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Chemical constituents from stems of Syzygium jambos var. jambos and their in vitro cytotoxicity

蒲桃茎化学成分及其体外细胞毒活性研究



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 14 期 2014 年 7 月

·1993·
蒲桃茎化学成分及其体外细胞毒活性研究
林大都 1, 2,刘嘉炜 1*,李武国 1,罗 维 3,成金乐 2,陈蔚文 1
1. 广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心,岭南中药资源教育部重点实验室,广东 广州 510006
2. 中山中智药业集团有限公司,广东 中山 528437
3. 华南理工大学分析测试中心,广东 广州 510640
摘 要:目的 研究蒲桃(原变种)Syzygium jambos var. jambos 茎的化学成分。方法 利用硅胶、葡聚糖凝胶、氧化铝和制
备液相等各种色谱技术进行分离和纯化,根据波谱数据分析鉴定化合物结构;利用 MTT 法评价分离化合物对人肝癌细胞
Huh-7 细胞毒作用。结果 从蒲桃茎醋酸乙酯和甲醇提取物中分离得到 12 个化合物,分别鉴定为麦珠子酸(1)、urolithin A
(2)、邻苯二甲酸二正丁酯(3)、桦木酸(4)、熊果酸(5)、1-(4-methoxyphenyl)-1, 2-propanediol(6)、2, 6-dimethoxy-1,
4-benzoquinone(7)、邻苯二甲酸二异丁酯(8)、β-谷甾醇(9)、3-乙酰-熊果酸(10)、积雪草酸(11)和阿江榄仁酸(12)。
细胞活性测试结果表明在 50 μmol/L 浓度时化合物 1、7、10、11+12 混合物对 Huh-7 细胞均未表现出显著的细胞毒作用。
结论 除化合物 4,其他 11 个化合物均为首次从植物分离获得,所测试化合物均无明显细胞毒活性。
关键词:蒲桃;麦珠子酸;熊果酸;β-谷甾醇;积雪草酸;细胞毒活性
中图分类号:R284.1 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2014)14 - 1993 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.14.006
Chemical constituents from stems of Syzygium jambos var. jambos and their
in vitro cytotoxicity
LIN Da-du1, 2, LIU Jia-wei1, LI Wu-guo1, LUO Wei3, CHENG Jin-le2, CHEN Wei-wen1
1. Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan (Ministry of Education), Research Center of Medicinal Plant
Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, China
2. Zhongzhi Pharmaceutical Company Group, Zhongshan 528437, China
3. Analysis and Test Center of South China University of Technology, Guangzhou 510640, China
Abstract: Objective To study the chemical constituents from the stems of Syzygium jambos var. jambos. Methods The
phyotchemicals were isolated by using various chromatographic techniques such as silica gel, Sephadex LH-20, alumina column
chromatography, and preparative HPLC process. The structures were elucidated on the basis of spectral data analysis. Their
cytotoxicity against human liver cancer cells Huh-7 was conducted using MTT assay. Results Twelve compounds were isolated from
the EtOAc and MeOH extracts in the stems of S. jambos and identified as alphitolic acid (1), urolithin A (2), dibutyl phthalate (3),
betulinic acid (4), ursolic acid (5), 1-(4-methoxyphenyl)-1, 2-propanediol (6), 2, 6-dimethoxy-1, 4-benzoquinone (7), diisobutyl
phthalate (8), β-sitosterol (9), 3-acetyl-ursolic acid (10), asiatic acid (11), and arjunolic acid (12), respectively. All tested
compounds 1, 7, 10, and 11 + 12 mixture did not show the cytotoxic activities towards human tumor cells Huh-7 in the test range
up to 50 μmol/L. Conclusion Except compound 4, the other 11 compounds are obtained from this plant for the first time. All
tested compounds exhibit no significant cytotoxic activity against Huh-7 cells.
Key words: Syzygium jambos var. jambos (L.) Alston; alphitolic acid; ursolic acid; β-sitosterol; asiatic acid; cytotoxicity

蒲桃(原变种)Syzygium jambos var. jambos (L.)
Alston 为桃金娘科蒲桃属植物,在我国主要分布于
台湾、福建、广东、广西、贵州和云南等省区,蒲
桃茎作为一种传统民间药材在岭南地区使用已有悠
久历史,具有温中散寒、降逆止呕、温肺止咳,可
用于治疗胃寒呃逆、肺虚寒咳等病症,并收载于广

