全 文 ：板蓝根的质量标准研究
王 　瑞1 ,2 ,杨海英3 ,杨琪伟1 ,黄山君1 ,王峥涛1 ,2 3 ①
(11 上海中医药大学中药学院 中药研究所 教育部中药标准化重点实验室 ,上海 　201203 ; 21 上海中药标准化研究中心 ,
上海 　201203 ; 31 云南民族大学化学与生物技术学院 民族药资源化学重点实验室 ,云南 昆明 　650031)
摘 　要 :目的 　对 22 批板蓝根药材和饮片进行定性定量试验研究 ,提高板蓝根的质量标准。方法 　采用薄层色谱法
对板蓝根中表告依春进行定性分析 ,采用高效液相色谱法测定表告依春的量 ,Ultimate AQ2C18 (250 mm ×416 mm , 5
μm)色谱柱 ,流动相甲醇20102 %磷酸 (7 ∶93) ;检测波长 245 nm ;体积流量 110 mL/ min ;柱温 30 ℃。结果 　板蓝根中
表告依春的薄层色谱鉴别特征明显 ,专属性强 ,可与南板蓝根区别 ;表告依春的定量测定在 214～30910μg/ mL 呈
良好的线性关系 , r = 1 ;平均回收率 10019 %(RSD = 210 %) 。结论 　本方法简单灵敏 ,准确可靠 ,重现性好 ,可完善
现行的质量标准 ,为提高板蓝根的质量控制方法提供了实验数据 ,对于保证其质量和临床疗效具有重要意义。
关键词 :板蓝根 ;质量标准 ;表告依春 ;薄层色谱法 ;高效液相色谱法
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2010) 0320478203
　　板蓝根为常用中药 ,始载于《神农本草经》,《中
国药典》1985 年版开始收载 ,2005 年版规定板蓝根
为十字花科植物菘蓝 Isatis i ndi gotica Fort1 的干
燥根 ,从 2000 年版开始 ,马蓝〔南板蓝根 B a p hica2
cant hus cusi a (Nees) Bremek1〕不再被列入板蓝根
范围内。板蓝根具有清热解毒 ,凉血利咽之功效。
用于温毒发斑 ,舌绛紫暗 ,痄腮 ,喉痹 ,烂喉丹痧 ,大
头温疫 ,丹毒 ,痈肿等 ,临床上常用于治疗病毒性疾
病及细菌性感染疾病[1 ,2 ] 。
从《中国药典》1985 年版收载板蓝根药材至现行
版 ,均无专属性指标成分用于该药材的质量标准研
究。板蓝根中的表告依春是抗病毒的主要活性成分
之一[3 ,4 ] ,对其定量测定虽已有文献报道[5 ,6 ] ,但尚未
见系统评价板蓝根药材与饮片质量的相关报道。
本研究选择表告依春为指标成分 , 首先用
M T T 法测定了表告依春是否具有淋巴细胞毒性 ,
结果表明对淋巴细胞无毒性[ 7 ] 。在此基础上建立表
告依春的定性定量分析方法 ,完善现行的质量标准 ,
为提高板蓝根的质量控制方法提供了实验数据 ,对
保证其质量具有重要意义。
1 　仪器与试药
硅胶 GF254 预制板 (烟台化学工业研究所
SGF254 200 ×100 ,批号 060414) ;双槽展开缸 ;薄层
色谱仪 (Reprostar ,瑞士 CAMA G公司) ;1100 型高
效液相色谱仪 (美国安捷伦公司 ,包括四元泵、自动
进样器、柱温箱、检测器、工作站) ;甲醇 (色谱纯) ;磷
酸 (色谱纯) ;水 (纯净水) ;其他试剂均为分析纯 (国
药集团化学试剂有限公司) 。表告依春对照品 (上海
中药标准化研究中心提供 ,质量分数 > 98 %) 。
板蓝根药材 10 批 ,板蓝根饮片 (净片) 12 批 ,南
板蓝根药材 2 批 ,由上海中药标准化研究中心吴立
宏博士收集并鉴定 ,标本保存在上海中药标准化研
究中心。
2 　定性鉴别
取定量测定项下制备的样品溶液 10 mL ,蒸干 ,
残渣加甲醇 1 mL 使溶解 ,作为供试品溶液。另取
表告依春对照品 ,加甲醇溶解 ,制成 015 mg/ mL 对
照品的溶液。照薄层色谱法 (附录 ⅥB) 试验 ,吸取
上述两种溶液各 5～ 10 μL ,分别点于同一硅胶
GF254薄层板上 ,以石油醚2醋酸乙酯 (1 ∶1) 为展开
