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讨论


体外细胞实验说明: SCF 其他组分 ( A+ B+ C)
对两种肺癌细胞均无明显的抑制增殖作用; 黄酮组
分( D)与萜类组分( E)对两种肺癌细胞均有明显的
抑制增殖作用; 黄酮组分与萜类组分的配伍对肺癌
细胞的增殖抑制作用明显增强。黄酮组分与萜类组
分等生药量配伍后, IC50比未配伍前显著降低 ( P<
0
05) ,说明该复方有效组分之间在药理作用上具有
协同作用,这从一个方面验证了中药复方的药理作
用是多种组分部位共同作用的假说 [ 2] , 也符合笔者
所提出的关于物质基础
三个层次多维结构
组分部
分结构理论中的一维结构: 其各药效组分之间存在
配伍配比关系, 也是对假说中第三个层次的解析[ 3] 。
体内动物实验结果说明: SCF 中萜类组分高剂
量组小鼠脾指数明显降低, 而且胸腺指数变化不明
显,说明该组分在抑瘤的同时, 对机体免疫作用较
弱,甚至有一定的抑制作用;而黄酮组分对小鼠脾指
数无明显影响, 而且可以提高小鼠胸腺指数, 说明该
组分在抑瘤的同时, 能提高机体特异性免疫力,这也
是应用中药复方治疗肿瘤的优势之一; 黄酮组分与
萜类组分配伍对小鼠脾指数无明显影响, 胸腺指数
有一定程度的升高, 且抑瘤率比未配伍前有所提高。
提示黄酮组分与萜类组分配伍后对小鼠移植性肿瘤
有一定的减毒增效作用。从而阐明了由多个组分构
成的整体 ( SCF 的物质基础) ,其中黄酮组分与萜类
组分为主要的药效组分, 且它们之间存在的配伍配
比关系和减毒增效作用, 这是该复方中药物质基础
中一维结构的研究。
为了节约成本,更好地适合工业大生产,本课题
组在组分分离纯化的过程中采用乙醇提取、大孔树
脂纯化的方法进行。本研究在
组分结构理论
[ 3, 4]
的指导下进行, 通过体内、体外实验对 SCF 抗肺癌
有效组分进行了筛选, 探索了组分之间的配伍关系,
进一步探索了 SCF 抗肺癌的物质基础,实验结果也
印证了本课题组所提出的
组分结构理论
。本课题
组将在接下来的科研中进行更深入的研究,从分子
生物学角度阐明 SCF 组分配伍配比抗肺癌的作用
机制。本研究为制备疗效更好的该复方制剂做准
备,并为创作抗肺癌现代复方中药提供科学依据。
参考文献:
[ 1]
张兰桐, 袁志芳, 杜英峰, 等
山茱萸的研究近况及开发前
景 [ J]
中草药, 2004, 35( 8) : 952-955

