全 文 ：生地与熟地中糖类和梓醇的比较研究
邱建国,贾正平* ,张汝学, 盛
杰,李茂星,樊鹏程
(兰州军区兰州总医院 药材科, 甘肃 兰州
730050)
摘
要: 目的
对生地与熟地中的成分进行比较。方法
高效液相色谱法测定。采用水为溶媒, 超声提取糖类成
分,流动相用乙腈-水( 72
28) ,体积流量 1
0 mL / min, NH2 色谱柱分离, 示差折光检测器检测, 高效液相色谱法测
定;采用甲醇为溶媒, 超声提取梓醇,流动相用甲醇-0
1%磷酸溶液 ( 1
99) , 体积流量 1
0 mL/ min, C18色谱柱分
离,检测波长 210 nm。结果
生地与熟地的糖类成分基本一致, 只是量不同;生地与熟地中梓醇的量存在显著性差
异。结论
本方法分离效果好、准确、快速、干扰少, 适用于生地与熟地中糖类和梓醇的比较。
关键词:生地; 熟地;糖类; 梓醇;高效液相色谱
中图分类号: R286
02


文献标识码: B


文章编号: 0253-2670( 2010) 07-1117-03


地黄为玄参科植物地黄的新鲜或干燥块根 [ 1]。
鲜地黄清热生津、凉血、止血、用于热病伤阴, 舌绛烦
渴,发斑发疹,吐血, 衄血,咽喉肿痛。生地黄清热凉
血、养阴、生津, 用于热病舌绛烦渴、阴虚内热、骨蒸
劳热、内热消渴、吐血、衄血、发斑发疹。熟地黄滋阴
补血、益精填髓, 用于肝肾阴虚、腰膝酸软、骨蒸潮
热、盗汗遗精、内热消渴、血虚萎黄、心悸怔忡、月经
不调、崩漏下血、眩晕、耳鸣、须发早白。现代药理研
究发现,地黄具有调节免疫功能, 影响血液系统、内
分泌系统、中枢神经系统等各方面活性, 并具有抗衰
老及降血糖等多方面功效。本课题组多年来对地黄
的降血糖机制进行了研究, 发现其调节血糖的主要
成分是地黄寡糖 [ 2]。文献报道环烯醚萜苷类中的梓
醇可能是地黄降血糖作用的有效成分之一[ 3]。加工
炮制过程中有效成分的变化是其药性发生改变的根
本原因,因此本实验对炮制前后的地黄中梓醇和糖
类进行了研究, 为地黄的炮制机制研究提供参考。
1
仪器与材料


SCL
6A 高效液相色谱仪, Shimadzu RID

6A示差折光检测器(日本) , M illennium32色谱管理
系统; Waters 高效液相色谱仪, Waters996 紫外检
测器, Waters600泵; M et tler AE240电子分析天平
(瑞典) , SK7200H 超声波清洗器(上海科导超声仪
器有限公司) , FZQ
2涡旋混合器 (江苏泰县医疗
器械厂) ,微量进样器(上海安亭微量进样器厂)。
葡萄糖(北京化学试剂三厂) , 果糖(中国药品生
物制品检定所, 批号 1504-200001) , 半乳糖 (德国
EMERCK 公司) , 楝二糖 ( Sigma-Aldrich, 批号
1362360) ,蔗糖(北京化学试剂三厂) , 棉子糖(西安
舟鼎国生物技术有限公司, 批号 DH258) , 水苏糖
( U nited Kingdom, 批号 065K3775)。生地药材购
于河南怀庆、河南新乡、河南西峡等地, 经兰州大学
药学院曹宗钧教授鉴定,与
中国药典
2005 年版一
部正品相符, 熟地药材由同批生地根据
中国药典

2005年版一部熟地黄
制法( 2)项蒸法
及附录
D
炮制而成,其他试剂均为分析纯,水为重蒸水。
2
方法与结果
2
1
糖类成分的 HPLC法检测[ 4, 5]
2
1
1
色谱条件: 色谱柱为 Phenomenex NH 2 柱
( 150 mm
4
6 mm , 5
m) , 检测器为 Shimadzu
RID
6A 示差折光检测器,流动相为乙腈-水( 72

28) ,体积流量为 1
0 mL/ m in, 柱温为室温,进样量
20
L。色谱图见图 1。
2
1
2
对照品溶液的制备:分别称取葡萄糖、果糖、
半乳糖、楝二糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖对照品 8 mg,
精密称定, 置1
5 mL 离心管中,精密加 1 000
L 水
溶解,制成 8 mg / mL 的溶液, 0
45
m 滤过, 得滤
液,备用。
2
1
3
供试品溶液的制备: 分别称取生地、熟地
1 g, 精密称定, 加水 20 mL,超声提取 30 m in,放冷,
用水定容至 25 mL,取 1 mL, 5 000 r/ m in,离心,上
清液 0
45
m 滤过,得滤液,备用。
2
1
4
测定结果的比较:结果见表 1。可见生地中
的水苏糖的量相对较高;熟地中的甘露三糖的量相对
较高;二者中棉子糖的量也有较显著的差异,生地中
含 35
1 mg/ g,熟地中含 14
4 mg/ g;二者中蔗糖和楝

