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27种菌种茯苓中茯苓酸分析比较研究



全 文 :质量控制提供了基础和方法。对于一个药材需要在
总体理化定性的基础上, 经过性状鉴别,结合指纹图
谱相似性鉴别, 最终通过指标成分的量化实现对药
材的综合质量评价,这样才可以在整体质量上控制
好药材。
参考文献:
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[ 2]  杨  云, 张  晶, 陈玉婷 天然药物化学成分提取分离手册
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27种菌种茯苓中茯苓酸分析比较研究
徐  斌1 ,昝俊峰1 , 何丽姗1 , 苏  玮2 ,王克勤2 ,刘焱文1 * 
( 1 湖北中医学院 中药资源与中药复方省部共建教育部重点实验室,湖北 武汉  430061;
2 湖北省中医药研究院,湖北 武汉  430073)
摘 要:目的  建立茯苓中茯苓酸的测定方法, 比较不同菌种培育的茯苓中茯苓酸的量,为评价不同菌株培育茯苓
的品质提供理论依据, 从而确定优良菌种, 控制茯苓资源品质。方法  采用反相高效液相色谱法( RPH PLC) ,
Kromasil 1005 C18色谱柱( 250 mm 4 6 mm, 5m) , 柱温30 ! ,流动相为乙腈0 2%甲酸( 80∀ 20) ,体积流量 1 0
mL/ min,检测波长 242 nm。结果  茯苓酸在 0 48~ 2 40 g 与其色谱峰面积呈良好线性关系( r= 0 999 7) ,平均
回收率 100 26% , RSD为 1 26%。不同菌种培育茯苓中茯苓酸的量有所差异。结论  该方法简便、专属、稳定, 可
用于评价不同菌种培育茯苓中茯苓酸量的研究。
关键词:茯苓; 茯苓酸;高效液相色谱法
中图分类号: R282 6    文献标识码: A    文章编号: 02532670( 2010) 04064703
  茯苓为多 孔菌科 真菌茯 苓 Poria cocos
( Schw ) Wolf的干燥菌核,寄生于松科植物赤松和
马尾松的根茎, 埋于土壤下 20~ 30 cm, 通过菌株繁
衍而成。茯苓收载于历年版#中国药典∃, 具渗湿利
尿、和胃健脾、宁心安神的功效; 临床主要用于治疗
小便不利、水肿、脾胃气虚、食少便溏、体倦乏力及心
神不宁、惊悸、失眠等症 [ 1]。现代药理研究表明, 茯
苓具有抗肿瘤、调节免疫功能、抗炎、抗过敏等方面
的生物活性[ 2]。茯苓为药食两用的传统中药大品
种,是诸多中药方剂和中成药配伍组方的重要中药,
并大量出口国外。我国是世界上唯一进行茯苓人工
栽培的国家,菌种栽培已成为当前全国茯苓的主栽
培模式,用于培育茯苓的菌种约有 40余种。由于各
地使用菌种混乱,加上各菌株多年交叉混用, 导致茯
苓药材品质差异较大[ 3] 。为了规范栽培茯苓使用的
菌种,保证茯苓药材的质量, 本研究采用 RPHPLC
对收集的 27种菌培育的茯苓药材中主要有效成分
茯苓酸( pachymic acid)进行了分析比较研究, 筛选
出栽培茯苓药材的优良菌种, 并建立了简便、快速、
准确可靠的定量测定方法。本项研究对于规范茯苓
药材的栽培方法, 控制茯苓药材的质量具有重要参
考意义。
1  仪器与试药
Ag ilent 1100 液相色谱仪, U V % 2401 紫外检
测器, Ag ilent色谱工作站; KQ3200DE 型超声波清
洗仪(昆山市超声仪器有限公司) ; Sartonus型电子
天平(十万分之一) (德国) ;茯苓酸对照品为本实验
室自制,经面积归一化法测定后确认其质量分数大
&647&中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
收稿日期: 20090511                     基金项目:国家∋ 十一五(科技支撑计划项目( 2006BAI06A1545)作者简介:徐  斌( 1984 % ) ,男,湖北宜昌市人,硕士,研究方向为中药学。
T el : 13986144585  Fax: ( 027) 88920834  Em ail: x ubin2003tcm@ 163 com
* 通讯作者  刘焱文
于 98% ;茯苓药材为全国 27种菌种培育的茯苓, 茯
苓药材由各地方研究机构提供, 并经湖北省中医药
研究院王克勤教授鉴定, 菌种及其来源见表 1。乙
腈为色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2  方法及结果
