全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 10 期 2012 年 10 月
·1934·
多指标综合评价玉竹蜜蒸炮制工艺研究
王冬梅 1,吕振江 1,王永红 2,刘 丹 1
1. 西北农林科技大学林学院,陕西 杨凌 712100
2. 上海睿智化学研究有限公司,上海 201203
摘 要:目的 优选玉竹蜜蒸炮制工艺。方法 兼顾多糖、皂苷、黄酮、醇提物、水提物和水分各指标的量及抗氧化活性,
研究蜜润时间、料液比(炼蜜-玉竹)、蜜蒸时间、蜜蒸温度对各指标的影响,采用多指标综合评分法,利用正交试验优化玉
竹的蜜蒸炮制条件。结果 在蜜润时间为 2 h,料液比(炼蜜-玉竹)为 1∶4,蜜蒸时间 1 h,蜜蒸温度 70 ℃条件下,综合
得分为 84.07,与未炮制玉竹相比,多糖、皂苷、醇提物、水提物的量分别提高了 32.02%、206.95%、55.60%、48.78%,水
分和黄酮的量稍有下降。结论 该方法有效提高了玉竹各指标的提取率,提高了玉竹的利用价值。
关键词:玉竹;蜜蒸工艺;多指标综合评分法;抗氧化活性;正交试验
中图分类号:R283.1 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2012)10 - 1934 - 05
Honey-steam processing technology of Ploygonatum odoratum by multi-index
comprehensive evaluation
WANG Dong-mei1, LV Zhen-jiang1, WANG Yong-hong2, LIU Dan1
1. College of Forestry, Northwest Sci-Tech University of Agriculture and Forestry, Yangling 712100, China
2. Shanghai Chempartner Co., Ltd., Shanghai 201203, China
Abstract: Objective To optimize the honey-steam processing technology of Ploygonatum odoratum. Methods The content and
anti-oxidant activity of polysaccharides, saponins, flavonoids, ethanol extracts, water soluble substance, and water were taken into
consideration. The effects of honey-moistening time, solid-liquid ratio, honey-steam time, and honey-steam temperature on each index
were studied. The best extraction condition was optimized using the orthogonal test coupled with the multi-index comprehensive
evaluation. Results The results showed that the comprehensive score was 84.07 under the optimal condition, 2 h for honey-
moistening, honey-P. odoratum was 1∶4, and honey-steam temperature was 70 ℃ for 1 h. The contents of polysaccharides, saponins,
ethanol extract, and water soluble substance were raised by 32.02%, 206.95%, 55.60%, and 48.78%, respectively, compared with those
of unprocessed P. odoratum. The contents of flavonoids and water decreased slightly. Conclusion This method could be used to raise
the comprehensive score of all indexes and the utility value of P. odoratum.
Key words: Polygonatum odoratum (Mill.) Druce; honey-steam technology; multi-index comprehensive evaluation; anti-oxidant
