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HPLC determination of iridoid glycosides and phenylethanoid glycosides in roots of Lamiophlomis rotata

HPLC法测定独一味根中环烯醚萜苷和苯乙醇苷



全 文 :中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 • 279 •
HPLC 法测定独一味根中环烯醚萜苷和苯乙醇苷
潘 正 1,高运玲 1,张 涛 2,邓 杰 2
1. 重庆邮电大学生物信息学院,重庆 400065
2. 重庆医药工业研究院有限责任公司,重庆 400061
摘 要:目的 建立 HPLC 法,同时测定独一味根中 4 种环烯醚萜苷胡麻属苷、山栀苷甲酯、7,8-dehydropenstemoside、
8-O-乙酰山栀苷甲酯和 2 种苯乙醇苷连翘酯苷、毛蕊花糖苷。方法 采用高效液相色谱法,Waters Symmetry 柱(100 mm×
3.5 mm,3.5 μm),柱温 25 ℃,流动相为甲醇-水,梯度洗脱;体积流量 1.0 mL/min,检测波长 235、332 nm。结果 胡麻
属苷在 0.236~1.410 μg、山栀苷甲酯在 0.440~2.640 μg、7,8-dehydropenstemoside 在 0.094~0.564 μg、8-O-乙酰山栀苷甲酯
在 0.750~4.500 μg、连翘酯苷在 0.698~4.180 μg、毛蕊花糖苷在 0.455~2.730 μg 线性关系良好,回收率均在 96.75%~
103.97%,RSD 均小于 2%。结论 此方法同时测定了独一味根中 6 种化学成分,方法分离度好,快速,简便,结果稳定。
关键词:独一味根;环稀醚萜苷;胡麻属苷;苯乙醇苷;连翘酯苷;毛蕊花糖苷
中图分类号:R286.02 文献标志码:B 文章编号:0253 - 2670(2011)02 - 0279 - 03
HPLC determination of iridoid glycosides and phenylethanoid glycosides in roots
of Lamiophlomis rotata
PAN Zheng1, GAO Yun-ling1, ZHANG Tao2, DENG Jie2
1. College of Bio-Information, Chongqing University of Posts and Telecommunications, Chongqing 400065, China
2. Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd., Chongqing 400061, China
Key words: the roots of Lamiophlomis rotate (Benth.) Kudo; iridoid glycosides; sesamoside; phenylpropanoid glycosides;
forsythoside B; verbascoside

独一味为唇形科植物独一味 Lamiophlomis
rotata (Benth.) Kudo 的干燥地上部分[1-2]。《中国药
典》2010 年版一部收载以山栀苷甲酯和 8-O-乙酰
山栀苷甲酯为对照,HPLC 法测定了独一味及其
胶囊。独一味中主要含有环烯醚萜苷类和苯乙醇
苷类成分 [3-4],其中环烯醚萜苷类具有很好的止
血、促凝血作用,是止血活性成分[5];苯乙醇苷
类成分具有抗炎、抗氧化活性 [6-7]。本实验采用
HPLC-梯度洗脱法,测定独一味根中 4 种环烯醚
萜苷胡麻属苷、山栀苷甲酯、7,8-去氢钓钟柳苷
(7, 8-dehydropenstemoside)[8]、8-O-乙酰山栀苷
甲酯和 2 种苯乙醇苷连翘酯苷、毛蕊花糖苷,为
更好地保证药材质量提供了有益的参考。
1 仪器与材料
Waters1525 高效液相液谱仪,2996PDA 检测
器,717 Sampler 自动进样器,MILLIQ 纯水机,Buchi
旋转蒸发仪,Sartorius CP224S 电子天平。
独一味的根由市场购买,经重庆邮电大学生物
信息学院刘毅副教授鉴定为唇形科植物独一味
Lamiophlomis rotata (Benth.) Kudo 的干燥根;胡麻
属苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、8-O-
乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷、毛蕊花糖苷对照品均
为本实验室自制,经 HPLC 面积归一化法计算质量
分数分别为 99.87%、99.01%、98.25%、98.63%、
98.06%、98.12%,UV、NMR 光谱测试确认其结构;
甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Waters Symmetry 柱(100 mm×3.5
mm,3.5 μm),柱温 25 ℃,流动相为甲醇(A)-
水(B),梯度洗脱(0~8 min,12%~15% A;8~
11 min,15%~27% A;11~15 min,27% A;15~

收稿日期:2010-06-10
基金项目:重庆市教委科学技术研究基金资助项目(KJ080504)
作者简介:潘 正(1976—),男,河南临颍人,讲师,研究方向为中药成分的分离纯化及质量控制。
Tel: (023)62461884 E-mail: panzhengbusiness@yahoo.com.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 • 280 •
18 min,27%~40% A;18~25 min,40%~48% A;
25~27 min,60%甲醇);体积流量 1.0 mL/min,检
测波长 235、332 nm。
2.2 系统适应性及专属性试验
分别取对照品溶液、供试品溶液各 5 μL 进样,
记录色谱图见图 1。以胡麻属苷计,理论塔板数大
于 1 500,两峰的分离度≥1.5。
1
2
3
4
5 6

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2
3
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5 6


