全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 21 期 2015 年 11 月

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• 药材与资源 •
长柄石杉 L-赖氨酸脱羧酶基因克隆及序列分析
宋育红 1, 2，陈作毅 1，张君诚 1*
1. 复旦大学-三明学院 天然药物工程研究中心，福建 三明 365004
2. 三明学院资源与化工学院，福建 三明 365004
摘 要：目的 在对长柄石杉 Huperzia serrata、闽浙马尾杉 Phlegariurus minchegensis、华南马尾杉 Phlegariurus austrosinicus
和有柄马尾杉 Phlegariurus petiolatus 4 种石杉科植物的 L-赖氨酸脱羧酶（L-lysine decarboxylase，LDC）基因编码区进行克
隆的基础上，对长柄石杉的 LDC 基因全长序列进行分析并预测其蛋白结构。方法 采用 RT-PCR 技术，以石杉科植物叶片
提取的总RNA为模板克隆得到LDC基因编码区序列，通过BLAST比对和MEGA5.0软件对克隆的序列进行分析。采用RACE
技术获得石杉科广布种长柄石杉的 LDC 基因全长序列，并对其蛋白的二级结构及三维结构进行预测分析。结果 克隆的 4
种石杉科植物 LDC 基因序列与数据库中被注释为编码 LDC 的基因序列保持高度的相似性，长柄石杉 LDC 蛋白与 NCBI 中
的蛇足石杉 LDC 氨基酸序列相似度很高，与蕨类植物江南卷柏的同源性也较高。长柄石杉 LDC 基因编码区全长为 1 266 bp，
编码 403 个氨基酸，GenBank 登录号 KF040056。结论 克隆得到 4 种石杉科植物的 LDC 基因，分析了长柄石杉 LDC 基因
的全长序列并预测其蛋白结构，为进一步阐明石杉科植物石杉碱甲生物合成途径奠定基础。
关键词：L-赖氨酸脱羧酶；石杉科；基因克隆；序列分析；长柄石杉；闽浙马尾杉；华南马尾杉；有柄马尾杉
中图分类号：R282.12 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)21 - 3228 - 07
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.21.019
Cloning and sequence analysis of L-lysine decarboxylase gene in Huperzia serrata
var. longipetiolata
SONG Yu-hong1, 2, CHEN Zuo-yi1, ZHANG Jun-cheng1
1. Research Center of Natural Medicines Engineer, Sanming College, Fudan University, Sanming 365004, China
2. College of Resources and Chemical Engineering, Sanming University, Sanming 365004, China
Abstract: Objective To obtain and analyze the full-length L-lysine decarboxylase (LDC) gene sequence of Huperzia serrata var.
longipetiolata and predictively analyze its protein structure on the basis of cloning the coding region of LDC gene from four species of
Huperziaceae. The species are Huperzia serrata var. longipetiolata, Phlegariurus minchegensis, Phlegariurus austrosinicus, and
Phlegariurus petiolatus. Methods The LDC coding region sequences were cloned by RT-PCR strategy with the template of total RNA
extracted from the leaves. Then the sequences were analyzed by means of BLAST and MEGA 5.0. The full-length of LDC gene
sequence of H. serrata var. longipetiolata was obtained by RACE technology. And then the secondary structure and three-dimensional
structure of LDC protein were predictively analyzed. Results The coding region sequences were highly similar to the lysine
decarboxylase in the database. And the encoding protein of H. serrata var. longipetiolata was highly similar to the amino acid
sequences of H. serrata in NCBI, and with high homology to Selaginella moellendorffii. The full-length LDC gene sequence of H.
serrata var. longipetiolata contained 1 266 bp open reading frame and encodes a predicted protein of 403 amino acids. The GenBank
accession number for this gene is KF040056. Conclusion The LDC genes of the four species of Huperziaceae are cloned in this study.
The full-length LDC gene sequence of H. serrata var. longipetiolata is obtained and analyzed, and its protein structure is predictively
analyzed. The result will provide a foundation for exploring the mechanism of huperzine A biosynthesis in the plants of Huperziaceae.
Key words: L-lysine decarboxylase; Huperziaceae; gene cloning; sequence analysis; Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev. var.
longipetiolata (Spring) H. M. Chang; Phlegariurus minchegensis (Ching) L. B. Zhang; Phlegariurus austrosinicus (Ching) L. B. Zhang;
Phlegariurus petiolatus (C. B. Clarke) H. S. Kung et L. B. Zhang

