全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 2 期 2012 年 2 月
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UPLC-ELSD 法同时测定重楼中重楼皂苷 I、II、VI、VII
韩燕全 1，洪 燕 2，夏伦祝 1*，左 冬 2，姜 蕾 2，罗 欢 2
1. 安徽中医学院第一附属医院 国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽 合肥 230031
2. 安徽中医学院，安徽 合肥 230031
摘 要：目的 建立同时测定重楼中重楼皂苷 I、II、VI、VII 的超高效液相色谱-蒸发光散射（UPLC-ELSD）分析方法。方
法 采用 Waters Acquity UPLC H-Class 色谱系统，ELSD 检测器，BEH C18色谱柱（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），流动相为乙
腈-水，以体积流量 0.45 mL/min 进行梯度洗脱，柱温 30 ℃。结果 被测成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r＞
0.999 5）；平均回收率在 98.36%～100.11%，RSD≤1.56%。结论 UPLC 法分离效果及重现性好，且快速、简便，可作为重
楼的质量控制方法。
关键词：重楼；超高效液相色谱-蒸发光散射；重楼皂苷 I；重楼皂苷 II；重楼皂苷 VI；重楼皂苷 VII
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)02 - 0305 - 03
Simultaneous determination of Paris saponins I, II, VI, and VII in Paridis
Rhizoma by UPLC-ELSD method
HAN Yan-quan1, HONG Yan2, XIA Lun-zhu1, ZUO Dong2, JIANG Lei2, LUO Huan2
1. The First Affiliated Hospital, Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Grade 3 Laboratory of Traditional Chinese
Medicine Preparation, State Administration of TCM, Hefei 230031, China
2. Anhui College of Traditional Chinese Medicine, Hefei 230031, China
Key words: Paridis Rhizoma; UPLC-ELSD; Paris saponin I; Paris saponin II; Paris saponin VI; Paris saponin VII
重楼是百合科（Liliaceae）重楼属 Paris L.植物
的泛称，以蚤休之名首载于《神农本草经》。重楼属
植物全世界共有 24 种，我国种类最多，拥有 19 种，
其中西南各省区种类和资源极为丰富[1-3]。该属植物
主要分布于我国的云南、四川、贵州等地，具有清
热解毒、消肿止痛、息风定惊的功效，主要用于臃
肿疮毒、毒蛇咬伤等症，是云南白药、宫血宁胶囊
等中成药的主要组成药物。《中国药典》2010 年版
一部规定药用重楼来源为百合科植物云南重楼
Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.)
Hand. -Mazz.或七叶一枝花 Paris polyphylla Smith
var. chinensis (Franch.) Hara 的干燥根茎[4]。皂苷是
其主要活性成分，主要苷元为异螺甾烷醇类的薯蓣
皂苷元和偏诺皂苷元，本研究中重楼皂苷 I、II 属于
薯蓣皂苷，重楼皂苷 VI、VII 属于偏诺皂苷[2]。本
实验在文献研究的基础上[4-5]，采用超高效液相色
谱-蒸发光散射（UPLC-ELSD）法，建立了同时测
定重楼皂苷 I、II、VI、VII 的色谱条件，测定了不
同产地的重楼中重楼皂苷的量，测定时间只是常规
HPLC 法的 20%，且灵敏度高，准确性好，是一种
简便、快速、准确的检测方法，为重楼的质量控制
和临床合理应用提供了一定的科学依据。
1 仪器与试药
Waters Acquity H-Class UPLC 超高效液相色谱
仪（美国 Waters 公司），包括四元梯度泵、恒温自
动进样器、柱温箱、Acquity ELSD检测器以及Waters
Empower 2 软件；KQ3200DB 型超声清洗器（江苏
昆山超声仪器有限公司）；0.2 μm 微孔滤膜（上海
陆纳生物科技有限公司）。重楼皂苷 I（111590-
200402）、重楼皂苷 II（111591-200402）、重楼皂苷
VI（111592-200402）、重楼皂苷 VII（111593-200402）
对照品均购自中国药品生物制品检定所；乙腈为色
收稿日期：2011-06-20
基金项目：国家中医药管理局重点学科肺病学科开放基金项目（kfjj201115）；安徽中医学院临床科研基金（2009LC1-019A）
作者简介：韩燕全（1977—），男，博士，主要从事中药质量控制和新药研究。E-mail: hyquan2003@163.com
*通讯作者 夏伦祝 E-mail: xlunzhu@sohu.com
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谱纯（Tedia，美国）；屈臣氏蒸馏水；乙醇等试剂
均为分析纯。
不同产地重楼药材分别购于安徽省合肥市的医
院、零售药店和亳州药材市场，经安徽中医学院第
一附属医院中药房李立华副主任药师鉴定均为百合
科 植 物 云 南 重 楼 Paris polyphylla Smith var.