1-胡麻属苷 2-山栀苷甲酯 3- 7, 8-dehydropenstemoside
4- 8-O-乙酰山栀苷甲酯 5-连翘酯苷 6-毛蕊花糖苷
1- sesamoside 2- shanzhiside methyl methyl ester
3-7,8-dehydropenstemoside 4- 8-O-acetylshanzhiside methyl ester
5- forsythoside B 6- verbascoside
图 1 对照品(A)和独一味根(B)的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances (A)
and roots of L. rotata sample (B)
2.3 标准曲线的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的胡麻属
苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、8-O-
乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷、毛蕊花糖苷对照品适
量,加甲醇制成质量浓度分别为 0.472、0.880、0.188、
1.50、1.395、0.910 mg/mL 的混合对照品溶液。
精密量取上述对照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、
2.5、3.0 mL,分别置 5.0 mL 量瓶中,用甲醇稀释
至刻度,摇匀,即得。分别进样 5 μL,以峰面积为
纵坐标,进样量为横坐标进行线性回归,得各成分
回归方程,见表 1。由于系统误差,标准曲线未过
原点,所以采用外标两点法进行测定。
2.4 供试品溶液的制备
独一味根研细,过 60目筛,精密称取细粉 0.5 g,
置 25 mL 具塞锥形瓶中,加 70%甲醇 25 mL,称定
质量,超声处理 20 min,冷却,用甲醇补充损失的
质量,滤过,精密吸取续滤液 1.0 mL,置 5.0 mL
量瓶中,70%甲醇定容,摇匀,用 0.22 μm 微孔滤
膜滤过,即得。
2.5 精密度试验
取供试品溶液(批号 20090226),连续进样 6
次,每次 10 μL,记录峰面积,计算质量分数,结
果胡麻属苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、
8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷、毛蕊花糖苷质量
分数的 RSD 分别为 1.07%、1.87%、1.94%、1.42%、
1.84%、1.73%。
2.6 稳定性试验
取供试品溶液(批号 20090226)于 0、2、4、6、
8、10 h 进样分析,每次 10 μL,记录峰面积,计算
质量分数,结果胡麻属苷、山栀苷甲酯、7, 8-
dehydropenstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘
酯苷、毛蕊花糖苷质量分数的 RSD 分别为 1.08%、
1.75%、1.82%、1.63%、1.14%、1.48%。结果表明
供试品溶液中活性成分在 10 h 内稳定。
2.7 重现性试验
取同一批样品(批号 20090226)6 份,制备供试
品溶液,进样,测定峰面积,计算质量分数,结果胡麻
属苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、8-O-乙
酰山栀苷甲酯、连翘酯苷、毛蕊花糖苷质量分数的
RSD 分别为1.47%、1.78%、1.92%,1.84%、1.43%、1.15%。
表 1 各成分的回归方程
Table 1 Regression equations of components
成分 回归方程 r 线性范围/μg
胡麻属苷 Y=−1.53×104+1.19×106 X 0.999 8 0.236~1.410
山栀苷甲酯 Y=6.20×103+1.27×106 X 0.999 5 0.440~2.640
7, 8-dehydropenstemoside Y=−8.56×103+1.06×106 X 0.999 5 0.094~0.564
8-O-乙酰山栀苷甲酯 Y=−7.37×104+1.41×106 X 0.999 6 0.750~4.500
连翘酯苷 Y=−9.46×104+6.12×105 X 0.999 5 0.698~4.180
毛蕊花糖苷 Y=−7.31×104+7.67×105 X 0.999 7 0.455~2.730
0 6 12 18 24 30
t/min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 2 期 2011 年 2 月 • 281 •
2.8 加样回收率试验
精密吸取独一味样品(批号 20090226),6 份,
分别精密加入混合对照品溶液 1.0 mL,制备供试品
溶液,进样 5.0 μL,测定峰面积,计算回收率,结
果胡麻属苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、
8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷、毛蕊花糖苷的平
均回收率分别为 96.75%、103.21%、103.77%、
99.85%、103.97%、97.61%,RSD 分别为 1.86%、
1.77%、1.98%、1.59%、1.73%、1.55%。
2.9 样品测定
取独一味样品,制备供试品溶液,分别精密吸
取 10 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积积分值,用
外标法测定样品中环烯醚萜苷和苯乙醇苷,结果见
表 2。
表 2 独一味根中胡麻属苷、山栀苷甲酯、7, 8-dehydropenstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯、
连翘酯苷、毛蕊花糖苷的测定(n=3)
Table 2 Determination of sesamoside, shanzhiside methyl ester, 7, 8-dehydropenstemoside, 8-O-acetylshanzhiside
methyl ester, forsythoside B, and verbascoside in roots of L. rotate (n=3)
质量分数/(mg·g−1) 批号
胡麻属苷 山栀苷甲酯 7,8-dehydropenstemoside 8-O-乙酰山栀苷甲酯 连翘酯苷 毛蕊花糖苷
20090201 7.908 3.512 – 3.610 13.87 7.258
20090226 4.302 2.330 0.151 1.325 14.21 6.740
20090305 6.389 2.818 0.368 1.157 19.17 8.023

3 讨论
研究表明独一味总环烯醚萜苷类成分具有很好
的止血、促凝血作用,是其中的止血活性成分,李
茂星等[9]采用 UV 法对独一味药材中总环烯醚萜苷
类进行了测定,结果显示药材中总环烯醚萜苷类量
最高,可达 12.5%。刘婕等[10]采用 HPLC 法测定了
独一味中苯乙醇苷类成分类叶升麻苷。张凤[11]通过
HPLC 法测定了不同产地的独一味中连翘酯苷和毛
蕊花糖苷。在参考上述研究的基础上,本实验采用
HPLC法对独一味根中的4个环稀醚萜苷和2个苯乙
醇苷类进行测定,对独一味药材的整体质量评价具
有更切实际的指导意义。
考察了乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸水、甲醇-水、
甲醇-0.4%磷酸水 4 种流动相,并尝试了这 4 种流动
相的多种线性梯度洗脱,结果表明甲醇-水系统最
佳,并进行了梯度洗脱条件的优化。采用该系统得
到的各个色谱峰的峰形和分离度都较好,基线稳定。
因此选用该系统为独一味根测定的流动相。
参考文献
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