全 文 ：木豆叶的质量评价研究
张俊清, 李海龙,谭银丰,符乃光, 刘明生*
(海南医学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室, 海南 海口 571101)
摘 要:目的 对木豆叶药材进行质量评价。方法 使用生药学研究、薄层色谱法、H PLC 法对木豆叶质量进行评
价。结果 对木豆叶的性状、显微特征进行了描述, 对牡荆苷、异美五针松双氢黄酮、木豆茋做了 TLC 定性鉴别和
HPLC 定量分析。结论 通过研究制定了木豆叶的质量控制标准。
关键词:木豆叶; 质量标准;牡荆苷; 异美五针松双氢黄酮;木豆茋
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10172303
木豆 Caj anus caj an L 为豆科木豆属植物, 分
布于东南亚、印度、中国西南及海南诸省。民间将木
豆嫩叶用于止血、止痛、抗感染,并用于治疗褥疮、水
痘和股骨头坏死等疾病。木豆叶除较早发现的有效
成分牡荆苷外, 近年文献报道了木豆叶中的茋类化
合物能降低高脂小鼠血清和肝脏脂质水平[ 1] , 对雌
激素缺乏导致的大鼠骨质丢失具有改善作用 [ 2]。木
豆叶药材的现行质量标准收载于 广东省中药材标
准!2004年版, 但标准中无定量测定项。为进一步
提高药材的质量控制水平, 本研究对海南产木豆叶
进行了检测, 对药材进行了性状、显微特征和 T LC
鉴别,以及有效成分定量等项目研究,为海南省中药
材地方标准的出台提供参考依据。
1 仪器与试药
ZF- 1型三用紫外分析仪, Waters 515液相色谱
系统( Waters 515泵; 2996PDA 检测器) , 美国 Pall公
司 Cascade ∀超纯水器,日本 Kubota公司 KR # 702
型离心机。牡荆苷对照品由中国药品生物制品检定
所提供(批号 111687200501) ,异美五针松双氢黄酮、
木豆茋由暨南大学药学院提供(质量分数大于99%)。
乙醇、磷酸为分析纯,乙腈为色谱纯,水为超纯水。木
豆叶采于海南省万宁市兴隆华侨农场,由中国医学科
学院兴隆分所陈伟平教授鉴定为豆科木豆属植物木
豆Caj anus caj an L。
2 方法与结果
2 1 性状: 三出复叶,互生;卷缩或半卷缩, 完整叶
片展开后呈卵状披针形, 长 5 ~ 10 cm, 宽 1~ 3 5
cm; 托叶小;叶柄长约 2 cm ,向上渐短; 叶片先端锐
尖, 全缘,上表面绿色或棕褐色; 下表面绿褐色。两
面均被白毛,下面具有不明显腺点。
2 2 显微特征:横切面,上下表面细胞类长方形,外
被角质层;下表皮具稍凸起的气孔。非腺毛下表皮
较上表皮多,由 1~ 2 个细胞组成, 上部尖; 腺毛偶
见,腺头细胞一个, 较大, 腺柄细胞一个。栅栏组织
为 1例细胞,偶见两列;海绵组织疏松。主脉维管束
外韧型,中柱鞘纤维断续成环, 壁木化, 周围细胞含
草酸钙方晶, 形成晶纤维。主脉上表皮内侧有数列
厚角细胞;薄壁细胞含草酸钙方晶。
2 3 薄层色谱鉴定: 取木豆叶粉末 0 5 g 置 250
mL 圆底烧瓶中, 加 70%乙醇 50 mL, 回流提取 20
m in,放凉, 滤过, 滤液蒸干, 用 25 mL 甲醇溶解, 得
供试品溶液。另取木豆茋、异美五针松双氢黄酮、牡
荆苷对照品加甲醇分别配制成质量浓度分别为
0 034、0 61、0 35 mg/ mL 的溶液, 作为对照品溶
液。照薄层色谱法( 中国药典!2005年版一部附录
∃ B)试验, 分别吸取异美五针松双氢黄酮、牡荆苷
对照品溶液各 10 L, 木豆茋对照品溶液和供试品
溶液各 20 L, 分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏
合剂的硅胶 G薄层板上,以甲苯丙酮甲醇( 6% 2%
2) ,加两滴醋酸为展开剂,展开, 取出, 晾干, 365 nm
紫外灯下观察,供试品与对照品在相同位置有相同
的荧光斑点,见图 1。
2 4 定量测定
2 4 1 对照品溶液的制备:精密称取牡荆苷对照品
3 0 mg、异美五针松双氢黄酮 6 1 mg、木豆茋 3 4
mg,分别置 10 mL 量瓶中, 甲醇溶解、定容,作为对
照品储备液冷藏保存。依次取上述 3种对照品溶液
&1723&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20100310 基金项目:国家科技支撑计划资助项目( 2007BAI27B06) ;海南省自然科学基金资助项目(309030)作者简介:张俊清( 1964 # ) ,女,海南医学院药学系教授,主要从事热带药用植物质量标准研究。
T el : ( 0898)66895337 Email: 112552819@ qq com
* 通讯作者 刘明生 Email: secondmessenger@163 com
1木豆茋
2异美五针松双氢黄酮
3牡荆苷 4样品
12carb ox yl3hydroxy4
is opr enyl5methoxyst ilb ene
2pinost robin
3 vitexin 4sample
图 1 木豆叶薄层色谱图
Fig 1 TLCChromatogram of C caj an leaves
1、2、3 mL 置 10 mL 量瓶中混合,甲醇定容至刻度,
摇匀得混合对照品溶液。临用前以 0 45 m 微孔
滤膜过滤。
2 4 2 供试品溶液的制备:精密称取常温减压干燥
至恒重的木豆叶细粉 0 5 g, 置具塞锥形瓶中, 精密
加入 70%乙醇 50 mL, 称定质量, 沸水浴回流提取
20 min, 放冷,再称定质量, 用 70%乙醇补足减失的
质量,摇匀, 静置, 吸取上清液, 经 0 45 m 微孔滤
膜滤过,取续滤液,即得。
2 4 3 色谱系统适用性研究: XT err a C18色谱柱
( 250 mm ∋ 4 6 mm, 5 m) ;流动相: 0 2%磷酸水溶
液( A )乙腈 ( B) , 梯度洗脱 ( 0 ~ 15 min, 83% A;
15~ 20 m in, 83% A~ 45% A; 20~ 30 min, 45% A;
30~ 35 m in, 45% A ~ 30% A; 35 ~ 45 m in, 30%
( A) ;体积流量: 1 0 mL/ min;最大吸收波长牡荆苷
为 338 nm,理论塔板数6 000以上;异美五针松双氢
黄酮为 300 nm, 理论塔板数10 000以上; 木豆茋为
261 nm,理论塔板数10 000以上;在以上 3个波长下
对应的被测组分分离度均在 1 5以上, 拖尾因子均
小于 1 10,柱温 40 ( 。色谱图见图 2。
2 4 4 线性关系考察:分别精密吸取混合对照品溶
液 4、6、8、10、12、14、16 L, 进样, 测定。以对照品
的量为横坐标, 峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线, 牡
荆苷、异美五针松双氢黄酮、木豆茋的回归方程依次
为: Y 1= 2 8 ∋ 106X - 6 93 ∋ 103 , r= 0 999 9, 线性
范围 0 120 ~ 0 480 g ( 338 nm ) ; Y2 = 4 99 ∋
106X - 1 05 ∋ 105 , r = 0 999 9, 线性范围 0 488~
1 952 g ( 300 nm) ; Y 3= 5 25 ∋ 106X- 7 28 ∋ 104 ,
r= 0 999 9,线性范围 0 408~ 1 632 g( 261 nm)。