剂 ,预饱和 15 min ,展开 ,取出晾干 ,置紫外光灯
(254 nm)下检视。供试品色谱中 ,在与对照品色谱
相应的位置上 ,显相同的荧光淬灭斑点 ,见图 1。表
告依春的 Rf 值约为 0145。
3 　定量测定
311 　色谱条件 :Ultimate XB2C18色谱柱 (250 mm ×
416 mm ,5μm) ;流动相 :甲醇20102 %磷酸 (7 ∶93) ;
检测波长 245 nm ; 体积流量 110 mL/ min ; 柱温
30 ℃;进样量 10μL ,见图 2。
312 　对照品溶液的制备 :精密称取表告依春对照品
·874· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206224　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家药典委员会项目 (yz2168、yz2169) ;上海市科委科研计划项目 (08DZ1970103、06DZ19737) ;上海市教委科研项目 (08CZ07)
作者简介 :王　瑞 (1973 —) ,女 ,辽宁省本溪市人 ,副教授 ,研究方向中药活性成分与质量标准化。
Tel : (021) 51322181 　E2mail :ellewangtcm @gmail1com3 通讯作者　王峥涛　Tel : (021) 51322507 　Fax : (021) 51322519 　E2mail :wangzht @shutcm1 edu1cn
1～102板蓝根　11～122南板蓝根　S2表告依春
1 —102Radi x Isati dis 　11 —122I ndi go N aturalis 　S2epigoit rin
图 1 　板蓝根的薄层色谱图( UV 254 nm)
Fig11 　TLC Chromatogram of Radix Isatidis at
UV 254 nm
12表告依春
12epigoit rin
图 2 　表告依春对照品( A)和板蓝根( B)的 HPLC图
Fig12 　HPLC Chromatograms of epigoitrin reference
substance ( A) and Radix Isatidis ( B)
适量 ,加甲醇制成 40μg/ mL 的溶液 ,即得。
313 　供试品溶液的制备 :取样品粗粉约 210 g ,精密
称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 80 %甲醇 20 mL ,
密塞 ,称定质量 ,超声处理 (功率 250 W ,频率 40
k Hz) 30 min ,放冷 ,再称定质量 ,补足减失的质量 ,
摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
314 　线性关系考察 :取表告依春对照品适量 ,精密
称定 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,制成含表告
依春 013 mg/ mL 对照品贮备溶液。分别精密吸取
不同体积的对照品储备溶液 ,制成系列浓度溶液 ,按
上述色谱条件测定 ,进样 10μL ,分别以对照品的浓
度 ( X)为横坐标 ,峰面积积分值 ( Y) 为纵坐标 ,得回
归方程为 Y = 631734 X + 01303 6 , r = 1 ,线性范围
214～30910μg/ mL 。
315 　检测限和定量限 :取对照品溶液 ,用甲醇依次
稀释制成系列浓度由高到低的溶液 ,测得表告依春
的检测限 ( S/ N = 3) 为 0124 ng ,定量限 ( S/ N = 10)
为 0172 ng (RSD = 210 %) 。
316 　精密度试验 :取同一供试品溶液 ,在上述色谱
条件下连续进样 6 次 ,测得表告依春色谱峰面积的
RSD 为 012 % ,精密度良好。
317 　重现性试验 :取同一样品 6 份 ,精密称定 ,按
“供试品溶液制备”项下操作 ,在上述色谱条件下进
样测定 ,计算表告依春质量分数的 RSD 为 015 % ,
