全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2288·
超滤膜技术用于脉络宁注射液废弃物中多糖分离及其活性筛选研究
刘双双 1, 2, 3,刘丽芳 1*,朱华旭 2*,肖秋萍 2,郭立玮 2,段金廒 2,潘永兰 2,汤卫国 3,张瑞梅 3
1. 中国药科大学 天然药物活性组分与药效国家重点实验室,江苏 南京 210009
2. 南京中医药大学 江苏省中药资源产业化过程协同创新中心,江苏 南京 210023
3. 金陵药业股份有限公司南京金陵制药厂研究所,江苏 南京 210009
摘 要:目的 采用超滤膜技术对脉络宁注射液废弃物进行资源化研究。方法 脉络宁注射液大生产废弃醇沉物中富含石斛
多糖、牛膝多糖和金银花多糖,通过免疫活性筛选自废弃物中分离出富含多糖的有效部位。采用不同孔径超滤膜将废弃醇沉
物分离所得粗多糖分为相对分子质量<3×103、3×103~1×104、1×104~3×104、3×104~1×105、1×105~3×105、>3×
105共 6 个部位,分别命名为 MFP1、MFP2、MFP3、MFP4、MFP5、MFP6;利用苯酚-硫酸比色法和考马斯亮蓝 G-250 染
色法测定MFP1~MFP6中多糖和蛋白质的量;ELSD-HPLC法检测MFP1~MFP6中多糖组分;通过小鼠脾淋巴细胞增殖、
转化和小鼠单核巨噬细胞 RAW264.7释放 NO实验对MFP1~MFP6进行免疫活性筛选。结果 MFP1~MFP6多糖定量测定
结果发现 MFP4多糖的量最高且免疫活性最优,多糖的量和得率分别为 76.80%和 10.81%;MFP5免疫活性次之,其量和得
率分别为 73.23%和 14.73%;结论 MFP4和 MFP5是免疫活性较优的部位,具开发利用价值。超滤膜技术可用于脉络宁注
射液废弃物中多糖资源化利用,该工艺过程简便易行,成本低廉,在循环经济利用中具有独特优势。
关键词:脉络宁注射液;废弃物资源化;超滤膜技术;多糖;活性筛选
中图分类号:R284.2 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2016)13 - 2288 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.13.014
Separation of polysaccharides from industrialization waste in Mailuoning
Injection by ultrafiltration membrane technology and screening for active
indicators
LIU Shuang-shuang1, 2, 3, LIU Li-fang1, ZHU Hua-xu2, XIAO Qiu-ping2, GUO Li-wei2, DUAN Jin-ao2, PAN
Yong-lan2, TANG Wei-guo3, ZHANG Rui-mei3
1. The State Key Laboratory of Active Ingredients and Efficacy in Natural Medicines, China Pharmaceutical University, Nanjing
210009, China
2. Jiangsu Collaborative Innovation Center of Chinese Medicinal Resources Industrialization, Nanjing University of Chinese
Medicine, Nanjing 210023, China
3. Nanjing Jinling Pharmaceutical Institute, Jinling Pharmaceutical Co., Ltd., Nanjing 210009, China
Abstract: Objective In this study, ultrafiltration membrane process is employed first to separate the polysaccharides from
industrialization waste in Mailuoning Injection and to promote the resources utilization of the waste. Methods The waste ethanol
sediments in the production of Mailuoning Injection mainly include dendrobium polysaccharides, Achyranthes bidentata polysaccharides
(ABPS), and honeysuckle polysaccharides, and the active components of polysaccharide with high content were selected through the
immune activity. Six different relative molecular weight cut-off membranes (< 3 × 103, 3 × 103—1 × 104, 1 × 104—3 × 104, 3 × 104—1 ×
