全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 8 期 2016 年 4 月

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桑菊饮抗炎活性成分筛选与单体验证
潘梓烨 1，常念伟 1，周梦鸽 2，段茜茜 2，李延美 2，姜 民 1*，白 钢 1
1. 天津中医药大学，天津 300073
2. 南开大学药学院，天津市分子药物研究重点实验室，天津 300071
摘 要：目的 探究桑菊饮的抗炎活性，明确其抗炎活性物质基础；为进一步阐明桑菊饮抗炎作用机制，建立其质量标准提
供依据。方法 采用 UPLC-Q/TOF 技术结合核因子-κB（NF-κB）荧光素酶报告基因检测系统筛选桑菊饮中具有抗炎活性的
药效成分，并选取人支气管上皮细胞（BEAS-2B），建立炎症损伤模型，对咖啡酸、绿原酸、甘草酸、马钱子苷和胡萝卜酸
等成分的抗炎活性进行验证。结果 筛选出 16 种具有抑制 NF-κB 活性的成分，其中胡萝卜酸、22β-乙酰基-甘草酸、甘草皂
苷 G2 抑制 NF-κB 活性为首次报道。结论 桑菊饮可以通过抑制 NF-κB 的表达发挥抗炎作用，其抗炎活性主要与 16 种单体
物质相关。
关键词：桑菊饮；抗炎；UPLC-Q/TOF；核因子-κB（NF-κB）；药效物质基础
中图分类号：R284；R284.51 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)08 - 1289 - 08
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.08.007
Screening of activity components with anti-inflammation in Sang Ju Yin and
verification of monomer
PAN Zi-ye1, CHANG Nian-wei1, ZHOU Meng-ge2, DUAN Xi-xi2, LI Yan-mei2, JIANG Min1, BAI Gang1
1. Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300073, China
2. Tianjin Key Laboratory of Molecular Drug Research, College of Pharmacy, Nankai University, Tianjin 300071, China
Abstract: Objective To investigate the anti-inflammatory activity of Sang Ju Yin (Mulberry Leaf and Chrysanthemum Decoction),
and elucidate its bioactive components on nuclear factor-κappa B (NF-κB) inhibition, and to further clarify the anti-inflammatory
mechanism of Sang Ju Yin, so as to provide the basis for establishing its quality standard. Methods UPLC-Q/TOF MS coupled with
NF-κB activity luciferase reporter assay system was applied to determine the potential anti-inflammatory components in Sang Ju Yin.
And the human bronchial epithelial cells (BEAS-2B) were selected to set up the inflammatory injury model, caffeic acid, chlorogenic
acid, glycyrrhizic acid, loganin, and malonic acid in Sang Ju Yin were investigated for their anti-inflammation. Results Sixteen
components were screened to have the NF-κB inhibitory effects. Among them, malonic acid, 22β-acetoxyl-glycyrrhizic acid, and
licorice saponin G2 were first reported to have the NF-κB inhibitory activity. Conclusion Sang Ju Yin contains the potential NF-κB
inhibitors. Sixteen potentially active ingredients are found to have the anti-inflammatory effects as NF-κB inhibitors.
Key words: Sang Ju Yin; anti-inflammation; UPLC-Q/TOF; NF-κB; pharmacodynamic material basis

桑菊饮为吴鞠通所创，首载于《温病条辨》，由
桑叶、菊花、杏仁、连翘、薄荷、苦桔梗、生甘草、
芦根 8 味中药组成，具有辛凉解表、疏风清热、宣
肺止咳之功效。传统用于风温初起所致的咳嗽、口
微渴、身热不甚、脉浮数等表热轻证[1]，西医学急
性上呼吸道感染、急性支气管炎等疾病均属本方应
用范畴[2]。本方在现代临床呼吸系统等疾病中应用
广泛，诸多方剂均由本方加减而成。现代药理研究
表明，桑菊饮对免疫系统有较好的调节作用，具有
抗炎、止咳、祛痰、平喘、抑菌等诸多药理活性[3]。
炎症在急性上呼吸道感染、急性支气管炎中起
着关键性的作用。发病过程中炎症因子肿瘤坏死因