收稿日期:2014-01-02
作者简介:林大都(1987—),硕士研究生,从事天然药物化学研究。
*通信作者 刘嘉炜,博士,副研究员,硕士生导师,研究方向为生物有机与天然药物化学。Tel/Fax: (020)39358547 E-mail: jiawei.liu@ymail.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 14 期 2014 年 7 月

·1994·
东省地方中药材标准[1]。现代药理学研究表明蒲桃
茎提取物具有降血糖、抗氧化、抗菌以及抗炎等作
用[2-5]。综合查阅国内外文献发现蒲桃茎的药效物质
基础研究鲜有报道,仅有关于其挥发油成分的研究
报道[6-7]。为了阐明该药材的药效物质基础,本实验
对蒲桃茎进行研究,从其醋酸乙酯和甲醇提取物中
分离得到 12 个化合物,分别鉴定为麦珠子酸
(alphitolic acid,1)、urolithin A(2)、邻苯二甲酸
二正丁酯(dibutyl phthalate,3)、桦木酸(betulinic
acid,4)、熊果酸(ursolic acid,5)、1-(4-methoxy-
phenyl)-1, 2-propanediol(6)、2, 6-dimethoxy-1, 4-
benzoquinone(7)、邻苯二甲酸二异丁酯(diisobutyl
phthalate,8)、β-谷甾醇(β-sitosterol,9)、3-乙酰-
熊果酸(3-acetyl-ursolic acid,10)、积雪草酸(asiatic
acid,11)和阿江榄仁酸(arjunolic acid,12),其
中,除化合物 4,其他 11 个化合物均为首次从该植
物分离获得,三萜酸类化合物是蒲桃茎的主要化学
成分,体外细胞活性测试结果表明在 50 μmol/L 浓
度时化合物 1、7、10、11 和 12 对 Huh-7 细胞均未
表现出明显细胞毒作用
1 仪器与药材
Bruker Avance 400 和 600 型核磁共振波谱仪
(瑞士 Bruker 公司);电子轰击电离质谱仪(美国
Thermofisher 公司);LH—20 型葡聚糖凝胶(GE
Healthcare 公司);D101 型大孔吸附树脂(天津南大
树脂科技有限公司);制备液相(大连依利特公司);
实验所用试剂均为分析纯或色谱纯。3111 型 CO2细胞
培养箱,美国 Thermo Scientific 公司产品;CKX41 型
相差倒置显微镜,日本 Olympus 公司产品;TC10 型
细胞计数仪、Imark 酶标仪,美国 Bio-Rad 公司产品;
TGL—16G 型高速台式离心机,上海安亭科学仪器公
司产品。DMEM 培养液(C11995)、PBS 缓冲液
(C10010)、胎牛血清(10099)、0.25% Trypsin-EDTA
(25200)、Pen Strep(15140)均为美国 Gibco 公司产
品;噻唑蓝(MTT),美国 Sigma 公司产品。
蒲桃茎由中山市中智药业集团有限公司赖卓宏
于 2011 年 4 月采集于广东省郁南县,经中国科学院
华南植物研究所叶华谷研究员鉴定为桃金娘科蒲桃
属蒲桃(原变种)Syzygium jambos var. jambos (L.)
Alston 的茎,树龄 20 年左右。药材标本(0120110402)
存放于中山市中智药业集团技术中心实验室。
2 提取与分离
取 4.4 kg 蒲桃茎干燥粗粉,依次用醋酸乙酯(7.5
L×4)和甲醇(7.5 L×4)超声提取(40 kHz,45 ℃,
30 min),超声萃取液用布氏漏斗抽滤,滤液用旋转
蒸发仪浓缩成干浸膏,称定质量,分别得到醋酸乙
酯提取物 28.7 g 和甲醇提取物 264.4 g。
取醋酸乙酯提取物 26.0 g,采用硅胶柱色谱(石
油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶100)进行梯度洗脱,
共获得 25 个组分 Fr. 1~25。Fr. 5(0.32 g)进一步
通过硅胶柱色谱法(石油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶
100)分离获得化合物 3(42.0 mg); Fr. 8(0.39 g)
经过硅胶柱色谱法(石油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶
100)和重结晶法分离纯化后获得化合物 4(5.1 mg)
和 5(4.6 mg);Fr. 10(0.87 g)经过氧化铝柱色谱
法(石油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶100,醋酸乙酯-
甲醇 80∶20 洗脱),得到微组分 Fr. 10-1~10-18,
其中微组分 Fr. 10-18(66.7 mg)再利用制备薄层色
谱法(石油醚-醋酸乙酯 3∶1)纯化得到化合物 10
(7.7 mg);Fr. 11(0.94 g)利用氯仿重结晶,获得
化合物 9(76.4 mg);Fr. 21(0.64 g)先后利用硅胶
柱色谱(石油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶100)和葡
聚糖凝胶柱色谱(醋酸乙酯-甲醇 3∶1)分离纯化
后得到化合物 1(5 mg)、2(1.8 mg)、7(4.2 mg)
和 8(4.5 mg);Fr. 23(0.74 g)先后采用葡聚糖凝
胶柱色谱(醋酸乙酯-甲醇 3∶1)和制备液相色谱
(体积流量为 3 mL/min,波长为 279 nm,流动相为
甲醇-水,梯度洗脱,0~15 min,30%~63%甲醇;
15~20 min,63%~100%甲醇;20~30 min,100%
甲醇;30~32 min,100%~30%甲醇;32~35 min,
30%甲醇)得到化合物 6(3.3 mg);取 15 g 甲醇粗
提物,加适量纯水混悬,正丁醇(3×100 mL)进
行萃取,合并浓缩,得到正丁醇萃取物 1.1 g,然后
采用大孔树脂柱色谱法(乙醇-水 0∶100→100∶0)
进行洗脱,分离得到 4 个组分 Fr. 1~4),其中 Fr. 3
(75%乙醇洗脱部分,187.5 mg)采用硅胶柱色谱(石
油醚-醋酸乙酯 100∶0→0∶100、醋酸乙酯-甲醇
50∶50→0∶100)分离,得化合物 11 和 12 的混合
物(11.1 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色粉末;Liebermann-Burchard 反
应阳性;EI-MS m/z: 472 [M]+。1H-NMR (600 MHz,
CD3OD) δ: 4.71 (1H, d, J = 1.4 Hz, H-29a), 4.59 (1H,
d, J = 1.4 Hz, H-29b), 3.90 (1H, m, H-2), 3.30 (1H, m,
H-3), 3.01 (1H, m, H-19), 1.69 (3H, s, H-30), 1.02
(3H, s, H-27), 0.96 (3H, s, H-23), 0.95 (3H, s, H-26),
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 14 期 2014 年 7 月

