全 文 ：吴茱萸汤及其各组分对 ＴＰＨ２启动子活性的影响
王玉刚，雷帆，王秀坤，胡臖，詹宏磊，邢东明，杜力军
（清华大学 生物科学与技术系 药物药理研究室，北京 １０００８４）
［摘要］ 目的：利用分子生物技术构建色氨酸羟化酶（ＴＰＨ２）启动子调控红色荧光蛋白（ｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＦＰ）转
基因细胞，以筛选吴茱萸汤及其各组成药物对 ＴＰＨ２启动子的调控活性，探讨其治疗偏头痛可能的分子靶点。方法：构建
ＴＰＨ２启动子调控红色荧光蛋白表达的转基因细胞系，观察统计不同给药组中细胞荧光强度的变化及发光细胞数量的变化。
结果：通过荧光细胞计数发现吴茱萸汤、吴茱萸、生姜、大枣水提物不同透析部分在不同浓度上对 ＴＰＨ２启动子转录活性具有
不同的调控作用。结论：吴茱萸汤治疗偏头痛的可能分子靶点与激活ＴＰＨ２表达有关。ＴＰＨ２启动子调控红色荧光蛋白表达
细胞模型可用于对以此为靶点的药物筛选和活性评价。
［关键词］ ＴＰＨ２；吴茱萸汤；吴茱萸；转录调控；ＰＣ１２细胞
［收稿日期］ ２００９０６０１
［基金项目］ 国家“十一五”科技支撑计划（２００６ＢＡＩ０８Ｂ０３０９）；中
国博士后科学基金（２００８０４４０４１８）
［通信作者］ 杜力军，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｊｕｎｄｕ＠ｍａｉｌ．ｔｓｉｎｇｈｕａ．ｅｄｕ．ｃｎ
偏头痛是一种由神经血管功能紊乱而引起的
顽固性病症。为常见病、多发病，主要表现为单侧或
双侧周期性发作的疾病，严重时影响工作和日常生
活。国际上普遍认为偏头痛的发生与脑内五羟色胺
（５ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ，５ＨＴ）含量异常上调有关，目
前已用于临床或正在研究中的针对偏头痛的药物大
部分的作用机制是通过稳定调控脑内交感神经、副
交感神经和５ＨＴ含量而达到防治的目的［１］。５ＨＴ
是一种单胺类神经递质，它参与多种机体对外界刺
激的非行为学反应，如情绪，焦虑，欲望，伤害感受，
警觉，睡眠等［２］。色胺能神经递质紊乱与众多精神
疾病相关，如抑郁症，双向型障碍症，精神分裂症，孤
独症，多动症及自杀行为等。在体内，５ＨＴ的生物
合成限速酶是色氨酸羟化酶（ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｈｙｄｒｏｘｙ
ｌａｓｅ，ＴＰＨ）［３］。ＴＰＨ有 ＴＰＨ１和 ＴＰＨ２两个亚
型［４］，其中ＴＰＨ２在脑内特异性高表达［５］，为脑内５
ＨＴ合成限速酶。
吴茱萸汤出自张仲景《伤寒论》，经历代医学家
应用治疗头痛效果良好，现代临床也多用来治疗偏
头痛［６］。药理实验表明，该药具有镇痛、改善脑膜
血流量、升高脑内 ５ＨＴ含量的作用［７８］，其中主要
为吴茱萸生物碱类、黄酮类以及人参皂苷类成
分［９］。为了研究吴茱萸汤治疗偏头痛的可能分子
机制，以及寻找吴茱萸汤中主要的药效物质，作者通
过构建ＴＰＨ２启动子调控红色荧光蛋白表达的细胞
系，通过观察测量红色荧光蛋白表达量的变化来反
应药物组分 ＴＰＨ２基因表达启动的干预，从而对吴
茱萸汤各组分进行活性筛选和评价。
１ 材料与方法
１．１ 受试药物 吴茱萸汤（中国中医科学院中药
研究所中药质量标准中心提供，批号 ０８０４０９４）。
吴茱萸汤及其各组成中药吴茱萸、人参、大枣、生姜
均用水提并经７０％乙醇沉淀，取上清液浓缩干燥。
使用时称取一定重量，用生理盐水溶解配至所需浓
度。将溶液置于相对分子质量１００Ｄ和５００Ｄ的透
析袋内，４℃蒸馏水透析过夜，取袋内溶液用于实
验。吴茱萸、人参、生姜和大枣各药材提取物均由上
述单位提供，其制备工艺及样品前处理同吴茱萸汤，
批 号 分 别 为：０８０４０９５，０８０４０９１０，０８０４０９８，
０８０４０９２。
１．２ 仪器 ＯｌｙｍｐｕｓＳＥＲＩＥＳ１２０荧光倒置显微镜；
北京六一仪器厂 ＤＹＹ７Ｃ型电泳仪；ＢＩＯＥＲＬｉｔｌｅ
ＧｅｎｉｕｓＰＣＲ仪；ＳＡＮＹＯＭＣＯ１５ＡＣＣＯ２细胞培养
箱；复日科技 ＦＲ２００Ａ全自动紫外与可见分析装
置。
１．３ 人ＴＰＨ２启动子ＤＮＡ片段获得 抽取健康男
性成年人全血 ５ｍＬ，用基因组抽提试剂盒（Ｔｉａｎ
ｇｅｎ）按照说明书操作步骤提取人基因组 ＤＮＡ。以
人基因组ＤＮＡ为模板，用ｐｒｉｍｅｒｐｒｅｍｉｅｒ５０设计引
物扩增 ＴＰＨ２的启动子序列：ｓｅｎｓｅ：５′ｃｔａｃａｔｇｔｇｇｃｔａ