yunnanensis (Franch.) Hand. -Mazz.或七叶一枝花
Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara
的干燥根茎。详细信息见表 1。
表 1 重楼来源
Table 1 Origins and sources of Paridis Rhizoma
编号 购买地 产地 基 源
1 合肥市百姓缘大药房 安徽 七叶一枝花
2 合肥市华嘉药房 四川 七叶一枝花
3 合肥市为民大药房 云南 云南重楼
4 合肥市绿中原医药连锁点 安徽 七叶一枝花
5 合肥市蜀山区门诊部药房 广西 七叶一枝花
6 合肥市上善大药房 四川 七叶一枝花
7 亳州中药材市场 云南 云南重楼
2 方法与结果
2.1 色谱条件[6-7]
Acquity UPLC BEH C18色谱柱（50 mm×2.1
mm，1.7 μm），柱温 30 ℃，分析时间 8 min，进样
量：对照品最大 5 μL（样品进样 2 μL），流动相为
乙腈（A）-水（B），梯度洗脱：0～2.5 min，40%～
45% A；2.5～3.5 min，45%～55% A；3.5～4.5 min，
55%～60% A；4.5～6.5 min，65%～40% A；体积流
量 0.45 mL/min。进样前流动相梯度初始条件平衡
15 min，柱温 30 ℃。弱洗溶剂：乙腈-水（90∶10），
800 μL；强洗溶剂：乙腈-水（10∶90），500 μL；
ELSD 条件[5]包括：增益 500，数据率 1.0×10−5，喷
雾器模式为冷却；漂移管温度50 ℃，气体压力275.8
kPa。色谱图见图 1。
2.2 混合对照品溶液的制备
分别精密称取重楼皂苷 I、II、VI、VII 对照品
适量于 5 mL 量瓶中，甲醇定容，制成重楼皂苷 I、
II、VI、VII 分别为 99.6、118.4、84.0、133.6 μg/mL
溶液，存放于 4 ℃冰箱中供分析用，临用时 0.2 μm
微孔滤膜滤过，取续滤液作为混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
分别取7批不同产地重楼样品细粉（过60目筛）
约 1.0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别精确加入
1-重楼皂苷 VII 2-重楼皂苷 VI 3-重楼皂苷 II 4-重楼皂苷 I
1-Paris saponin VII 2-Paris saponin VI 3-Paris saponin II
4-Paris saponin I
图 1 重楼皂苷混合对照品 (A) 和样品 (B) 的
UPLC 色谱图
Fig. 1 UPLC chromatograms of Paris saponins mixed
reference substances (A) and sample (B)
乙醇 25 mL，称定质量，回流提取 30 min，称定质
量，用乙醇补足减失的质量，静置 10 min。取上清
液过 0.2 μm 滤膜，取续滤液，即得供试品溶液，存
放于 4 ℃冰箱中供分析用，临用时以 0.2 μm 微孔
滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
依次精密量取混合对照品溶液 1.00、2.00、3.00、
4.00、5.00 μL，分别进样，测定峰面积。分别以各
色谱峰面积积分值（Y）对其质量浓度（X）进行线
性回归，线性范围及回归方程见表 2。
2.5 精密度试验
吸取对照品溶液 2.0 μL，连续进样 5 次，测定，
计算得重楼皂苷 I、II、VI、VII 峰面积的 RSD 分别
为 0.98%、0.30%、1.03%、1.08%，结果表明仪器
精密度良好。
2.6 稳定性试验
取 6 号重楼样品制备供试品溶液，分别在 0、2、
4、8、12、24 h 进样，每次进样 2.0 μL 测定峰面积，
结果重楼皂苷 I、II、VI、VII 峰面积的 RSD 分别为
1.07%、1.13%、1.89%、1.50%，表明供试品溶液在
24 h 内稳定。
2.7 重现性试验