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0.89 (3H, s, H-25), 0.83 (3H, s, H-24);13C-NMR (150
MHz, CD3OD) δ: 42.8 (C-1), 67.3 (C-2), 80.1 (C-3),
39.5 (C-4), 49.4 (C-5), 19.1 (C-6), 35.4 (C-7), 43.7
(C-8), 51.6 (C-9), 39.6 (C-10), 22.1 (C-11), 26.8
(C-12), 39.6 (C-13), 42.1 (C-14), 30.8 (C-15), 33.3
(C-16), 57.5 (C-17), 50.5 (C-18), 48.5 (C-19), 152.0
(C-20), 31.7 (C-21), 38.1 (C-22), 29.2 (C-23), 22.2
(C-24), 17.7 (C-25), 16.7 (C-26), 15.1 (C-27), 180.1
(C-28), 110.2 (C-29), 19.6 (C-30)。以上数据与文献报
道的一致[8],故鉴定化合物 1 为麦珠子酸。
化合物 2:黄色粉末;EI-MS m/z: 228 [M]+。
1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ: 6.72 (1H, d, J = 2.3
Hz, H-9), 6.80 (1H, dd, J = 8.8, 2.3 Hz, H-7), 7.32
(1H, dd, J = 8.8, 2.6 Hz, H-4), 7.50 (1H, d, J = 2.6 Hz,
H-2), 8.02 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-6), 8.10 (1H, d, J =
8.8 Hz, H-5);13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ:
160.7 (C-1), 113.6 (C-2), 157.0 (C-3), 124.2 (C-4),
123.6 (C-5), 123.9 (C-6), 113.1 (C-7), 158.6 (C-8),
102.9 (C-9), 120.2 (C-10), 127.0 (C-11), 109.9 (C-12),
151.0 (C-13)。以上数据与文献报道一致[9],故鉴定
化合物 2 为 urolithin A。
化合物 3:红褐色粉末;EI-MS m/z: 278 [M]+。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7.71 (2H, s, H-3, 6),
7.53 (2H, s, H-4, 5), 4.31 (4H, m, H-1′, 1′′), 1.73 (4H,
m, H-2′, 2′′), 1.44 (4H, m, H-3′, 3′′), 0.97 (4H, m,
H-4′, 4′′);13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 167.7 (C-1,
8), 132.4 (C-2, 7), 130.9 (C-4, 5), 128.8 (C-3, 6), 65.6
(C-1′, 1′′), 30.6 (C-2′, 2′′), 19.2 (C-3′, 3′′), 13.7 (C-4′,
4′′)。以上数据与文献报道一致[10],故鉴定化合物 3
为邻苯二甲酸二正丁酯。
化合物 4:无色晶体(醋酸乙酯);Liebermann-
Burchard 反应阳性;EI-MS m/z: 456 [M]+。1H-NMR
(400 MHz, DMSO-d6) δ: 4.68 (1H, s, H-29b), 4.56
(1H, s, H-29a), δ 4.27 (1H, d, J = 5.1 Hz, -OH), 3.30
(1H, m, H-3), 2.97 (1H, m, H-19), 1.64 (3H, s, H-30),
0.93 (3H, s, H-27), 0.87 (6H, s, H-23, 26), 0.76 (3H, s,
H-25), 0.65 (3H, s, H-24);13C-NMR (100 MHz,
DMSO-d6) δ: 37.6 (C-1), 27.2 (C-2), 76.8 (C-3), 38.5
(C-4), 54.9 (C-5), 18.0 (C-6), 33.9 (C-7), 40.3 (C-8),
49.9 (C-9), 36.3 (C-10), 20.5 (C-11), 25.1 (C-12), 38.3
(C-13), 42.0 (C-14), 30.1 (C-15), 31.7 (C-16), 55.4
(C-17), 46.6 (C-18), 48.6 (C-19), 150.3 (C-20), 29.2