activity; orthogonal test
玉竹 Polygonatum odoratum (Mill.) Druce 为百
合科黄精属多年生草本植物。玉竹含有多糖、皂苷、
黄酮、挥发油等多种化学成分[1]。其干燥根茎可入
药,性甘、微寒,归肺、胃经,具有养阴润肺、生
津止渴等功能[2]。药理实验研究表明,玉竹提取物
具有抑制肿瘤生长、提高机体的免疫功能、治疗和
缓解糖尿病症状的作用,同时具有扩张血管、抗急
性心肌缺血、降血压、抗衰老、抗菌等作用[3]。
玉竹为传统中药,临床需炮制后方可入药。药
材经炮制后可以增强药效、扩大治疗范围、缓和药
性、降低毒性起到解毒的作用,同时可以提高苷元
的溶解度,促进吸收,还可以防止药材有效成分的
氧化,从而提高药效,保证药材的质量[4-5]。
目前,国内外对玉竹的研究主要集中在化学成
分、药理作用、临床疗效等方面,而对玉竹的炮制
方法、炮制工艺及饮片的质量控制鲜有研究[6-11]。虽
然陈胜璜等[12]研究结果表明,在清蒸、蜜蒸、酒蒸、
清炒、蜜炒等几种玉竹炮制方法中,蜜蒸的效果最
收稿日期:2012-03-07
基金项目:陕西省科技攻关项目(2009K19-06);国家林业公益性行业科研专项(200904004)
作者简介:王冬梅,女,博士,副教授,硕士生导师,主要研究方向为天然产物化学和药用植物开发利用。E-mail: dmwli@163.com
网络出版时间:2012-09-07 网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120907.1021.006.html
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佳,但却未对玉竹蜜蒸工艺进行进一步的深入研
究。本研究综合考虑多糖、皂苷、黄酮、醇提物、
水提物和水分各指标的量及其抗氧化活性,采用多
指标综合评分法,利用正交试验优化玉竹的蜜蒸炮
制工艺,以期为改善玉竹炮制品的质量,提升玉竹
在药用或保健等方面的价值提供理论依据。
1 仪器与材料
TU1810 型紫外可见分光光度计(北京普析通
用仪器有限责任公司);JA5003 型分析天平(上海
舜宇恒平科学仪器有限公司);R—GG17 型旋转蒸
发仪(上海申生科技有限公司);HHSY2—N18 型
电热恒温水浴锅(哈尔滨东联公司);SHB—III 型
循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);
101—1 型电热恒温鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器
有限公司)。
无水葡萄糖(广东光华化学厂有限公司,批号
20100508),芦丁(批号 080-9303)、薯蓣皂苷元(批
号 100001-200504)中国药品生物制品检定所。苯
酚、浓硫酸、高氯酸、甲醇、无水乙醇、亚硝酸钠、
氢氧化钠、三氯化铝均为分析纯。
玉竹 Polygonatum odoratum (Mill.) Druce 根茎
于 2010 年 9 月采自秦岭太白山厚畛子,样品由西北
农林科技大学林学院李登武教授鉴定为正品,切成
薄片,自然干燥后备用。
2 方法与结果
2.1 多糖的测定[13]
2.1.1 线性关系考察 精密称取 60 mg 无水葡萄
糖,用蒸馏水溶解定容至 100 mL,精密吸取 1.0、
1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL 上述溶
液定容至 50 mL。分别吸取 2.0 mL 置试管中,加入
5%苯酚 1.0 mL、浓硫酸 7.0 mL,摇匀,静置 5 min,
沸水浴加热 15 min,置冰水浴 5 min。另吸取 2.0 mL
蒸馏水重复上述操作,做空白对照。在波长 490 nm
处测吸光度(A)值。以质量为横坐标(X),A 值
为纵坐标(Y)进行线性回归,得回归方程 Y=
5.733 3 X+0.032 4,r=0.999 6,线性范围 0.024~
0.120 mg。
2.1.2 样品中多糖的测定 称取样品 2.00 g,加水
200 mL,浸泡 12 h,80 ℃浸提 1.5 h,提取 1 次,
合并滤液,浓缩至约 5 mL,加无水乙醇至醇体积分
数为 95%,加入 1 mol/L NaOH 溶液调节 pH 值至 7,
静置 12 h,滤过,将滤渣于 60 ℃下鼓风烘干即得
多糖精制品。取多糖精制品 25 mg,加水溶解并定
容至 50 mL,吸取 3 mL 加水定容至 50 mL,得样品
溶液。吸取样品溶液 2 mL,按“2.1.1”项方法显色,
测定 A 值,计算多糖的质量分数。
2.2 皂苷的测定[14]
2.2.1 线性关系考察 精密称取 3.00 mg 薯蓣皂苷
元,用甲醇溶解并定容至 10 mL,精密移取 0.2、0.3、