收稿日期：2015-11-10
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81473403）
作者简介：潘梓烨（1989—），女，硕士在读，研究方向为复方药物与系统生物学。Tel: (022)23504933 E-mail: nihaopanpan123@163.com
*通信作者 姜 民，男，博士，副研究员，主要从事复方药物与系统生物学研究。Tel: (022)23506930 E-mail: minjiang@nankai.edu.cn
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子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-
6（IL-6）及白细胞介素-8（IL-8）均在患者体内显
著性升高[4-5]。核因子-κB（NF-κB）作为多种炎症介
质表达所必需的转录调节因子，在调节免疫、炎症反
应具有非常关键的作用[6-8]。NF-κB 转录因子调节着大
量基因的表达，例如 TNF-α、IL-1、IL-6 和 IL-8 等细
胞因子的表达均受其调节[9]。
根据文献记载，桑菊饮中 8 味中药均具有较
好的抗炎活性。Han 等[10]通过建立小鼠肺部急性
感染模型，表明菊花给药后能显著降低 TNF-α、
IL-6 和 IL-8 等炎症因子的表达。目前临床报道芦
根可以用来治疗感冒、急慢性支气管炎等呼吸系
统疾病。毛伟松[11]采用芦根贝母汤加减治疗急性
支气管炎，取得较好的治疗效果；陈福君等[12]通
过巴豆油所致小鼠耳廓肿胀实验，表明桑叶具有
较强的抗炎作用；周幼龙[13]采用薄荷大黄汤治疗
急性扁桃体炎有较好的疗效；杏仁具有驱风的功
效，传统上用于治疗胃炎、皮炎等疾病[14]；甘草
中的成分甘草酸，桔梗中的成分桔梗皂苷 D[15]，
连翘中的连翘酯苷 A[16]可以通过抑制 NF-κB 的表
达调控炎症因子的分泌。诸药合用组成的桑菊饮
也具有较好的抗炎活性[3]，但其作为复方联合应
用的抗炎物质基础研究未见报道。如能明确其物
质基础，对于科学阐释中药配伍理论，进一步探
讨中医治法均有重要意义。
为了快速准确地筛选出桑菊饮中抗炎活性成
分，本实验使用超高效液相色谱-四级杆/飞行时间
质谱（UPLC-Q/TOF）结合荧光素酶报告基因检测
系统筛选抑制 NF-κB 活性成分的方法，从抗炎角度
明确桑菊饮药效物质基础，筛选出 16 种具有 NF-κB
抑制活性的成分，其中胡萝卜酸、22β-乙酰基-甘草
酸、甘草皂苷 G2 抑制 NF-κB 活性为首次报道。
1 材料
1.1 试药
桑叶、菊花、杏仁、连翘、薄荷、桔梗、甘草、
芦根购自河北安国中药材批发市场，经天津药物研
究院张铁军研究员鉴定为桑 Morus alba L. 的干燥
叶、菊花 Chrysanthemum morifolium Ramat. 的干燥
头状花序、杏仁 Prunus armeniaca L. 的干燥成熟种
子、连翘 Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl 的干燥果
实、薄荷 Mentha haplocalyx Brip 的干燥地上部分、
桔梗 Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. 的干燥
根、甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根、芦
苇 Phragmites communis Trin. 的干燥根茎。
桑菊饮提取物的制备：根据《温病条辨》记载，
将桑叶（7.5 g）、菊花（3 g）、杏仁（6 g）、连翘（5 g）、
薄荷（2.5 g）、桔梗（6 g）、甘草（2.5 g）、芦根（6 g），
加水 2 L，煮取 1.3 L，真空泵滤过，浓缩，旋蒸得浸
膏，称得浸膏质量为 8.372 7 g，至于 4 ℃冰箱中保存。
1.2 主要试剂
胰蛋白酶（Gibco，美国）；TNF-a（Peprotech，
美国）；地塞米松（Dex，Sigma，美国）；PGL4.32
质粒和内参质粒 Prl-TK（Promega，美国）；细胞裂
解液（Promega，美国）；双荧光酶报告基因试剂盒
（Promega，美国）；脂质体 2000 转染试剂（PEI，
Invitrogen，美国）；酶联免疫 ELISA 试剂盒（上海
西唐生物科技公司）。
色谱纯甲醇、乙腈（Fisher，美国）；色谱纯甲