(C-21), 36.7 (C-22), 28.1 (C-23), 15.7 (C-24), 15.8
(C-25), 15.9 (C-26), 14.4 (C-27), 177.2 (C-28), 109.6
(C-29), 19.0 (C-30)。以上数据与文献报道一致[11],
故鉴定化合物 4 为桦木酸。
化合物 5:白色粉末;Liebermann-Burchard 反
应阳性;EI-MS m/z: 456 [M]+。1H-NMR (400 MHz,
DMSO-d6) δ: 5.12 (1H, t, J = 3.3 Hz, H-12), 4.30 (1H,
d, J = 5.0 Hz, -OH), 2.99 (1H, m, H-3), 1.03 (3H, s,
H-27), 0.90 (3H, d, J = 7.6 Hz, H-30), 0.89 (3H, s,
H-25), 0.86 (3H, s, H-26), 0.80 (3H, d, J = 6.4 Hz,
H-29), 0.74 (3H, s, H-23), 0.67 (3H, s, H-24);
13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 38.4 (C-1), 27.5
(C-2), 76.9 (C-3), 38.5 (C-4), 54.8 (C-5), 18.0 (C-6),
32.7 (C-7), 41.7 (C-8), 46.8 (C-9), 36.3 (C-10), 22.9
(C-11), 124.6 (C-12), 138.2 (C-13), 40.8 (C-14), 28.3
(C-15), 23.8 (C-16), 47.0 (C-17), 52.4 (C-18), 38.4
(C-19), 38.2 (C-20), 30.2 (C-21), 36.5 (C-22), 27.0
(C-23), 15.2 (C-24), 16.1 (C-25), 16.9 (C-26), 23.3
(C-27), 178.3 (C-28), 17.0 (C-29), 21.1 (C-30)。以上
数据与文献报道一致[12],故鉴定化合物 5 为熊果酸。
化合物 6:黄绿色粉末;EI-MS m/z: 182 [M]+。
1H-NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 0.96 (3H, d, J = 6.3
Hz, H-3), 3.78 (1H, m, H-2), 4.30 (1H, d, J = 7.2 Hz,
H-1), 6.65 (2H, d, J = 8.3 Hz, H-3′, 5′), 7.02 (2H, d,
J = 8.3 Hz, H-2′, 6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD) δ:
78.6 (C-1), 71.6 (C-2), 17.8 (C-3), 133.9 (C-1′), 127.9
(C-2′, 6′), 113.2 (C-3′, 5′), 159.3 (C-4′), 54.3 (-OCH3)。
以上数据与文献报道一致[13],故鉴定化合物 6 为
1-(4-methoxyphenyl)-1, 2-propanediol。
化合物 7:黄色针晶(氯仿);EI-MS m/z: 168
[M]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.82 (6H, s
-OCH3), 5.86 (2H, s, H-3, 5);13C-NMR (100 MHz,
CDCl3) δ: 176.6 (C-1), 157.3 (C-2, 6), 107.4 (C-3, 5),
186.8 (C-4), 56.4 (2×-OCH3)。以上数据与文献报道
一致[14],故鉴定化合物7为2, 6-二甲氧基-1, 4-苯醌。
化合物 8:白色粉末;1H-NMR (400 MHz,
CD3COCD3) δ: 7.75 (2H, m, H-3, 6), 7.65 (2H, m,
H-4, 5), 4.31 (4H, d, J = 7.6 Hz, H-1′, 1′′), 1.73 (4H,
m, H-2′, 2′′), 0.85 (12H, d, J = 7.6 Hz, H-3′, 3′′, 4′,
4′′);13C-NMR (100 MHz, CD3COCD3) δ: 167.1 (C-1,
8), 132.5 (C-2, 7), 131.1 (C-4, 5), 128.7 (C-3, 6), 71.2
(C-1′, 1′′), 27.6 (C-2′, 2′′), 13.5 (C-3′, 3′′, 4′, 4′′)。以上
数据与文献报道一致[10],故鉴定化合物 8 为邻苯二
甲酸二异丁酯。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 14 期 2014 年 7 月