0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL 上述溶液,高氯酸定容
至 10 mL,漩涡混匀 1 min。置 70 ℃水浴中加热 15
min,立即置于冰水浴中 5 min 以停止反应,以高氯
酸为空白对照,在波长 408 nm 处测定 A 值。以质
量为横坐标(X),A 值为纵坐标(Y)进行线性回
归,得回归方程 Y=3.549 8 X-0.077,r=0.999 9,
线性范围 0.06~0.24 mg。
2.2.2 样品中皂苷的测定 称取样品 5.00 g,加 60
mL 石油醚脱脂 2 h,加入 70%乙醇 45 mL浸泡 12 h,
80 ℃水浴中回流提取 2 次,每次 1.5 h,合并滤液,
浓缩至干。再用 50 mL 蒸馏水溶解,用正丁醇萃取
3 次(20、20、10 mL),合并正丁醇部分,浓缩至
干即得皂苷粗品。用甲醇溶解粗品并定容至 50 mL,
取溶液 0.5 mL,按“2.2.1”项方法操作,测定 A 值,
根据回归方程计算粗提物中皂苷的质量分数。
2.3 黄酮的测定[15]
2.3.1 线性关系考察 精密称取 4.0 mg 芦丁对照
品,用 60%乙醇溶解,定容至 100 mL 量瓶中,即
得对照品溶液。移取 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0
mL 对照品溶液于 25 mL 量瓶中,加入 0.50 mol/L
NaNO2 溶液 1 mL,5 min 后加 0.30 mol/L AlCl3 溶液
1 mL,摇匀,5 min 后加入 1mol/L NaOH 溶液 5 mL,
60%乙醇定容至刻度,空白对照用 60%乙醇代替对
照品溶液,在 525 nm 波长处测定 A 值。以质量为
横坐标(X),A 值为纵坐标(Y)进行线性回归,得
回归方程 Y=0.500 1 X-0.003 4,r=0.999 3,线性
范围 0.04~0.40 mg。
2.3.2 样品中黄酮的测定 称取样品 5.00 g,加
70%乙醇 60 mL,浸泡 1 h,在 80 ℃水浴中回流提
取 2 次,每次 2 h,合并滤液,定容至 250 mL。吸
取溶液 5 mL,按“2.3.1”项方法操作,测定 A 值,
根据回归方程计算粗提物中黄酮的质量分数。
2.4 水分的测定
将蜜蒸玉竹冷却至室温,称取样品 3 份,均为
1.00 g,60 ℃下鼓风烘干至恒定质量。计算失水量。
2.5 水提物的测定
称取蜜蒸玉竹样品 2.00 g 于锥形瓶中,加水 50
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mL,静置 1 h,80 ℃水浴浸提 1 h,取滤液,减压
浓缩至干,记录质量。计算水提物量。
2.6 醇提物的测定
称取样品 2.00 g 于锥形瓶中,加 50 mL 无水乙
醇,静置 1 h,80 ℃水浴回流 1 h,取滤液,减压浓
缩至干,记录质量。计算醇提物量。
2.7 权重系数的确定
采用归一化法解决指标间量纲不一致问题,根
据指标间的重要性差异给出指标的权重系数,综合
评分后进行统计分析[16]。本研究综合考虑各指标的
质量分数和抗氧化能力,确定各指标的权重系数,
使得优选出的工艺条件更加合理。根据层次分析法
原理,以多糖、皂苷、黄酮、醇提物、水提物和水
分 6 个指标为评价标准,以 6 类成分的抗氧化活性
及其质量分数为基础,反映玉竹蜜蒸工艺的总评价
目标,建立评价目标树,确定权重系数[17-19]分别为
多糖 0.353 2、皂苷 0.042 6、黄酮 0.050 4、醇提物
0.251 0、水提物 0.163 2、水分 0.139 6。经一致性检
验,判别矩阵的一致性比例 CR<0.10,表明权重系
数合理有效。
初始权重系数(wi′)=(ai1ai2ai3…ain)1/m
归一化权重系数(wi)=wi′ / (w1′+w2′+w3′+…+wm′)
ain为各指标成对比较判断优选矩阵的元素
2.8 单因素试验
选取影响蜜蒸工艺的几个主要参数:蜜润时间、
料液比(炼蜜-玉竹)、蜜蒸时间、蜜蒸温度,分别
讨论各个参数对各指标的影响。
2.8.1 蜜润时间 称取 40 g 干燥玉竹各 5 份,分别
加 5 g 炼蜜,搅拌混匀。室温下分别静置 1、2、3、
4、5 h,然后在 80 ℃下蒸 5 h 后测定各指标。结果
表明(表 1),综合得分随蜜润时间的增加先增加后
降低,在蜜润时间为 2 h 时,综合得分最高,随后
缓慢下降。综合得分对蜜润时间响应变化较小,在
正交试验中不再考虑该因素。
2.8.2 料液比 称取 36 g 干燥玉竹各 5 份,分别加
18、9、6、4.5、3.6 g 炼蜜,搅拌混匀。室温下静置
2 h,然后在 80 ℃下蒸 5 h 后测定各指标。结果表
明(表 1),在料液比为 1∶6 时,综合得分最高,
随后逐渐下降。