收稿日期：2015-05-10
基金项目：福建省自然科学基金项目（2012J01145）；福建省生物学重点学科开放基金项目
作者简介：宋育红（1965—），女，副教授，主要从事药用植物资源研究。E-mail: song0598@163.com
*通信作者 张君诚，男，教授，博士，主要从事药用植物分子生物学研究。E-mail: 5988603101@163.com
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石杉科（Huperziaceae）植物为多年生拟蕨类植
物，是最古老的植物类群之一，现存马尾杉属
Phlegmariurus (Herter) Holub 和石杉属 Huperzia
Bernh. 两属，马尾杉属主要分布于长江以南，现知
23 种；石杉属广布全国，现知 25 种[1]。因其植体中
的次生代谢生物碱石杉碱甲（huperzine A，HupA）是
一种高效且低毒的乙酰胆碱酯酶活性抑制剂，可作为
老年性痴呆症治疗的临床特效药物[1]，深受医药学界
广泛关注。然而HupA在石杉科植物全草中的量甚微，
野生资源生物量小、生长缓慢、物种濒临灭绝[2-4]，无
法满足市场用药需求；在结构化学方面，HupA 开环
的吡啶酮环和六氢吡啶环结构的复杂性，导致化学合
成成本昂贵，因此到目前为止，未见 HupA 成功产业
化生产的报道[5]。目前 HupA 的获得仍全部依赖于天
然石杉科植物全草的提取，持续增长的 HupA 需求使
石杉资源遭到严重破坏[6]。随着近年石杉碱代谢途径
和调控机制研究的深入，生物合成与代谢工程已然成
为生产 HupA 最有潜力的途径之一，因此对合成与代
谢途径中的关键（限速）酶的研究显得十分重要，目
前对有关HupA生物合成途径中关键酶基因的研究报
道不多：Luo 等[7-8]认为细胞色素 P450 参与到石杉碱
的特殊构象催化反应中，并起着关键作用；杜次等[9]
对蛇足石杉的赖氨酸脱羧酶基因进行了克隆与分析；
张君诚等[10]对HupA生物合成与代谢调控关键基因的
差异表达进行了分析。目前 HupA 生物合成的起始物
已经被证实为 L-赖氨酸[11]，L-赖氨酸脱羧酶（L-lysine
decarboxylase，LDC）为 HupA 生物合成途径上第一
个关键限速酶[12-13]，对该酶基因的克隆及功能分析将
有助于阐明 HupA 生物合成代谢途径。本实验对长柄
石杉 Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev. var.
longipetiolata (Spring) H. M. Chang、闽浙马尾杉
Phlegariurus minchegensis (Ching) L. B. Zhang、华南马
尾杉 Phlegariurus austrosinicus (Ching) L. B. Zhang 和
有柄马尾杉 Phlegariurus petiolatus (C. B. Clarke) H. S.
Kung et L. B. Zhang 4种石杉科植物 LDC 基因序列进
行克隆，通过 RACE 技术获得了石杉科植物中开发
利用价值高的广布种长柄石杉[14]的 LDC 基因全长
序列，并预测了其蛋白质结构，为进一步阐明石杉
科植物 HupA 生物合成途径奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂及仪器
1.1.1 材料 长柄石杉、闽浙马尾杉、华南马尾杉
和有柄马尾杉于 2012 年夏季采自福建省尤溪县高山
村的福建省石杉科植物种质资源圃。全草采集株高
为 10～12 cm 的植株，采集后用清水冲洗干净，用
吸水纸吸干表面水分，保存于−80 ℃超低温冰箱备
用。植物材料由复旦大学潘胜利教授鉴定。大肠杆
菌 Escherichia coli Top10 菌株由本实验室提供。
1.1.2 试剂 TRIzon RNA 试剂盒、DNA 凝胶回收
纯化试剂盒、高纯度质粒中提试剂盒均为康为世纪
公司产品；pGEM®-T Easy 载体系统试剂盒、
M-MLV、Rnasin、Taq DNA 聚合酶均购自 Promega
公司；dNTP 和 DNA Marker 购于天根生物公司；
Oligo-DT18、LDC 基因扩增引物 LysD-F 和 LysD-R
由博尚生物技术有限公司合成。其他试剂均为分析
纯国产试剂。
1.1.3 仪器 PTC-100 多功能热循环仪（美国）；
GIS2008 型凝胶成像系统；紫外可见光光度计
（UV-1240，岛津公司）；制冰机（ICE TWO-Q21）；
高速冷冻离心机（Multifuge X3FR，美国 Thermo）；
超低温冰箱（MDF-U4086s，三洋公司）；卧式高压
蒸气消毒锅（YXQ-WYD1600）；电热恒温水浴锅
（HHS-II-2K）；生化培养箱（HPS-250）；DYY 型双
移定时电泳仪。
1.2 方法
1.2.1 RNA的提取和 cDNA的合成 取 4种石杉科
植物新鲜材料，使用康为世纪 TRIzon RNA 试剂盒
提取总 RNA。用紫外分光光度计进行浓度及纯度的
测定，1%的琼脂糖电泳检测 RNA 完整性。再利用
Promega 公司的 M-MLV 反转录酶，按照该试剂盒
说明书提供的反应条件和步骤进行实验操作，将
RNA 反转录成第一链互补链 DNA（cDNA）。
1.2.2 石杉科植物 LDC 基因的扩增及测序 根据
美国国立生物技术信息中心（NCBI）蛇足石杉
Huperzia serrata (Thunb. ex Murray) Trev. 的 EST数
据库序列（GenBank：GO914645.1），结合使用 Primer
Premier 5.0 和 Oligo 6.0 软件设计引物，由博尚生物
技术有限公司合成。引物为 LysD-F：5’-GCAGCA-
GTGGCAAGAAGA-3’，LysD-R：5’-T-GGGCAGTT-
GAAGCAGAC-3’。以 4 种石杉科植物的 cDNA 为
模板，按照以下体系对LDC基因进行扩增：cDNA 2.5
μL，10×缓冲液 5.0 μL，10 μmol/L 上下游引物各
1.25 μL，dNTP mix（10 mmol/L）1.5 μL，25 mmol/L
MgCl2 4.5 μL，5 U/μL Taq 酶 0.75 μL，终体积为 30.0
μL。反应程序：95 ℃ 预变性 3 min；然后进行 32
个循环：95 ℃变性 30 s，50 ℃退火 30 s，72 ℃延
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伸 45 s；循环结束后 72 ℃延伸反应 5 min，4 ℃条
件下保存。1%的琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物，对
扩增所得目的片段进行切胶回收。
将回收产物与 pGEM®-T Easy（USA Promega
公司）载体连接，使用新制备的 Top 10 感受态细胞
进行转化，在含有氨苄的 LB 平板上进行培养，挑
取单克隆菌落 PCR 扩增和电泳检测后选择阳性克
隆送公司测序。
1.2.3 长柄石杉 LDC 基因全长的调取 采用 RACE
技术获得广布种长柄石杉 LDC 基因全长序列，所用
引物见（表 1）。RACE 结果经过纯化回收，连接载
体，转化后提取质粒测序。5’-RACE 测序结果与
3’-RACE 测序结果经过 DNAman 软件拼接后得到
LDC 基因全长序列。
表 1 LDC 基因调取的扩增引物
Table 1 LDC gene retrieval and amplification primers
引物名称 引物序列 (5’→3’)
5’ RACE-P1 GGCCACGCGTCGACTAGTACCCCCCCCCCCCCCCCCC
5’ RACE-P2 GGCCACGCGTCGACTAGTAC
3’ RP1 TACCGTCGTTCCACTAGTGATTTCACTATAGGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTvn
3’ router TACCGTCGTTCCACTAGTGATTTC
cb5r1 GAGCAATAAATGCATAAGCTTGTCG
cb5r2 CTGCAACAGCAAGTACTTCTCCAAC
cb3r1 GGCTGAAATGGCACGACAAGCTTATG
cb3r2 GGAAATGATCACGTGGTCTCAGC

