全 文 ：ｂｅｔａｔｏｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｓｃｉ
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Ｅｆｅｃｔｏｆｐｕｅｒａｒｉｎａｎｄｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｏｎ
ｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡβ２５３５
ＷＡＮＧＹｕ，ＷＡＮＨａｉｔｏｎｇ，ＹＡＮＷｅｉｍｉｎ，ＹＡＮＧＪｉｅｈｏｎｇ，ＧＵＯＹｉｎｇ，ＰＡＮＹｕａｎｊｉａｎｇ，ＨＡＮＪｉｎ，ＹＵＱｉｎ
（ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣａｒｄｉｏｃｅｒｅｂｒｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｆＭＤＡ，ＳＯＤ，ＬＤＨｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｊｕｒｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｍ
ｙｌｏｉｄｂｅｔａｐｒｏｔｅｉｎ（Ａβ２５３５）ａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｅｃｔｏｆｐｕｅｒａｒｉｎａｎｄｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｐｒｉｍａｒｙｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｗｅｒｅｃｕｌ
ｔｕｒｅｄａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡβ２５３５．ＴｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆＭＤＡ，ＳＯＤａｎｄＬＤＨｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄａｆｔｅｒｅｘ
ｐｏｓｅｄｔｏＡβ２５３５，ｐｕｅｒａｒｉｎａｎｄｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＡｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ（ＡＤ）ｍｏｄｅｌｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐ
ｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓ．ＡＤｇｒｏｕｐｈａｓｒｅｍａｒｋａｂｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄＭＤＡａｎｄＬＤＨｌｅｖｅｌ，ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄＳＯＤｌｅｖｅｌ，Ｐｉｒａｃｅｔａｎｇｒｏｕｐａｎｄｃｏｍｂｉｎｅｄ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｇｒｏｕｐｏｆｈａｖｅｒｅｍａｒｋａｂｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄＭＤＡａｎｄＬＤＨｌｅｖｅｌａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄＳＯＤｌｅｖｅｌ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＡＤｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００１）．
ＬｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈｐｕｅｒａｒｉｎｇｒｏｕｐｈａｓｒｅｍａｒｋａｂｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄＭＤＡａｎｄＬＤＨｌｅｖｅｌａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄＳＯＤｌｅｖｅｌ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｌｉｇｕｓ
ｔｒａｚｉｎｅｇｒｏｕｐａｎｄｐｕｅｒａｒｉｎｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａβ２５３５ｃａｎｉｎｄｕｃｅｃｕｌｔｕｒｅｄｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｊｕｒｙ，ｃｏｍｂｉｎｅｄａｐ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ，ａｎｄｐｕｅｒａｒｉｎｃａｎａｌｅｖｉａｔｅｔｈｅｉｎｊｕｒｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒｄｉｓｅａｓｅ；ａｍｙｌｏｉｄｂｅｔａｐｒｏｔｅｉｎ；ｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅ；ｐｕｅｒａｒｉｎ；ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓ；ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０５２０
［基金项目］ 福建省教育厅项目（ＪＡ０５２０１）
［通讯作者］ 陈元仲，Ｔｅｌ：（０５９１）８３３５７８９６，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｙｚ＠ｐｕｂ３．ｆｚ．ｆｊ．ｃｎ
不同寄主红花桑寄生总黄酮提取物
抗白血病细胞株 ＨＬ６０的研究
肖义军１，２，陈元仲１，陈炳华２，陈建华１，２，林振兴１，范延丽２
（１．福建医科大学 附属协和医院 福建省血液病研究所，福建 福州 ３５０００１；
２．福建师范大学 生命科学学院，福建 福州 ３５０１０８）
［摘要］ 目的：比较不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外抗肿瘤效果。方法：用８０％乙醇提取、聚
酰胺柱层析分离了从寄主分别为夹竹桃、桑树、无患子和桂花的红花桑寄生总黄酮，硝酸铝显色法测定其中的黄酮
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第３３卷第４期
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含量；ＭＴＴ法分析不同寄主来源的红花桑寄生总黄酮提取物体外对人白血病细胞株 ＨＬ６０细胞增殖抑制效果；
ＡＯ／ＥＢ荧光染色观察和ＤＮＡ片段化分析检测了寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对ＨＬ６０细胞凋亡的诱
导，流式细胞术分析细胞凋亡率和细胞周期分布。结果：寄主为夹竹桃的红花桑寄生总黄酮提取物对 ＨＬ６０细胞
增殖有很强的抑制作用，作用４８ｈ的ＩＣ５０值为０６０ｍｇ·Ｌ
－１，桑树寄生的效果次之，ＩＣ５０值为２４９ｍｇ·Ｌ
－１，无患
子寄生ＩＣ５０值为８３８９ｍｇ·Ｌ
－１，桂花寄生在检测的浓度范围内基本无抑制作用；夹竹桃寄生总黄酮提取物通过阻
滞ＨＬ６０细胞周期于Ｇ０Ｇ１期和诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。结论：红花桑寄生总黄酮提取物抗肿瘤效果与
其寄主相关，以寄主为夹竹桃者效果最好。
［关键词］ 红花桑寄生；夹竹桃；总黄酮；强心苷；ＨＬ６０；细胞增殖；细胞凋亡
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０４２８０５
桑寄生科植物在我国有广泛的资源，是一种常
用中药，为《神农本草经》上品，有补肝肾、强筋骨、
祛风湿、养血安胎和降血压的功能。近年来的研究
显示黄酮类化合物具有多方面的抗肿瘤作用，而桑