酸（Acros，比利时）；亮氨酸-脑啡肽醋酸盐（Sigma-
Aldrich，美国）；超纯水由 Milli-Q 制备（Millipore
Laboratory，Bedford，美国）。
对照品咖啡酸（批号 ABO97C，质量分数 99.5%）、
绿原酸（批号 AZ001C，质量分数 98.46%）、甘草酸
（批号 AB291G，质量分数 98%）、马钱子苷（批号
200604，质量分数 98%）购于天津一方科技公司，胡
萝卜酸（批号 M813040，质量分数 99.5%）购于上海
麦恪林公司（中国）。
1.3 实验细胞
人胚肾上皮细胞 293（HEK 293）、人支气管上
皮 细 胞 （ BEAS-2B ） 购 于 美 国 Type Culture
Collection，Rockville，MD 公司。HEK 293 培养于
DMEM 高糖培养基（HyClone，美国），包含 10%牛
血清白蛋白（FBS，Gibco，美国）和 1%双抗（100 U/mL
青霉素和 0.1 mg/mL 链霉素，Gibco，美国）；BEAS-2B
培养于 10% FBS 和 1%双抗的 RPMI 1640 完全培养
基，均在 5% CO2、37 ℃培养箱中培养。
1.4 主要仪器
Waters Acquity UPLC-Q/TOF Premier：配置自
动进样器、柱温箱、PDA 检测器、Masslynx 4.1 工
作站（Waters，美国）；色谱柱：Waters Acquity UPLC
BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；Velocity 14R
高速冷冻离心机（Dynamic，澳大利亚）；Milli-Q 超
纯水仪（MILLIPORE，美国）；DZF-6020 真空干燥
箱（河南予化仪器有限公司）；HF151UV CO2 细胞
培养箱（上海 Heal Force 公司）；XD-101 倒置显微
镜（南京东海光电子股份有限公司）；酶标仪（美国
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Bio-Rad 公司）；AB104-N 电子天平（Mettler Toledo
公司）；BIOELLEA Reader ELX800（Bio-Tek，美国）；
Modulus 荧光检测仪（美国 Turner Designs 公司）；
超净工作台（苏州净化设备有限公司）。
2 方法
2.1 桑菊饮抗炎活性评价
2.1.1 双荧光素酶报告基因质粒瞬时共转染
HEK293 细胞 HEK293 细胞于 96 孔板中培养，待
细胞汇合度在 50%～70%时与NF-κB荧光素酶报告
PGL4.32（100 ng/孔）及内参质粒 Renilla（9.6 ng/
孔）共转染，转染时使用脂质体 2000 作为辅助转染
试剂。将适当比例的质粒和转染试剂置于无 FBS 的
培养基中，混匀后静置 15 min，以确保质粒与转染
试剂充分结合。最后将转染液加入预培养的细胞 96
孔板中，于 CO2 培养箱中共孵育 24 h 以上。
2.1.2 细胞实验分组及给药 细胞实验分为 6 组，
分别为空白组，模型组，阳性药地塞米松组，桑菊
饮高、中、低剂量（1、0.1、0.01 mg/mL）组。细
胞各组预给药 6 h，阳性药组给予 1×10−5 mol/L 的
地塞米松；空白组、模型组给予新鲜培养基，加入
TNF-α（终质量浓度为 10 ng/mL）造模 6 h，收集的
裂解液用于 NF-κB 荧光检验。
2.1.3 NF-κB双荧光素酶报告基因活性检测 给药完
成后，弃去细胞培养液，用 PBS（100 μL/孔）洗涤
细胞 2 次，弃去 PBS 液，加入配制好的细胞裂解液（20
μL/孔），室温振荡 30 min 后，每孔吸出 15 μL 细胞裂
解液用于 NF-κB 双荧光素酶报告基因活性检测。
向 15 μL 细胞裂解液中加入 20 μL NF-κB 荧光
素酶报告基因质粒 pGL4.32（100 ng/孔）检测试剂，
轻轻混匀后，检测 NF-κB 荧光值（Modulus 荧光检
测仪），再加入 20 μL 内参荧光素酶检测试剂，轻轻
混匀后，检测 Renilla 荧光值。按公式计算 NF-κB 荧
光素酶活性，以相对荧光比率表示 NF-κB 抑制率。
相对荧光比率＝NF-κB 荧光值/Renilla 荧光值
2.2 桑菊饮抗炎活性成分的筛选
2.2.1 UPLC 色谱条件 色谱柱：Waters Acquity
UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱温 30
℃；体积流量 0.4 mL/min；PDA 检测 190～400 nm 扫
描；进样量 2.0 μL；流动相：乙腈（A）-0.1%甲酸水
溶液（B）；二元梯度洗脱条件：0～2 min，2% A；2～
20 min，2%～20% A；20～40 min，20%～40% A；40～
44 min，40%～85% A；44～45 min，85%～2% A。
2.2.2 Q-TOF 质谱条件 使用正、负离子 2 种模式
扫描测定，仪器参数如下：电喷雾离子源（ESI）；
V 模式；毛细管电压 3.0 kV（正模式），2.5 kV（负
模式）；锥孔电压 30 V；离子源温度 100 ℃；脱溶
剂气温度 350 ℃；脱溶剂氮气流量 600 L/h；锥孔
气流量 50 L/h；检测器电压 1 900 V；采样频率 0.1 s；
间隔 0.02 s；质量数扫描范围 100～1 500；内参校正
液 Lockmass 采用亮氨酸脑啡肽盐 LEA（[M＋H]+＝
555.293 1；[M－H]−＝553.277 5）。数据采集工作站
为 Masslynx 4.1。
2.2.3 UPLC 分段样品的制备 精密称取桑菊饮浸膏
10 mg，加入 1 mL 纯净水，配制成 10 mg/mL 水溶液
于 1.5 mL EP 管中，12 000 r/min 离心 15 min 后取上
清液，用于 UPLC 的馏份收集实验。样品经 UPLC 分
离后，将流出液按每 1 分钟一段收集于 96 深孔板（规
格：2.2 mL/孔）中，50 ℃真空干燥，挥去溶剂，再
向每孔加入 100 μL 细胞培养基复溶，放于振荡器中
振荡 20 min，待物质完全溶解后，加入到预先转染好
的细胞中分析每段馏份对 NF-κB 表达的影响。
2.2.4 抗炎活性物质结构鉴定方法 通过分析
Q-TOF 提供的一级、二级质谱信息并结合文献的方
法鉴定具有抗炎活性的化合物。经正、负模式下的
一级质谱分析，得到化合物的准分子离子峰信息。
通过精确质量数推断化合物的相对分子质量和元素
组成。通过二级碎片信息，推断化合物的裂解规律，
通过查阅大量文献以及数据库搜索，如 chemspider，
将裂解信息与文献或数据库中数据库进行比对，再
参考化合物的紫外吸收和相对保留时间等信息，确
定相关活性化合物的结构信息。
2.2.5 数据标准化处理方法 采用 SPSS13.0 软件
进行数据统计，实验结果以 ±x s 表示，组间比较采
用单因素方差分析（One-way ANOVA）。
2.3 单体验证
2.3.1 双荧光素酶报告系统验证 NF-κB 抑制活性
将咖啡酸、绿原酸、甘草酸、马钱子苷对照品用
HEK293 细胞培基稀释成 1×10−4、1×10−5、1×10−6
mol/L 进行细胞验证。操作方法同“2.1”项。
2.3.2 BEAS-2B 细胞炎症因子 IL-6 和 IL-8 水平测
定 将 BEAS-2B 细胞培养于 96 孔板中 24 h，完全
贴壁后，细胞各组（将咖啡酸、绿原酸、甘草酸、
马钱子苷和胡萝卜酸对照品用细胞培基稀释成 1×
10−4、1×10−5、1×10−6 mol/L 进行细胞验证）预给
药 6 h 后，用 TNF-α（终质量浓度为 10 ng/mL）刺
激 6 h 后收集上清，测定 IL-6、IL-8 水平。
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3 结果
3.1 桑菊饮在细胞水平的抗炎活性评价
由图 1 可见，TNF-α 刺激后，模型组 NF-κB 的
表达与对照组比较显著升高（P＜0.001），而与模型
组相比，阳性药组 NF-κB 的表达明显降低（P＜
0.01）。桑菊饮各剂量组均可降低 NF-κB 表达，且
具有剂量依赖性。
3.2 桑菊饮抗炎活性成分的筛选
3.2.1 桑菊饮分段样品对 NF-κB 表达的影响 本实
验通过UPLC/Q-TOF-MS的方法得到了桑菊饮的离子
流图，紫外图及正、负离子流图分别见图 2-A～C。
对桑菊饮 45 段馏份进行细胞活性筛选分析，发现其
中 16 种样品（其中 9 号峰由 2 个化合物组成）具有
抑制 NF-κB 活性（图 2-D）。
3.2.2 桑菊饮抗炎活性成分鉴定 按照“2.2.4”项
方法对细胞实验筛选出的 16 种样品中包含的对
NF-κB 具有显著抑制活性成分进行结构鉴定。鉴定
结果见表 1，结构见图 3。经质谱信息分析，文献检




