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Vol.34，Issue 3
February，2009
第 34 卷第 3 期
2009 年 2 月
贵州道地药材坚龙胆指纹图谱研究
李 玮*，韩 双，王建科
（贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002）
4 坚 龙 胆 为 龙 胆 科 植 物 坚 龙 胆 Gentiana
rigescens Franch. 的根及根茎，主产于广西、贵州、
四川、云南等省[1]，为贵州道地药材。对其质量控
制，目前主要以单一有效成分含量作为其质量控制
的指标，从而将药材本身内部各种成分的综合作用
割裂开来，不能准确反映中药材的质量，可能离反
映中药的整体疗效的距离越远[2-3]。因此，有必要建
立坚龙胆药材有效的质量评价方法，对贵州不同产
地坚龙胆质量进行比较研究，确保药材质量稳定。
本实验按国家食品药品监督管理局 2000 年颁
发的“关于注射剂用中药材指纹图谱研究技术要
求”，采用药典委员会编写的“中药相似度评价软件”
系统，对贵州道地药材坚龙胆进行了 HPLC 指纹图
谱的方法建立。
1 材料
LC-20AT 高效液相色谱仪（SPD-20A 检测器、
LCsolution/Lite 色谱工作站），1/10 万电子天平
（AUW220D，日本岛津），超声清洗机（HS10260D，
天津恒奥科技公司）等；龙胆苦苷对照品（中国药
品生物制品检定所提供，批号 110770-2005110）；
乙腈（色谱纯，天津科密欧公司生产），其余试剂
均为分析纯。
坚龙胆药材共 10 批，经贵阳中医学院周汉华
副教授鉴定为龙胆科植物坚龙胆干燥根及根茎，见
表 1。
2 结果与分析
2.1 色谱条件 色谱柱为 Alltima C18（4.6 mm×250
mm，5 μm），检测波长 225 nm，柱温 30 ℃，流动
相乙腈-0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，运行时间 65 min。
0～30 min 乙腈从 5%线性梯度至 15%；30～65 min
线性梯度至 45%。流速 1.0 mL·min- 1；进样 10 μL。

[收稿日期] 2008-06-20
[基金项目] 教育部春晖计划项目（Z2005-1-52001）
[通讯作者] *李玮，Tel：13985177779，E-mail：lw64@sina.com
表 1 坚龙胆药材来源
No. 采集地 No. 采集地
1 大方 6 安顺
2 都匀 7 六枝
3 花溪 8 兴义
4 乌当 9 沿河
5 龙里 10 遵义

2.2 供试品溶液的制备 取样品粉末约 0.5 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，
称重，超声提取 40 min，放冷，称重，补足减失的
质量，滤过，取续滤液适量，以 0.45 μm 微孔滤膜
滤过，即得。
2.3 对照品溶液的制备 精密称取于 60 ℃干燥至
恒重的龙胆苦苷适量，加甲醇制成每 1 mL含 0.2 mg
的对照品溶液，摇匀，即得。
2.4 精密度试验 取同一份供试品溶液，重复进样
5 次，以龙胆苦苷峰为参照峰，对主要色谱峰的相
对保留时间及相对峰面积进行统计，RSD 分别在
0.57%和 2.98%以内，表明精密度良好。
2.5 重复性试验 取同一批号的供试品 5 份，按上
述方法进行测定，以龙胆苦苷峰为参照峰，对主要
色谱峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计，
RSD 分别在 1.05%和 2.89%以内，表明该方法的重
复性较好。
2.6 稳定性试验 取同一份样品，分别在 0，2，4，
6，12，24 h 进行检测，以龙胆苦苷峰为参照峰，
对主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积进行
统计，RSD 分别在 0.94%和 2.96%以内，表明在此
时间内供试品溶液的成分是稳定的。
2.7 样品测定 在优化的条件下，将供试品溶液分
别进样、测定各批次样品并记录其色谱图。
2.8 坚龙胆指纹图谱的建立
2.8.1 主要色谱峰的鉴定及参照峰的选择和定位
在优化色谱条件下，测定龙胆苦苷的对照图谱，在