寄生科植物普遍富含黄酮类化合物。对于半寄生性
植物来说，由于宿主的成分与寄主相关，寄生于不同
寄主植物的红花桑寄生成分可能不完全相同。笔者
以体外培养的人急性白血病细胞株 ＨＬ６０为模型，
研究了我国南方地区常见的桑寄生科植物———红花
桑寄生总黄酮提取物的体外抗肿瘤作用，并比较了
４种不同寄主来源提取物的体外抑瘤效果。
１ 材料
１．１ 药材
红花桑寄生ＳｃｕｒｕｌａｐａｒａｓｉｔｉｃａＬ．叶采自福州市
仓山区，寄主分别为夹竹桃ＮｅｒｉｕｍｉｎｄｉｃｕｍＭｉｌ．、桑
树ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ．、桂花ＯｐｓｍａｎｔｈｕｓｆｒａｇｒａｎｓＬｏｕｒｓ．和
无患子ＳａｐｉｎｄｕｓｍｕｌｏｒｏｓｉＧａｅｒｔｎ．，均在２００５年５月
采集。药材经福建师范大学生命科学学院植物学教
研室陈炳华副教授鉴定，标本保存在福建师范大学
细胞生物学实验室。
１．２ 试剂
芦丁和槲皮素购自中国药品生物制品检定所
（批号分别为 １０００８０２００３０６和 １０００８１２００４０６）。
聚酰胺粉（１００～２００目，浙江台州路桥四甲生化塑
料厂，批号 ２００４０８１２），硅胶 Ｇ２５４（青岛海洋化工
厂，批号２００００３３１），胎牛血清（杭州四季青公司，批
号 ２００３０８１２），ＲＰＭＩ１６４０（Ｇｉｂｃｏ公 司，批 号
１２０１２４５），丫啶橙（ＡＯ，Ｆｌｕｋａ公司），溴化乙锭（ＥＢ，
华美公司），细胞周期检测试剂盒（北京天来生物公
司，批号０６０６１２），ＭＴＴ，ＲＮａｓｅＡ和蛋白酶 Ｋ均为
Ｓｉｇｍａ公司产品，其他试剂为国产分析纯。
１．３ 仪器
细胞培养箱（ＨＥＡＬＦＯＲＣＥ），流式细胞仪（ＢＤ
公司，ＦＡＣＳｃａｎ），荧光显微镜（Ｎｉｋｏｎ，ＴＥ２０００－Ｕ
型），旋转蒸发器（上海亚荣），９６孔细胞培养板
（Ｃｏｓｔａｒ），酶标仪（Ｓｔａｔ，Ｆａｘ－２１００型）。
２ 方法
２．１ 总黄酮提取物的制备［１］
２．１．１ 提取 药材洗净烘干后粉碎，过６０目筛，分
别称取约１００ｇ，加８倍量８０％乙醇回流提取，每次
４ｈ，重复提取３次，合并３次提取液抽滤。滤液加
蒸馏水调整至含醇约６０％～７０％，放４℃冰箱过夜
以使色素和油脂析出，趁冷抽滤除去色素和油脂，再
用等量石油醚萃取进一步除去色素和油脂。浓缩滤
液得浸膏。浸膏加１／３量聚酰胺粉拌成糊状，６０℃
干燥后研磨成细粉备用。
２．１．２ 分离 采用聚酰胺柱色谱法。取预处理过
的聚酰胺粉用蒸馏水湿法装柱，静置过夜。第２天
将样品粉末轻轻加于柱顶端，样品与聚酰胺的比例
大约为１∶８；分别用蒸馏水，１０％，３０％，５０％，７０％，
９０％乙醇顺序洗脱，控制流速为每分钟约１ｍＬ，每
个梯度洗至基本无色后换下一梯度，分别收集各梯
度洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥。由于蒸馏水和
１０％乙醇洗脱部分主要是一些小分子糖类物质，因
此将３０％，５０％，７０％，９０％乙醇洗脱部分混匀，得
总黄酮提取物。
２．２ 提取物中黄酮含量的测定
总黄酮含量测定采用硝酸铝显色法［２］。以芦
丁为标准对照品绘制标准曲线，用最小二乘法以质
量浓度（Ｃ，ｍｇ·ｍＬ－１）与吸光度值（Ａ５１０ｎｍ）进行线
性回归，得回归方程 Ａ＝１１３５７Ｃ＋０００４９，ｒ＝
０９９９９，其线性范围为００～０５ｍｇ·ｍＬ－１。将待
测样液用３０％乙醇定容至５ｍＬ，分别加５％ ＮａＮＯ２
０３ｍＬ摇匀，室温放置６ｍｉｎ，加１０％Ａｌ（ＮＯ３）３０３
ｍＬ，摇匀，室温放置６ｍｉｎ后，加入１ｍｏｌ·Ｌ－１ＮａＯＨ
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溶液４ｍＬ和蒸馏水０４ｍＬ，摇匀，放置１５ｍｉｎ，测
Ａ５１０，依据回归方程计算样品液中黄酮的含量。
２．３ 强心苷的检测［１］
采用三氯乙酸过氧化氢反应、ＫｅｌｅｒＫｉｌｉａｎｉ反
应和薄层色谱后Ｋｅｄｄｅ试剂显色进行提取物中含强
心苷的定性检测。
２．４ 强心苷的分离制备
寄生于夹竹桃的红花桑寄生叶和夹竹桃叶分别
洗净烘干后粉碎，８０％乙醇回流提取。滤液除去色素
和油脂，减压浓缩除去乙醇，浓缩水溶液用等量氯仿