105, 1 × 105—3 × 105, > 3 × 105) made of polyether sulfone (PES) were used. Six fractions were obtained and named as MFP1, MFP2,
MFP3, MFP4, MFP5, and MFP6. Meanwhile, polysaccharides and protein content were determined by phenol-sulfuric acid colorimetry
收稿日期:2016-03-13
基金项目:江苏省科技厅产学研联合创新资金——前瞻性研究项目(BY2012036);江苏省六大人才高峰项目(2014-YY-014);江苏省中药资
源产业化过程协同创新中心分离平台建设项目(ZDXM-1-6,ZDXM-1-8);江苏省高校优势学科建设工程资助项目;南京中医药大
学校级创新团队资助;江苏省重点研发计划-社会发展面上项目(BE2016754)
作者简介:刘双双(1990—),女,在读硕士,研究方向为现代中药分析。Tel: 13260882127 E-mail: shuang_tcp@163.com
*通信作者 刘丽芳(1969—),女,博士生导师,研究方向为现代中药分析及中药新药研究。Tel: (025)86185136 E-mail: liulifang69@126.com
朱华旭(1972—),女,研究员,研究方向为中药制药过程分离技术研究。Tel: (025)85811070 E-mail: huaxu72@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2289·
and Coomassie brilliant blue G-250 staining method; Polysaccharides species was analyzed by ELSD-HPLC; Immunocompetence of
different fractions were investigated in vitro, including mouse spleen lymphocytes proliferation, transformation, and production of
nitric oxide after acting on the macrophage RAW264.7. Results The results showed MFP4 (3 × 104—1 × 105) have the highest
content and immunocompetent, MFP5 (1 × 105—3 × 105) immunocompetent followed, compared to others, purity, and recovery of
MFP4 are 76.80% and 10.81%, purity and recovery of MFP5 are 73.23% and 14.73%, respectively. Conclusion The findings reveal
MFP4 and MFP5 serves as our object of exploitation in the future; Moreover, separation of polysaccharides from “Mailuoning
Injection” by the membrane is feasible with high recovery and low cost in the realization of circular economy.
Key words: Mailuoning Injection; resource utilization; ultrofiltration membrane technology; polysaccharides; activity screening
脉络宁注射液由金陵药业股份有限公司南京金
陵制药厂生产,由牛膝、玄参、石斛、金银花 4味
药材经水提、醇沉、醋酸乙酯精制等工艺处理后而
得。为国家级中药保护品种,是防治血栓性闭塞性
血管病的中药复方注射液,为国家基本药物目录所
保留的 8个中药注射液品种之一,已成为全国中医
院急诊必备药品。该注射液生产过程产生的废弃物
主要有:水提取后 4味药的混合药渣、乙醇沉淀物、
醋酸乙酯萃取后剩余物及制药过程产生的大量废
水。中药资源产业化过程中废弃的植物根系、地上
茎叶、药渣、深加工过程废弃物等不仅造成严重的
资源浪费,而且会造成严重的环境污染问题。针对
这一社会问题,探索中药废弃物的资源化利用策略
与模式势在必行[1]。根据中药废弃物的来源与组成
特征,其利用策略主要有:传统非药用部位多途径
利用、中药材与中药饮片加工过程废弃物回收利用
和中药资源深加工过程废弃物回收利用[2-3]。在本实
验室前期研究中发现,乙醇沉淀物富含多糖、蛋白
质等大分子物质,据文献报道,牛膝、金银花和石
斛多糖均有免疫活性,故本研究以大生产中所产生
的乙醇沉淀废弃物为研究对象,对其进行活性跟踪
