全 文 ：三白草的质量标准研究
陈宏降 ,李　祥
①
,陈建伟 ,张　婕
(南京中医药大学药学院 ,江苏 南京　210046)
摘　要 :目的　以三白草酮和里卡灵 A 为指标 ,建立三白草质量标准。方法 　采用薄层色谱法 ( TLC)为定性鉴别方
法 ; HPLC法测定其中三白草酮和里卡灵 A 量。结果　三白草酮在80132～80312 ng 呈良好的线性关系 : Y = 25 668 X
+ 19171 , R2 = 01999 9 ;里卡灵 A 在40124～40214 ng 呈良好的线性关系 : Y = 57 825 X + 42135 , R2 = 01999 5。三白草酮
平均回收率为 10018 % ,RSD 为 2113 % ,里卡灵 A 平均回收率为 10015 % ,RSD 为 2157 %。结论
建立的方法简便、准确、可靠 ,可作为三白草质量控制方法。
关键词 :三白草 ;质量标准 ;三白草酮 ;里卡灵 A ;高效液相色谱
中图分类号 :R28411 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 06 - 0997 - 03
　　三白草系三白草科三白草属植物三白草 S auru2
rus chinensis (Lour1) Baill1 的干燥地上部分[1 ] 。具有
清热解毒、利水消肿之功效 ,主要用于治疗尿路感染、
尿结石、肾炎水肿、白带过多、支气管炎等症 ,外敷治
疗痈疮疥肿和皮肤湿疹。现代研究表明其有显著的
降血糖作用 ,同时在韩国、朝鲜等也作为民间常用药
物 ,用于治疗水肿、黄疸、淋病等 ,且从三白草全草及
根茎中分离得到多个具有抗炎、抗氧化、保肝、抑制中
枢神经作用等多种药理活性的木脂素类成分[2～4 ] 。
《中国药典》2005 年版中三白草仅以性状、对照
药材薄层鉴别、检查项和醇溶性浸出物进行质量控
制 ,缺乏定量测定项 ,难以有效地控制药材质量 ,保证
临床疗效。本课题组在对三白草的化学成分研究的
基础上分离得到两个质量分数高 ,专属性强且具有抗
炎、抗氧化、保肝等多种药理活性的木脂素类成
分[5～13 ] ———三白草酮 ( sauchinone) 、里卡灵 A (licarin
A) ,同时文献研究表明三白草酮仅从三白草中分离
得到。因此 ,三白草酮、里卡灵 A 可作为三白草质量
控制的指标性成分 ,本实验采用 TLC 法和 HPLC 法
对三白草药材进行质量标准研究 ,以便对三白草的质
量控制提供科学依据 ,更好地保证其临床疗效。
1 　仪器与试药
Agilent 1200 高效液相色谱仪 , G1315D 型 DAD
检测器 , KQ —250B 型超声波清洗器 ,三白草酮、里卡
灵 A 自行从三白草中分离得到 ( HPLC面积归一化测
定质量分数大于 98 %) ,硅胶 G薄层板 (青岛海洋化
工厂) ,甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其他试剂为分析
纯。三白草由不同产地购入 ,对照药材由南京中医药
大学标本馆提供 ,经南京中医药大学陈建伟教授鉴定
为三白草 S aururus chinensis (Lour1) Baill1 的干燥地
上部分。
2 　薄层色谱鉴别
取各批三白草药材粉末 2 g ,加甲醇 30 mL ,超声
40 min ,滤过 ,滤液浓缩至约 2 mL ,分别加于活性炭2
氧化铝柱 (012 g ,4 g)上 ,干法装柱 ,湿法上样 ,用甲醇
60 mL 洗脱 ,收集洗脱液 ,蒸干 ,残渣加醋酸乙酯 2
mL 使溶解 ,作为供试品溶液。另取三白草对照药材
2 g ,同法制成对照药材溶液。另取三白草酮和里卡
灵 A 对照品 ,加醋酸乙酯制成 1 mg/ mL 的溶液 ,作为
对照品溶液。吸取上述对照品溶液 5μL ,对照药材溶
液、供试品溶液各 10μL ,分别点于同一硅胶 G薄层
板上 ,以石油醚 (60～90 ℃)2丙酮 (5 ∶2)为展开剂 ,展
开 ,取出 ,晾干 ,10 %硫酸乙醇显色。供试品色谱中 ,
在与三白草酮、里卡灵 A 对照品和三白草对照药材
色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。见图 1。
3 　HPLC测定
311 　色谱条件及系统适应性 :色谱柱为 Agilent
Eclipse XDB2C18柱 (150 mm ×416 mm ,5μm) ;流动相
为甲醇2水 (63 ∶37) ,检测波长为 230 nm ;体积流量为
018 mL/ min ;柱温为 30 ℃;理论塔板数按三白草酮计
算应不低于4 000。色谱图见图 2。
312 　对照品溶液的制备 :分别精密称取三白草酮、里
卡灵 A 对照品 10 mg 置 50 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻
度 ,摇匀 ,即得。
313 　供试品溶液的制备 :取本品粉末 (过四号筛) 约
01 5 g ,精密称定 ,精密加入甲醇25 mL ,称定质量 ,
·799·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月
①收稿日期 :2009209212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :中国药典委员会项目( YS2136 , YS2137)
作者简介 :陈宏降 (1983 —) ,男 ,硕士在读 ,研究方向中药及复方的质量控制。　E2mail :chhj1228 @1631com3 通讯作者　李　祥　E2mail :lixiang_8182 @1631com
1～112为购自于不同产地的三白草药材　L2里卡灵 A
S12三白草酮　S22三白草对照药材
1 - 112samples obtained from various habitats 　L2licarin A
S12sauchinone 　S22control medicine
图 1 　三白草的 TLC图谱
Fig11 　TLC Chromatogram of S1 chinensis
t/ min
12三白草酮　22里卡灵 A
12sauchinone 　22licarin A
图 2 　对照品( A)和样品( B)色谱图
Fig12 　HPLC Chromatograms of reference
substance ( A) and samples ( B)
浸泡 30 min ,超声 40 min ,放冷 ,再称定质量 ,用甲醇
补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
314 　标准曲线的制备 :分别精密吸取三白草酮对照
品溶液 014、018、112、116、210、410 mL ,里卡灵 A 对
照品溶液 012、014、018、112、116、210 mL 置 10 mL 量
瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,分别进样 10μL。结果三
白草酮在80132～80312 ng 呈良好的线性关系 : Y =
25 668 X + 19171 , R2 = 01999 9 ;里卡灵 A 在40124～
40214 ng 呈良好的线性关系 : Y = 57 825 X + 42135 ,
R2 = 01999 5。
315 　精密度试验 :取同一份供试品溶液 (产地 :安徽
080926) ,重复进样 6 次 ,三白草酮峰面积值 RSD 为
01515 % ,里卡灵 A 峰面积值 RSD 为 01938 %。
316 　稳定性试验 :取供试品溶液 (产地 :安徽 081201)
分别于 0、2、4、6、8、12、24 h 进样测定 ,三白草酮峰面
积值 RSD 为 2180 % ,里卡灵 A 峰面积值 RSD 为
1153 % ,结果表明供试品溶液在 24 h 内稳定性良好。
317 　重现性试验 :对同一批三白草药材 (产地 :安徽
081201)平行制备 6 份供试品溶液 ,精密进样 10μL ,
三白草酮质量分数的 RSD 为 21910 % ,里卡灵 A 质
量分数的 RSD 为 21819 %。
318 　加样回收率试验 :精密称取三白草粉末 (产地 :安
徽 081201)约 0125 g ,共 6 份 ,每份按一定比例加入对照
品溶液 ,按 313 项下进行样品制备并测定 ,计算回收率。
三白草酮平均回收率为 10018 % ,RSD 为 2113 %;里卡
灵 A 平均回收率为 10015 % ,RSD 为 2157 %。
319 　样品的测定 :按 313 项 ,对各产地三白草药材
进样测定 ,每批平行测定两份 ,测定结果见表 1。
4 　讨论
41 1 　薄层色谱鉴别 :用甲醇作为提取溶剂较2005
表 1 　三白草各产地样品测定结果( n = 2)
Table 1 　Detemination of S1 chinensis from different habitats ( n = 2)
产地及批号 来　　源 三白草酮/ % 里卡灵 A/ %
湖北 080822 浙江中医药大学饮片厂 01159 ±01 003 01 017 4 ±01000 1
浙江 080821 浙江中医药大学饮片厂 01309 ±01 000 01 017 8 ±01001 1
江苏 080610 中国药科大学植物园 01429 ±01 005 01 026 2 ±01000 2
河北 081127 河北安国京兴药业 01123 ±01 002 01 014 9 ±01000 6
安徽 081127 安徽谯城药业 01157 ±01 005 01 066 2 ±01002 8