ａａｔｇａａｃｃｃｔａｃ３′，ａｎｔｉｓｅｎｓｅ：５′ＡＣＡＴＣＡＴＣＡＴＴＧＣＴ
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ＧＧＣＴＧＣＡＴＧＧ３′。
１．４ ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒＲＦＰ表达重组质粒的构建 将
ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒ的 ＰＣＲ产物电泳分离纯化后用 Ｔ４
连接酶（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）连接到过渡载体 ｐＵＣＭ１８Ｔ载
体上，挑选正确连接的克隆并测序。将正确连接且
测序无误的质粒用 ＳａｃＩ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）３７℃酶切２ｈ，
将 ｐＤｓＲｅｄＥｘｐｒｅｓｓｅＮ１质粒用 ＡｓｅＩ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）３７
℃酶切２ｈ后分别用Ｋｌｅｎｏｗｆｒａｇｍｅｎｔ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）３７
℃补平１０ｍｉｎ，将产物用酚氯仿（Ｓａｎｇｏｎ）抽提后用
ＸｈｏＩ３７℃酶切２ｈ。将 ｐＤｓＲｅｄＥｘｐｒｅｓｓｅＮ１双酶切
的产物用 ＢＡＰＦ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）５５℃去磷酸化。将
ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒｐＵＣＭ１８Ｔ质粒和 ｐＤｓＲｅｄＥｘｐｒｅｓｓｅ
Ｎ１质粒双酶切的产物用Ｔ４连接酶连接。将连接子
转化入 ＤＨ５α感受态细胞中，挑取单克隆并 ＥｃｏＲＩ
（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ）酶切鉴定选择含正确连接质粒的菌种
并大量提取高纯度质粒。
１．５ 细胞转染与细胞培养 用含 １０％马血清
（Ｇｉｂｉｃｏ）和５％胎牛血清（四季青）ＲＰＭＩ１６４０细胞
培养基（Ｇｉｂｉｃｏ）培养的 ＰＣ１２细胞用阳离子脂质体
（Ｔｉａｎｇｅｎ）按照说明书在６孔板内将构建好的 ＴＰＨ２
ｐｒｏｍｏｔｅｒＲＦＰ转染入 ＰＣ１２细胞。转染２４ｈ后加入
终浓度为４００ｍｇ·Ｌ－１Ｇ４１８筛选转染细胞。７ｄ后
将细胞接种于９６孔板进行试验。
１．６ 给药及荧光拍照 用０１％的胰酶将转基因
细胞从６孔板中消化下来，按照５×１０５个／ｍＬ的细
胞浓度在９６孔板内每孔接种１００μＬ细胞悬液。在
细胞培养箱培养１２ｈ后，弃培养液，用 ＰＢＳ洗涤
细胞２次后给药。各药用含０１％马血清的 ＲＰＭＩ
１６４０细胞培养基配制。每个药按２倍浓度等比稀
释成６个浓度梯度，各药物各浓度做３复孔。对照
组给含０１％马血清的 ＲＰＭＩ１６４０细胞培养基。实
验重复 １遍。给药 １２ｈ后监测药物的细胞毒性。
按照最大无毒剂量将各药物按照２倍浓度等比稀释
配制成６个浓度梯度后给药，１２ｈ后将培养基吸
出，用ＰＢＳ漂洗２次后在荧光显微镜下用１０倍物
镜，１０倍目镜随即选取视野拍照，曝光时间固定
为４００ｍｓ。在每个孔内随机取３个无相互重叠的拍
照视野拍照。
１．７ 数据处理 用ＩｍａｇｅＪ软件扫描每张图片中可
见点的荧光密度，以扫描值大于等于２０００的荧光
点定义为一个荧光细胞，计数每一张图片中荧光细
胞。用ＳＰＳＳ１１０软件做各数据处理，单因素方差
分析，ｔ检验，以Ｐ＜００５为差异具有显著性。
２ 结果
２．１ 人ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒ片段的ＰＣＲ扩增及ＴＡ克隆
与分析 以人基因组 ＤＮＡ为模板，用引物 ｓｅｎｓｅ和
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ在６０℃退火条件下进行３５个ＰＣＲ反应循
环，将ＰＣＲ产物在１０％琼脂糖凝胶中电泳检测，只
得到１条１ｋｂ大小的特异条带，与目的条带大小吻
合。将用ＥｃｏＲＩ酶切鉴定选择的正向连接 ＴＡ克隆
菌液递交给上海生工生物技术有限公司测序，测序
结果与ＮＧ００８２７９通过ＢＬＡＳＴ程序进行比对，相似
度为１００％。