·1996·
化合物 9:白色针晶(氯仿);EI-MS m/z: 414
[M]+。1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3.51 (1H, m,
H-3,), 5.35 (1H, t, J = 2.6 Hz, H-6), 1.01 (3H, s,
H-18), 0.68 (3H, s, H-19), 0.84 (3H, d, J = 7.5 Hz,
H-21), 0.81 (3H, d, J = 6.5 Hz, H-26), 0.92 (3H, d, J =
6.5 Hz, H-27), 0.85 (3H, t, J = 7.6 Hz, H-29);
13C-NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 37.3 (C-1), 31.7
(C-2), 71.8 (C-3), 42.3 (C-4), 140.8 (C-5), 121.7
(C-6), 31.9 (C-7), 31.9 (C-8), 50.2 (C-9), 36.5 (C-10),
21.1 (C-11), 39.8 (C-12), 42.3 (C-13), 56.8 (C-14),
24.3 (C-15), 28.2 (C-16), 56.1 (C-17), 19.4 (C-18),
12.0 (C-19), 36.1 (C-20), 18.8 (C-21), 34.0 (C-22),
26.2 (C-23), 45.9 (C-24), 23.1 (C-25), 19.8 (C-26),
19.0 (C-27), 29.2 (C-28), 11.8 (C-29)。以上数据与文
献报道一致[15],故鉴定化合物 9 为 β-谷甾醇。
化合物 10:白色粉末;Liebermann-Burchard
反应阳性;EI-MS m/z: 498 [M]+。1H-NMR (400 MHz,
CDCl3) δ: 5.17 (1H, t, J = 3.3 Hz, H-12), 4.43 (1H, t,
J = 7.2 Hz, H-3), 1.02 (3H, s, H-27), 0.91 (3H, d, J =
7.6 Hz, H-30), 0.89 (3H, s, H-25), 0.85 (3H, s, H-26),
0.82 (3H, d, J = 6.4 Hz, H-29), 0.74 (3H, s, H-23),
0.67 (3H, s, H-24), 1.97 (3H, s, -COCH3);13C-NMR
(100 MHz, DMSO-d6) δ: 38.4 (C-1), 27.5 (C-2), 80.2
(C-3), 38.0 (C-4), 55.8 (C-5), 18.0 (C-6), 32.7 (C-7),
40.7 (C-8), 46.8 (C-9), 37.0 (C-10), 22.9 (C-11), 125.9
(C-12), 138.1 (C-13), 42.6 (C-14), 28.8 (C-15), 24.8
(C-16), 47.2 (C-17), 52.4 (C-18), 38.4 (C-19), 38.2
(C-20), 30.2 (C-21), 36.7 (C-22), 28.0 (C-23), 17.2
(C-24), 16.1 (C-25), 16.9 (C-26), 23.1 (C-27), 182.9
(C-28), 17.1 (C-29), 21.1 (C-30), 171.2 (-COCH3),
21.3 (-COCH3)。以上数据与文献报道一致[16],故鉴
定化合物 10 为 3-乙酰-熊果酸。
化合物 11 和 12:白色粉末;Liebermann-
Burchard 反应阳性;EI-MS m/z: 488 [M]+;通过解
析其 1H-、13C-NMR,HSQC 和 HMBC 等波谱学数
据,可判断为积雪草酸(11)和阿江榄仁酸(12)2
个化合物的混合物,其 NMR 数据分别与文献报道
积雪草酸和阿江榄仁酸的数据基本一致[17-18];化合
物 11:13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 47.6 (C-1),