与对照组比较：###P＜0.001；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01
###P < 0.001 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 vs model group
图 1 桑菊饮对 NF-κB 的抑制作用 ( x ±s, n = 3)
Fig. 1 Inhibition of Sang Ju Yin on NF-κB levels ( x ±s, n = 3)

t/min
A-紫外图 B-负离子模式离子流图 C-正离子模式离子流图 D-NF-κB 抑制率活性图，黑色柱为有效馏份，上面的数字所对应的化合物的信
息见表 1
A-UV chromatogram B-BPI chromatogram in negative mode C-BPI chromatogram in positive mode D-bioactivity chromatogram of inhibitory rate
on NF-κB, Black columns represent active ingredients, the peak numbers are consistent with those in Table 1
图 2 UPLC-Q/TOF 结合荧光素酶报告基因检测系统筛选桑菊饮中抑制 NF-κB 活性的单体成分 ( x ±s, n = 5)
Fig. 2 Screening on inhibitory activity of NF-κB in Sang Ju Yin using UPLC-Q/TOF coupled with luciferase reporter assay
system ( x ±s, n = 5)
TNF-α 10 ng·mL−1
###
**
*
**
0
20
40
60
80
100
相
对
荧
光
比
率
/%

对照 模型 地塞米松 1 0.1 0.01
桑菊饮/(mg·mL−1)
A
B
C
D
N
F-
κB
抑
制
率
/%

空白对照
2
7, 8 9, 10
5, 6
7~10
11, 12
11, 12
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表 1 桑菊饮样品中抗炎活性成分结构信息
Table 1 Information of bioactive compounds with anti-inflammation in SangJu Yin
峰号 tR/min 活性成分 离子模式 m/z MS/MS 化学式 来源
1 4.02 胡萝卜酸

负 204.027 0 203 [M－H]−, 185 [M－H2O－H]−,
249 [M＋HCOOH－H]−
C7H8O7 菊花
2 6.93 绿原酸

负 354.095 1 353 [M－H]−, 191 [M－caffeoyl－H]−,
399 [M＋HCOOH－H]−
C16H18O9 菊花
3 16.09 甘草苷

负 418.126 4 417 [M－H]−, 255 [M－Glu－H]−,
835 [2M－H]−
C21H22O9 甘草
4 17.02 甘草苷元-4′-芹糖葡萄糖苷

负 550.168 6 549 [M－H]−, 595 [M＋HCOOH－H]−,
1 099 [2M－H]−
C26H30O13 甘草
5 19.01 连翘脂苷 A

负 624.205 4 623 [M－H]−, 461 [M－Glu－H]−,
1 247 [2M－H]−
C29H36O15 连翘
6 19.07 甘草次酸

正 470.339 6 471 [M＋H]+, 325 [M－rhamnose＋
H]+, 163 [M－rhamnose－Glu＋H]+
C15H16O8 甘草
7 19.46 异连翘脂苷 A

负 624.205 4 623 [M－H]−, 461 [M－Glu－H]−,
124 7 [2M－H]−
C29H36O15 连翘
8 19.48 连翘脂苷 D

正 478.168 6 479 [M＋H]+, 642 [M＋rhamnose]+,
643 [M＋rhamnose＋H]+
C20H30O13 连翘
9 20.04 (+)-松脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷＋
3,5-二咖啡酰基奎宁酸
负 520.194 5
516.126 8
519 [M－H]−, 357 [M－Glu－H]−,
565 [M＋HCOOH－H]−；
515 [M－H]−, 353 [M－caffeoyl－H]−,
191 [M－2caffeoyl－H]−
C19H35O16
C25H24O12
连翘＋
菊花
10 20.01 L-苯基丙酸氨基断马钱子苷

正 537.221 0 538 [M＋H]+, 357 [M－Glu＋H2O]+,
555 [M＋H2O]+
C26H35NO11 菊花
11 32.63 刺槐素-7-O-6″-甲基葡萄糖苷