萃取３次，合并３次萃取液，减压浓缩得总强心苷。
２．５ 细胞株及培养
人急性髓系白血病细胞株 ＨＬ６０购自美国典
型物保藏中心（ＡＴＣＣ），福建省血液病研究所传代
保存。用含１０％胎牛血清的 ＲＰＭＩ１６４０培养液培
养，置 ３７℃，５％ＣＯ２饱和湿度的培养箱中培养。
２～３ｄ传代１次，取对数生长期细胞用于实验。
２．６ 细胞增殖抑制实验
４×１０４个细胞／孔，药物终质量浓度分别为
５００，１００，２０，０４，００８，００１６ｍｇ·Ｌ－１，阴性对
照组含等量浓度二甲亚砜（ＤＭＳＯ），每组４个复孔。
孵育４８ｈ后采用ＭＴＴ法［３］检测ＨＬ６０细胞增殖的
变化情况。采用４９２ｎｍ和６３０ｎｍ双波长测 Ａ，计
算各组的细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率（％）＝
（１－用药组平均 Ａ／对照组平均 Ａ）×１００％。Ｌｏｇｉｔ
法计算药物浓度的半数抑制率（ＩＣ５０）值，重复３次，
取平均值。
２．７ 夹竹桃寄生的红花桑寄生总黄酮提取物（以
下简称ＮＩＳＰＥＸ）诱导ＨＬ６０细胞凋亡的检测
２．７．１ ＡＯ／ＥＢ荧光染色［４］ ＡＯ，ＥＢ分别用 ＰＢＳ
（ｐＨ７２）配成１００ｍｇ·Ｌ－１的储备液，４℃避光保
存，用前等量混合。分别取对照组与０７５ｍｇ·Ｌ－１
ＮＩＳＰＥＸ处理３，６，１２，２４，４８，７２ｈ的 ＨＬ６０细胞悬
液９５μＬ置 ９６孔板中，加入 ５μＬＡＯ／ＥＢ染液混
匀，立即置荧光显微镜下观察。核染色质着绿色并
呈固缩状或碎块状的为早期凋亡细胞，核染色质被
染成橘黄色并呈固缩状或碎块状为晚期凋亡细胞。
２．７．２ 细胞 ＤＮＡ片段化检测 收集对照组和
０７５ｍｇ·Ｌ－１ＮＩＳＰＥＸ处理１２，２４和４８ｈ的 ＨＬ６０
细胞，每组约１×１０６个细胞，ＰＢＳ洗涤后离心沉淀细
胞，加入细胞裂解液（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ，１０ｍｍｏｌ
·Ｌ－１ＴｒｉｓＨＣｌ，１％ＳＤＳ）充分裂解细胞，加入 ＲＮａｓｅ
Ａ３７℃孵育３ｈ后，再加入２０ｇ·Ｌ－１蛋白酶 Ｋ３７
℃过夜。取２０μＬ的上述反应物经１５％琼脂糖凝
胶电泳，紫外灯下观察结果。
２．７．３ ＤＮＡ倍体分析及细胞周期分析 收集对照
组和０７５ｍｇ·Ｌ－１ＮＩＳＰＥＸ处理１２，２４，４８和７２ｈ
的ＨＬ６０细胞，每组约１×１０６个细胞，ＰＢＳ洗涤后离
心沉淀细胞，采用细胞周期检测试剂盒处理，按说明
书操作，上流式细胞仪检测，重复３次。
３ 结果
３．１ ４种不同寄主红花桑寄生提取物中总黄酮含
量
４种不同寄主的红花桑寄生总黄酮提取物中以
桑树寄生的黄酮含量最高，为７８７７％，夹竹桃寄生
次之，为７２３７％，无患子和桂花寄生中的均较低，
分别为４３４１％和５２３２％。
３．２ 强心苷显色反应检测结果
检测结果显示，夹竹桃寄生的红花桑寄生总黄
酮中含强心苷，其强心苷斑点与夹竹桃中的强心苷
斑点的Ｒｆ值（０８２）相同。而寄主为桑树、桂花和
无患子的红花桑寄生提取物中不含强心苷。
３．３ ４种不同寄主红花桑寄生提取物抑制 ＨＬ６０
细胞增殖的效果比较
不同寄主提取物抑制效果不同，抑制率以夹竹桃
寄生为最高，４８ｈ的ＩＣ５０值为０６０ｍｇ·Ｌ
－１；桑树寄生
次之，ＩＣ５０值为２４９ｍｇ·Ｌ
－１；无患子寄生又次之，ＩＣ５０
值为８３８９ｍｇ·Ｌ－１；桂花寄生在检测的浓度范围内基
本无抑制作用（图１）。采用氯仿萃取去除ＮＩＳＰＥＸ中
的强心苷后，其抑制率与槲皮素相近（图２）。
图１ 不同寄主红花桑寄生提取物处理４８ｈ对
ＨＬ６０细胞的抑制率（ｎ＝１２）
３．４ 夹竹桃寄生的红花桑寄生强心苷与夹竹桃强
心苷抑制ＨＬ６０细胞增殖的效果比较
从图３可以看出，夹竹桃强心苷的抑制作用强，
作用４８ｈ时的 ＩＣ５０值为００２１ｍｇ·Ｌ
－１，而红花桑
寄生强心苷的ＩＣ５０值为０２７１ｍｇ·Ｌ
－１。
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图２ ＮＩＳＰＥＸ与去强心苷的ＮＩＳＰＥＸ处理４８ｈ对
ＨＬ６０细胞的抑制率（ｎ＝１２）
图３ 红花桑寄生强心苷与夹竹桃强心苷处理４８ｈ对
ＨＬ６０细胞的抑制率（ｎ＝１２）
３．５ ＡＯ／ＥＢ荧光染色观察细胞凋亡发生的过程
