全 文 ：竹节参总皂苷对脑缺血损伤大鼠海马
一氧化氮合酶的影响
赵 晖１，２，张秋霞１，穆 阳１
（１首都医科大学 中医药学院，北京 １０００６９；２北京中医药大学 中药学院，北京 １００１０２）
［摘要］ 目的：探讨竹节参总皂苷（ｔＲＰＪＳ）对脑缺血损伤的保护作用机制，观察药物对局灶性脑缺血大鼠和慢
性前脑缺血大鼠海马组织一氧化氮合酶（ＮＯＳ）及诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）的影响。方法：采用线栓法建立局灶
性脑缺血大鼠模型，双侧颈总动脉永久结扎方法制备慢性前脑缺血，研究竹节参总皂苷对这两种脑缺血损伤大鼠
模型海马组织ＮＯＳ，ｉＮＯＳ的影响。结果：与假手术组相比，局灶性脑缺血大鼠海马组织ＮＯＳ，ｉＮＯＳ含量均明显增高
（Ｐ＜００５），竹节参总皂苷能显著降低局灶性脑缺血大鼠ＮＯＳ，ｉＮＯＳ的含量（Ｐ＜００５）；慢性前脑缺血大鼠与假手
术组相比，海马组织总ＮＯＳ活力没有明显改变，ｉＮＯＳ含量增高（Ｐ＜００５），竹节参总皂苷能显著降低慢性前脑缺血
大鼠海马组织ｉＮＯＳ的含量（Ｐ＜００５）。结论：竹节参总皂苷抗缺血性海马神经元损伤与降低海马组织 ｉＮＯＳ的活
性有关。
［关键词］ 竹节参总皂苷；脑缺血；一氧化氮合酶
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０５０５５７０３
［收稿日期］ ２００７０９０９
［基金项目］ 北京市优秀人才资助项目（２００５１Ｄ０５０１８２３）
［通讯作者］ 赵晖，Ｔｅｌ：（０１０）８３９１１６３５，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｈｕｉ８９５７
＠ｓｉｎａｃｏｍ
一氧化氮（ＮＯ）是目前公认的一种信息传递分
子，在脑缺血损伤中具有神经保护和神经毒性两种
不同作用［１］。ＮＯ的双重作用除与自身复杂的理
化、生物学特性有关外，一氧化氮合酶（ＮＯＳ）作为
ＮＯ合成过程中的重要限速酶，是决定其双重作用
的关键因素。因此，对 ＮＯＳ的测定是深入研究 ＮＯ
生理病理作用的重要环节，从功能来分ＮＯＳ有结构
型（ｃＮＯＳ）和诱导型 （ｉＮＯＳ）两大类。目前认为
ｃＮＯＳ在生理状态下即有表达，瞬时产生的ＮＯ主要
与细胞信息传递有关，而ｉＮＯＳ被认为是一种 “病理
型的酶”，在免疫刺激后表达，持续产生的 ＮＯ与细
胞毒作用有关［２］。竹节参总皂苷（ｔＲＰＪＳ）是从五加
科植物竹节参ＰａｎａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓＣＡＭｅｙｅｒ根茎中提
取的主要有效活性部位，其主要成分包括竹节人参
皂苷（ｃｈｉｋｕｓｅｔｓｕｓａｐｎｉｎ）Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，人参皂苷（ｇｉｎ
ｓｅｎｏｓｉｄｅ）Ｒｄ，Ｒｅ，Ｒｇ１，Ｒｇ２，三七皂苷 Ｒ２（ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎ
ｏｓｉｄｅＲ２）。本室前期研究表明竹节参总皂苷对脑缺
血动物模型有很好的保护作用［３，４］。海马是脑组织
中对缺血、缺氧最敏感的区域之一，ＮＯＳ活力的变
化与海马神经元的损伤具有相关性。本实验拟通过
检测竹节参总皂苷对局灶性脑缺血和慢性前脑缺血
大鼠海马组织 ＮＯＳ及其亚型酶 ｉＮＯＳ活力的影响，
探讨抗脑缺血损伤的可能作用机制。
１ 材料
１１ 动物 ＳＤ雄性大鼠，清洁级，体重（３００～３２０