68.2 (C-2), 76.7 (C-3), 42.7 (C-4), 46.6 (C-5), 17.7
(C-6), 32.4 (C-7), 39.4 (C-8), 46.2 (C-9), 36.2 (C-l0),
23.9 (C-11), 125.1 (C-12), 138.1 (C-13), 42.7 (C-14),
27.8 (C-15), 25.1 (C-16), 48.1 (C-17), 52.9 (C-18),
39.0 (C-19), 38.9 (C-20), 30.4 (C-21), 37.6 (C-22), 64.8
(C-23), 12.6 (C-24), 16.7 (C-25), 16.6 (C-26), 23.3
(C-27), 180.5 (C-28), 23.2 (C-29), 22.6 (C-30)。化合物
12:13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ: 47.4 (C-1), 68.2
(C-2), 76.7 (C-3), 42.7 (C-4), 46.5 (C-5), 17.6 (C-6), 32.2
(C-7), 39.0 (C-8), 46.2 (C-9), 36.2 (C-10), 23.9 (C-11),
122.0 (C-12), 143.9 (C-13), 42.7 (C-14), 27.4 (C-15),
25.1 (C-16), 48.1 (C-17), 52.9 (C-18), 46.7 (C-19), 30.1
(C-20), 30.4 (C-21), 37.4 (C-22), 64.8 (C-23), 12.5
(C-24), 17.6 (C-25), 16.6 (C-26), 23.0 (C-27), 180.3
(C-28), 33.5 (C-29), 23.9 (C-30)。另外,综合化合物的
核磁数据,可推断化合物 11 和 12 的 C-12 位相连的
烯氢信号分别为 δ 5.24 (1H, t, J = 3.6 Hz, H-12) 和
5.28 (1H, t, J = 3.6 Hz, H-12),其积分比为 1.4∶2.0,
故推断化合物 11 和 12 的量之比约为 0.7∶1。
4 体外细胞毒活性测试[19]
选择蒲桃茎代表性化合物 1、7、10 及 11+12
混合物进行活性测试。体外培养人肝癌 Huh-7 细胞
株,细胞生长至约 80%密度时收集对数生长期的
Huh-7 细胞,消化后计数,在 96 孔板中每孔加入约
5×103 个细胞,放入细胞培养箱培养。细胞接种于
96 孔板 24 h 后,吸弃各孔中的培养液,空白对照组
每孔加入 200 μL 含 0.5% DMSO 和 10% FBS 的
DMEM培养液,给药组每孔加入 200 μL含 10% FBS
和不同浓度(0、1、5、10、20、30、40、50 μmol/L)
试药的DMEM培养液,每组平行设置 3个孔,37 ℃、
5% CO2 培养 24 h,每孔加入 20 μL 5 g/L MTT,培
养 4 h,吸弃培养基,每孔加入 150 μL DMSO,振
荡 10 min。酶标仪 490 nm 测定吸光度(A)值。
MTT 测试结果(图 1)显示所有测试化合物在
50 μmol/L 时作用 24 h 后,均对人肝脏肿瘤 Huh-7


图 1 MTT 法评价分离化合物的体外细胞毒活性
Fig. 1 In vitro cytotoxic activities of isolated compounds
evaluated by MTT assay

1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0







对照 1 7 10 11+12
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 45 卷 第 14 期 2014 年 7 月

·1997·
细胞没有显著细胞毒活性。有文献报道三萜酸类化
合物如熊果酸对 Huh-7 细胞没有明显细胞毒活性
(IC50=75 μmol/L)[20],与本实验结果一致。
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