1.2.4 LDC 基因生物信息学分析 采用 GOR 贝叶斯
统计学法（http://npsa-pbil.ibcp.fr/cgi- bin/secpred_ gor4.
pl）进行 LDC 蛋白质二级结构分析，SWISS-MODEL
（http://swissmodel. expasy.org/）分析预测 LDC 蛋白质
的三维结构。氨基酸序列比对利用 NCBI 的蛋白质序
列数据库进行，通过MEGA 5.0 软件构建系统进化树。
2 结果与分析
2.1 4 种石杉科植物 LDC 基因克隆与长柄石杉
LDC 基因全长序列分析
提取的 4 种石杉科植物的 RNA 经检测其浓度
及纯度达到实验要求后反转录成 cDNA，再以 cDNA
为模板，利用 RT-PCR 技术扩增获得 4 种石杉科植
物 LDC 基因（图 1）。采用 RACE 技术获得的长柄
石杉 LDC 基因全长序列为 1 266 bp，4 种碱基的量
分别为 A 29.5%、C 19.4%、G 24.4%、T 26.7%。双
链的 DNA 分子大小为 780 410。该序列编码的蛋白
质由 403 个氨基酸组合而成，将核酸序列提交到
NCBI，GenBank 登录号为 KF040056。
2.2 长柄石杉 LDC 基因编码蛋白的二级结构及
三维结构预测
使用 GOR 贝叶斯统计学法分析（http://npsa-
pbil.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_gor4.pl），结果表明长柄
石杉 LDC 蛋白的二级结构中 α-螺旋（α-helix）结
构占 34.49%，延伸主链结构（extended strand）占