[ 2]
罗国安, 王义明
中药复方的化学研究体系 [ J]
世界科学技
术


中药现代化, 1999, 1( 1) : 11- 15

[ 3]
贾晓斌, 陈
彦, 李
霞, 等
中药复方物质基础研究新思
路和方法 [ J ]
中华中医药杂志, 2008, 23( 5) : 420-425

[ 4]
贾晓斌, 封
亮, 陈
彦, 等
夏枯草肺癌化学预防研究思
路与方法 [ J ]
中草药, 2009, 40( 2) : 316-317

注射用红花黄色素缓解油酸诱导的大鼠急性肺损伤作用
裴崇强,孙春燕,金
鸣

(首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所, 北京
100029)
摘
要:目的
探讨注射用红花黄色素对油酸致大鼠急性肺损伤的作用及其机制。方法
W istar 大鼠随机分成对
照组、油酸组 (模型组)、油酸+ 山莨菪碱 10 mg / kg 组、油酸+ 红花黄色素 ( 8、16、32 mg / kg) 组, 每组 12 只,各组
在 iv 油酸 0
18 g / kg 前给予药物干预。油酸损伤 4 h 后,测定大鼠动脉血血氧分压、左肺含水系数和肺组织髓过
氧化物酶 ( M PO) 活性; RT- PCR 法检测肺组织肿瘤坏死因子-
( T NF-
)、白细胞介素- 1
( IL- 1
)、白细胞介素- 6
( IL- 6)、细胞间黏附分子- 1 ( ICAM- 1)、血管细胞黏附分子- 1 ( VCAM- 1) mRNA 表达水平; 免疫组织化学法观察肺
组织 NF-
B p65 活化细胞数; Western blot ting 法检测 p38 M APK 蛋白磷酸化水平。结果
红花黄色素组大鼠动
脉血血氧分压值均高于模型组,肺组织含水系数和 M PO 活性均低于模型组; 同时各炎症因子 mRNA 表达水平,
NF-
B p65 阳性细胞数和 p38 M APK 蛋白磷酸化水平也均低于模型组。结论
红花黄色素可缓解急性肺损伤所
致肺水肿,提高动脉血氧分压, 减少肺部炎性细胞浸润,其作用机制可能与抑制 p38 M APK 磷酸化及 NF-
B 活化,
下调 TNF-
、IL-
等炎症因子的表达有关。
关键词:红花黄色素; 急性肺损伤; 炎症因子; p38 M APK ; NF-
B
中图分类号: R285
5


文献标识码: A


文章编号: 0253- 2670( 2010) 04- 0596- 06

596
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月

收稿日期: 2009-09-29





















基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30572344) ; 北京市自然科学基金资助项目 ( 797225) ; 北京中医药重点学科项目资助 ( 京中重
V20) ; 科技部科技人员服务企业行动项目 ( 2009GJA30001)作者简介:金
鸣( 1957
) ,男,北京人,首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所药理研究室主任,医学博士,研究员,博士生导师。T el: ( 010) 64456308
E-mail: jinzang@ publ ic3. bta. n et . cn
Mitigation of safflor yellow injection on acute lung injury of rats induced by oleic acid
PEI Chong-qiang, SUN Chun-yan, JIN M ing
( Beijing Anzhen Hospital o f the Capital University o f M edical Science- Beijing Institiute of H eart Lung
and Blood Vessel Diseases, Beijing 100029, China)
Abstract: Objective
To invest igate the effects of saf f lor yellow ( SY) inject ion on acute lung injury
( ALI) rats induced by oleic acid ( OA) and its potent ial mechanism. Methods
Wistar r ats w ere randomly
divided into six g roups, including contro l g roup, OA group, OA+ 10 mg / kg anisodamine g roup, OA + 8
mg/ kg SY gr oup, OA+ 16 mg / kg SY group, and OA+ 32 mg / kg SY group. Norm al saline or anisodam ine
or SY w ere pret reated before 0. 18 g/ kg OA iv inject ion. T he arterial part ial pr essure of ox ygen, the pu-l
m onar y w ater content index , and M PO act iv ity in lung tissue w ere determined; The mRNA level of T NF-

, IL-1
, IL-6, ICA M-1, and VCAM-1 w ere m easured by RT-PCR; And NF-
B p65 protein in nucleus
observed by immunohistochemical technolo gy, w hile the level of p38 M APK protein phosphory lat ion in
lung t issue w as analyzed by Western blot t ing. Results
T he arterial part ial pressure of oxygen in all SY
groups w as higher than that in OA group, w hile the pulm onar y w ater content index and MPO act iv ity w ere
low er than those in OA g roup, as w ell as the m RNA level of the above inflamm ator y cy tokines and the NF-

B p65 in nucleus and level of p38 M APK phosphory lation. Conclusion
SY could alleviate the lung t issue
edem a, increase the arterial part ial pressur e of ox ygen, and depress MPO act iv ity in ALI rat induced by
OA. T he SY m echanism of at tenuat ing the acute lung injury may be associated w ith inhibit ing the p38
phosphory lation and NF-
B act ivation and reducing inf lam matory factors expression.
Key words: saf f lor y ellow ( SY) ; acute lung injury ( A LI) ; inflamm ator y factor; p38 MAPK; NF-
B