分离,以期对其实现资源化利用[4-7]。
水提醇沉是中药制药生产的通用技术,由此而
生成的半固体物料因含有大量糖类等大分子物质,
稠厚、黏度大,极难干燥,不但限制了其再利用,
还成为中药行业污染环境,浪费资源的共有技术难
题。采用超滤膜分离多糖,与传统的多糖分离方法
(如乙醇分级沉淀和凝胶渗透色谱法)相比,不仅分
离过程简单,省时高效,节能,无相变,能避免生
物活性成分损失[8];同时能够提高多糖纯度,富集
有效部位。另外,在清洗使用得当时可以长期连续
使用并保持较恒定的产量和分离效果,在相当低的
压力差下仍具有高流通率。膜科学技术因具有节约、
清洁、安全等优势可作为中药废弃物资源化的重要
选择之一[9-10]。本研究将膜技术与制药过程废弃物
资源化开发有机结合,对于提升中药产业竞争力,
促进中药产业的性能优化与升级,推进中药资源可
持续发展具有重要意义。
1 仪器与材料
Waters 2695 高效液相色谱仪,美国 Waters 公
司,Waters 2424 ELSD检测器,Waters 2998 PDA
检测器;Allegra64R Centrifuge高速冷冻离心机,美
国贝克曼库尔特有限公司;Libro AEL-40SM十万分
之一电子分析天平,日本岛津公司;EnSpire酶标仪,
美国 PerkinElmer公司;切向流过滤系统,美国 GE
公司;超滤膜,美国 GE 公司;材质 PES,截留相
对分子质量(MW)为 3×103、1×104、3×104、1×
105、3×105,滤膜有效面积为 0.1 m2。
脉络宁注射液乙醇沉淀物来源于金陵药业股份
有限公司南京金陵制药厂。98%浓硫酸,批号 81007,
上海凌峰化学试剂有限公司;5%苯酚,广州金华大
化学试剂有限公司,批号 20150119;无水葡萄糖对
照品,批号 7B8L-257Z,中国食品药品检定研究院;
RPMI 1640培养液,批号 G40307,上海源培生物科
技有限公司;DMEM 培养液,批号 K40308,上海
源培生物科技有限公司;红细胞裂解液,Biosharp
公司,批号 65098010;双抗(批号 H20210)、胰酶
(批号 B40301)、胎牛血清(批号 JC30131),Sigma
公司;CCK-8试剂盒,Vazyme公司,批号 A311-02;
BCA蛋白质浓度测定试剂盒(批号 P0012)、NO测
定试剂盒(批号 S0021),上海碧云天生物技术有限
公司;氯仿、无水乙醇、正丁醇(分析纯);水为超
纯水。雄性昆明种小鼠,SPF级,体质量(20±2)
g,由上海杰思捷动物有限公司提供,合格证号
SCXK2015-0006。RAW 264.7细胞株,由中国科学
院细胞库提供。
2 方法与结果
2.1 脉络宁注射液乙醇沉淀物粗多糖的超滤膜分离
2.1.1 预处理 取一定量冻干的脉络宁注射液乙醇
沉淀物,加蒸馏水溶解稀释制备成质量浓度为 20
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2290·
mg/mL的溶液,5 000 r/min离心 10 min,取上清液
即得富含多糖的溶液(以下简称为MFP)。
2.1.2 不同MW区段MFP样品的制备 按参考文献
的方法[11-12],在 25 ℃,入口压力 0.3 MPa,出口压
力 0.1 MPa下,分别用截留MW 3×105、1×105、3×
104、1×104、3×103的超滤膜将 MFP 分离为不同
MW 区段多糖,共得 MFP1(MW<3×103)、MFP2
(MW 3×103~1×104)、MFP3(MW 1×104~3×
104)、MFP4(MW 3×104~1×105)、MFP5(MW 1×
105~3×105)、MFP6(MW>3×105)6个部位。各
部位分别浓缩,冷冻干燥,称定质量,计算得率(ω)。
ω=W0/W
W0为各 MW段多糖的质量,W为超滤前多糖的质量
2.2 多糖的定量测定
采用苯酚-硫酸法[13]测定不同 MW区段 MFP 样
品中多糖的量,各分离部位 MFP1~MFP6 中的多
糖测定结果见表 1。
2.3 蛋白质的定量测定
采用考马斯亮蓝 G-250染色法[14]测定不同 MW
区段MFP样品的蛋白质的量,各分离部位MFP1~
MFP6 中蛋白质测定结果见表 1。由表 1 的研究结
果可知,MFP3、MFP4、MFP5 3 部分多糖得率较
高,其多糖的量也较其他部分较高,说明脉络宁复
方多糖的 MW多分布在 1×104~3×105。
表 1 各分离部位的成分测定结果
Table 1 Composition results of different separation parts of
MFP
部位 MW ω/% 多糖/% 蛋白质/%
MFP1 <3×103 2.14 54.39 0.98
MFP2 3×103~1×104 6.74 71.08 1.31
MFP3 1×104~3×104 14.06 74.81 2.33
MFP4 3×104~1×105 10.81 76.80 5.97
MFP5 1×105~3×105 14.73 73.23 3.33
MFP6 >3×105 6.74 52.55 8.26
2.4 HPLC法检测多糖组分
2.4.1 色谱条件 [15] 色谱柱是 Tsk-gel G4000
PWXL0(300 mm×7.8 mm)柱(Column No.