2 1  色谱条件: 色谱柱: Kromasil 1005 C18色谱柱
( 250 mm 4 6 mm , 5 m) ;柱温: 30 ! ; 流动相:乙
腈0 2%甲酸( 80 ∀20) ; 体积流量 1 0 mL/ min; 检
测波长 242 nm, 色谱图见图 1。
2 2  对照品溶液的制备: 精密称取茯苓酸对照品
2 40 mg, 置于 10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度,摇匀,
即得 0 240 mg/ mL 的茯苓酸对照品溶液。
表 1 茯苓菌株与来源
Table 1  Sources of bacterial strains of Poria


菌株
名称 菌种来源
茯苓酸质量
分数/ %


菌株
名称 菌种来源
茯苓酸质量
分数/ %
1 5 78 中国科学院微生物研究所 0 299 6 15 GD 广东广州市微生物研究所 0 232 9
2 ACCC50864 中国农业微生物菌种管理保藏中心 0 252 0 16 FJ006 福建农业大学生命科学学院 0 209 4
3 ACCC50876 中国农业微生物菌种管理保藏中心 0 201 6 17 AH 安徽岳西 0 186 9
4 ACCC50478 中国农业微生物菌种管理保藏中心 0 226 7 18 S1 陕西省洋县天麻研究所 0 225 6
5 A9 安徽农大,后经华中农大紫外诱变 0 163 4 19 T 1 同仁堂 1号(湖北英山) 0 200 2
6 SD( GD) 山东济宁光大食用菌科研中心 0 172 3 20 SD( JX) 山东金乡县真菌研究所 0 181 7
7 D8 黑龙江东北食(药)用菌研究所 0 225 5 21 JZ28 陕西省西乡县古城菌研所 0 184 7
8 SC 四川省农科院食用菌研究开发中心 0 256 9 22 F5 湖北武汉华奉食用菌研究所 0 210 8
9 ZJ 浙江云和县象山食用真菌研究所 0 217 1 23 H Z 湖北华中食用菌栽培研究所 0 163 9
10 H BM C 湖北麻城县科委食用菌技术研究所 0 159 9 24 E1 华中农业大学菌种实验中心 0 146 2
11 H BSZ 湖北随州厉山镇食用菌技术研究所 0 156 0 25 901 福建三明真菌研究所 0 210 9
12 F8 湖北武汉周玉麟食用菌研究所 0 198 6 26 P0 野生,采自大别山 0 186 4
13 protoplast9 华中农业大学真菌研究所 0 183 5 27 Y1( BS) 云南宝山县 0 179 5
14 GZ 贵州习水县酒镇食用菌研究中心 0 221 7
t / min
* 茯苓酸
* pachymic acid
图 1  茯苓酸与茯苓药材 HPLC图
Fig 1 HPLCChromatograms of pachymic acid (A)
and Poria (B)
2 3  供试品溶液的制备:精密称取不同菌种培育茯
苓粉末(过 60目筛) 0 5 g,置于 50 mL 具塞锥形瓶
中,准确加甲醇 25 mL, 加塞称定,浸泡 25 m in,超声
60 m in,放置, 称质量, 用甲醇补足减失的质量, 滤
过,精密吸取续滤液 5 mL, 置于蒸发皿中, 水浴蒸
干,残留物用甲醇稀释至 2 mL 量瓶中,即得。
2 4  线性关系的考察:分别精密吸取茯苓酸对照品
溶液 10 L ( 质量浓度为 0 048、0 096、0 144、
0 196、0 240 mg / mL) , 注入液相色谱仪中,测定其
峰面积。以进样质量为横坐标, 峰面积为纵坐标,绘
制标准曲线并进行线性回归, 得回归方程: Y =
202 99 X - 17 185( r= 0 999 7) , 结果表明茯苓酸
在 0 48~ 2 40 g 呈良好线性关系。
2 5  精密度试验: 精密吸取同一样品溶液 10 L,
重复进样 6次,测定茯苓酸的峰面积计算得其 RSD
为 0 50% ( n= 6)。
2 6  稳定性试验:精密吸取同一样品溶液,分别于
0、1、2、4、8、24 h 各进样 10 L,测定茯苓酸的峰面
积值,计算得其 RSD 为 1 07% ( n= 6)。结果表明
供试品溶液在 24 h内稳定。
2 7  重现性试验: 精密称定同一批茯苓粉末
( 0 500 0 ) 0 000 5) g ,共 6份, 制备供试品溶液,各
精密量取 10 L 进样, 测定茯苓酸量依次为
1 461 1、1 427 1、1 466 0、1 458 6、1 424 2、
1 506 4 g, RSD为 2 06%。