M-Marker 1-长柄石杉 2-闽浙马尾杉 3-华南马尾杉 4-有柄马尾杉
M-Marker 1-H. serrata var. longipetiolata 2-P. minchegensis 3-P.
austrosinicus 4-P. petiolatus
图 1 4 种石杉科植物 LDC 基因目的条带
Fig. 1 Gel electrophoresis of LDC gene in four plants from
Huperziaceae
19.35%，随机卷曲（random coil）占 46.15%（图 2）。
使用 Swiss-model（http://swissmodel.expasy.org/）预
测了 LDC 蛋白的三维结构，第 63 至 242 位氨基酸
参与了建模，结果见图 3。
2.3 LDC 基因核酸序列比对与系统发生分析
将 4 种材料的 LDC 基因测序结果通过
Nucleotide blast下的Blastn比对，结果显示Nucleotide
collection（nr/nt）核酸非冗余数据库[16]中的蛇足石杉
LDC全长基因Huperzia serrata lysine decarboxylase 1
（LDB1）gene（Sequence ID：gb|JQ308624.1|）和
Huperzia serrata lysine decarboxylase 2（LDB2）gene

2 000 bp
1 000 bp
750 bp
500 bp
250 bp
100 bp
M 1 2 3 4
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蓝色表示 α-螺旋，红色表示延伸主链，浅紫色表示随机卷曲
blue indicates α-helix; red indicates extended strand; light purple
indicates random coil structure
图 2 长柄石杉 LDC 二级结构预测
Fig. 2 Prediction of LDC secondary structure in H. serrata var.
longipetiolata

图 3 长柄石杉 LDC 三级结构预测
Fig. 3 Prediction of LDC tertiary structure in H. serrata var.
longipetiolata
（Sequence ID：gb|JQ308625.1|），以及 EST 数据库
中 Huperzia serrata Leaf 02980（Sequence ID：GO
914645.1）3 条序列与实验获得 4 种材料的 LDC
基因序列具有较高的相似性，且数据库中的这 3
条序列皆被注释为编码 CDC 的基因，可见克隆获
得的 4 种材料的基因确为 CDC 基因。采用
MEGA5.0 软 件 将 以 上 序 列 基 于 Maximum
Composite Likelihood 距离（Bootstrap 重复 1 000
次）构建 UPGMA 树型图，由图 4 可见，长柄石
杉的 LDC 基因序列与数据库中的蛇足石杉 LDC
基因序列 LDB1、LDB2（JQ308624.1、JQ308625.1）
及引物设计序列 LDC（GO914645.1）聚类到一起，
说明长柄石杉与蛇足石杉的 LDC 基因序列具有
高同源性，而 3 种马尾杉属植物（闽浙马尾杉、
华南马尾杉和有柄马尾杉）聚为一簇，一定程度
上验证了对石杉科植物分类的科学性。