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31.60 min 处出现色谱峰。与样品图谱中相应位置色
谱峰进行比较，其保留时间和紫外光谱与对照品一
致，故样品图谱中 5 号特征峰为龙胆苦苷。在各批
次药材图谱中龙胆苦苷的色谱峰分离良好，峰位居
中，且为所有样品共有，所以确定龙胆苦苷为参照
峰。
2.8.2 坚龙胆 HPLC 指纹图谱共有模式的建立 10
批坚龙胆药材按照同样方法制备供试品溶液，在同
样色谱条件下测定 HPLC 图，以中位数法筛选指纹
特征峰及色谱峰面积值，共确认特征峰 16 个，见
表 2。建立了坚龙胆 HPLC 指纹图谱共有模式，见
图 2。
表 2 坚龙胆 HPLC 指纹图谱共有模式特征峰表
No.
相对保留
时间/min
相对峰
面积 No.
相对保留
时间/min
相对
峰面积
1 0.349 8 0.008 2 9 1.419 2 0.014 9
2 0.669 9 0.022 5 10 1.460 0 0.021 9
3 0.853 9 0.072 7 11 1.522 3 0.011 1
4 0.960 7 0.006 9 12 1.608 2 0.008 0
5 1.000 0 1.000 0 13 1.644 9 0.011 0
6 1.036 0 0.011 6 14 1.744 6 0.011 6
7 1.373 4 0.017 9 15 1.775 6 0.010 2
8 1.408 4 0.038 7 16 1.850 7 0.011 7


1~16. 为特征峰；5. 龙胆苦苷。
图 2 坚龙胆 HPLC 指纹图谱

2.9 各产地药材指纹图谱相似度评价 采用中国
药典委员会指纹图谱相似度评价软件对上述 10 批
药材的指纹图谱进行相似度的分析。以相关系数
（中位数）代表其相似度，所得 10 批药材的相似
度分别为 0.997，0.998，0.988，0.997，0.998，0.977，
0.985，0.981，0.972，0.972。10 批药材的相似度
均在 0.970 以上，表明不同产地间药材质量比较稳
定。各产地药材指纹图谱见图 3。

图 3 10 批坚龙胆药材的指纹图谱比较

3 讨论
考察了不同波长下的指纹图谱，在 225 nm 处，
坚龙胆含有的主要成分环烯醚萜苷类等成分均有
较强的吸收，出峰数量多，故选择 225 nm 作为指
纹图谱的检测波长。不同厂家色谱柱的考察结果表
明，Alltima C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm） 相对于
另外2种色谱柱Dikma C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），
Gracesmart C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）而言，出
峰数量较多，分离度高，峰形对称性好，故选用
Alltima C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm） 色谱柱。柱
温的选择方面，比较了 20，25，30，35 ℃对色谱
分离的影响，柱温为 30 ℃时出峰数量较多，分离
度高，故确定柱温为 30 ℃。
在选择流动相时，用乙腈-0.1%磷酸溶液系统要
比甲醇-0.1%磷酸、甲醇-0.4%乙酸、乙腈-0.4%乙酸
溶液的系统分离度高，峰形对称性好。2 h 的图谱
显示 65 min 后再没有其他特征峰出现。
在供试品的制备上，分别采用水、50%甲醇、
50%乙醇、70%甲醇、70%乙醇、甲醇和乙醇对坚
龙胆药材进行提取，结果甲醇提取效率较高，色谱
峰数量最多，色谱峰的强度较大，主要成分的出峰
好，图谱稳定。
[参考文献]
[1] 肖培根. 新编中药志. 第 5 卷[M].北京：化学工业出版社，2007：
346，349.
[2] 中国药典.一部[S]. 2005：64.
[3] 谢培山. 中药色谱指纹图谱[M]. 北京：人民卫生出版社，2005：
6，13.
[责任编辑 鲍 雷]