荧光显微镜下观察，细胞经 ＮＩＳＰＥＸ处理后 ６
ｈ，形态没有明显改变，与对照组一样，偶见坏死细
胞；１２ｈ时细胞逐渐开始凋亡，以正常细胞和胞核
呈绿色颗粒状的早期凋亡细胞为主；２４ｈ后细胞大
多凋亡，以早期凋亡细胞为多见，晚期凋亡细胞也开
始大量出现（图４），４８ｈ后细胞基本处于凋亡晚期
和坏死状态。
３．６ ＤＮＡ片段化检测
图４ ＮＩＳＰＥＸ处理前后的ＨＬ６０细胞
ＡＯ／ＥＢ染色照片（×２００）
Ａ．对照组；Ｂ．０７５ｍｇ·Ｌ－１处理２４ｈ
ＮＩＳＰＥＸ处理 ＨＬ６０细胞１２，２４，４８ｈ后，均出
现明显的细胞凋亡特征性ＤＮＡ梯带，而对照组未见
凋亡特异性梯带（图５）。
图５ ０７５ｍｇ·Ｌ－１ＮＩＳＰＥＸ处理ＨＬ６０细胞
ＤＮＡ片段化检测结果
１．对照组；２．处理４８ｈ；３．处理２４ｈ；４．处理１２ｈ
３．７ ＤＮＡ倍体分析及细胞周期分析检测结果
ＮＩＳＰＥＸ处理 ＨＬ６０细胞后１２，２４，４８，７２ｈ均
可见到亚二倍体峰，且随时间增加比例明显增高，而
对照组细胞在任何时段均未见到亚二倍体峰；周期
分析表明，ＮＩＳＰＥＸ处理后 Ｓ期细胞数量逐渐下降，
细胞周期被阻滞在Ｇ０Ｇ１期（表１）。
表１ ０７５ｍｇ·Ｌ－１ＮＩＳＰＥＸ处理后ＨＬ６０细胞周期变化及凋亡率（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３）
组别 Ｇ０Ｇ１ Ｓ Ｇ２ 凋亡率／％
对照 ３８８±８１ ４８０±１０２ １３２±２６
处理１２ｈ ３０４±７３ ５０２±１０３ １９５±４３ ２８３±８２
处理２４ｈ ５４７±８１２） ３３０±７１１） １２４±２４ ５６３±１２１
处理４８ｈ ６９５±１０２２） １５９±３１２） １４６±３７ ４８６±１２３
处理７２ｈ ７２６±９１２） １０７±３２２） １６７±３８ ７６６±４３
注：与对照组比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１
４ 讨论
实验结果显示，不同寄主的红花桑寄生总黄酮
提取物抑瘤效果不同，所含成分也有差别。寄主为
夹竹桃者含有与夹竹桃相关的强心苷类成分，其总
黄酮提取物具有较强的体外抑瘤作用，通过抑制肿
瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用，
它对肿瘤细胞增殖的抑制是将细胞周期阻滞在 Ｇ０
Ｇ１期；研究结果还显示，其中的主要细胞毒成分可
能是强心苷。寄生于其他３种寄主的红花桑寄生不
含强心苷类成分，其各自的抑瘤效果有所差别。寄
主影响半寄生类植物的成分和药效可能是一种普遍
现象。槲寄生提取物在欧洲是一种广为应用的抗肿
瘤药，有研究表明其抗肿瘤效果与寄主相关，不同寄
主来源的提取物诱导肿瘤细胞凋亡的效果不
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同［５，６］。
黄酮类化合物具有多方面的抗肿瘤作用，可以
抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡，逆转肿瘤细
胞多药耐药，干预肿瘤细胞信号转导，促进抑癌基因
表达、抑制癌基因表达及抑制热休克蛋白合成、抑制
新生血管生成、抗转移和免疫调节等，而且对正常细
胞无毒性或低毒性。不少强心甾类化合物对人类肿
瘤细胞具有强烈的选择性细胞毒作用。瑞典的
Ｓｔｅｎｋｖｉｓｔ等［７］通过流行病学调查发现，使用洋地黄
药物的乳腺癌病人５年后复发率比未使用者低９６
倍；长期跟踪调查发现使用洋地黄药物者的乳腺癌
病人手术后２０多年（平均２３３年）后的死亡率为
６％，而未使用者为３４％。本世纪以来国际上对强
心甾抗肿瘤的研究逐渐增多，目前已有的研究表明，
强心苷类药物具有很强的选择性诱导肿瘤细胞凋亡
的作用，也有抑制新生血管生成、逆转肿瘤细胞耐药
性的作用，还可增敏放化疗的效果。
夹竹桃中含强心苷类成分，寄生在夹竹桃上的
桑寄生因此也含强心苷。《中国药典》规定桑寄生
药材须做强心苷检查，含强心苷类成分的桑寄生须
作为有毒药材予以剔除。传统上红花桑寄生常作为
桑寄生Ｔａｘｉｌｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（ＤＣ．）Ｄａｎｓｅｒ的代用品入