2.8.3 蜜蒸时间 称取 36 g 干燥玉竹各 5 份,分别
表 1 单因素试验
Table 1 Single factor test
因素与水平 多糖 / % 皂苷 / % 黄酮 / % 醇提物 / % 水提物 / % 水分 / % 综合评分
蜜润时间 1 h 28.22 0.277 0.106 9.50 69.88 6.60 92.14
2 h 27.93 0.238 0.126 11.62 73.85 6.40 96.92
3 h 22.35 0.294 0.093 11.97 74.58 6.90 91.33
4 h 21.78 0.289 0.094 10.83 72.33 6.75 87.40
5 h 24.06 0.246 0.095 10.58 72.73 6.80 89.34
料液比 1∶2 21.52 0.315 0.120 5.75 59.43 6.40 72.04
1∶4 21.27 0.290 0.125 10.08 62.31 6.60 81.36
1∶6 28.08 0.310 0.165 12.45 64.28 6.70 96.66
1∶8 28.55 0.230 0.110 5.42 56.38 7.40 79.51
1∶10 28.77 0.190 0.080 5.20 57.33 8.10 79.32
蜜蒸时间 1 h 26.11 0.260 0.130 11.65 64.48 7.70 91.60
2 h 28.47 0.250 0.140 11.25 65.69 7.75 94.22
3 h 26.88 0.230 0.130 9.45 62.40 9.10 88.47
4 h 17.38 0.230 0.130 8.58 62.47 11.05 77.14
5 h 24.91 0.240 0.135 8.05 62.33 11.75 86.48
蜜蒸温度 60 ℃ 21.62 0.336 0.130 10.35 57.63 7.95 66.87
70 ℃ 27.43 0.330 0.130 12.13 61.98 8.80 77.87
80 ℃ 29.02 0.332 0.140 19.05 64.43 8.15 89.36
90 ℃ 21.88 0.342 0.150 9.42 60.18 10.00 68.46
100 ℃ 16.77 0.328 0.230 9.38 59.15 21.30 70.91
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加 6 g 炼蜜,搅拌混匀。室温下静置 2 h,80 ℃下
分别蒸 1、2、3、4、5 h 后测定各指标。结果表明
(表 1),综合得分呈现出先上升后下降再上升的趋
势,在蜜蒸时间为 2 h 时,综合得分最高。
2.8.4 蜜蒸温度 称取 36 g 干燥玉竹各 5 份,分别
加 6 g 炼蜜,搅拌混匀。室温下静置 2 h,分别在 60、
70、80、90、100 ℃下蒸 2 h 后测定各指标。结果
表明(表 1),随温度的增加,综合得分先上升后下
降,在 80 ℃时有最大值。
2.9 工艺优化试验
根据正交试验设计原理,利用单因素试验结果
筛选的因素与水平,选择对综合评分有较大影响的
料液比(A)、蜜蒸时间(B)、蜜蒸温度(C)为考
察因素,进行 L9(34) 正交试验,采用层次分析法进
行多指标评价,以各指标综合评分为考察指标,进
一步优选玉竹蜜蒸工艺[20-21]。称取干燥玉竹 9 份,
均为 36 g,按正交试验设计进行试验,试验设计与
结果见表 2,方差分析见表 3。
各指标综合评分 Vi=vi1+vi2+vi3+…+vi6
vij=100×wj×mij / mjmax
Vi 为第 i 次处理的综合评分,mij为指标 j 在第 i 次处理中的
量,mjmax 为指标 j 在所有处理中的最大值,wj 为指标 j 的归
一化权重系数
直观分析结果表明,以综合评分为评价指标,
在所选的因素水平范围内,蜜蒸温度对玉竹各指标
的提取效果影响最大,料液比影响较小,蜜蒸时间
影响最小。方差分析结果表明,蜜蒸温度对综合评
分的影响均达到显著水平,具有统计学意义(P<
0.05),料液比、蜜蒸时间影响不显著。选取最佳蜜
蒸条件为 A1B1C1,即料液比为 1∶4,蜜蒸时间 1 h,
蜜蒸温度 70 ℃。各因素不同水平间多重比较结果
显示(表 4),料液比、蜜蒸时间的 3 个水平之间差
异不显著,蜜蒸温度的前 2 个水平差异不显著,因
此从节约原料、降低成本、减少能耗等方面考虑,
表 2 L9(34) 正交试验结果
Table 2 Result of L9(34) orthogonal test
试验号 A B / h C / ℃ D (误差)
多糖 /
%
皂苷 /
%
黄酮 /
%
醇提物 /
%
水提物 /
%
水分 /
%
综合评分