急性肺损伤 ( acute lung injury, ALI) 是现代
危重医学的一大难题, 表现为各种原因引起的急性
呼吸困难和顽固性低氧血症。目前用于 ALI 治疗
的药物主要包括氧自由基清除剂和抗氧化剂、肺表
面活性物质、糖皮质激素、一氧化氮、前列腺素 E2
( PGE2 ) 和
2 受体激动剂等, 这些药物虽然能对
ALI 起到一定的治疗作用,但其效果均还不尽如人
意。红花为菊科植物红花 Car thamus tinctor ius L.
的干燥花,具有活血通经、散瘀止痛之功效。红花黄
色素 ( saff lor y ellow, SY ) 是红花的主要有效部
位[ 1] , 它是从红花中提取的多种水溶性查耳酮成分
混合物, 包括羟基红花黄色素 A ( hydr oxy lsaf flo r-
yellow A, H SYA )、红花黄色素 B 等组分, 其中
H SYA 是其主要有效成分 [ 2, 3]。注射用红花黄色素
是 SY 的粉针剂, 临床上主要用于治疗冠心病心绞
痛。有研究表明 SY 可以拮抗 PAF 受体[ 4] ; 调节一
氧化氮 ( NO) 水平, 清除自由基、保护细胞膜; 还可
降低冠心病患者血浆中 C反应蛋白 ( CRP)、肿瘤坏死
因子-
( TNF-
)、白细胞介素-6 ( IL-6) 的水平[5]。此外
药动学研究[ 6]显示 iv SY后其在小鼠肺内具有较高的
分布容积。这些研究提示 SY 可能对肺部炎症反应具
有抑制作用,故本研究探讨 SY 对 ALI 的药效及其作
用机制,试图为 ALI的药物治疗提供新的思路。
1
材料与方法
1
1
药品与试剂: 注射用红花黄色素 (每瓶含 80
m g SY,批号 70302009) 由山西华辉凯德制药有限
公司提供,使用前用生理盐水 ( N S) 分别配制成不
同浓度的溶液;山莨菪碱为北京双鹤药业有限公司
提供的原料药, 用前用 NS 溶解; 牛血清白蛋白
( BSA) 购于北京鼎国生物技术有限责任公司, 用
NS 配制成 0
5% BSA/ NS 溶液备用; 分析纯油酸
购于北京化学试剂公司, 密度为 0
890~ 0
899, 使
用前加入 4倍体积的 0
5% BSA/ NS 溶液振荡混
匀后立即使用; 乌拉坦购于北京化学试剂公司, 用
NS 配制成 20% 溶液;髓过氧化物酶 ( M PO) 测定
试剂盒购于南京建成生物工程研究所; TRIzol Rea-
gent 购于 inv it ro gen 公司; RNA 酶抑制剂、Ol-i
godT、鼠源反转录酶均购于 Promega公司; T aq酶、
dNTP、100 bp DNA Ladder 均购于北京鼎国生物
技术有限责任公司; 所有引物均由北京赛百盛基因
技术有限公司合成; 兔抗鼠 NF-
B p65 多克隆抗体
购于 SAN TA CRU Z 公司; 兔抗鼠 p38 MA PK 多
克隆抗体、兔抗鼠磷酸化 p38 M APK 多克隆抗体、
兔抗鼠
- act in 多克隆抗体均购于北京博奥森生物
技术有限公司。
1
2
仪器:丹麦雷度 ABL726 全自动血气分析仪,
Biometra 公司 PCR 扩增仪, Biostep GmbH Mein-
ersdorfer st r. 47A 凝胶成像扫描仪, 美国 M edia
Cybernet ics 公司 Im age-Pro Plus 多功能真彩色细
胞图像分析管理系统。

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
1
3
方法: 清洁级成年雄性 Wistar 大鼠, 体质量
200~ 220 g, 购于北京维通利华实验动物技术有限
公司,合格证编号: 0134034。大鼠随机分为 6组, 分
别为:对照组、油酸组 (模型组)、油酸+ 10 mg / kg
山莨菪碱组、油酸+ 8 mg/ kg SY 组、油酸+ 16 m g/
kg SY 组、油酸+ 32 m g/ kg SY 组,每组12只动物。
大鼠禁食 8 h, 称量大鼠体质量, ip 20% 乌拉坦 ( 1
g/ kg) 麻醉大鼠。待麻醉起效后, 经右下肢隐大静
脉 iv 0. 18 g/ kg 油酸造成大鼠急性肺损伤模型, 对
照组用 0
5% BSA/ NS 代替。iv 油酸前 30 m in,
SY 组经尾 iv 分别给予 8、16、32 m g/ kg 的 SY 溶
液,山莨菪碱组 iv 给予 10 mg / kg 的山莨菪碱/ NS
溶液,对照组和模型组用同等体积的 NS 代替。注
射油酸 4 h 后,用肝素化注射器经腹主动脉抽取动
脉血送血气分析。放血处死大鼠,取左肺组织样本
测定含水系数, 取右肺下叶瘀血最明显处组织, 冰冷
PBS 冲洗后,立即置于 4% 多聚甲醛中固定, 以备后
续 H E 染色和免疫组化分析用。另取右肺上、中叶,
用冰冷 NS 冲洗后, 分管置于液氮中保存,以备后续
MPO测定、RT-PCR和 Western blotting 实验用。
1
4
左肺含水系数测定: 处死大鼠后打开胸腔, 取
出左肺,称量左肺湿质量, 然后于 80
烘烤 24 h
后,称量左肺干质量,计算左肺含水系数[左肺含水
系数= 1 000
(左肺湿质量- 左肺干质量) /体
质量]。
1
5
MPO 活性测定: 两周内从液氮罐中取出冻存
的肺组织,精密称质量后, 冰上匀浆,按试剂盒方法
操作,邻连茴香胺比色法测定 M PO 活性。以 37