2 4 5 精密度试验:精密吸取混合对照品溶液 10
L, 重复进样 5次, 求得峰面积 RSD分别为牡荆苷
0 55%、异美五针松双氢黄酮 0 67%、木豆茋
为 0 62%。
t/ min
a牡荆苷 b异美五针松双氢黄酮 c木豆茋
a vitexin bpinos tr ob in c2carboxyl3
hydroxy4is oprenyl5meth ox yst ilbene
图 2 混合对照品(A)和木豆叶样品( B)的 HPLC色谱图
Fig 2 HPLC Chromatograms of mixed reference subs
tances ( A) and C caj an leaves samples ( B)
2 4 6 稳定性试验:供试品溶液在室温下放置,按
上述色谱条件,在放置 0、4、8、24 h 进样测定, 进样
量为 20 L, 测定峰面积,计算牡荆苷异美五针松双
氢黄酮、木豆茋的 RSD 分别为 0 88%、0 50%、
1 84% ,说明供试品在 24 h 内稳定性较好。
2 4 7 重现性试验: 取木豆叶粉末 0 5 g ,共 6份,
制备供试品溶液, 按选定色谱条件各取 20 L, 测
定,计算质量分数,结果牡荆苷、异美五针松双氢黄
酮、木豆茋的 RSD分别为 1 31%、1 69%、1 60%。
2 4 8 加样回收率试验: 取上述已知牡荆苷、异美
五针松双氢黄酮、木豆茋量的木豆叶粉末 6份, 每份
约 0 125 g, 精密称定, 分别置具塞锥形瓶中,每组分
别加入一定量的对照品溶液,按供试品溶液制备方
法制备,按选定的色谱条件各取 20 L 进行测定,根
据测定结果,计算加样回收率。牡荆苷、异美五针松
双氢黄酮、木豆茋平均回收率分别为 99 5%、
99 3%、103 7%, RSD分别为 1 6%、1 4%、2 0%。
2 4 9 样品测定:精密称取 5批木豆叶粉末各 0 5
g ,按供试品溶液制备方法制备, 取 20 L, 进样测
定。结果牡荆苷、木豆茋、异美五针松双氢黄酮质量
分数分别为 0 114%、0 515%、0 463%, RSD 分别
为 1 29%、1 75%、1 97%。
3 讨论
进行定量测定时比较了木豆叶 60%、70%、
80%乙醇超声提取、索氏提取、水浴回流提取 3种方
法后,确定该供试品最佳提取方法为 70%乙醇水浴
加热回流 20 min。
&1724& 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
研究结果表明木豆叶中异美五针松双氢黄酮、
木豆茋的量较高。同时木豆叶中活性成分主要为黄
酮类和茋类化合物, 所以,选择该 3种成分作为指标
成分具有较好的代表性, 本方法选择 3种主要成分
作为木豆叶质量控制指标成分是可行的。
参考文献:
[ 1] 骆庆峰, 孙 兰, 斯建勇, 等 木豆叶茋类提取物对高脂模
型小鼠血脂和肝脏胆固醇的降低作用 [ J] 药学学报, 2008,
43( 2) : 145149
[ 2] 郑元元, 杨 京, 陈迪华, 等 木豆叶茋类提取物对雌激素
缺乏性大鼠骨质丢失的影响 [ J] 药学学报, 2007, 42( 5 ) :
562565
RPHPLC法测定鹿衔草中水晶兰苷
赵明波,屠鹏飞*
(北京大学药学院 天然药物及仿生药物国家重点实验室,北京 100191)
摘 要:目的 建立鹿衔草中水晶兰苷的测定方法。方法 采用 RPH PLC 法 , 色谱柱为 Agilent Zorbax SBAq
( 250 mm ∋ 4 6 mm, 5 m) ,流动相为甲醇0 1%磷酸溶液( 5% 95) , 体积流量 1 0 mL/ min,检测波长 235 nm,柱温
25 ( 。结果 水晶兰苷在0 254 4~ 5 08 8 g线性良好 , R2= 0 999 9;平均回收率 97 2% , 检测限为 13 ng。结论