ｇ），由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，
合格证号ＳＣＸＫ（京）２００２０００３。
１２ 药品与试剂 ｔＲＰＪＳ（首都医科大学中医药学
院植化室提供，为淡黄色粉末，临用前用生理盐水稀
释至实验所需浓度），尼莫地平片剂（河北永丰药业
有限公司，批号２００７０１０６）；ＮＯＳ测定试剂盒、蛋白
质测定试剂盒（考马斯亮蓝法，均购自南京建成生
物工程研究所，批号２００７０４１６）。
１３ 仪器和设备 ７５２Ｎ型分光光度计（上海精密
科学仪器有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｇ型高速台式离心机
（上海医用分析仪器厂）；ＡＥＧ－２２０电子分析天平
（日本Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司）；ＤＹ８９－１型电动玻璃匀浆机
（宁波新芝生物科技股份有限公司）。
２ 方法与结果
２１ ｔＲＰＪＳ对局灶性脑缺血大鼠海马组织总 ＮＯＳ
及ｉＮＯＳ活性的影响 实验动物随机分为６组，即
ｔＲＰＪＳ组（２００，１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１），尼莫地平组
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第３３卷第５期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３３，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００８
（１０５ｍｇ·ｋｇ－１），假手术组，模型组。给药组均于
手术前３ｄ灌胃给药，模型组和假手术组给予生理
盐水，每日灌胃 １次。各组给药容积均为 １ｍＬ·
ｋｇ－１。第３天各组给药后２０ｍｉｎ手术，施行手术，
术后每８ｈ给药１次。
按文献方法制备局灶性脑缺血模型［５］。大鼠
以水合氯醛３５０ｍｇ·ｋｇ－１，ｉｐ麻醉，仰卧固定，颈正
中切口，依次暴露右侧颈总、颈外和颈内动脉，结扎
颈总动脉、颈外动脉，于颈总动脉分叉下方剪一切
口，将预先用酒精灯烧成圆头的尼龙线（长４ｃｍ，直
径０２０～０２５ｍｍ）置于颈内动脉１７～１８ｍｍ，到有
轻微阻力感为止，扎紧动脉残端，缝合皮肤。假手术
组大鼠麻醉后，仅暴露颈内外动脉分支，不闭塞大脑
中动脉。术中、术后室温严格控制在２４～２５℃，大
鼠体温维持在３６５～３７５℃。假手术组大鼠仅分
离右侧颈总、颈外和颈内动脉，不插入尼龙线。术后
２４ｈ，各组动物断头处死，在冰浴中分离大鼠缺血侧
海马（右侧），分离后的海马组织均称重后放入预冰
的生理盐水中，冰浴中制成１０％的组织匀浆，３０００
ｒ·ｍｉｎ－１，离心１０ｍｉｎ，取上清。按ＮＯＳ及蛋白质测
定试剂盒说明书分别进行测定。使用ＳＰＳＳ１００统
计软件，进行单因素方差分析。
结果表明大鼠局灶性脑缺血２４ｈ后，缺血侧海
马组织总 ＮＯＳ，ｉＮＯＳ的活性显著升高（Ｐ＜００５）；
与模型组比较，ｔＲＰＪＳ组（２００，１００ｍｇ·ｋｇ－１）海马
ＮＯＳ，ｉＮＯＳ的含量均明显降低（Ｐ＜００５）；ｔＲＰＪＳ５０
ｍｇ·ｋｇ－１组海马区的 ｉＮＯＳ的活性也较模型组显著
降低（Ｐ＜００５）（表１）。
表１ ｔＲＰＪＳ对局灶性脑缺血大鼠海马组织总ＮＯＳ，
ｉＮＯＳ的影响（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ｎ