重现性良好。
318 　稳定性试验 :取样品粉末约 210 g ,精密称定 ,按
“供试品溶液制备”项下操作 ,在上述色谱条件下 ,分
别于 0、1、4、8、16、24、48 h 测定 ,测得表告依春色谱峰
面积的 RSD 为 213 % ,表明样品溶液在 48 h 内稳定。
319 　加样回收实验 :取已测定的板蓝根样品粉末 9
份 ,约 110 g ,精密称定 ,分别按已知量的 50 %、
100 %、150 % 3 个水平加入表告依春对照品 ,按“供
试品溶液制备”项下操作 ,在上述色谱条件下进样测
定 ,测得回收率为 10019 %(RSD = 210 %) 。
3110 　样品测定 :分别取板蓝根样品粉末约 210 g ,
精密称定 ,按“供试品溶液制备”项下操作 ,制成供试
品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各
10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,结果见表 1。
表 1 　板蓝根中表告依春的定量测定结果 ( n = 3)
Table 1 　Determination of epigoitrin in
Radix Isatidis ( n = 3)
编号 商品名 产地 收集地 表告依春/ %
1 板蓝根 (药材) 　 安徽 　　 安徽 　　　　　　　　 01 023 8
2 板蓝根 (药材) 　 安徽 　　 亳州 　　　　　　　　 01 034 6
3 板蓝根 (药材) 　 不详 　　 辽宁 　　　　　　　　 01 029 1
4 板蓝根 (药材) 　 不详 　　 上海 　　　　　　　　 01 066 3
5 板蓝根 (药材) 　 甘肃 　　 上海华宇药业有限公司 01 055 1
6 板蓝根 (药材) 　 安徽 　　 上海华宇药业有限公司 01 047 1
7 板蓝根 (药材) 　 安徽 　　 四川成都 　　　　　　 01 035 4
8 板蓝根 (药材) 　 甘肃武威 浙江中医药大学饮片厂 01 004 2
9 板蓝根 (药材) 　 河北祈州 浙江中医药大学饮片厂 01 006 7
10 板蓝根 (药材) 　 甘肃陇西 浙江中医药大学饮片厂 01 024 5
11 板蓝根 (饮片) 　 安徽 　　 安徽 　　　　　　　　 01 018 2
12 板蓝根 (饮片) 　 不详 　　 河北安国 　　　　　　 01 051 3
13 板蓝根 (饮片) 　 河北 　　 河北安国 　　　　　　 01 052 2
14 板蓝根 (饮片) 　 不详 　　 上海花木华氏 　　　　 01 061 2
15 板蓝根 (饮片) 　 安徽 　　 亳州沪谯 　　　　　　 01 064 5
16 板蓝根 (饮片) 　 河南 　　 河南中原正信 　　　　 01 078 1
17 板蓝根 (饮片) 　 安徽 　　 西部药都 　　　　　　 01 101 0
18 板蓝根 (饮片) 　 甘肃 　　 河北安国 　　　　　　 01 066 7
19 板蓝根 (饮片) 　 黑龙江 　 哈尔滨三棵树 　　　　 01 079 6
20 板蓝根 (饮片) 　 甘肃武威 浙江中医药大学饮片厂 01 074 7
21 板蓝根 (饮片) 　 河北祁州 浙江中医药大学饮片厂 01 040 0
22 板蓝根 (饮片) 　 甘肃陇西 浙江中医药大学饮片厂 01 064 8
23 南板蓝根 (饮片) 不详 　　 上海雷允上中药饮片厂 —
24 南板蓝根 (饮片) 不详 　　 上海雷允上中药饮片厂 —
4 　讨论
411 　薄层色谱条件的选择 :分别考察了不同的展开
系统 ,如石油醚2醋酸乙酯、石油醚2醋酸乙酯2冰醋
·974·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
酸、石油醚2丙酮、氯仿2甲醇等 ,在此基础上进行优
化 ,结果表明以石油醚2醋酸乙酯 (1 ∶1) 作为展开剂
斑点相对位置和重现性好。比较了国家药典委员会
规定使用的 5 种硅胶预制板 : HP TL C2Fertigoplat2