图 4 LDC 基因 UPGMA 图
Fig. 4 UPGAM tree of LDC gene
2.4 LDC 氨基酸序列比对与进化分析
将长柄石杉的 LDC 氨基酸全长序列与蛇足石
杉 的 LDC1 和 LDC2 氨 基 酸 序 列 即 LDB1
（JQ308624.1）和 LDB2（JQ308625.1）进行比对（图
5），从图 5 可以看出长柄石杉 LDC 氨基酸序列长
度超过目前已获得的蛇足石杉 LDC，在第 7、76、
83、113、158、203、206、217～219、224、230、
233 位，长柄石杉 LDC 与 LDB1、LDB2 均有差异，
而在第 237～242 位长柄石杉 LDC 与 LDB1 高度相
似而与 LDB2 有差异。长柄石杉 LDC 氨基酸序列
与蛇足石杉 LDB1、LDB2 序列的相似性分别为
92.08%和 89.11%，说明长柄石杉与蛇足石杉的
LDC 基因有高的同源性，可以认为它们的 LDC 基
因是一个基因家族，许多同源基因编码的蛋白催化
同一类的生物反应，同时也表明该基因功能域部分
绝对保守。
从 NCBI 的非冗余蛋白数据库（Nr）中选取与
4 种石杉科植物 LDC 基因编码蛋白相似性高的 8 个
物种 16 条 LDC 蛋白序列，使用 Mega 5.0 软件构建
Neighbor Joining（NJ）系统进化树（图 6）。这些序
列包括蛇足石杉（gi|381392359|、gi|381392357|）、
江 南 卷 柏 Selaginella moellendorffii Hieron
（gi|300164809|、gi|300172123|）、玉米 Zea mays L.
（gi|414880785|、gi|195627148|、gi|195653861|）、桃
Prunus persica (L.) Batsch.（gi|462403512|）、毛果杨
Populus trichocarpa Torr. et Gray（gi|222841434|、
gi|222855466| ）、 黄 瓜 Cucumis sativus Linn.
（gi|444327158|）、拟南芥 Arabidopsis thaliala (L.)
Heynh（gi|297319084|）、蓖麻 Ricinus communis L.
（gi|223544575|、gi|223530312|、gi|223541391|）等
的 LDC 序列。从图 6 可见，克隆的 4 种石杉科植物
LDC 氨基酸序列首先与石杉科的蛇足石杉的 LDC

蛇足石杉（LDB1）
蛇足石杉（LDB2）
蛇足石杉（LDC）
长柄石杉
闽浙马尾杉
华南马尾杉
有柄马尾杉

0.025 0.015 0.005
50 100 150 200 250 300 350
50 100 150 200 250 300 350
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图 5 长柄石杉 LDC 蛋白与蛇足石杉 LDC 蛋白的同源性比较
Fig. 5 Amino acid alignments of LDC between H. serrata var. longipetiolata and H. serrata

图 6 LDC 基因编码氨基酸序列的 NJ 进化树
Fig. 6 NJ tree phylogenetic analysis of LDC coding amino
acid sequences
（gi|381392359|、gi|381392357|）聚类在一起，其中
长柄石杉与蛇足石杉聚类为一分支，而 3 种马尾杉
属植物聚为一簇，说明相对于其他石杉科植物，长
柄石杉 LDC 蛋白与 NCBI 中的蛇足石杉 LDC 氨基
酸序列相似度最高。在系统发生树中，石杉科植物
与蕨类植物江南卷柏的 LDC 基因[17]（gi|300164809、
gi|300172123）的距离相对于其他植物如玉米
（gi|414880785、gi|195627148、gi|195653861），桃
（gi|462403512），毛果杨（gi|222841434）等植物的
LDC 基因的距离更为接近，更加确定了其分类学上
的依据。与拟南芥等植物的 LDC 氨基酸序列具有部
分相似性。
3 讨论
由于 HupA 目前尚未能人工合成，也未见通过
组织培养[5]、产 HupA 内生真菌发酵培养[18-19] 等其
他途径实现 HupA 来源产业化的报道，药品生产仍
完全依赖野生资源，因此通过生物合成途径获得
HupA 成为一种有潜力的途径。有关石杉碱生物合
成可能途径的研究，已有学者进行了探索：我国学
者 Ma[5]、谭昌恒等[20]对 HupA 及相关的石松碱在石
杉科植物体中代谢途径进行了初步的探讨，较为完
善地描述了从 L-赖氨酸为起始物合成 HupA 途径
长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列