ＮＯＳ
／Ｕ·ｍｇ－１
ｉＮＯＳ
／Ｕ·ｍｇ－１
假手术 － ９ ２４５８±０６２１１） ０７３１±０１９４１）
模型 － ９ ４５９５±１７３６ １４０４±０５５９
ｔＲＰＪＳ ２００ ９ ３１１５±１２４９１） ０８８４±０２７７１）
１００ １０ ２７２５±１０７３１） ０９１８±０１９５１）
５０ ９ ３３１７±０６８３ １０３３±０４２６１）
尼莫地平 １０５ １０ ３０２６±０７３６１） ０７７４±０１９８１）
注：与模型组比较１）Ｐ＜００５（表２同）
２２ ｔＲＰＪＳ对慢性前脑缺血大鼠海马组织总 ＮＯＳ，
ｉＮＯＳ活性的影响 实验动物分组及给药方法同上，
按照文献［６］，采用双侧颈总动脉永久结扎方法制
备慢性前脑缺血大鼠模型。具体方法为大鼠麻醉，
仰卧固定，颈正中切口，分离双侧颈总动脉后用０号
线分别结扎其远近端，并从中间剪断以确保阻断颈
动脉血流，术后缝合切口。假手术组大鼠除不结
扎双侧颈总动脉外，余处理同缺血组大鼠。术后２０
ｄ各组动物断头处死，在冰浴中分离大鼠海马，冰浴
中制成１０％的组织匀浆，３０００ｒ·ｍｉｎ－１，离心 １０
ｍｉｎ，取上清。ＮＯＳ、蛋白质测定及统计方法同上。
结果表明慢性前脑缺血大鼠海马区总 ＮＯＳ的
含量比假手术组没有明显差异，但 ｉＮＯＳ的活性显
著升高（Ｐ＜００５）。ｔＲＰＪＳ（２００，１００ｍｇ·ｋｇ－１）组
动物与模型组比较海马区的 ｉＮＯＳ的活性明显降低
（Ｐ＜００５）（表２）。
表２ ｔＲＰＪＳ对慢性前脑缺血大鼠海马总ＮＯＳ，
ｉＮＯＳ的影响（珋ｘ±ｓ）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ｎ
ＮＯＳ
／Ｕ·ｍｇ－１
ｉＮＯＳ
／Ｕ·ｍｇ－１
假手术 － ９ ２５０２±０３８２ ０６７９±０５１３１）
模型 － ９ ３６９７±０８４２ １３７３±０３５８
ｔＲＰＪＳ ２００ １０ ２６７３±１０８６ ０８０１±０４５９１）
１００ １０ ３２５０±１８９１ ０９２３±０３２８１）
５０ ９ ３１８２±２０６４ １０２７±０５６４
尼莫地平 １０５ ９ ３４６４±０９８３ ０８８０±４７３１）
３ 讨论
一氧化氮在脑内具有重要的血管和神经作用，
在脑缺血病理生理过程中具有双重作用，既参与脑
缺血急性期脑损伤，迟发性神经元死亡过程，又具有
一定的神经保护作用。ＮＯ是以 Ｌ精氨酸为底物，
在一氧化氮合酶（ＮＯＳ）催化下产生的。存在于神经
元、血管内皮细胞和平滑肌细胞中的 ｃＮＯＳ产生的
ＮＯ主要与信息传递、局部脑血流量的调节和血管
内皮细胞抗黏附功能有关；ｉＮＯＳ主要存在于各种胶
质细胞、浸润的中性粒细胞及巨噬细胞内，其产生的
ＮＯ量大，时间长，主要起细胞毒性作用。不同来源
的ＮＯ在脑缺血损伤中所起的作用是不同的，脑缺
血发生后即有短暂的 ＮＯ增高，主要由 ｃＮＯＳ介导，
由于其短暂的特性，较少可能产生神经毒性作用，相
反，它通过 ＮＯ／ｃＧＭＰ途径扩张脑血管，增加脑血
流，抗血小板聚集，从而对抗缺血性脑损伤，起着保
护作用，研究表明缺血后３ｄｃＮＯＳ活性持续升高达
到峰值，７ｄ后ｃＮＯＳ活性下降［７］。脑缺血损伤２４ｈ
后出现延迟性的更为明显的ＮＯ升高，ｉＮＯＳ是介导
此期ＮＯ合成的主要限速酶。ｉＮＯＳ受基因转录水
平调控，为非钙离子／钙调蛋白依赖性酶，，一旦形成
·８５５·
第３３卷第５期
２００８年３月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ３３，Ｉｓｓｕｅ ５
Ｍａｒｃｈ，２００８