全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 11 期 2015 年 6 月
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不同产地桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 的测定
谭玲玲 1,侯晓敏 1,胡正海 2*
1. 青岛农业大学生命科学学院 山东省高校植物生物技术重点实验室,山东 青岛 266109
2. 西北大学生命科学学院,陕西 西安 710069
摘 要:目的 建立测定桔梗 Platycodon grandiflorum 中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 的测定方法,并准确测定我国不同产地桔梗药
材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 的量。方法 采用超声波甲醇提取法,称重法测定桔梗总皂苷量;采用 HPLC 法测定桔梗皂苷 D 量,
色谱条件:Waters Symmetry-C18色谱柱,流动相为乙腈-水(22∶78),体积流量 1.0 mL/min,检测波长为 210 nm,柱温为 30 ℃。
结果 不同产地的桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 量差别较大。在所测的桔梗药材中,浙江产桔梗总皂苷量最高,为 12.03%;
黑龙江、辽宁、安徽、山东、江西产桔梗总皂苷量均高于《中国药典》2005 年版规定的 6%;而其余各省的量均低于 6%,最低的
为河南,其量仅为 1.57%。对于桔梗皂苷 D 来说,云南产桔梗的量最高,为 0.654%;河北产桔梗的量最低,为 0.017%。结论 建
立的方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于桔梗药材中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 量的测定。在我国不同产地桔梗药材中,桔
梗总皂苷和桔梗皂苷 D 的量存在差异。同一药材中桔梗总皂苷与桔梗皂苷 D 的量,未显示出相关性。
关键词:桔梗;桔梗总皂苷;桔梗皂苷 D;HPLC;超声波甲醇提取法
中图分类号:R282.6 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2015)11 - 1682 - 03
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.11.023
Determination of platycodin in Platycodi Radix from different habitats
TAN Ling-ling1, HOU Xiao-min1, HU Zheng-hai2
1. College of Life Science, Qingdao Agricultural University/Key Lab of Plant Biotechnology in Universities of Shandong Province,
Qingdao 266109, China
2. College of Life Science, Northwest University, Xi’an 710069, China
Abstract: Objective To establish a method of the determination of total platycodin and platycodin D; And to determine the contents
of total platycodin and platycodin D in Platycodi RadiX from different habitats. Methods The content of total platycodin was
determined by 1ultrasonic extraction and weight method; And the content of platycodin D was determined by HPLC. The
chromatographic conditions were Waters Symmetry-C18 column, mobile phrase of CH3CN-H2O (22:78), flow rate of 1.0 mL/min,
detection wavelength at 210 nm and column temperature 30 ℃. Results There was a greater difference between the contents of total
platycodin and platycodin D in Platycodi Radix from different habitats. In measuring Platycodi Radix, the content of total platycodin in
Platycodi Radix from Zhejiang Province was the highest, which was 12.03%; the contents in Platycodi Radix from Heilongjiang,
Liaoning, Anhui, Shandong, and Jiangxi Provinces were more than 6%; However, the contents in Platycodi Radix from the other
provinces were lower than 6%, and it was the lowest in Platycodi Radix from Henan province, which was 1.57%. The contents of
platycodin D in Platycodi Radix from Yunnan province was the highest, and it was the lowest in Platycodi Radix from Hebei province.
Conclusion The methods could be used for the determination of total platycodin and platycodin D in Platycodi Radix because of
theirs simple operations with accurate and reliable results. The contents of total platycodin and platycodin D are different obviously in
Platycodi Radix from different habitats, and the contents of total platycodin and platycodin D in the same drug with the level of
inconsistency don’t show correlation.
Key words: Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC.; total platycodin; platycodin D; HPLC; lultrasonic extraction
桔梗 Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. 为
桔梗科(Campanulaceae)桔梗属 Platycodon A. DC.