ten Nano2DU RASIL220 UV254 , 德 国 MN , 批 号
502059 ; Pre2coated TL C2plates SIL G225 UV254 ,德
国 MN ,批号 501027 ; 烟台化学工业研究所 HS2
GF254 ,批号 080527 ;烟台化学工业研究所 SGF254 ,
批号 060414 ;手铺板 GF254薄层色谱用硅胶 ,青岛海
洋化工厂 ,015 %羧甲基纤维素钠水溶液 ,厚度 014
mm ,结果表明均可以对板蓝根中的表告依春进行
定性鉴别 ,在保证重复性的前提下 ,以选择价格易于
接受为原则 ,推荐使用国产普通预制硅胶板。分别
观察在 5 种不同湿度下的展开情况 :用不同浓度的
硫酸溶液控制薄层板的相对湿度 ,结果显示湿度在
32 %～88 %时均能获得较好的效果。分别在室温
(20～25 ℃)及低温 (10～4 ℃) 展开 ,结果显示温度
影响相对较小。
412 　表告依春 HPL C 定量测定条件的选择
41211 　供试品溶液制备方法 :对提取溶液 (乙醇、甲
醇、80 %甲醇、50 %甲醇) 、提取方法 (冷浸、超声振
荡、直接回流) 、提取时间 (15、30、60 min) 和提取溶
剂量 (10 倍、20 倍) 进行考察 ,最终确定提取方法为
80 %甲醇 20 mL 超声提取 30 min。
41212 　耐受性试验 : 对不同品牌和型号色谱柱
(Shiseido C18 M G ,Ultimate AQ2C18 ,Agilent XDB2
C18 , Agela venusil2MP C18 , VARIAN Polaris C182
A ;250 mm ×416 mm ,5μm) 、流动相比例变化 (5 ∶
95～9 ∶91) 、柱温 (25～40 ℃) 、检测波长 (235～255
nm) 、体积流量 (018～112 mL/ min) 进行考察 ,按定
量测定色谱条件以及改变色谱条件后进样分析 ,测
得表告依春量以及相对标准偏差、分离度符合定量
测定要求。因此 ,板蓝根中的表告依春定量测定条
件较宽 ,具有较好的耐受性。
413 　本研究对 10 批板蓝根药材和 12 批板蓝根饮
片进行定性定量分析。结果表明 ,各样品均可检出
表告依春 ,南板蓝根中不含有表告依春 ,与 HPL C
试验结果一致 ,具有特征性和专属性。定量测定结
果表明表告依春在各样品中量差异较大 ,有必要对
其质量进行控制。
2005 年版《中国药典》板蓝根 ( P1142) 鉴别项下
(3)以精氨酸对照品作为 TL C 鉴别依据 ,无定量测
定方法。精氨酸虽然也可作为指标建立定性方法 ,
但并非板蓝根的特征性成分 ,缺乏专属性。表告依
春为板蓝根的特征性成分 ,专属性强 ,可与南板蓝根
相区别 ,为活性成分 ,所具有的活性与板蓝根药材的
功效接近。因此本研究选择表告依春为指标成分建
立板蓝根药材与饮片的质量标准 ,方法简便 ,准确可
靠 ,重现性好。广泛收集各地样品 ,结果具有一定的
代表性 ,为板蓝根新质量标准的制定提供依据。
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和急性毒性比较研究 [J ]1 中草药 , 2007 , 38 ( 8 ) : 11992
12021
《中草药》、《中国药学杂志》及陈新谦、陈常青荣获
“新中国 60 年有影响力的期刊及期刊人”
为纪念新中国诞辰 60 周年 ,表彰和鼓励对期刊事业做出重要贡献的期刊和期刊工作者 ,总结经验 ,促进
期刊行业健康发展 ,中国期刊协会、中国出版科学研究所联合举办了“新中国 60 年有影响力的期刊及期刊
人”推选活动。经过各地、各行业期刊协会和专家评审委员会的严格评审 ,中国药学会主办期刊《中草药》、
《中国药学杂志》及《中国药学杂志》副主编陈新谦、《中草药》杂志执行主编陈常青研究员分别荣获“新中国
60 年有影响力的期刊及期刊人”称号。
[本刊讯 ]
·084· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月