安徽 081201 亳州市华申药业 01183 ±01 005 01 086 0 ±01003 7
河南 081129 亳州市华申药业 01125 ±01 002 01 101 0 ±01001 4
湖北 081130 亳州市华申药业 01073 ±01 004 01 020 8 ±01001 3
湖北 061213 亳州市中药饮片厂 01270 ±01 008 未检出
江苏 812114 南京正草堂药业 01093 ±01 008 01 061 2 ±01002 4
江苏 080910 中国药科大学植物园 01178 ±01 003 01 013 8 ±01000 9
年版《中国药典》中的乙醇好 ,超声法较回流法好。
除色素前在三白草酮稍下方有显红色荧光的色素干
扰 ,硫酸乙醇显色后显黄绿色 ,因此 ,采用活性炭、氧
化铝柱对其进行除色素 ,经除色素后的供试品不再
有干扰 ,分离效果较好。
412 　检测波长的确定 :三白草酮在 245、298 nm 处
·899· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月
有最大吸收 ,里卡灵 A 在 275 nm 处有最大吸收 ,两
者没有共同的最大吸收波长 ,根据对照品的紫外光
谱图及供试品的 3D 图确定检测波长为 230 nm。
413 　流动相的选择 :由于三白草酮、里卡灵 A 结构
中几乎不含酸性基团 ,故没有考察 p H 值对分离效
果的影响。在不加酸的条件下 ,三白草酮、里卡灵 A
色谱峰的对称性均较好 ,所以只考察了甲醇2水 ,乙
腈2水两种洗脱系统。两种系统分离效果、出峰顺
序、峰形无显著差别 ,考虑到乙腈的价格及毒性 ,所
以选择了甲醇2水系统。
414 　系统适应性考察 :考察了 Agilent TC2C18柱 (250
mm ×416 mm ,5μm) ,Aiglengt Eclipse XDB2C18 (150
mm ×416 mm ,5μm) , Hanbon Lichrospher C18柱 (250
mm ×416 mm ,5μm) 3 根不同型号色谱柱 ,甲醇2水
(63 ∶37) 、(65 ∶35) 、(60 ∶40) 3 种不同比例流动相 ,
25 ℃、30 ℃、35 ℃3 种不同柱温 ,结果两者均达到基
线分离 ,表明系统适应性良好。
415 　本实验建立的方法简便易行 ,能够准确、科学
地评价三白草药材的质量。从多数样品的测定结果
看 ,不同产地和批次的药材差异较大 ,这可能与采收
期有关。本课题组分别于 2008 年 6 月 10 日 ,9 月
10 日同采于中国药科大学的两批三白草中 ,三白草
酮和里卡灵 A 的量相差两倍左右 ,表明不同采收期
成分量相差较大。《中国药典》2005 年版对三白草
没有明确的采收期 ,三白草为多年生草本 ,生长期会
枯萎 ,叶片脱落 ,这势必会影响药材中主要成分的
量 ,从而影响其质量。应开展采收期相关研究 ,明确
规定其采收期。
416 　样品测定中 ,药材 (湖北 081130) 未能测出里卡
灵 A , TLC鉴别也未见其斑点。同时在测定总灰分时
发现该批药材灰分呈绿色 (其他药材灰分呈灰白色) ,
提示该批药材可能已经变质 ,这也从一侧面反应了开
展三白草存储、有效期等相关研究的重要性。
参考文献 :
[1 ] 　中国药典 [ S]1 20051
[2 ] 　Sung S H , Huh M S , Kim Y C1 New tet rahydrofuran2type
sesquilignans of S aururus chinensis root [J ]1 Chem Pharm
B ull , 2001 , 49 (9) : 1192211941
[3 ] 　Moon T C , Seo C S , Haa K , et al1 Meso2dihydroguaiaretic
acid isolated f rom S aururus chinensis , inhibit s cyclooxygen2
ase22 and 52lipoxygenase in mouse bone marrow2derived mast
cells [J ]1 A rch Pharm Res , 2008 , 31 (5) : 60626101
[4 ] 　马　敏 , 阮金兰 , Koppaka V R1 三白草的化学成分研究
( Ⅰ) [J ]1 中草药 , 2001 , 32 (1) : 92111
[5 ] 　Hwang B Y , Lee J H , J ung H S , et al1 Sauchinone , a lignan
f rom S aururus chinensis , suppresses iNOS expression
t hrough t he inhibition of t ransactivation activity of NF2κB