药，主要用于风湿、关节痛、高血压、坐骨神经痛、腰
痛、产后乳少等症。本研究结果表明，寄主为夹竹桃
上的红花桑寄生总黄酮提取物因含强心苷而具有更
好的体外抗肿瘤效果，体内研究也发现它有较强的
抑制ＨＬ６０裸鼠移植瘤的效果［８］，提示用于传统治
疗目的时须作为有毒药材剔除的寄主为夹竹桃的桑
寄生（包括红花桑寄生等桑寄生科植物）可能是一
种具有较好抗肿瘤作用的药材。目前一种商品名为
Ａｎｖｉｒｚｅｌ的抗肿瘤夹竹桃水提物在美国正在进行二
期临床研究［９］，其中的主要细胞毒成分是夹竹桃苷
（ｏｌｅａｎｄｒｉｎ）。目前的研究表明 Ａｎｖｉｒｚｅｌ在前列腺癌
和乳腺癌治疗方面有较好疗效。
寄生于夹竹桃的红花桑寄生强心苷与夹竹桃的
强心苷对ＨＬ６０细胞的ＩＣ５０值相差约１３倍，可能是
因为纯度的不同，也可能它们的结构并不完全一样，
作者采用ＬＣＭＳ技术分析了红花桑寄生中所含强
心苷的相对分子质量，与夹竹桃强心苷的相对分子
质量对比，两种成分的相对分子质量相差２Ｄ（未发
表资料）。进一步研究红花桑寄生中的强心苷结构
和含量是下一步要做的工作。
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ｍｏｎｏｃｙｔｉｃｃｅｌｌｉｎｅｓｔｏｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｅｆｅｃｔｓｏｆＶｉｓｃｕｍａｌｂｕｍｅｘ
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ｌｉｎｅｓＰＣ３ａｎｄＤＵ１４５ｂｙａｎｖｉｒｚｅｌａｎｄｉｔｓｃａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｃｏｍｐｏ
ｎｅｎｔ，ｏｌｅａｎｄｒｉｎ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００１，６２（４）：４６９．
ＳｔｕｄｙｏｎｃｙｔｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｎｈｕｍａｎｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅＨＬ６０ｂｙ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＳｃｕｒｒｕｌａｐａｒａｓｉｔｉｃａｆｒｏｍｆｏｕｒｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｔｒｅｅｓ
ＸＩＡＯＹｉｊｕｎ１，２，ＣＨＥＮＹｕａｎｚｈｏｎｇ１，ＣＨＥＮＢｉｎｇｈｕａ２，ＣＨＥＮＪｉａｎｈｕａ１，２，ＬＩＮＺｈｅｎｘｉｎｇ１，ＦＡＮＹａｎｌｉ２
（１．ＦｕｊｉａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＡｆｉｌｉａｔｅｄＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｊｉａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＦｕｊｉａｎＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ３５０１０８，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅａｎｔｉｃａｎｃｅｒｅｆｅｃｔｓｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＳｃｕｒｕｌａｐａｒａｓｉｔｉｃａｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｔｒｅｅｓ
·１３４·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
ｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄ：８０％ ｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＳ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａｐａｒａｓｉｔｉｚｉｎｇｏｎＮｅｒｎｉｕｍｉｎｄｉｃｕｍ，Ｍｏｒｕｓａｌｂａ，Ｏｐｓｍａｎｔｈｕｓｆｒａｇｒａｎｓ，ａｎｄＳａｐｉｎ
ｄｕｓｍｕｌｏｒｏｓｉｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｐｏｌｙａｍｉｄｅｓｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄｔｈｅｅｌｕａｔｅｓｏｆ３０％，５０％，７０％ ａｎｄ９０％ ｅｔｈａｎｏｌｗｅｒｅｍｉｘｅｄａｓ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｓ．ＨｕｍａｎａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｉｎｅＨＬ６０ｗａｓｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｄｕｃｅｄｂｙｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆ
Ｓ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａＬｗｉｔｈＭＴＴａｓｓａｙ．ＡｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＡＯ／ＥＢｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｓ
ａｎｄｃｅｌｃｙｃｌｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＥｘｔｒａｃｔｏｆＳ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａｐａｒａｓｉｔｉｚｉｎｇｏｎＮ．ｉｎｄｉｃｕｍ（ＮＩＳ
ＰＥＸ）ｗａｓｔｈｅｍｏｓｔｓｅｎｓｉｔｉｖｅｔｏＨＬ６０ｃｅｌｓｏｆｔｈｅ４ｄｉｆｅｒｅｎｔｈｏｓｔｔｒｅｅｓ，ｔｈｅＩＣ５０ｖａｌｕｅｂｅｉｎｇ０６０ｍｇ·Ｌ
－１；ａｎｄｅｘｔｒａｃｔｏｆＳ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａ
ｐａｒａｓｉｔｉｚｉｎｇｏｎＭａｌｂａｔｏｏｋｔｈｅｓｅｃｏｎｄｐｌａｃｅ，ｔｈｅＩＣ５０ｖａｌｕｅ，ｂｅｉｎｇ２４９ｍｇ·Ｌ
－１；ｅｘｔｒａｃｔｏｆＳ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａｐａｒａｓｉｔｉｚｉｎｇｏｎＯ．ｆｒａｇｒａｎｓ
ｈａｄｎｏｅｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓａｓｈｉｇｈａｓ５０ｍｇ·Ｌ－１ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．ＮＩＳＰＥＸｉｎｄｕｃｅｄＨＬ６０ｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎ
ｄｏｓｅａｎｄｔｉｍｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．ＣｅｌｃｙｃｌｅｓｗｅｒｅａｒｅｓｔｅｄａｔＧ０Ｇ１ｐｈａｓｅａｆｔｅｒｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＮＩＳＰＥＸ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒｅｆｅｃｔｓｏｆ
Ｓ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａｃｏｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｈｏｓｔｔｒｅｅｓ．ＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｅｘｔｒａｃｔｓｏｆＳｐａｒａｓｉｔｉｃａｐａｒａｓｉｔｉｚｉｎｇｏｎＮ．ｉｎｄｉｃｕｍｅｘｈｉｂｉｔｅｄｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙｂｅｔｅｒ
ａｎｔｉｃａｎｃｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｖｉｔｒｏａｍｏｎｇｔｈｅｈｏｓｔｔｒｅｅｓｓｔｕｄｉｅｄ．ＮＩＳＰＥＸｉｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅａｇｏｏｄｃａｎｄｉｄａｔｅｆｏｒａｎｔｉｃａｎｃｅｒ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｓｃｕｒｕｌａｐａｒａｓｉｔｉｃａ；Ｎｅｒｎｉｕｍｉｎｄｉｃｕｍ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｃａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅ；ＨＬ６０；ｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０５２０
［通讯作者］ 李平亚，Ｔｅｌ：（０４３１）８５６１９８０３，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｐｙ＠ｊｌｕ．
ｅｄｕ．ｃｎ
伪人参皂苷 ＧＱ的排泄试验研究
赵春芳１，刘金平２，赵 岩２，李平亚２
（１．吉林大学 药学院 药物分析，吉林 长春 １３００２１；
２．吉林大学 再生医学科学研究所，吉林 长春 １３００２１）
［摘要］ 目的：研究大鼠舌下静脉给药伪人参皂苷 ＧＱ后，其在胆汁、粪和尿中的排泄情况。方法：采用高效
液相蒸发光散射色谱（ＨＰＬＣＥＬＳＤ）法测定大鼠胆汁、粪和尿中伪人参皂苷ＧＱ，ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），以甲醇水（２４∶７）为流动相，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测温度为５０℃，灵敏度为１０，以氮气为载气，压力
为３０３９７５Ｐａ。结果：ＨＰＬＣＥＬＳＤ测定方法的标准曲线线性关系、样品回收率和日内、日间精密度均符合要求。伪
人参皂苷ＧＱ大鼠舌下静脉给药后，主要以胆汁排泄为主，占总药量的 ４１６０％；其次为粪排泄，占总药量的
９９７％；尿液中仅检出少量伪人参皂苷ＧＱ。结论：大鼠胆汁、粪和尿中主要以伪人参皂苷ＧＱ原形药物排泄。
［关键词］ 伪人参皂苷ＧＱ；蒸发光散射检测法；药物排泄
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０４３２０４
西洋参ＰａｎａｘｑｕｉｎｑｕｅｆｏｌｉｕｍＬ．为五加科人参属
植物，具有补气养阴，清热生津之功效。实验结果表
明，西洋参含有很多的生物活性物质［１］，人参皂苷
被公认为西洋参和人参的主要活性成分，其中奥柯
梯隆型（ｏｃｏｔｉｌｏｌ）人参皂苷是区分西洋参与人参的
重要标志之一，是更具生物活性的一类人参皂苷，人
参中不具有该类成分。课题组在对西洋参果实及其
茎叶中人参皂苷的分离、纯化、合成以及生物活性进
行了较深入研究［２４］的基础上，通过结构修饰方法，
将人参皂苷 Ｒｇ３转化为具有奥柯梯隆型的新化合
物———伪人参皂苷 ＧＱ（ＰＧＱ）［５］（已获得了发明专
利）。经过体内、外对其生物活性研究结果表明：
ＰＧＱ具有很强的抗心肌缺血作用，几乎无不良反
应［３，６］。本研究建立了用 ＨＰＬＣＥＬＳＤ法测定胆汁、
粪和尿排泄物中的 ＰＧＱ的方法，对 ＳＤ大鼠舌下静
脉给药后的胆汁、粪和尿排泄情况进行了研究。
１ 材料
１．１ 药物
伪人参皂苷ＧＱ（ＰＧＱ）由吉林大学再生医学科
学研究所新药研究室提供，纯度＞９９％。
１．２ 动物
Ｗｉｓｔａｒ大鼠，体重１８０～２５０ｇ，雌雄兼用，吉林
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第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８