该方法稳定可靠,回收率高, 可用于鹿衔草的质量控制。
关键词:鹿衔草; 水晶兰苷; RPH PLC
中图分类号: R284 1 文献标识码: A 文章编号: 02532670( 2010) 10172502
鹿衔草为 中国药典!一部收载的中药品种, 是
鹿蹄草科植物鹿蹄草 Py rola cal liantha H Andres
或普通鹿蹄草 P decor ate H A ndres 的干燥全草,
具有祛风湿、强筋骨、止血等功效[ 1]。现代药理学研
究表明,鹿衔草对心血管系统有一定的作用, 并具有
抗菌、抗炎、镇痛等活性[ 2]。鹿衔草中主要含有黄酮
类、酚类、醌类和环烯醚萜苷类化合物[ 2]。水晶兰苷
属于环烯醚萜苷类化合物, 与其抗炎镇痛作用相
关[ 3]。目前,对鹿衔草的研究主要集中于黄酮类 [ 4] ,
酚苷类[ 5]和三萜类[ 6] 化合物, 而环烯醚萜苷类成分
的研究未见报道。本实验采用 RPHPLC 法, 建立
了鹿衔草中水晶兰苷的测定方法,为鹿衔草的质量
控制提供了参考。
1 仪器和试剂
高效液相色谱仪为 Agilent 1100高效液相色谱
仪:四元泵, 在线脱气机, 自动进样器,柱温箱, 二极
管阵列检测器, Ag ilent 1100化学工作站。乙睛( J
T Baker,色谱纯, 美国) ;水为乐百事纯净水; 磷酸
(分析纯)为北京化工厂; 水晶兰苷对照品为实验室
自制, HPLC检查质量分数大于 98% (面积归一化
法) ; 鹿衔草药材为各地收集, 由北京大学药学院屠
鹏飞教授鉴定为鹿蹄草 Py r ola cal l iantha H An
dres或普通鹿蹄草 Py r ola decor ate H Andres 的
干燥全草。
2 方法和结果
2 1 色谱条件: A gilent Zorbax SBA q色谱柱( 250
mm ∋ 4 6 mm, 5 m) ,流动相:甲醇0 1%磷酸溶液
( 5 % 95) ; 检测波长: 235 nm 体积流量: 1 0 mL/
m in;柱温: 25 ( 。
2 2 对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒质量的
水晶兰苷对照品适量, 加甲醇溶解制成 0 25 mg/
mL 的溶液, 即得。
2 3 供试品溶液的制备:取本品粗粉约2 g,精密称
定,加水50 mL,称定质量,在 80 ( 水浴中提取1 h,
放冷,称定重量,用水补足减失的质量,滤过,精密量
取续滤液 20 mL 减压浓缩至干,残渣加水适量使溶
解,转入 5 mL 量瓶中,用水分次洗涤容器, 洗涤液
并入量瓶中,再加水至刻度,摇匀,即得。
2 4 线性关系考察:取水晶兰苷对照品适量,配制
1 272 mg/ mL 对照品溶液, 精密吸取 0 4、0 8、1 6、
2、4、8 mL 置于 10 mL 量瓶中,加水稀释至刻度,配
制成不同质量浓度的对照品溶液。精密吸取上述溶
液 5 L 进样,测定峰面积。以质量为横坐标,峰面
积为纵坐标作标准曲线。结果表明, 水晶兰苷在
0 254 4~ 5 088 g 线性良好, 回归方程为 Y =
1 106 4 X- 24 381, R2= 0 999 9。水晶兰苷的检测
限为 13 ng ( S/ N= 3)。
2 5 精密度试验: 取编号 25样品, 制备供试品溶
&1725&中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 10 期 2010 年 10月
收稿日期: 20091227 作者简介:赵明波 北京大学医学部植化教研室 Tel/ Fax : ( 010) 82802859 Email: zmb_77@ 163 com