的反应体系下 H 2 O2被分解 1
mo l 为 1 个酶活力
单位 ( U )。
1
6
RT-PCR 法测定肺组织内 TNF-
、IL-1
、IL-
6、细胞间黏附分子-1 ( ICAM-1)、血管细胞黏附分
子-1 ( VCAM-1) mRNA 水平: 4周内从液氮罐中取
出冻存肺组织, 以 Tr izol 法提取大鼠右肺组织总
RNA,根据 A 260 / A 2 80确定纯度, 1% 琼脂糖凝胶电
泳鉴定其完整性。取总 RNA 2
g , 加入 Oligo
( dT ) 15、M-MLV、dNT P 等建立 25
L 反应体系, 按
25
、10 m in
37
、30 min
95
、5 min
4
、
5 m in 顺序进行逆转录。用 RT 产物 2
L 建立 25

L PCR 反应体系,以
-actin 为内参, 进行 PCR 扩
增。PCR 扩增条件为: 94
预变性 2 min, 94

变性 45 s, 退火 45 s, 72
延伸 45 s, 72
后延伸
10 min。引物序列、退火温度、循环次数和产物大小
见表 1。最后取8
L PCR反应产物 , 在2 % 琼脂
表 1
引物序列与 PCR 反应条件
Table 1
Sequence of primers and reaction conditions of PCR
基因 引物序列 循环数 退火温度 /
产物大小/ bp
T NF-
正向: 5
-GCCAAT GGCATGGAT CT CAA-3
28 59 307
反向: 5
-ACT T GGGC AGGTT GACC TCA- 3