多年生草本植物,其以根入药,又被称作土人参、
白药、和尚头等,具有宣肺、利咽、祛痰、排脓等
收稿日期:2014-12-16
基金项目:山东省高等学校科技计划项目(J11LC06);山东省自然科学基金青年基金项目(ZR2013CQ027)
作者简介:谭玲玲(1980—),女,山东威海人,副教授,博士,主要从事药用植物学研究。E-mail: tanlingling80@163.com
*通信作者 胡正海 E-mail: zhenghaihu@sina.com
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功效,主治咳嗽痰多、胸闷不畅、咽痛音哑及肺痈
吐脓[1],广泛用于各种方剂中。
桔梗的原植物分布区域非常广泛。在我国桔梗
产于华北、东北、华中、华东及西南地区。习惯上
将产于吉林、辽宁、黑龙江、河北、山东、山西及
内蒙古的商品桔梗称为“北桔梗”;产于安徽、江苏、
浙江的称为“南桔梗”;产于四川的称为“川桔梗”[2]。
由于我国桔梗资源分布广泛,产地的自然环境差异
大,故桔梗中主要药用成分桔梗皂苷的量存在差异,
从而导致各地桔梗的品质参差不齐,因此科学地评
价桔梗的质量十分有意义。本研究采用改进的称重
法及 HPLC 法对全国 17 个不同省份的桔梗药材中
的桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 量进行了测定,旨在为
桔梗质量标准的完善提供理论依据。
1 仪器、试剂和材料
1.1 仪器
菲恰尔 GL-16A 型离心机(上海菲恰尔分析仪
器有限公司);XMTD-2MA 型电热恒温水浴箱(龙
口市先科仪器公司);303-2 型电热恒温干燥箱(江
苏省东台县电器厂);美国安捷伦 Agilent 1100 型高
效液相色谱仪(美国);DAD 检测器;Waters
Symmetry-C18 型色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);
BP221S 型电子天平(Sartorius 公司);KQ-600KDE
型超声提取仪(昆山市超声仪器有限公司);RE-52
旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 试剂
桔梗皂苷 D 对照品(质量分数≥98%,批号
20121105)购自上海金穗生物科技有限公司;甲醇
(色谱纯,莱阳市康德化工有限公司);甲醇(分析
纯,天津市恒兴化学试剂制造有限公司);乙醚(分
析纯,烟台市双双化工有限公司);正丁醇(分析
纯,莱阳市康德化工有限公司)。
1.3 药材
桔梗药材购买于当地药房或药材市场,药材来
源见表 1。所有药材均由胡正海教授鉴定为桔梗
Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC.。
2 方法与结果
2.1 桔梗总皂苷的测定
精密称定样品粗粉 4 g 置于 50 mL 离心管中,
加入 40 mL 甲醇,超声提取 50 min,室温下 5 000
r/min 离心 10 min,提取滤过液。重复 3 次提取离心,
合并 3 次滤液。滤液于电热恒温水浴箱上加热浓缩
至 15~20 mL,放冷,加乙醚 50 mL,振摇,放置
表 1 样品来源及编号
Table 1 Sources and numbers of samples
编号 来源 编号 来源
1 江苏 10 江西
2 四川 11 安徽
3 河北 12 湖北
4 黑龙江 13 河南
5 辽宁 14 福建
6 陕西 15 宁夏
7 湖南 16 浙江
8 云南 17 山东
9 内蒙古
澄清,弃去上清液。沉淀分次加甲醇(20、10、5 mL),
加热使沉淀溶解,放冷,滤过,合并甲醇液。甲醇
液加热浓缩至 15~20 mL,放冷,加乙醚 50 mL,
振摇,同上法处理,合并甲醇液,置已事先干燥至
恒重的蒸发皿中。将蒸发皿中甲醇液于加热恒温水
浴箱中蒸发至干,然后于电热干燥箱中干燥至恒定
质量。蒸发皿前后质量之差即为桔梗总皂苷质量,
然后计算得出药材中桔梗总皂苷量,结果见表 2。
2.2 桔梗皂苷 D 的测定方法
2.2.1 色谱条件 色谱柱 Waters Symmetry-C18 柱
(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水
(22∶78);检测波长 210 nm;体积流量 1.0 mL/min;
进样量 20 μL;柱温 30 ℃;分析时间 60 min。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒定质
量的桔梗皂苷 D 对照品 4.33 mg,加入甲醇(色谱
纯)溶解后,定容于 10 mL 量瓶中,配制成质量浓
度为 0.433 mg/mL 的对照品溶液,备用。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取 4 g 桔梗样品
粉末,装入 50 mL 离心管中,加入 25 mL 甲醇,超
声提取 30 min。常压滤过后使用旋转蒸发器回收甲
醇,所得提取物加水 20 mL,再加入 30 mL 乙醚脱
脂,水液以水饱和的正丁醇提取,提取液利用旋转
蒸发器蒸干。所得蒸干产物以甲醇(色谱纯)定容
至 10 mL 量瓶中备用。
2.2.4 标准曲线的绘制 将 0.433 mg/mL 的对照品
溶液分别稀释 3、8、16、64、128 倍,配制为 144.0、
54.0、27.06、6.77、3.38 μg/mL 的溶液,分别吸入
20 μL 注入高效液相色谱仪进行测定,以桔梗皂苷 D