取 6 号重楼样品，平行取样 5 份，按“2.3”项
1
2
4
1 2
3
4
0 2 4 6 8
t / min
3
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表 2 重楼皂苷 I、II、VI、VII 线性回归方程和相关系数
Table 2 Linear regression equation and correlation coefficient of Paris saponins I, II, VI, and VII
成 分 线性范围 / (μg·mL−1) 回归方程 r
重楼皂苷 I 133.6～668.0 Y＝87 618.0 X－51 192.6 0.999 9
重楼皂苷 II 84.4～422.0 Y＝175 686.9 X－138 575.3 0.999 7
重楼皂苷 VI 118.4～592.0 Y＝108 943.9 X－67 272.3 0.999 6
重楼皂苷 VII 99.6～498.0 Y＝169 110.4 X－104 956.6 0.999 7
下处理制备供试品溶液，进样 2.0 μL 测定各成分的
峰面积，结果重楼皂苷 I、II、VI、VII 峰面积的 RSD
分别为 1.01%、1.53%、1.24%、1.52%。
2.8 加样回收率试验
精密称取 6 号重楼样品 0.5 g，共 6 份，分别置
10 mL 量瓶中，加入各对照品溶液适量，按“2.3”
项下处理，用甲醇稀释定容，过 0.2 μm 微孔滤膜，
取 2.0 μL 续滤液注入液相色谱仪，测定，计算得重
楼皂苷 I、II、VI、VII 的平均回收率分别为 100.11%、
98.36%、99.92%、99.04%，RSD 分别为 1.49%、
1.39%、1.56%、1.35%。
2.9 样品测定
取各重楼样品，按“2.3”项下方法制备供试品
溶液，进样 2.0 μL，记录峰面积，代入回归方程，
计算各样品中各成分的量，结果见表 3。
表 3 重楼中重楼皂苷 I、II、VI、VII 的质量分数
Table 3 Contents of Paris saponins I, II, VI, and VII
in Paridis Rhizoma
质量分数 / (mg·g−1) 编 号
重楼皂苷 I 重楼皂苷 II 重楼皂苷 VI 重楼皂苷 VII
201001 4.488 8.456 2.020 4.762
201002 1.958 5.413 1.776 4.061
201003 1.402 0.000 0.459 0.968
201004 2.464 0.366 1.002 0.161
201005 2.877 0.819 0.000 0.825
201006 0.000 1.176 0.000 1.345
201007 7.203 0.000 1.464 2.304
3 讨论
对样品的前处理方法进行了考察，主要考察了
乙醇和甲醇两种溶剂，加热回流和超声两种提取方
法对提取结果的影响，结果以乙醇回流提取的总体
效果为佳，30 min 即可提取完全。分别考察了乙腈-
水不同比例的流动相系统进行等度和梯度洗脱，结
果表明，用乙腈-水进行梯度洗脱为佳，各色谱峰保
留时间适中，峰形和分离均较好。本实验比较了二
极管阵列检测器和蒸发光散射检测器，结果二极管
阵列检测器干扰较大。由于皂苷类物质无紫外吸收
或仅为末端吸收，而蒸发光散射检测器（ELSD）为
通用质量型检测器，其响应不依赖样品的光学性质，
只要样品的挥发性低于流动相即可被检测[8]，故本
实验选用蒸发光散射检测器进行检测。UPLC 法具
有分析时间快、灵敏度高等特点，在中药成分分析
中应用越来越广泛。《中国药典》2010 年版一部以
HPLC 法测定重楼药材中 4 种皂苷成分，分析时间
需要 50 min 以上[6]，而本研究采用 UPLC 方法，在
8 min 内即可完成 1 次进样，分离效果和效率均有
大幅度提高。本实验结果表明，UPLC 法简单易行，
用时较短，适用于重楼药材中 4 种皂苷类成分的质
量控制。
参考文献
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