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 11-12





















基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30772773) ;甘肃省自然科学基金资助项目( 3ZS051
A25-078)
* 通讯作者
贾正平
T el: ( 0931) 8994652
E- mai l: Jiazp166@ sina
com
二糖的量没有显著性差异;由于果糖是酮基六碳糖、
葡萄糖和半乳糖是醛基六碳糖,结构相近, 色谱柱难
以分离开,没法测定, 但是从生地和熟地水提取物的
色谱图可以看出熟地中的果糖的量高于生地。
A-果糖
B-葡萄糖
C-半乳糖
D-蔗糖
E-楝二糖
F-棉子糖
G-水苏糖
H-生地水提取物
I-熟地水提取物
A-fructopyranose
B-glucose
C-galactos e
D-su crose
E-m elibiose
F- gossypose
G-upeose
H- dried rehmannia root
I-R ehmanniae Rad ix Pr ep arata w ater ext ract
图 1
不同对照品和提取物 HPLC色谱图
Fig
1
HPLC Chromatograms of different reference substances and extracts
表 1
地黄中各糖的比较(n= 3)
Table 1
Comparison of sugars in RehmanniaeRadix ( n= 3)
样品 质量分数/ ( mg
g- 1 )蔗糖峰 楝二糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖
生地(怀庆) 38
0 17
9 35
1 21
0 166
3
熟地(怀庆) 27
8 26
0 14
4 119
7 72
1
生地(新乡) 74. 9 375. 6
熟地(新乡) 7. 6 119. 1 36. 9
生地(西峡) 89. 6 458. 3
熟地(西峡) 4. 1 172. 3 6. 1
2
2
梓醇的 HPLC法检测[ 1]
2
2
1
色谱条件: Waters996 紫外检测器, Wa-
ter s600泵, C18柱 ( 150 mm
4
6 mm , 5
m) , 检测
波长为 210 nm, 流动相为甲醇-0
1%磷酸溶液( 1

99) ,体积流量 1
0 mL/ m in,柱温为室温, 进样量 20

L 。色谱图见图 2。
2
2
2
对照品溶液的制备:称取梓醇对照品适量,精
密称定,用流动相甲醇-0
1%磷酸溶液( 1
99)制成
10
g/ mL 的溶液, 0
45
m 滤过,得到滤液,备用。
* -梓醇
* -catalpol
图 2
梓醇对照品(A)、生地甲醇提取物( B)及熟地甲醇提取物(C)HPLC色谱图
Fig
2
HPLCChromatograms of catalpol refercnce substance ( A) and methanol extracts from Rehmanniae
Radix (B) and Rehmanniae Radix Praeparata (C)
2
2
3
供试品溶液的制备: 分别称取生地、熟地
0
5 g, 精密称定, 加甲醇 5 mL,超声提取 30 min, 放
冷,用甲醇定容至 5 mL, 滤过, 水浴蒸干, 残渣用流
动相甲醇-0
1% 磷酸溶液 ( 1
99) 溶解定容至 5

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
mL, 0
45
m 滤过,得到滤液, 备用。
2
2
4
测定结果的比较:结果见表 2。可见生地中
的梓醇的量相对较高,每克药材含有 2
04 mg ,熟地
每克药材含有 0
322 mg。
表 2
生地、熟地甲醇提取物中梓醇的比较( n= 3)
Table 2
Comparison of catalpol in methanol extracts
from Rehmanniae Radix and Rehmanniae
Radix Praep arata ( n= 3)
样品 梓醇/ ( mg
g- 1 )
生地 2
04
熟地 0
32
3
讨论
生地和熟地的糖类成分色谱图中, 成分基本一
致,量有所变化,二者都含有果糖、葡萄糖、半乳糖 3
种单糖,蔗糖、楝二糖两种二糖,棉子糖、甘露三糖两
种三糖,水苏糖一种四糖;生地炮制成熟地后水苏糖
主要失去一个酮基单糖果糖, 生成甘露三糖, 所以熟
地中甘露三糖和果糖的量较生地高;葡萄糖和半乳
糖都是醛基六碳糖, 保留时间分别为 4
387、4
443
min, 二者很难分开。文献报道, 地黄中的寡糖含有
少量的毛蕊四糖和毛蕊糖 (五糖) [ 6, 7] , 但是在本研
究的检测条件下没有检测到。
生地甲醇提取物及熟地甲醇提取物的 HPLC色
谱图显示,成分、量差别较大,其中生地明梓醇的量显
高于熟地。梓醇是一种环烯醚萜葡萄糖苷类化合物,
加工炮制过程中, 脱去糖基而发生了一系列化学变
化,导致梓醇大幅降低的同时出现了新的化合物。