A00026);柱温 30 ℃;流动相为 100%超纯水;等
度洗脱;体积流量 0.5 mL/min;进样量 20 μL;漂
移管温度 60 ℃;载气为氮气;气体压力为 275.80
kPa(40 psi);增益:10;色谱图见图 1。
2.4.2 供试品的制备 精密称定 10 mg样品,溶于
图 1 MFP 及其各分离部位 MFP1~MFP6 多糖的
HPLC-ELSD图
Fig. 1 HPLC-ELSD chromatogram of MFP and MFP1—
MFP6
2 mL纯水中,充分溶解,过 0.45 μm 滤膜,即得。
2.4.3 样品测定 分别将 MFP 及其各分离部位
MFP1~MFP6按“2.4.2”项下条件处理,按“2.4.1”
项色谱条件进样分析,MFP 及 MFP1~MFP6 的多
糖 HPLC图见图 1。由图 1的研究结果可知,MFP
主要包括组分 1、2,组分 1 MW高于组分 2。经超
滤膜分离后,MFP1~MFP4 组分 2 为对称峰,经
PDA检测无紫外吸收,MFP、MFP6和MFP5的组
分 2 为非对称单峰,经 PDA 检测发现有蛋白质存
在。结果表明截留 MW大于 1×105的超滤膜基本能
去除蛋白。MFP组分 1包含多种高MW多糖,MFP1、
MFP2、MFP3组分 1基本无吸收,说明高 MW多糖
的量很低,MFP4、MFP5和MFP6组分 1中多糖逐
渐分开,MFP6 组分 1 能明显看到有 3 种高 MW多
组分 1
组分 2 MFP1
组分 2
组分 1
MFP2
组分 1
组分 2 MFP3
组分 1
组分 2 MFP4
组分 1
组分 2 MFP5
组分 2
组分 1
MFP6
组分 1
组分 2
0 10 20 30 40
t/min
MFP
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2291·
糖的分离,说明对小分子杂质去除率较好。可见超
滤膜不仅能实现蛋白质等杂质的去除,也能实现高
MW多糖的分离和富集。
2.5 各分离部位的体外免疫活性筛选
2.5.1 小鼠脾淋巴细胞的制备 取 6周龄左右小鼠
脱臼处死,75%乙醇浸泡 2~3 min,无菌条件下取
脾脏,用 PBS 缓冲液冲洗 1~2次,将脾脏研磨后
过 200目筛网,收集滤液,1 000 r/min离心 5 min,
弃上清,加入红细胞裂解液,静置 15 min,1 000
r/min离心 5 min,弃上清,分别用 PBS和RPMI 1640
培养基各洗 1次,弃上清,加入含 10%胎牛血清的
RPMI 1640完全培养液悬浮细胞,得到细胞悬液,
培养 4 h后收集非贴壁细胞[16-17]。取纯化后的细胞
悬液,台盼蓝染色法检测细胞活力大于 95%,并调
整细胞浓度为 1×106个/mL。
2.5.2 体外刺激小鼠脾淋巴细胞增殖实验 将 1×
106个/mL淋巴细胞悬液加入 96孔细胞培养板对照
孔和样品孔中,每孔 100 μL,置 37 ℃、含 5% CO2
培养箱中连续培养 24 h后,于空白对照孔、阳性对
照孔和样品孔中分别加入 RPMI 1640培养基、LPS
(终质量浓度 5 μg/mL)和设有不同质量浓度梯度的
MFP、MFP1、MFP2、MFP3、MFP4、MFP5、MFP6
(终质量浓度分别为 62.5、125.0、250.0、500.0
μg/mL),每组设 3个复孔。连续培养 48 h后,加入
CCK-8溶液,培养 2 h后,酶联免疫检测仪于 450 nm
下测吸光度 A450值,计算各组相对增殖率(SI)[18]。
SI=A 样品/A 空白对照