IL- 1
正向: 5
-ACAAGGAGAGACAAGCAACGA-3
28 55 243
反向: 5
-T CT GC TT GAGAGGTGCT GAT G-3

IL- 6 正向: 5
-GCT CT GGTC TT CT GGAGT TC C- 3
28 54 236
反向: 5
-GAGT T GGATGGT CT TGGTCC T- 3

ICAM- 1 正向: 5
-T CCGGTAGAC AC AAGCAAGAG-3
28 55 239
反向: 5
-AGAAGCCC AAACCC GT ATGA-3

VCAM-1 正向: 5
-GGAT GCCGGAGTAT AC GAGTG-3
28 55 226
反向: 5
-C TT CT GT GC CTC CACCAGACT- 3


- act in 正向: 5
-T GGCAT CCACGAAACT ACCT-3
28 56 186
反向: 5
-T CAGGAGGAGCAAT GAT CT TG- 3

糖凝胶上进行电泳分离, 用凝胶成像系统照相,
Quant ity one 软件灰度扫描进行半定量分析。
1
7
免疫组化法观察 p65 阳性细胞数: 经固定、包
埋、脱蜡、入水、漂洗、抗原修复、封闭等步骤后滴加
p65 抗体, 4
过夜; 0
1 mo l/ L PBS 洗 3次后, 滴
加生物素化第二抗体, 37
孵育 20 min;漂洗后滴
加辣根酶标记链霉卵白素工作液, 37
孵育 20
m in;最后 DAB 显色、封片、照相。每个动物样本的
切片图像随机选取 5个视野,用 Image-Pro Plus 多
功能真彩色细胞图像分析管理系统处理分析,统计
其细胞总数和细胞核棕染的 p65 阳性细胞数,再得
到各组平均细胞总数和平均 p65 阳性细胞数。
1
8
Western blot t ing 法测定组织内磷酸化 p38
M APK 水平: 提取大鼠右肺组织总蛋白,经 BCA 法
定量, 10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离, 半干转
法转至 PVDF 膜上, 5% 脱脂奶粉 4
封闭过夜。
加入一抗 ( 1
300稀释) 室温孵育 1 h, PBST 洗涤
3次; H RP 标记的二抗 ( 1
1 000 稀释) 室温孵育
1 h, PBST 洗涤 3次; ECL 显色, 照相, 扫描入电脑
用 Quant ity One 软件进行灰度分析。
1
9
统计学分析: 所得数据用 x
s 表示, 计量资
料用 SPSS 13
0 的 ANOVA 分析和组间 SNK 检
验进行统计学处理,计数资料用
2检验分析。
2
结果
2
1
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织外观的影响:见图
1。对照组肺组织边缘锐利、粉红色,未见充血水肿;
模型组肺组织体积明显增大, 边缘变钝、暗红色,重度
瘀血水肿;山莨菪碱组肺组织瘀血肿胀明显,深红色;
SY各组肺组织肿胀明显,但瘀血程度逐渐减轻。
2
2
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织病理形态的影
响:图 2显示,对照组大鼠的肺泡腔清晰可见、结构
完整, 间质无水肿; 模型组大鼠的肺泡塌陷萎缩,间

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
图 1
各组急性肺损伤大鼠肺组织外观
Fig. 1
Appearance of lung tissue of ALI rats in each group
质明显增厚,组织重度水肿;山莨菪碱组大部分肺泡
结构尚完整,组织轻度水肿; SY 8 m g/ kg 组肺泡腔
数目稀少,大部分肺泡塌陷萎缩, 间质明显增厚, 组
织中度水肿; SY 16 m g/ kg 组可见少量结构完整的
肺泡,组织水肿程度低于模型组和 SY 8 m g/ kg 组;
SY 32 mg/ kg 组大部分肺泡腔结构清楚,间质轻度
增厚,组织水肿不明显。
2
3
SY对肺含水量、动脉血氧分压和 M PO 活性的
影响:表 2显示,注射油酸后,各组肺含水量和 M PO
图 2
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织病理改变的影响
Fig. 2
Effects of SY on histological changes in lung tissue of ALI rats
表 2
SY 对急性肺损伤大鼠肺含水量、血氧分压
及 MPO 活性的影响 (x
s, n= 12)
Table 2
Effects of SY on water content in lung tissue,
arterial partial pressure of oxygen, and MPO
activity in lung tissue of ALI rats ( x
s, n= 12)
组
别 剂量/ ( mg
kg- 1) 肺含水量/ % 血氧分压/ mmHg MPO / ( U
g- 1 )
对照 - 0
129
0
007 88
45
4
04 0
36
0
08
模型 - 0
232
0
036


69
44
11
16


1
08
0
25



山莨菪碱 10 0
189
0
025* * * 77
97
5
88* 0
65
0
27* * *
SY 8 0
182
0
032* * * 76
43
7
26 0
75
0
22* *
16 0
185
0
022* * * 77
81
10
03* 0
67
0
22* * *
32 0
167
0
022* * * 81
36
11
26* * 0
64
0
29* * *


与对照组比较:


P < 0
001


与模型组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01
* * * P< 0
001





P < 0
001 v s cont rol group


* P< 0
05
* * P < 0
01
* * * P < 0
001 v s model gr ou p
活性较对照组显著升高。相比模型组, SY 各组的
肺含水量和 M PO 活性明显降低,且 SY 32 mg/ kg
组下降最为显著 ( P< 0
001)。而大鼠 iv 油酸后各
组血氧分压均明显下降 ( P< 0
001) ,相比模型组, SY
各组血氧分压值随着 SY 剂量增加而升高,且 SY 32
mg/ kg 组血氧分压值明显高于山莨菪碱组。
2
4
SY 对肺组织内 TNF-
、IL-1
、IL-6、ICAM-1、
VCAM-1 mRN A 表达水平的影响:图 3显示,注射
油酸 4 h 后, 大鼠体内的 TNF-
、IL-1
、IL-6、
ICAM-1 和 VCAM-1 m RNA 表达水平明显升高
( P < 0
001) , 且 T NF-
mRNA 水平高于其他因
子。和模型组相比, 山莨菪碱组上述因子的表达明
显减少,而 SY 各组上述因子的表达水平低于模型
组,且随着 SY 剂量的增加而呈下降趋势。



与对照组比较:


P < 0
001;
与模型组比较: * * P < 0
01
* * * P < 0
001



P< 0
001 v s cont rol g rou p;
* * P< 0
01
* * * P< 0
001 v s m odel group
图 3
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织 TNF-
、IL-1
、IL-6、ICAM-1、VCAM-1 mRNA 表达的影响 (x
s, n= 8)
Fig. 3
Effects of SY on mRNA expression of TNF-
, IL-1
, IL-6, ICAM-1, and VCAM-1 in lung tissue of ALI rats (x
s, n= 8)

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中草药
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第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
2
5
SY 对肺组织内 NF-
B p65表达的影响:由图
4可见, 对照组 p65 阳性细胞数目少, 着色浅; 模型
组可见大片的胞核棕染的 p65 阳性细胞, 着色深;
而山莨菪碱组 p65阳性细胞呈散在分布,着色深浅
不一。相比之下, SY 3个剂量组其 p65阳性细胞数
和着色程度均比模型组低。表 3 则显示, 模型组
p65 阳性细胞率显著升高, 3个 SY 组则随着剂量增
加其 p65阳性细胞率逐步下降,且 SY 32 m g/ kg 组
p65 阳性细胞率明显低于模型组, 接近于对照
组水平。
2
6
SY 对肺组织内 p38 M APK 信号通路的影响:
Western blot t ing 结果显示 (图 5) ,注射油酸后,大
鼠肺组织内 p38 M APK 蛋白磷酸化水平显著升高。
给予 SY 处理, 磷酸化 p38 M APK 蛋白水平随 SY
剂量升高而降低, 且 SY 32 mg / kg 组的磷酸化 p38
M APK 水平已明显低于山莨菪碱组。
图 4
各组急性肺损伤大鼠肺组织 NF-
B p65 阳性表达 ( DAB染色)
Fig. 4
Positive expression of NF-
B p65 in lung tissue of ALI rats in groups ( DAB stain)
表 3
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织 NF-
B p65 阳性表达率
的影响 (x
s, n= 8)
Table 3
Effects of SY on positive expression rate of NF-
B
p65 in lung tissue of ALI rats ( x
s, n= 8)
组
别 剂量/ ( mg
kg- 1 ) NF-
B p65阳性表达率/ %
对照 - 7
26
6
07
模型 - 24
11
10
18



山莨菪碱 10 15
50
6
61*
SY 8 19
12
10
89
16 13
00
7
23* *
32 9
00
7
29* *


与对照组比较:


P < 0
001


与模型组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01
* * * P< 0
001





P < 0
001 v s cont rol group


* P< 0
05
* * P < 0
01
* * * P < 0
001 v s model gr ou p
与模型组比较: * P< 0
05
* * P< 0
01
* * * P< 0
001
* P< 0
05
* * P< 0
01
* * * P< 0
001 v s model group
图 5
SY 对急性肺损伤大鼠肺组织 p38 磷酸化的影响
( x
s, n= 8)
Fig. 5
Effects of SY on phosphorylated level of p38MAPK
in lung tissue of ALI rats (x
s, n= 8)
3
讨论


静脉注射油酸诱导的急性肺损伤动物模型已经
沿用多年,虽然它和临床 ALI 的病因不同, 但其病
理表现却和临床上 ALI/ ARDS 患者的病理表现非
常接近,因此常被用来评估肺损伤后结局和评价新
的肺损伤治疗方案[ 7]。而大量的文献报道[ 8~ 10] 山
莨菪碱能明显改善动物的血气, 减少肺湿干质量比,
抑制肺组织中激酶 I
K-
的 mRNA 表达和肺泡巨
噬细胞中 NF-
B 的活性,从而降低支气管肺泡灌洗
液中 TNF-
和 IL-1
等前炎症因子的量。据此,选
用山莨菪碱作为阳性药物对照,观察 SY 对 ALI 模
型大鼠的影响。
顽固性低氧血症是 A LI 的主要表现之一, 而本
实验动脉血气分析结果表明,在 iv 油酸后大鼠血氧
分压显著下降, SY ( 8、16、32 m g/ kg ) 则能剂量依
赖性增加血氧分压 ( P< 0
05、0
01)。ALI 顽固性
低氧血症的病变基础为弥漫性肺泡-毛细血管损伤
所致肺不张和肺水肿, 本实验 H E 染色和左肺含水
系数测定结果则显示, iv 油酸后大鼠肺泡结构被破
坏,肺组织重度水肿, SY 可缓解其肺不张和肺水肿
程度。
M PO 是一种重要的含铁溶酶体, 主要存在于
中性粒细胞和单核细胞中, 是髓细胞的特异性标志。
因此,通过测定肺组织 M PO 活性可以间接反映出
肺部中性粒细胞浸润情况。本研究结果显示, iv 油
酸可导致大鼠肺组织内 M PO 活性升高 3 倍, 这提
示大鼠肺部有大量粒-单核细胞浸润, 而不同剂量的
SY 可以不同程度地减少中性粒细胞浸润。