２．２ 人 ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒＲＦＰ表达质粒的鉴定 用
ＥｃｏＲＩ酶切鉴定选择转入正确连接的 ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔ
ｅｒＲＦＰ表达质粒的克隆，大量摇菌并提取质粒。以
该质粒为模板，用ｓｅｎｓｅ和 ａｎｔｉｓｅｎｓｅ，６０℃退火条件
下进行ＰＣＲ反应，能扩增出清晰的１ｋｂ大小的目的
条带。
２．３ ＰＣ１２转基因细胞的表达及鉴定 用阳离子脂
质体将 ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒＲＦＰ转染入 ＰＣ１２细胞３６ｈ
后用荧光显微镜观察，有大量细胞开始表达红色荧
光蛋白（图１）。将该细胞悬液作模板，用 ｓｅｎｓｅ和
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ在６０℃退火条件下进行ＰＣＲ反应，得到１
ｋｄ大小的特异条带。
Ａ．红色荧光细胞（荧光强度≥２０００）；
Ｂ．明场下同一视野中ＰＣ１２细胞。
图１ ＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒＲＦＰ转基因ＰＣ１２细胞
２．４ 药物对ＴＰＨ２基因表达启动的影响 给药１２
ｈ后对细胞红色荧光细胞进行计数。结果表明，在
给药１２ｈ后有４个组分对 ＴＰＨ２启动子有激活作
用，有２个组分对ＴＰＨ２启动子有抑制作用，有１个
组分对ＴＰＨ２启动子有不同的作用（图２，３），大枣
提取物没有激活作用。各给药组分和剂量对 ＴＰＨ２
启动子调控作用见表１。
３ 讨论
本研究成功地构建了ＴＰＨ２启动子调控红色荧
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Ａ．相对分子质量＜５００；Ｂ．相对分子质量＞１００和＞５００。
与对照组相比Ｐ＜００５；珋ｘ±ｓ，ｎ＝６。
图２ 不同相对分子质量吴茱萸提取物（ＷＺＹＨ）对ＴＰＨ２
启动子的调控活性
Ａ．吴茱萸汤（ＷＺＹＴ）；Ｂ．人参提取物；
Ｃ．生姜提取物。与对照组相比Ｐ＜００５。珋ｘ±ｓ，ｎ＝６。
图３ 不同分子量吴茱萸汤（ＷＺＹＴ）、人参、
生姜提取物对ＴＰＨ２启动子的调控活性
表１ 不同浓度药物药后１２ｈ对ＴＰＨ２
启动子的调控作用
组分（相对分子质量范围） 调控作用最低有效质量浓度／ｇ·Ｌ－１
吴茱萸汤（＜５００） 激活 ０１１
吴茱萸（＞１００） 激活 ０１５６
吴茱萸（＞５００） 激活 ０１５６
吴茱萸（＜５００） 抑制 ００２０８
人参（＞１００） 激活 ２６１
人参（＞１００） 抑制 ０１６３
人参（＞５００） 抑制 ０１６３
生姜（＞１００） 激活 ００１５
光蛋白表达的转基因细胞模型。在该模型中质粒
ｐＤｓＲｅｄＥｘｐｒｅｓｓｅＮ１调控红色荧光蛋白表达的 ＣＭＶ
启动子被ＴＰＨ２启动子替代，因此给药后红色荧光
蛋白表达量的变化直接反映并模拟了细胞受到药物
刺激后ＴＰＨ２基因表达的调控。
在实验拍摄中随机选取视野，曝光时间均为
４００ｍｓ，发光较弱的细胞在该曝光时间内不被感应。
以荧光细胞计数为指标进行ＴＰＨ２启动子调控 ＲＦＰ
表达差异的考察可以排除由于培养板各孔差异而带
来的荧光背景不一致等问题。为了保证荧光细胞计
数的客观性，实验中设定一固定的荧光强度（≥
２０００）为判断一个荧光细胞计数点的标准。
为了排除非特异性成分对实验结果的干扰，本
实验采用相对分子质量１００Ｄ透析袋进行样品前处
理的方法［１０］，以除去 ＜１００的小分子物质。由于天
然化合物多为相对分子质量 ＜５００的小分子物质，
因此实验中又以相对分子质量５００Ｄ透析袋进行样
品处理，以进一步考察活性物质的分子质量分布。
通过荧光细胞计数得出７个部分在处理细胞模
型１２ｈ后相对于对照组有统计学差异。吴茱萸提
取物＞１００和 ＞５００组分在细胞给药后荧光细胞计
数显著高于对照组，提示吴茱萸提取物中刺激ＴＰＨ２
转录激活的成分可能存在于 ＞５００的组分中，而吴
茱萸提取物＜５００组分对 ＴＰＨ２转录活性具有显著
抑制作用，提示吴茱萸提取物 ＜５００组分中含有抑
制ＴＰＨ２转录活性物质。人参提取物 ＞１００组分对
ＴＰＨ２启动子具有较特别的调控作用，当给药浓度
大于２６１ｇ·Ｌ－１时激活 ＴＰＨ２转录，小于０６５１ｇ
·Ｌ－１时抑制ＴＰＨ２转录。人参提取物＞５００组分在
０１６３～２６１ｇ·Ｌ－１对ＴＰＨ２转录起抑制作用，生姜