2.5.3 刀豆蛋白 A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞
体外转化实验 将 1×106个/mL淋巴细胞悬液加入
96孔细胞培养板对照孔和实验孔中,每孔 100 μL,
置 37 ℃、含 5% CO2培养箱中连续培养 24 h后,
于对照孔和实验孔均加入诱导剂 ConA 10 μL(终质
量浓度 5 μg/mL)[19],并分别加入 RPMI 1640培养
基和设有不同质量浓度梯度的MFP、MFP1、MFP2、
MFP3、MFP4、MFP5、MFP6(终质量浓度分别为
62.5、125.0、250.0、500.0 μg/mL),每组设 3个复
孔。连续培养 48 h后,按“2.5.2”项所述方法测定
各细胞培养孔 A450值,并计算各组的 SI值。
2.5.4 统计学分析 采用 SPSS 16.0软件进行统计
分析,结果以 ±x s表示,t检验采用 SPSS 19统计
软件完成。
2.5.5 不同多糖部位对小鼠脾淋巴细胞增殖、转化
的影响 为考察不同质量浓度的不同MW MFP免疫
活性,以促进小鼠脾淋巴细胞的增殖作为考察分析
的根据,考察其免疫促进功能,MFP1~MFP6对小
鼠脾淋巴细胞增殖结果见图 2。ConA是小鼠脾淋巴
T 细胞分裂原,多糖与其协同作用能刺激小鼠脾淋
巴细胞转化[20],MFP1~MFP6对 ConA诱导的小鼠
脾淋巴细胞转化结果见图 3。由图 2、3的研究结果
可知,MFP、MFP4、MFP5和MFP6能显著促进小
鼠脾淋巴细胞的增殖和转化(P<0.05、0.01),高
质量浓度的MFP1和MFP2反而有抑制作用。表明
与空白对照组比较:*P<0.05 **P<0.01,下同
*P < 0.05 **P < 0.01 vs control group, same as below
图 2 不同质量浓度 MFP 及 MFP1~MFP6 对小鼠脾淋巴
细胞增殖的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 2 Effects of different centrations of MFP and MFP1—
MFP6 on proliferation of mouse spleen lymphocytes ( x±s,
n = 3)
图 3 不同质量浓度 MFP 及 MFP1~MFP6 对 ConA 诱导
的小鼠脾淋巴细胞转化的影响 ( x±s, n = 3)
Fig. 3 Effects of different centrations of MFP and MFP1—
MFP6 on transformation of mouse spleen lymphocytes
( x±s, n = 3)
空白对照 LPS MFP MFP1 MFP2 MFP3 MFP4 MFP5 MFP6
* *
*
*
**
**
*
*
**
62.5 μg∙mL−1
125.0 μg∙mL−1
250.0 μg∙mL−1
500.0 μg∙mL−1
1.4
1.3
1.2
1.1
1.0
0.9
0.8
SI
空白对照 MFP MFP1 MFP2 MFP3 MFP4 MFP5 MFP6
*
*
**
*
*
*
*
**
SI
62.5 μg∙mL−1
125.0 μg∙mL−1
250.0 μg∙mL−1
500.0 μg∙mL−1
1.2
1.1
1.0
0.9
0.8
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2292·
促进小鼠脾淋巴细胞增殖部位主要分布在MW>3×