1 1∶4 (1) 1 (1) 70 (1) (1) 27.96 0.143 0.093 14.58 73.20 6.55 84.07
2 1∶4 (1) 2 (2) 80 (2) (2) 26.56 0.150 0.097 12.73 67.55 9.20 82.22
3 1∶4 (1) 3 (3) 90 (3) (3) 14.12 0.164 0.104 10.72 68.12 8.80 64.94
4 1∶6 (2) 1 (1) 80 (2) (3) 27.13 0.325 0.098 11.67 65.45 10.50 83.67
5 1∶6 (2) 2 (2) 90 (3) (1) 13.44 0.186 0.095 10.85 66.35 8.45 63.29
6 1∶6 (2) 3 (3) 70 (1) (2) 26.77 0.281 0.086 11.53 63.28 9.75 81.77
7 1∶8 (3) 1 (1) 90 (3) (2) 15.04 0.209 0.102 10.72 61.52 7.30 63.12
8 1∶8 (3) 2 (2) 70 (1) (3) 25.21 0.200 0.095 9.30 62.18 8.65 74.80
9 1∶8 (3) 3 (3) 80 (2) (1) 23.83 0.219 0.102 6.15 60.58 11.35 72.65
K1 231.23 230.86 240.64 220.01
K2 228.73 220.31 238.54 227.11
K3 210.57 219.36 191.35 223.41
R 20.66 11.50 49.29 7.10
表 3 方差分析
Table 3 Analysis of variance
变异来源 离均差平方和 自由度 F 值 显著性
A 84.763 2 10.082
B 27.162 2 3.231
C 517.868 2 61.600 P<0.05
D (误差) 8.407 2
F0.05(2, 2)=19.00 F0.01(2, 2)=99.00
本研究最终选取的蜜蒸条件科学合理。
2.10 验证试验
2.10.1 优选工艺与正交试验的比较 本研究最终
选取的蜜蒸条件为 A1B1C1,与正交试验中第一组试
验条件相符,从综合评分结果可以看出,该条件下
的综合评分最高,说明选取结果合理。
2.10.2 蜜蒸玉竹与未炮制玉竹的比较 玉竹有效
成分提取、定量测定方法与蜜蒸玉竹有效成分提取、
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表 4 各因素不同水平间多重比较 (n=3)
Table 4 Multiple comparisons among factors
at different levels (n=3)
水 平 因素
1 2 3
A 76.65a 76.24a 70.19a
B 76.53a 73.44a 73.12a
C 79.79a 79.51a 63.78b
不同小写字母者表示同一因素不同水平间比较差异显著(P<0.05)
Values with different lowercase letters mean significant difference
at different levels of same factor (P < 0.05)
测定方法相同。定量测定结果说明,采用优选工艺
炮制后的玉竹综合评分提高了 45.19%,多糖、醇提
物、皂苷、水提物的量均上升,其中醇提物上升比
率最大为206.95%,水分和黄酮的量稍有下降(表5)。
3 讨论
玉竹主要含有多糖以及少量皂苷和黄酮类化合
物,其水提物、醇提物等成分均具有抗氧化能力,
能够延缓衰老,对免疫功能有一定的调节作用。以
单一指标成分进行工艺优选与中药多组分、多靶点
的作用特点有一定的距离。本研究以多糖、皂苷、
表 5 炮制前后玉竹中各成分的量及其变化趋势
Table 5 Ingredient content and its change trend in P. odordatum before and after processing
样 品 水分 / % 水提物 / % 醇提物 / % 多糖 / % 黄酮 / % 皂苷 / % 综合评分
炮制后 6.55 73.20 19.58 27.96 0.092 8 0.142 9 84.07
未炮制 7.05 49.20 4.75 21.18 0.099 8 0.091 8 57.90
提高率 −7.09 48.78 206.95 32.02 −7.01 55.60 45.19
黄酮、醇提物、水提物和水分 6 个指标的量为考察
对象,综合考虑其抗氧化能力,采用层次分析法、
多指标加权综合评分法优选了玉竹蜜蒸工艺,符合
降低能耗、节约原料的原则,达到提高玉竹有效成
分提取率的要求。
参考文献
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