提取物 ＞１００组分在 ００１５～２４ｇ·Ｌ－１可激活
ＴＰＨ２转录，＞５００组分则没有明显的活性，提示其
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活性成分分子量主要集中在 １００～５００。吴茱萸
汤＜５００组分能激活ＴＰＨ２启动子，提示吴茱萸汤各
组成药物混合制备后其药效成分可能受到一定影
响，但综合的结果在一定浓度范围内仍表现出激活
ＴＰＨ２启动子作用。
吴茱萸汤及其各配伍药味的不同透析组分不同
浓度对ＴＰＨ２启动子分别有抑制作用和激活作用，
表明吴茱萸汤在调控体内 ５ＨＴ的双向性或复杂
性，这与其降低正常大鼠脑内５ＨＴ和升高模型大
鼠脑内５ＨＴ含量的报道有一定的一致性［１１］。提示
在不同的生理、病理状态下吴茱萸汤对其进行调控
的机制有所不同，尚有待于进一步研究。本研究利
用ＴＰＨ２启动子为分子靶点对吴茱萸汤及其各组分
进行活性评价，提示该方法对于以生物活性为指标
对吴茱萸汤及其各组分进行质量控制具有一定的可
行性。
［参考文献］
［１］ ＳｔｅｐｈｅｎＤＳｉｌｂｅｒｓｔｅｉｎ．Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍｉｇｒａｉｎｅ［Ｊ］．
ＴｒｅｎｄｓＰｈａｒｍａｃｏｌＳｃｉ，２００６，２７（８）：４１０．
［２］ ＬｕｃｋｉＩ．Ｔｈｅｓｐｅｃｔｒｕｍｏｆｂｅｈａｖｉｏｒｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄｂｙｓｅｒｏｔｏｎｉｎ［Ｊ］．
ＢｉｏｌＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，１９９８，４４：１５１．
［３］ ＨａｍｏｎＭ，ＢｏｕｒｇｏｉｎＳ，ＡｒｔａｕｄＦ，ｅｔａｌ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ
ｎｅｕｒｏｎａｌｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ［Ｊ］．ＡｄｖＥｘｐｅｒＭｅｄＢｉｏｌ，
１９８１，１３３：２３１．
［４］ ＷａｌｔｈｅｒＤＪ，ＰｅｔｅｒＪＵ，ＢａｓｈａｍｍａｋｈＳ，ｅｔａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｓｅｒｏ
ｔｏｎｉｎｂｙａｓｅｃｏｎｄｔｒｙｐｔｏｐｈａｎｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｉｓｏｆｏｒｍ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，
２００３，２９９：７６．
［５］ ＰａｒｅｓｈＤＰａｔｅｌ，ＣｒｙｓｔａｌＰｏｎｔｒｅｌｏ，ＳｈａｒｏｎＢｕｒｋｅ．Ｒｏｂｕｓｔａｎｄｔｉｓ
ｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＰＨ２ｖｅｒｓｕｓＴＰＨ１ｉｎｒａｔｒａｐｈｅａｎｄ
ｐｉｎｅａｌｇｌａｎｄ［Ｊ］．ＢｉｏｌＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００４，５５：４２８．
［６］ 刘红燕，刘春艳．吴茱萸汤治疗偏头痛３２例临床观察［Ｊ］．中
国中医急症，２００６，１５（６）：６０８．
［７］ 杜力军，李敏，孙虹，等．精制吴茱萸胶囊镇痛镇静和对脑血流
的作用［Ｊ］．中药药理与临床，１９９９，１５（５）：９．
［８］ 杜力军，孙虹，李敏，等．精致吴茱萸胶囊对偏头痛小鼠的作用
［Ｊ］．中药药理与临床，１９９９，１５（３）：３．
［９］ 杨秀伟，肖诗鹰，杨智，等．精制吴茱萸胶囊化学成分的研究
［Ｊ］．北京大学学报：医学版，２００１，３３（３）：２８０．
［１０］ 王秀坤，雷帆，曹兰秀，等．基于吴茱萸汤相关功效从平滑肌
角度探讨其质量控制的可行性［Ｊ］．世界科学技术———中医
药现代化，２００９，１１（２）：２４３．
［１１］ 肖诗鹰，杜力军，王智民，等．吴茱萸汤的研究与开发［Ｊ］．中
国中药杂志，１９９９，２４（８）：５０３．
ＲｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆＷｕｚｈｕｙｕｔａｎｇ（Ｅｖｏｄｉａｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）ａｎｄ
ｉｔｓｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｈｅｒｂｓｏｎＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒ
ＷＡＮＧＹｕｇａｎｇ，ＬＥＩＦａｎ，ＷＡＮＧＸｉｕｋｕｎ，ＨＵＪｕｎ，ＺＨＡＮＨｏｎｇｌｅｉ，ＸＩＮＧＤｏｎｇｍｉｎｇ，ＤＵＬｉｊｕｎ
（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｓｉｇｎｇｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８４，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＷｕｚｈｕｙｕｔａｎｇ（ＷＺＹＴ，Ｅｖｏｄｉａｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）ａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＷＺＹＴｏｎｔｈｅＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＷＺＹＴｏｎｍｉ
ｇｒａｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＢｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｎｇａＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＲｅｄＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｉｎｔｏＰＣ１２ｃｅｌ，ｔｈｅｇｌｏｂａｌ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｉｅｓａｎｄｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓｏｆｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｃｅｌｓａｆｔｅｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｅｒｅｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｙｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＷＺＹＴｗｉｔｈｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴＰＨ２
ｐｒｏｍｏｔｅｒｄｒｏｖｅＲｅｄＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｅｌｌｉｎｅｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｓｙｓｔｅｍｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｔａｒｇｅｔｉｎｇＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒａｃｔｉｖ
ｉｔｙ．ＴｈｅｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＷＺＹＴｏｎｍｉｇｒａｉｎｅｍａｙｄｕｅｔｏｉｔｓｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｅｆｅｃｔｓｏｎＴＰＨ２ｐｒｏｍｏｔｅｒ，ａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄ
ｒｅｌｅａｓｅｏｆ５ＨＴｉｎｃｅｒｅｂｒａｌ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｆｕｃｔｕｓｅｖｏｄｉａｅ；ＴＰＨ２；ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ；ｗｕｚｈｕｙｕｔａｎｇ；ＰＣ１２ｃｅｌｓ
［责任编辑 张宁宁］
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