104区段,其中,MW 3×104~1×105区段多糖促进
作用最为显著,MW 1×105~3×105区段多糖次之。
2.5.6 不同多糖部位对小鼠单核巨噬细胞 RAW
264.7释放NO能力的影响 将巨噬细胞RAW 264.7
以 5×105个/mL 的浓度接种到 96 孔培养板中,每
孔 100 μL,置 37 ℃、含 5% CO2培养箱中连续培
养 24 h后更换细胞培养液。于空白对照孔、阳性对
照孔和实验孔中分别加入 DMEM完全培养基、LPS
对照药(终质量浓度 5 μg/mL)和设有不同质量浓
度梯度的 MFP、MFP1、MFP2、MFP3、MFP4、
MFP5、MFP6(终质量浓度均分别为 31.25、62.5、
125.0、250.0、500.0 μg/mL),每组设 3个复孔。作
用巨噬细胞 RAW 264.7 24 h后收集各孔中的细胞
培养上清[21],按照 NO 测定试剂盒操作步骤测定
NO的生成量。NO作为一种多功能的内源性生物信
息分子,其在免疫系统的多种生理过程中均发挥着
重要作用,是巨噬细胞发生免疫激活反应的重要因
子[22]。不同 MW区段MFP体外刺激巨噬细胞 NO生
成的实验结果见图 4。由图 4 可知,与空白对照组
相比,MFP 和 MFP4 能显著促进巨噬细胞 RAW
264.7释放 NO(P<0.05、0.01),高质量浓度的MFP1
对 NO的释放具抑制作用,说明促进小鼠单核巨噬
细胞 RAW264.7 释放 NO 部位主要分布在 MW 3×
104~1×105区段。
综上所述,采用不同孔径超滤膜对醇沉废弃物
中多糖进行分离,分离所得 6个部位多糖的量和种
图 4 不同质量浓度 MFP 及 MFP1~MFP6 对小鼠单核巨
噬细胞 RAW264.7释放 NO能力的影响 ( x±s, n = 6)
Fig. 4 Production of nitric oxide after different centrations
of MFP and MFP1—MFP6 acting on macrophage
RAW264.7 ( x±s, n = 6)
类不同,采用 3 种典型的免疫活性评价指标对
MFP1~MFP6 的免疫活性进行初步评价[23-24]。其
中,MFP1(MW<3×103)多糖的量较少,可能主
要为单糖、低聚糖及色素富集的部位,未检测到免
疫活性。MFP2(MW 3×103~1×104)和MFP3(MW
1×104~3×104)虽富含多糖,但免疫活性较弱,不
作为后续多糖资源化的主要部位。MFP4(MW 3×
104~1×105)和MFP5(MW 1×105~3×105)得率
较高,与 MFP 相比免疫活性提高,故作为后续多
糖资源化考察的主要部位。MFP6(MW>3×105)
为大 MW多糖和蛋白质富集的部位,也具免疫活性。
3 讨论
推行清洁生产、实现减废减毒是废弃物资源化
的必然选择。膜科学技术符合建设资源节约型和环
境友好型社会,以及循环经济的发展思路。目前膜
技术研究已逐渐深入,在工业上已成熟应用于废水
处理、气体处理、化工产品生产、发酵工业等,基
于筛分效应的超滤和微滤可在 MW范围对物质进行
切割,是国际公认的最有发展前途的,也是我国中
药制药工业亟需推广的高新技术。
牛膝、玄参、石斛、金银花均为临床常用中药,
根据中国药材市场网报道,4 味中药的供应日趋紧
张,价格逐年上扬。本实验研究对象 MFP 是 4 味
药材经水提醇沉之后的混合多糖,本实验室前期研
究发现MFP能提高雏鸡的免疫能力,但无显著性,
超滤法分离MFP旨在找到活性最优部位,而MFP4