生地和熟地的糖类成分色谱图与梓醇色谱图显
示, 糖类成分的量高, 生地中水苏糖量最高, 达到
166
3 mg / g, 楝二糖最低达到21
0 mg/ g,熟地中甘
露三糖最高达到119
7mg/ g, 棉子糖最低达到14
4
mg/ g, 梓醇的量相比较较低,生地 2
04 mg/ g ,熟地
0
32 mg/ g。
生地炮制成熟地, 无论糖类成分还是环烯醚萜
苷类成分均有不同程度地变化。其对地黄的药效变
化有何作用等问题,有待进一步深入研究。
对供试品溶液的计算,采用工作曲线回归方程
法和外标一点法两种方法[ 8]。工作曲线回归方程法
计算供试品中水苏糖的量和加样回收率的 RSD分
别为 1
04%、3
51% ; 用外标一点法计算供试品中
水苏糖的量和加样回收率的 RSD 分别为 0
93%、
2
94%。用外标一点法计算的误差比用工作曲线回
归方程法的误差小, 所以建试验中地黄寡糖的测定
采用外标一点法计算, 既可以减少对照品的浪费,又
可以降低计算带来的误差。
参考文献:
[ 1]
中国药典[ S]
一部
2005

[ 2]
张汝学,贾正平,李茂星,等
地黄寡糖改善 HepG2细胞胰岛
素抵抗的分子机制研究[ J]
中草药, 2008, 39( 8) : 1184-1187

[ 3]
阴
健,郭力弓
中药现代研究与临床应用( 1) [ M ]
北京: 学
苑出版社, 1993

[ 4]
张汝学,樊俊杰,贾正平,等
地黄中寡糖的提取分离工艺研究
[ J]
解放军药学学报, 2005, 21( 1) : 34- 36

[ 5]
刘有平,张佳蕊,邵
华,等
柱前衍生化 RP-H PLC法测定地
黄中葡萄糖、半乳糖和蜜二糖[ J]
中草药, 2009, 40 ( 6) : 974-
976

[ 6]
T om oda M , Kato S, Onuma M, et al
Water-soluble cons titu-
ents of R ehmanniae Rad ix
I
Cab ohy-drates and acids of R e-
hmannia g lut inosa f
hueichingensi s [ J]
Ch em Pharm Bu ll ,
1971, 19( 7) : 1455-1460

[ 7]
Kubo M, Asano T, Matsuda H, e t al
S tu dies on Rehmanniae
Rad ix


T he relat ion betw een chan ges of const ituents an d
improvable effect s on hemorheology w ith the processing of
root s of Rehmannia glut inosa [ J ]
Yakugaku Zasshi , 1996,
116( 2) : 158-168

[ 8]
邱建国,张汝学,贾正平, 等
地黄中寡糖含量的 HPLC法测
定[ J]
中国实验方剂学杂志, 2009, 15( 8) : 8- 9

薄层色谱法鉴定莪术油中倍半萜类成分的研究
崔
友1 ,孙秀燕2* ,张
慧2
( 1
浙江天瑞药业有限公司,浙江 瑞安
325200; 2
烟台大学药学院,山东 烟台
264005)
摘
要: 目的
建立莪术油中= 牛儿酮、呋喃二烯、莪术二酮和莪术烯 4种倍半萜类成分的鉴别方法。方法
采用
薄层色谱法,硅胶薄层板, 正己烷-醋酸丁酯( 98
2)为展开剂,香草醛硫酸试液显色。结果
= 牛儿酮、呋喃二烯、
莪术二酮和莪术烯的 Rf值分别为 0
11、0
31、0
50、0
60。结论
方法操作简便、准确、重现性好,可用于同时鉴别
莪术油中有效成分= 牛儿酮、呋喃二烯和莪术二酮。

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中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 7 期 2010 年 7 月
* 收稿日期: 2009- 06-12





















基金项目:山东省教育厅科技计划项目( J07W01)作者简介:崔
友( 1966
) ,男,黑龙江省宝清县人,副主任药师,主要从事新药研发及其药物制剂工艺与质量标准研究。
* 通讯作者
孙秀燕
T el: ( 0535) 6706023
Fax : ( 0535) 6706036
E-mail: sunxy@ ytu
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cn