600
中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
丝裂原活化蛋白激酶 ( m itog en activated pro-
tein kinase, M APK) 是机体许多信号从细胞膜到
细胞核内的重要传递者, M APK 能被 TNF-
、脂多
糖 ( LPS) 等多种炎性因子所激活, 是炎症介质作用
的重要信号通路[ 11, 12]。MAPK 家族中的 p38
MAPK 是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶, p38
MAPK 上的酪氨酸和苏氨酸被双磷酸化后成为活
化形态的磷酸化 p38 M APK, 后者使某些调节蛋白
的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化而启动相应的反应。
NF-
B 是存在于多种细胞胞浆内的一种快反应转
录因子,通常情况下 NF-
B 与其抑制性蛋白 kappa
B ( inhibitor kappa B, I
B) 结合而呈非活性状态。
炎症因子可激活 M APK 通路使 I
B 磷酸化而使
NF-
B 活化[ 13] ,活化后的 NF-
B 再进入细胞核与
靶基因上的 N F-
B 结合基序结合, 进而启动许多细
胞因子的表达。TNF-
和 IL-1
是 ALI 早期的两
个主要前炎症因子, 发挥着多种生化效应。它们诱
导 ICAM-1 等黏附分子的表达使淋巴细胞黏附至
内皮细胞表面; 诱导巨噬细胞释放 IL-6, 导致 B 细
胞释放抗体和细胞毒 T 细胞分化,从而激活中性粒
细胞并产生组织损害; 诱导产生纤维蛋白溶原酶激
活剂的抑制剂和其他因子, 造成凝血系统和纤溶系
统的失衡从而参与炎症和纤维化过程[ 14]。在 ALI
的过程中,肺部的上皮细胞、巨噬细胞和中性粒细胞
均可通过 NF-
B 活化的信号机制参与肺部炎症形
成[ 15] , 由此可见 MA PK 和 NF-
B 与 ALI 的发生
发展密切相关。本实验结果显示: iv 油酸 4 h 后, 大
鼠肺组织内 p38 MA PK 磷酸化水平和 NF-
B 活化
细胞明显升高, 而 TNF-
、IL-1
、IL-6、ICAM-1 和
VCAM-1等因子的 mRNA 水平也相应升高, 并且
以 TNF-
的升高为主, 这和 ALI 早期的表现相符。
而 SY 则可抑制 p38 M APK 磷酸化和 NF-
B 活
化,减少上述前炎症因子和黏附分子的表达, 且随剂
量增大其抑制作用逐渐增强, 在高剂量 32 mg / kg
时药物作用优于山莨菪碱 ( 10 m g/ kg)。综上所述,
SY 呈剂量依赖性地减轻 ALI 肺水肿, 提高动脉血
氧分压, 减少肺部中性粒细胞浸润, 其机制之一可
能与抑制 p38 M APK 磷酸化和 NF-
B 活化通路,
下调其调控下游的 T NF-
、IL-1
、IL-6、ICAM-1 和
VCAM-1等前炎症因子表达有关。
张琼等 [ 16]研究表明,采用红花黄色素冻干粉针
剂 80 mg 或 160 mg 加入 250 m L N S 中静脉滴注,
每日一次用于冠心病心绞痛患者治疗, 其疗效确切
且无明显的不良反应。其剂量折算成大鼠用药剂量
大致为 10 ~ 20 mg/ kg, 而本研究所用中剂量 16
m g/ kg 正处于这个范围,且给药途径也是 iv 给药,
因此本研究可以作为后续临床实验的参考,为注射
用红花黄色素开辟治疗急性肺损伤这一新适应症提
供动物实验支持。总之, 本研究揭示了注射用红花
黄色素的抗炎作用并初步探讨了其作用机制,为其
进一步的理论研究和临床应用提供了依据。
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