和MFP5的体外免疫活性均优于MFP。本实验室后
期会对 MW 1×105~3×105区段多糖深入考察其免
疫活性,并对其主要多糖成分进行分离与鉴定,欲
将其开发为一种免疫调节剂,作为禽类动物的饲料
添加剂,显著提高禽类动物的免疫能力。故本研究
结果不仅为 MFP 的再利用找到途径,还可为中药
资源产业化过程中醇沉物利用提供示范。
目前,中药废弃物的综合利用技术尚处于初级
阶段,研究领域具有明显局限性,围绕农业种植业、
养殖业方向的居多,其次是建筑业,在其他领域的
利用研究较少,特别是中药资源深加工过程废弃物
资源化在医学上的研究更是凤毛麟角。本研究及其
后续研究将围绕国家中药保护品种——脉络宁注射
液的废弃物资源化,以中医药学、民族医药学与资
源学理论为指导,通过利用生物学价值发现技术如
药效评价、保健功能评价、兽药活性评价、农药效
应评价等,发现大生产过程产生的非药用部位、加
空白对照 LPS MFP MFP1 MFP2 MFP3 MFP4 MFP5 MFP6
*
* *
*
** 31.25 μg·mL−1
62.5 μg·mL−1
125.0 μg·mL−1
250.0 μg·mL−1
500.0 μg·mL−1
N
O
生
成
量
/(μ
m
ol
∙L
−1
)
25.0
22.5
20.0
17.5
15.0
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 13期 2016年 7月
·2293·
工过程形成的废弃物,以及中药材深加工产业过程
中形成的废弃部分可利用价值,基于现代分离技术,
实现废弃物的多途径、多层次综合利用,探索成本
可控的中药废弃物资源化循环利用经济模式,提升
资源利用效率。促进中药资源产业化过程中由传统
工艺向生态工艺转化,实现中药资源产业的可持续
发展[25-26]。
参考文献
[1] 沈 飞, 宿树兰, 江 曙, 等. 丹红注射液生产过程中
丹参固体废弃物的资源性成分分析及其转化机制研究
[J]. 中草药, 2015, 46(16): 2471-2476.
[2] 段金廒, 吴启南, 宿树兰. 2012—2013年我国中药及天
然药物资源研究进展与学科建设 [J]. 中国现代中药,
2014, 41(9): 693-703.
[3] 陶小芳, 沈 飞, 宿树兰, 等. 生脉注射液生产过程五
味子药渣中资源性物质的分析与循环利用途径探讨
[J]. 中草药, 2015, 46(18): 2712-2719.
[4] 段金廒, 严 辉, 钱大玮, 等. 一种具有抗菌活性的当
归地上部分有效部位及其制备方法和其应用: 中国,
200910246420.7 [P]. 2011-05-18.
[5] Xia L J, Liu X F, Guo H Y, et al. Partial characterization
and immunomodulatory activity of polysaccharides from
the stem of Dendrobium officinale (Tiepishihu) in vitro
[J]. J Funct Foods, 2012, 4(1): 294-301.
[6] 殷洪梅, 吕新勇, 萧 伟. 金银花多糖的制备工艺优化
及免疫活性研究 [J]. 中国中药杂志 , 2010, 4(35):
453-455.
[7] 王 剑, 付 田, 蒲 蔷, 等. 川牛膝多糖的体内免疫
活性研究 [J]. 中药药理与临床, 2008, 23(6): 31-33.
[8] 段金廒. 中药废弃物的资源化利用 [M]. 北京: 中国中
医药出版社, 2014.
