０６４) ｉｎ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ (Ｔａｂｌｅ ２
＆ ３). Ｔｈｅ ｔｗｏ ｍｏｎｏｍｏｒｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ
(Ｒｈ０２３ ａｎｄ Ｒｈ０９６) ｉｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ｓｈｏｗｅｄ ｐｏｌ￣
ｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ (Ｔａｂｌｅ ２ ＆ ３). Ｆｏｒ ｔｈｅ
２０ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍꎬ ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ ｐｅｒ ｌｏｃｕｓ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ２ ｔｏ ６ꎬ ｗｉｔｈ ａ ｍｅａｎ
ｏｆ ３ ２. Ｔｈｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ (ＨＯ) ａｎｄ ｅｘｐｅｃｔｅｄ (ＨＥ) ｈｅｔ￣
ｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０ ０００ ｔｏ ０ ８３３ ａｎｄ ｆｒｏｍ
０ １１７ ｔｏ ０ ７３６ꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｓｉｘ ｏｆ ｔｈｅ ２０ ｐｏｌｙｍｏｒ￣
ｐｈｉｃ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｄｅｖｉａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｈａｒｄｙ￣
Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ (Ｐ<０ ０１) (Ｔａｂｌｅ ３).
Ｉｎ ｓｕｍｍａｒｙꎬ ｏｆ ｔｈｅ ２８ ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ
ｆｉｒｓｔｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍꎬ ｍｏｓｔ ｗｏｒｋｅｄ ｉｎ
Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍ (７９％). Ｔｈｕｓꎬ ｔｈｅｓｅ ｃｏｄｏｍｉｎａｎｔ ｍｉｃ￣
ｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｗｉｌｌ ｂｅ
ｖｅｒｙ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｈｙｂｒｉｄ ｓｐｅｃｉａｔｉｏｎ ｓｃｅ￣
ｎａｒｉｏ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ Ｒ ｓｐｉｃｉｆｅｒｕｍꎬ ａｎｄ
ａｌｓｏ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ
ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｒ ｓｐｉｎｕｌｉｆｅｒｕｍ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ
ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ.
Ａｃｋｎｏｗｌｅｄｇｅｍｅｎｔｓ: Ｗｅ ａｒｅ ｇｒａｔｅｆｕｌ ｔｏ ＪＢ Ｙａｎｇꎬ Ｊ Ｙａｎｇꎬ
ＨＴ Ｌｉꎬ ＷＢ Ｙｕａｎ ａｎｄ ＣＹ Ｌｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅｉｒ ｈｅｌｐ ｉｎ ｌａｂ ｗｏｒｋ ａｎｄ
ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｗｅ ａｌｓｏ ｔｈａｎｋ Ｍｉｃｈａｅｌ Ｍöｌｌｅｒ ｆｒｏｍ Ｒｏｙａｌ Ｂｏ￣
ｔａｎｉｃ Ｇａｒｄｅｎ Ｅｄｉｎｂｕｒｇｈ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｅｎｇｌｉｓｈ ｏｆ ｔｈｅ ＭＳ. Ｌａ￣
ｂｏｒａｔｏｒｙ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｔ ｔｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｔ ｔｈｅ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ Ｂａｎｋ ｏｆ Ｗｉｌｄ Ｓｐｅｃｉｅｓꎬ Ｋｕｎｍｉｎｇ
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ｄｒｏｎ ｓｕｂｇｅｎｕｓ Ｈｙｍｅｎａｎｔｈｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒｓ:
ｂｅｔｗｅｅｎ￣ｌｉｎｅａｇｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｄａｐｔｉｖｅ ｒａｄｉａｔｉｏｎ? [ Ｊ ] .
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ｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｇａｓｔｕｍ: ａ ｈｙｂｒｉｄ ｔａｘｏｎ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｍａｉｎｌｙ Ｆ１ ｓ ｉｎ
Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ [Ｊ] . Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｂｏｔａｎｙꎬ １０５: ８９—１００
Ｚｈａｎｇ ＪＬꎬ Ｚｈａｎｇ ＣＱꎬ Ｇａｏ ＬＭ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. Ｎａｔｕｒａｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｏｒｉ￣
ｇｉｎ ｏｆ Ｒｈｏｄｏｄｅｎｄｒｏｎ ａｇａｓｔｕｍ ( Ｅｒｉｃａｃｅａｅ) ｉｎ Ｙｕｎｎａｎꎬ Ｃｈｉｎａ:
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６４ 植 物 分 类 与 资 源 学 报 第 ３６卷