2 8  加样回收率试验:精密称取 9份已知量的茯苓
样品各0 25 g, 分别加入 0 58、0 73、0 87 mg茯苓
&648& 中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
酸对照品各 3份,按 2 3项下方法制备并测定量, 计
算得平均回收率为 100 26%, RSD 值为 1 26%
( n= 9)。
2 9  样品测定:取不同菌种的茯苓粉末各 3份, 制
备供试品溶液, 用 0 45 m 微孔滤膜滤过, 滤液密
封备用,分别精密吸取各供试品溶液 10 L,注入液
相色谱仪,按上述色谱条件测定,计算样品溶液中茯
苓酸的量,结果见表 1。
3  讨论
3 1  采用高效液相色谱分析技术,对我国不同地区
使用的 27种菌株培育的茯苓的主要有效成分,即茯
苓酸的量进行了分析研究, 建立了可靠性强的定量
测定方法。#中国药典∃2005年版收载茯苓药材的
质量标准中缺少定量测定项, 本研究结果为完善茯
苓药材的质量标准提供了参考依据。
3 2  茯苓是通过菌种依附松木繁殖的菌类中药材,
菌种对茯苓药材质量起着至关重要的作用。27种
菌种茯苓中有效成分茯苓酸的量分析比较研究表
明,不同菌种培育的茯苓中茯苓酸量有较大差异,其
中 ACCC50864、5 78和 SC 3个菌种茯苓中茯苓酸
的量明显高于其他菌种茯苓。本研究结果为规范茯
苓的栽培提供了一定科学依据。
参考文献:
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紫背金盘的生药学鉴定
易刚强,李云耀,陈晓阳,蔡俊龙,王  珏
(湖南中医药大学药学院, 湖南 长沙  410208)
摘  要:目的  对紫背金盘进行生药学鉴定, 为其鉴别及应用提供科学依据。方法  采用原植物鉴别, 显微鉴别,
薄层鉴别的方法。结果  紫背金盘在原植物,显微, 薄层等具有专属性特征。结论  通过原植物, 显微, 薄层能够
很好地鉴别紫背金盘。
关键词:紫背金盘; 原植物; 生药学鉴定; 显微鉴定; 薄层鉴别
中图分类号: R282 21   文献标识码: A    文章编号: 02532670( 2010) 04064904
  紫背金盘为唇形科植物紫背金盘 Aj ugae nip 
ponensi s Makino 的全草,又名白毛夏枯草,破血丹,
筋骨草,石灰菜,九味菜, 散瘀草,散血丹,退血草, 散
血草,具有清热解毒,凉血散瘀,消肿止痛之功效, 有
收缩血管, 降血糖、降脂和降压,抗肿瘤作用, 抗炎、
抑菌和抗病毒, 促进创伤愈合等药理作用,该植物主
要分布在我国东部、南部及西南各省,西北至秦岭南
坡,此外, 日本, 朝鲜亦有分布[ 1, 2]。在我国由于紫
背金盘、筋骨草 A . ci l iatae Bunge、金疮小草 A .
decumbens Thunb. 3种植物近缘, 均属唇形科筋骨
属,统称 ∋白毛夏枯草(的名称, 都作为筋骨草使
用[ 3, 4] , 据文献报道筋骨草、金疮小草均含有木犀草
素活性成分,而紫背金盘未见其报道,为此笔者将木
犀草素作为该植物的鉴别手段[ 5, 6] 。本实验主要对
紫背金盘性状鉴别、组织、粉末的显微鉴别以及木犀
草素薄层色谱鉴别等进行研究, 为其资源研究奠定
一定的基础。
1  实验部分
1 1  材料与方法
1 1 1  药材与仪器:紫背金盘由民间赤脚医生在湖
南省宁乡县草地、林地及阳坡地采集,经湖南中医药
大学药学院彭菲教授鉴定)。普通刀片;植物粉碎机
(天津市泰斯特仪器有限公司) ; 数码相机( Sony ) ;
数码显微镜( SXJ % 2)。
1 2  方法
1 2 1  取部分新鲜药材, 按常规制片法制作切片,
在显微镜下观察, 成像系统成像。
1 2 2  取部分干燥药材,粉碎成粉末,制成装片,在
显微镜下观察,成像系统成像。
1 2 3  将硅胶与 0 5% 的 CMCNa 按 3 ∀1 的比
&649&中草药  Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 4 期 2010 年 4 月
收稿日期: 20090716                     基金项目:湖南省教育厅科研项目 ( 08C630) ; 2009湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目作者简介:易刚强( 1965 % ) ,男,副教授。Tel: ( 0731) 88458227  Email: yigangqiang2005@ yah oo. com . cn