质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得
回归方程为 Y=124.87 X-6.166 3,r=0.999 7,线
性范围为 0.067 6~2.880 0 μg。
2.2.5 精密度试验 取桔梗皂苷 D 对照品溶液,在
上述色谱条件下进行测定,连续进样 5 次,每次进
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样量为 20 μL,结果峰面积的 RSD 为 3.91%。
2.2.6 重复性试验 取同一桔梗药材供试品(河南)5
份,按“2.2.3”项下的方法制备样品溶液,按上述色
谱条件进行测定,结果其质量分数的RSD 为 4.3%。
2.2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液(辽宁)在
室温下放置,分别在 0、2、4、6、8、10 h 按上述
色谱条件进行测定,结果其峰面积 RSD 为 2.1%。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取已知桔梗皂苷 D
量的样品(安徽)5 份,准确加入等量的对照品,
按“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液,按上述色
谱条件进行测定,结果平均回收率为 97.56%,RSD
为 1.412%。
2.2.9 样品溶液的测定 样品溶液过 0.45 μm 滤膜
后,分别吸取制备好的不同供试品溶液 20 μL,在
上述色谱条件下进行测定,依据标准曲线来换算样
品中桔梗皂苷 D 的量。HPLC 色谱图见图 1。桔梗
皂苷 D 的测定结果见表 2。
图 1 对照品 (A) 和供试样品溶液 (B) 的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC of reference substances (A) and sample
solution (B)
3 讨论
由测定结果可以看出:不同产地桔梗药材中桔梗
总皂苷的量差异较大。《中国药典》2005 年版规定桔
梗药材中桔梗总皂苷的量不得低于 6%[3],而《中国药
典》2010 年版已不将桔梗总皂苷的量作为质量控制标
准。在测定的 17 个不同省份的桔梗药材中,产自浙江
的桔梗药材中桔梗总皂苷的量最高,为 12.03%;此外,
黑龙江、辽宁、安徽、山东、江西产桔梗药材中桔梗
总皂苷的量依次减少,但其量均大于 6%。而河北、四
川、江苏、宁夏、内蒙古、陕西、湖南、云南、湖北、
福建、河南的桔梗药材中桔梗总皂苷量均低于 6%,河
南的桔梗药材中桔梗总皂苷的量最低,仅为 1.57%。
肖培根[4]曾报道,桔梗以东北、华北产量较大,
表 2 不同产地桔梗中桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 量
Table 2 Contents of total platycodin and platycodin D in
Platycodi Radix from different habitats
产地 桔梗总皂苷/% 桔梗皂苷 D/%
1 3.67 0.134
2 4.18 0.130
3 5.04 0.017
4 10.27 0.075
5 8.57 0.143
6 3.51 0.039
7 3.31 0.385
8 3.24 0.654
9 3.56 0.028
10 7.50 0.138
11 8.45 0.350
12 2.35 0.042
13 1.57 0.107
14 1.68 0.216
15 3.59 0.199
16 12.03 0.176
17 8.23 0.343
以华东地区产品质量较好。本实验结果显示,浙江、
黑龙江、辽宁、安徽、山东、江西的桔梗药材中桔
梗总皂苷量均高于《中国药典》的规定,其药材质
量较好。对于桔梗皂苷 D 来说,云南省的量最高,
为 0.654%,为最低的河北省的 38.47 倍。《中国药
典》2010 年版以桔梗皂苷 D 作为评价桔梗药材的质
量标准,其量不低于 0.10%[1,5]。在测定的 17 个不
同省份的桔梗药材中,仅黑龙江、湖北、陕西、内
蒙古和河北桔梗药材中桔梗皂苷 D 量低于此标准,
其量依次减少,量最低的河北仅为 0.017%。
将桔梗总皂苷和桔梗皂苷 D 综合来看,同一药
材中桔梗总皂苷量高者,其桔梗皂苷 D 量并不一定
高,反之亦然。两者在同一药材中未显示出相关性。
因此,不应单独用某一成分作为评价桔梗药材质量
的标准,应兼顾两者为宜。本研究建立的方法操作
简便,测定结果准确可靠,可用于桔梗药材中桔梗
总皂苷和桔梗皂苷 D 量的测定。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 聂圣贤, 魏 云. 四川与其他产区桔梗总皂苷量测定
的比较 [J]. 华西药学杂志, 1997, 12(2): 129-130.
[3] 石俊英, 董其亭, 巩丽丽, 等. 不同产地桔梗中总皂苷
成分与质量的相关性研究 [J]. 山东中医药大学学报,
2006, 30(3): 247-250.
[4] 肖培根. 新编中药志(第 1 卷) [M]. 北京: 化学工业出
版社, 2001.
[5] 笔雪艳, 刘晓凤, 张清波, 等. 桔梗药材及饮片的质量
标准研究 [J]. 中医药信息, 2011, 28(6): 69-71.
15 20 25 30 35 40 45 50
t/min
A
B
桔梗皂苷 D
桔梗皂苷 D