[9] 朱华旭, 段金廒, 郭立玮, 等. 基于膜科学技术的中药
废弃物资源化原理及其应用实践 [J]. 中国中药杂志,
2014, 39(9): 34-38.
[10] 伍利华, 黄 英, 刘 婷, 等. 陶瓷膜分离技术应用于
中药口服液的研究进展 [J]. 药物评价研究 , 2014,
37(2): 184-187.
[11] 焦光联, 杨 艳, 何葆华. 超滤提取黄芪多糖的工艺研
究 [J]. 化学与生物工程, 2010, 27(8): 58-61.
[12] Sun H J, Qi D, Xu J Y, et al. Fractionation of
polysaccharides from rapeseed by ultrafiltration: Effect of
molecular pore size and operation conditions on the
membrane performance [J]. Sep Purif Technol, 2011,
80(3): 670-676.
[13] 殷红梅, 尚 强, 萧 伟. 金银花多糖脱蛋白质方法的
研究 [J]. 中草药, 2010, 41(1): 584-586.
[14] 李艳辉, 鲁巍巍, 官艳丽, 等. 玉竹多糖脱蛋白方法的
比较研究 [J]. 时珍国医国药, 2011, 22(9): 2127-2128.
[15] Xie J H, Shen M Y, Nie S P, et al. Separation of
water-soluble polysaccharides from Cyclocarya paliurus
by ultrafiltration process [J]. Carbohydr Polym, 2014,
101(1): 479-483.
[16] Ren Z, He C H, Fan Y H, et al. Immune-enhancing
activity of polysaccharides from Cyrtomium
macrophyllum [J]. Int J Biol Macromol, 2014, 70:
590-595.
[17] 陈璋辉, 陈云龙, 吴 涛, 等. 细茎石斛多糖 DMP4a-1
的结构特性及免疫活性研究 [J]. 中国药学杂志, 2005,
40(23): 1781-1784.
[18] Liu J, Chen X, Yue C J, et al. Effect of selenylation
modification on immune-enhancing activity of
Atractylodes macrocephala polysaccharide [J]. Int J Biol
Macromol, 2015, 72: 1435-1440.
[19] Zhang W X, Song D, Xu D, et al. Characterization of
polysaccharides with antioxidant and immunological
activities from Rhizoma Acori Tatarinowii [J]. Carbohydr
Polym, 2015, 133: 154-162.
[20] Cui H Y, Wang C L, Wang Y Y, et al. The polysaccharide
isolated from Pleurotus nebrodensis (PN-S) shows
immune-stimulating activity in RAW264.7 macrophages
[J]. CJNM, 2015, 13(5): 355-360.
[21] Sun W J, Meng K, Qi C H, et al. Immune-enhancing
activity of polysaccharides isolated from Atractylodis
macrocephalae Koidz [J]. Carbohydr Polym, 2015, 126:
91-96.
[22] Banskota A H, Stefanova R, Sperker S, et al. Five new
galactolipids from the freshwater microalga
Porphyridium aerugineum and their nitric oxide
inhibitory activity [J]. J Appl Phycol, 2012, 25(4):
951-960.
[23] Li C, Huang Q, Fu X, et al. Characterization, antioxidant
and immunomodulatory activities of polysaccharides
from Prunella vulgaris Linn [J]. Int J Biol Macromol,
2015, 75: 298-305.
[24] Chen Y G, Shen Z J, Chen X P. Evaluation of free radicals
scavenging and immunity-modulatory activities of
Purslane polysaccharides [J]. Int J Biol Macromol, 2009,
45(5): 448-452.
[25] Jian H X, Ming Y S, Shao P N, et al. Separation of
water-soluble polysaccharides from Cyclocarya paliurus
by ultrafiltration process [J]. Carbohydr Polym, 2014,
101: 479-483.
[26] 赵振坤, 王淑玲, 丁刘涛, 等. 中药药渣再利用研究进
展 [J]. 杭州师范大学学报: 自然科学版, 2012, 11(1):
38-42.