正 532.121 3 533 [M＋H]+, 550 [M＋H2O]+,
285 [M＋H－malonylgalactoside]+
C25H24O13 菊花
12 32.87 桔梗皂苷 D

正 1 224.577 5 1 225 [M＋H]+, 1 242 [M＋H2O]+,
1 063 [M－Glu＋H]+
C57H92O28 桔梗
13 35.11 22β-乙酰基-甘草酸

负 880.409 3 879 [M－H]−, 923 [M＋HCOOH－
2H]−, 938 [M＋CH3COOH－2H]−
C44H64O18 甘草
14 38.00 甘草皂苷 G2

正 838.398 7 839 [M＋H]+, 857 [M＋H2O＋H]+,
469 [M－2glucuronic acid]+
C42H62O17 甘草
15 40.23 甘草酸

正 822.403 8 823 [M＋H]+, 841 [M＋H2O＋H]+,
453 [M－2glucuronic acid]+
C42H62O16 甘草

索及相关书籍《中药原植物化学成分集》等的查阅，
得到这 16 种化合物，6 个来源于甘草，4 个来源于
连翘，5 个来源于菊花，1 个来源于桔梗。
3.3 抗炎活性单体验证
选取咖啡酸、绿原酸、甘草酸、马钱子苷、胡
萝卜酸按“2.3.1”项方法进行细胞验证。咖啡酸、
绿原酸、甘草酸、马钱子苷等成分在浓度 1×10−5
mol/L 时抗炎活性较好已有报道[17]，实验设计中把
1×10−5 mol/L 作为阳性验证的浓度，来说明双荧光
素酶报告系统可以成功地进行植物提取液 NF-κB
的筛选。并且由于活性成分 22β-乙酰基-甘草酸、甘
草皂苷 G2、胡萝卜酸为首次报道，故在实验中做了
胡萝卜酸的梯度验证，发现胡萝卜酸（1×10−5 mol/L）
能够抑制 NF-κB 的表达。由图 4 可见，5 个化合物
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R4
R3 O
R1
R2
O
HO R3
R1
R2
O
O
OH
OH
R1
R3
O
OH
O OHO
OHOH
O
OH
OH
O
OH
OH
OH
H
OH
O
O
H H
OH
O
O
OHO
OH
HO
HO
O
H OH
O
O OHN
H
O
H O
OHO
OH
HO
HO
R2
R4
R1
R3O
OR2
O
OH
HO
HO
OH
HO
O
O
O
O
OH
OH
O
OH
OH
OHO
OHOH
OH
HO
O
O
O O
OH
OH
OOH
OHOH
O
OH
OH
OHO
O
OH
OH
O
OH
3 R1=H,R2=O-glucose, R3=OH, R4=H
4 R1=H, R2=O-glucose-rhamnose,
R3=OH, R4=H
9 R1=caffeoyl, R2=OH, R3=COOH
11 R1=H, R2=OCH3, R3=O-(6-malonyl)
galactose, R4=OH
6 R1=H, R2=H, R3=O, R4=OH
12 R1=CH2OH, R2=Ara-Rha-Xyl-Api, R3=Glc
13 R1=CH3, R2=O-CO-CH3, R3=O, R4=O-glucose
14 R1=CH2OH, R2=H, R3=O, R4=O-glucose
15 R1=CH3, R2=H, R3=O, R4=O-glucose
2 R1=OH, R2=OH, R3=COOH
5 7 8
109
1