[J ]1 Planta Med , 2003 , 69 : 1096211011
[6 ] 　Lee A K , Sung S H , Kim Y C , et al1 Inhibition of lipopoly2
saccharide inducible nit ric oxide synt hase , TNF2αand COX22
expression by sauchinone effect s on I2κBα phosphorylation ,
C/ EBP and AP21 activation [J ]1 B r J Pharmacol , 2003
(139) : 112201
[7 ] 　Sung S H , Lee E J , Cho J H , et al1 Sauchinone , a lignan
f rom S aururus chinensis , Attenuates CCl42induced toxicity in
primary cultures of rat hepatocytes [J ]1 B iol Pharm B ull ,
2003 , 23 (5) : 66626681
[8 ] 　Sung S H , Kim Y C1 Hepatoprotective diastereomeric lignans
f rom S aururus chinensis herbs [J ]1 J N at Prod , 2000 , 63 :
10191
[9 ] 　Song H , Kim Y C , Moon A. Sauchinone , a lignan f rom
S aururus chinensis , inhibit s staurosporine2induced apoptosis
in C6 rat Glioma cells [J ]1 B iol Pharm B ull , 2003 , 26 (10) :
1428214301
[ 10 ] 　Seo C S , Lee Y K , Kim Y J , et al1 Protective effect of lig2
nans against sepsis f rom t he root s of S aururus chinensis [J ]1
B iol Pharm B ull , 2008 , 31 (3) : 52325261
[ 11 ] 　Lee M K , Yang H , Ma C J , et al1 Meso2dihydroguaiaretic
acid and licarin A of M achil us thunbergii protect against glu2
tamate2induced toxicity in primary cultures of a rat cortical
cells [J ]1 B iol Pharm B ull , 2007 , 30 (4) : 81428171
[ 12 ] 　Park B Y , Min B S , Kwon O K , et al1 Increase of caspase23
activity by lignans f rom M achilus t hunbergii in HL260 cells
[J ]1 B iol Pharm B ull , 2004 , 27 (8) : 1305213071
[ 13 ] 　Leel J S , Kim J W , Yu Y U , et al1 Inhibition of phospho2
lipase Cγ 1 and cancer cell proliferation by lignans and fla2
vans f rom M achilus t hunbergii [J ]1 A rch Pharm Res , 2004 ,
27 (10) : 1043210471
《中草药》杂志列中文核心期刊中国医学类第一位
中国医学类核心期刊表
序号 刊 　名 　　 序号 刊 　名 　　
1 　中草药 11 　针刺研究
2 　中国中药杂志 12 　中药新药与临床药理
3 　中国中西医结合杂志 13 　南京中医药大学学报
4 　中国针灸 14 　中国实验药剂学杂志
5 　中成药 15 　辽宁中医杂志
6 　北京中医药大学学报 16 　时珍国医国药
7 　中药材 17 　中医杂志
8 　中国中医基础医学杂志 18 　新中医
9 　中药药理与临床 19 　中国中西医结合急救杂志
10 　中华中医药杂志 20 　中国天然药物
　　　　摘自《中文核心期刊要目总览》2008 年版 (第五版)
·999·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 6 期 2010 年 6 月