长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列

长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列

长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列

长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列

长柄石杉 LDC
蛇足石杉 LDC1
蛇足石杉 LDC2
相同序列
80
35
35


120
75
75


160
115
115


200
155
155



240
195
195


280
212
202
蛇足石杉（gi|381392359|）
蛇足石杉（gi|381392357|）
长柄石杉
闽浙马尾杉
华南马尾杉
有柄马尾杉
江南卷柏（gi|300164809|）
江南卷柏（gi|300172123|）
玉米（gi|414880785|）
玉米（gi|195627148|）
玉米（gi|195653861|）
桃（gi|462403512|）
毛果杨（gi|222841434|）
黄瓜（gi|444327158|）
蓖麻（gi|223544575|）
毛果杨（gi|222855466|）
蓖麻（gi|223530312|）
拟南芥（gi|297319084|）
黄瓜（gi|444327158|）
蓖麻（gi|223541391|）

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中，各个中间物的相互转化[21]。LDC 主要生物学功
能是催化 L-赖氨酸脱羧生成 1,5-戊二胺（尸胺）和
二氧化碳。1,5-戊二胺是一种多胺，是生物体内广
泛存在的具有生理活性的含氮碱[22]，是植物次生代
谢产物生物碱合成的重要前体物质。张君诚等[10]通
过对 HupA 生物合成与代谢调控关键基因的差异表
达分析，认为 LDC 基因编码的蛋白对 HupA 的积累
具有明显的促进作用。
本实验对长柄石杉、闽浙马尾杉、华南马尾杉
和有柄马尾杉4种石杉科植物LDC基因序列进行了
克隆，长柄石杉为石杉科植物中的广布种，资源储
量相对较高，具有较高的研究和利用价值；其他 3
物种 LDC 基因的克隆不仅有助于对长柄石杉 LDC
基因序列的分析，而且对石杉碱生物合成的后续研
究有一定的意义，华南马尾杉与有柄马尾杉 HupA
量差异极大，后者约为前者的 10 倍[23]，二者对于
产 HupA 基因的筛选具有较高的研究价值。
采用RACE技术首次获得石杉科广布种长柄石
杉的 LDC 基因全长序列，编码区长为 1 266 bp，编
码 403 个氨基酸，GenBank 登录号 KF040056，其
序列长度超过目前已获得的蛇足石杉 LDC 序列
（JQ308624.1、JQ308625.1 分别编码 212、202 个氨
基酸[7]）。通过核酸序列及氨基酸序列的比对分析验
证了所克隆的 LDC 基因的正确性。进化分析显示
（图 6）长柄石杉 LDC 蛋白与 NCBI 中的蛇足石杉
LDC 蛋白氨基酸序列相似度最高。石杉科植物与蕨
类植物江南卷柏的 LDC 序列同源性较高。研究结果
丰富了为数不多的石杉科植物石杉碱生物合成与代
谢调控可能途径中涉及到的关键酶基因序列，同时
也为 L-赖氨酸脱羧酶基因的转导技术夯实了基础。
石杉碱生物合成与代谢途径复杂，参与调控的酶种
类繁多，已知的有赖氨酸脱羧酶、二胺氧化酶、细
胞色素 P450、氮甲基转移酶等[10,24]，目前对关键酶
基因的研究尚处起步阶段，还有更多的功能基因需
要筛选研究，合成与代谢过程仍有许多不确定的中
间体产物的存在，需要通过进一步深入研究以期为
实现 HupA 生物合成奠定基础。
参考文献
[1] 唐希灿. 石杉碱甲 (双益平): 一种有望治疗早老性痴
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