图 3 桑菊饮中活性单体的化学结构
Fig. 3 Chemical structures of active monomers in Sang Ju Yin
咖啡酸、绿原酸、甘草酸、马钱子苷、胡萝卜酸也
可以降低细胞炎症因子 IL-6 和 IL-8 的表达水平（P＜
0.05、0.01、0.001）。
4 讨论
因为具有低毒、高效的特点，传统中药越来越
受到人们的重视，而复方制剂因为多种成分的配伍
使用，常常发挥比单味饮片更佳的治疗效果，如文
献中记载复方黄连解毒汤，其主要成分包括黄酮和生
物碱等，这些主、次成分彼此协同，从而达到比较好
的抗炎效果[18]。但同时中药具有成分复杂，质量可控
性差等缺点。简单选取几种药效成分并不能对中药进
行有效质量控制。如《中国药典》在菊花的质量控制
中，只选取绿原酸，木犀草苷和异绿原酸 A 为指标成
分，但这并不能满足菊花药材质量控制需求[10]。另一
方面阐明桑菊饮的抗炎物质基础，不但能为其建立
可靠质量标准提供依据，还有助于下一步了解桑菊
饮的抗炎机制，明确药物作用的靶点，而为后续精
简复方，去除有害成分，找到具有较少的副作用，
更好疗效的抗炎药物做准备。
本实验采用 UPLC/Q-TOF 结合 NF-κB 双荧光
素酶报告基因系统，筛选出桑菊饮中 15 段共 16 种
活性成分。其中 5 个活性成分来源于菊花，6 个来
源于甘草，4 个来源于连翘，1 个来源于桔梗。绿原
酸、甘草酸、桔梗皂苷 D、咖啡酸、马钱子苷、连
翘脂苷 A、甘草苷等成分抗炎活性已有报道[19-21]，
胡萝卜酸、22β-乙酰基-甘草酸、甘草皂苷 G2 等调
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 8 期 2016 年 4 月

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与对照组比较：###P＜0.001；与模型组比较：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001
###P < 0.001 vs control group; *P < 0.05 **P < 0.01 ***P < 0.001 vs model group
图 4 桑菊饮整方及活性成分单体验证 (A 和 B：双荧光素酶报告系统验证活性单体 NF-κB 的抑制量；C 和 D：活性单体及
桑菊饮整方降低细胞炎症因子 IL-6 和 IL-8 的表达量, x ±s, n = 3)
Fig. 4 Confirmation of bioactive compounds from holistic Sang Ju Yin and active monomers (A and B: inhibition of NF-κB
verified by luciferase reporter assay; C and D: IL-6 and IL-8 expression in TNF-α reduced by holistic Sang Ju Yin, x ±s, n = 3)
控 NF-κB 活性为首次报道。
上皮细胞是气道与外界的屏障，是细菌感染的直
接接触部位，更是炎症反应和药物作用的主要位点，
在细胞因子及各种免疫调节介质的产生过程中起着
十分重要的作用。在本研究中，首先选用人支气管上
皮细胞建立炎症模型，在体外细胞水平上评价筛选出
的 5 个单体，即咖啡酸、绿原酸、甘草酸、马钱子苷
和胡萝卜酸，实验结果显示这 5 个化合物都能够明
显抑制 NF-κB 的表达，也可以降低细胞炎症因子
IL-6 和 IL-8 的表达水平，与筛选结果相一致。
通过本实验筛选出桑菊饮中比较好的抗炎活性
成分，初步明确了其抗炎物质基础，为进一步阐明
其抗炎作用机制提供了条件，也为以后建立其质量
标准提供依据。但由于桑菊饮中化学成分复杂，本
实验筛选出的一些比较好的活性峰并不是单一成
分，如图 2-D 中第 5 个活性柱，经鉴定有效成分有
5、6；第 6 个活性柱，有效成分有 7、8、9、10；
第 7 个活性柱，有效成分有 11、12。并且对于复方
中的主、次成分是否存在协同抗炎及这些成分与桑
菊饮其他药理活性，比如抗菌、解热、发汗、抑制
肠蠕动亢进和增强免疫是否存在联系也需要进一步
的研究[3]。
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A
0
200
400
600
800
相
对
荧
光
比
率
/%

TNF-α 10 ng·mL−1
TNF-α 10 ng·mL−1
TNF-α 10 ng·mL−1
TNF-α 10 ng·mL−1 C
B
D
0
200
400
600
800
对照 模型 地塞米松 咖啡酸 绿原酸 甘草酸 马钱子苷
对照 模型 地塞米松 咖啡酸 绿原酸 甘草酸 马钱子苷
###
*** ***
***
* **
N
F-
κB
抑
制
率
/%

对照 模型 地塞米松 1×10−4 1×10−5 1×10−6
胡萝卜酸/(mol·L−1)
对照 模型 地塞米松 1×10−4 1×10−5 1×0−6
胡萝卜酸/(mol·L−1)
0 0
200200
400
400
600
600
800
800
1 000
IL
-6
或
IL
-8
/(p
g·
m
L−
1 )

IL
-6
或
IL
-8
/(p
g·
m
L−
1 )
IL-6
IL-8
##
**
*
*
###
###
*** ***
**
**
*
###
###
***
***
***
***
***
***
***
***
**
**
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