全 文 ：Ｓｔｕｄｙｏｎｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔＧｌｙｃｙｒｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓｅｅｄｓ
ＷＥＩＳｈｅｎｇｌｉ１，２，ＷＡＮＧＷｅｎｑｕａｎ１，ＱＩＮＳｈｕｙｉｎｇ３，ＬＩＵＣｈａｎｇｌｉ４，ＺＨＡＮＧＺｈａｏｙｉｎｇ３，ＤＩＭｉｎｇ１
（１．ＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＣｏｌｅｇｅ，ＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０２，Ｃｈｉｎａ；
２．ＦｏｒｅｓｔｒｙＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓＣｏｌｅｇｅ，ＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ１５００４０，Ｃｈｉｎａ；
３．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＨｅｂｅｉ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１００１，Ｃｈｉｎａ；４ＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００６９，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔＧｌｙｃｙｒｈｉｚａ
ｕｒａｌｅｎｓｉｓｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓｅｅｄｓ，ａｐｐｒｏａｃｈｔｈｅｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｖａｒｉａｔｉｏｎｍｏｄｅａｎｄｅｃｏｌｏｇｙｍｅｃｈａｎｉｓｍ，ａｎｄｌａｉｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｄｉｓ
ｔｒｉｃｔｉｎｇａｎｄａｌｏｃａｔｉｎｇｏｆＧ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓｓｅｅｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｆｉｅｌｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｎｄｌａｂｏｒａｔｏｒｙａｎａｌｙｓｉｓｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄ．Ｓｅｅｄｓｈａｐｅａｎｄｋｉｌｏｓ
ｓｅｅｄｗｅｉｇｈｔｗｅｒｅｓａｍｐｌｅｄｒａｎｄｏｍｌｙ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｆｏｒｃｅｂｙｇｅｎｅｒａｌｍｅｔｈｏｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆ
Ｇ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓｓｅｅｄｓｓｈｏｗｅｄｒｏｕｇｈｌｙｌｏｎｇｉｔｕｄｅｖａｒｉａｔｉｏｎｔｅｎｄｅｎｃｙｔｈａｔｔｈｅｓｅｅｄｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｇｒａｄｕａｌｙｆｒｏｍｗｅｓｔｔｏｅａｓｔ．Ｗｈｉｌｅｔｈｅｇｅｒｍｉｎａ
ｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｈｏｗｅｄｒｏｕｇｈｌｙａｌｔｉｔｕｄｅｖａｒｉａｔｉｏｎｔｅｎｄｅｎｃｙｔｈａｔｔｈｅｓｅｅｄｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｆｏｒｃｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅ
ｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｔｈｅａｌｔｉｔｕｄｅ，ａｎｄｔｈｅａｖｅｒａｇｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｔｈｅｓａｍｅｗｉｔｈｔｈｅｓｅｅｄｓｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｎａｌｙ
ｓｉｓｃｏｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｌｉｍａｔｉｃｆａｃｔｏｒｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｏｆＧ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈａｎｎｕａｌｒａｉｎ
ｆａｌｏｆｔｈｅｈａｂｉｔａｔ，ａｎｄｔｈｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｒａｔｅｗａｓｑｕｉｃｋｅｎｅｄｂｙｄｒｏｕｇｈｔ，ｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｓｔｒｏｎｇｓｕｎｓｈｉｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｏｒ
ｐｈｏｌｏｇｉｃａｎｄｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｎｄｏｆＧ．ｕｒａｌｅｎｓｉｓｓｅｅｄｓｐｒｅｓｅｎｔｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｅｄｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｖａｒｉａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅ
ｖａｒｉａｔｉｏｎｗａｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｅｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｉｎｗｈｉｃｈｔｈｅｓｅｅｄｐｒｏｖｅｎａｎｃｅａｄａｐｔｅｄ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｇｌｙｃｙｒｈｉｚａｕｒａｌｅｎｓｉｓ；ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃａｌｖａｒｉａｔｉｏｎ；ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅ
［责任编辑 张宁宁］
［收稿日期］ ２００６１２１８
［基金项目］ 中国科学院知识创新工程重大项目子课题（ＫＳＣＸ１ＳＷ１１６）
［通讯作者］ 陈钧，Ｔｅｌ：（０５１１）８７８０１９６，Ｅｍａｉｌ：ｓｈｃｈｅｎ＠ｕｊｓ．ｅｄｕ．ｃｎ
微生物对蛇足石杉扦插生根及若干生理
生化指标的影响
李 娜１，陈 钧１，承 曦１，朱大元２
（１．江苏大学 药学院，江苏 镇江 ２１２０１３；
２．中国科学院 上海生命科学研究院 上海药物研究所 新药研究国家重点实验室，上海 ２０１０２３）
［摘要］ 目的：研究原生境土壤微生物、内生真菌和根表真菌对蛇足石杉扦插生根率和若干生理生化指标的
影响。方法：蛇足石杉分别在原生境土壤（土壤Ⅰ）、接种了内生真菌和根表真菌的灭菌土壤（土壤Ⅱ）、灭菌土壤
（土壤Ⅲ）上进行扦插，调查蛇足石杉扦插生根率，测定可溶性蛋白含量，可溶性糖含量，ＰＰＯ（多酚氧化酶），ＰＯＤ
（过氧化物酶）活性、黄酮类化合物和石杉碱甲含量。结果：与土壤Ⅲ上的扦插蛇足石杉相比，土壤Ⅰ和土壤Ⅱ上植
株生根率，分别提高了１０％和１６％，土壤Ⅱ上扦插植株茎中的可溶性蛋白含量显著提高（Ｐ＜００５），土壤Ⅰ上扦插
植株叶片和茎中的可溶性糖含量显著提高（Ｐ＜００５），土壤Ⅰ和土壤Ⅱ上的扦插植株的黄酮类化合物含量显著提
高。结论：原生境土壤微生物、内生真菌和根表真菌对扦插蛇足石杉的生根有促进作用，提高蛇足石杉体内的代谢
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水平。
［关键词］ 蛇足石杉；扦插；生根；生理生化指标
［中图分类号］Ｓ５６７ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０８０８７３０５
蛇足石杉Ｈｕｐｅｒｚｉａｓｅｒａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｔｒｅｖ．，属蕨
类植物门，石杉科，石杉属，由于从蛇足石杉中提得
的石杉碱甲是治疗早老性痴呆症的新药，使蛇足石
杉成为重要的药用植物［１］。蛇足石杉人工繁殖比
较困难，还没有成功大面积种植的报道，另外其生长
缓慢，发育成２０ｃｍ的成熟植株至少要经过 ８年。
２０世纪９０年代以来，蛇足石杉的采集量已达上百
吨［２］。据统计，我国蛇足石杉天然生物量为４６５６６
ｔ，理论可采量为１６０４ｔ，商业可采量大约不会超过
２００ｔ［３］。野生资源已不能满足市场需求，人工栽培
是解决蛇足石杉资源短缺问题的重要途径。文献报
道蛇足石杉孢子体和配子体均与真菌共生，形成菌
根才能生长［４，５］。陆地植物的根与真菌共生是地球
上最普遍的共生关系，９０％陆地植物与真菌共生形
成菌根［６］。内生真菌和根表真菌是与植物在空间
上接触最密切的真菌，因此本实验选取了这２类真
菌为研究对象，研究其与蛇足石杉生长发育的关系。
一般认为内生真菌影响植物的过程是发生在植物体
内，其大部分是土壤真菌，分布于植物的根际，具有
促进宿主植物生长，增加宿主对环境胁迫的抗性，增
加宿主植物的他感等作用［７，８］。根表真菌大部分对
植物有益，例如内生菌根菌、外生菌根都是根表真
菌，它们有改善植物营养源，促进土壤中营养元素矿
化、抗病原菌侵染等作用。本实验研究微生物对扦
插蛇足石杉生长发育的影响，为蛇足石杉引种栽培
和栽培管理提供理论参考。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 仪器 ＬＣ－１５００高效液相色谱仪，日本
ＪＡＳＣＯ公司；ＭＧＣ－３００Ｈ人工气候箱，上海一恒科
技有限公司；ＵＶ－２１２０ＰＣＳ型紫外可见分光光度计
（尤尼柯仪器有限公司）；ＱＹＣ２１１全温空气摇床（上
海福玛实验设备有限公司）；ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＸ－
２２Ｒ低温冷冻离心机；超净工作台（苏州净化设备有
限公司）；ＳＰＸ－２５０Ｂ型生化培养箱（上海跃进医疗
器械厂）。
１．１．２ 试剂 牛血清白蛋白、考马斯亮蓝Ｇ２５０（国
药集团化学试剂有限公司）；邻苯二酚、愈创木酚
（化学纯，国药集团化学试剂有限公司）；葡萄糖（分
析纯，国药集团化学试剂有限公司）；芦丁（Ｓｉｇｍａ公
司）；石杉碱甲（纯度≥９９％，中国科学院上海生命
科学研究院上海药物研究所提供）。
１．１．３ 植物 试验材料蛇足石杉采自安徽省宣城
市境内山区，由中国科学院上海生命科学研究院上
海药物研究所朱大元教授鉴定。扦插时弃去发黄、
萎蔫枝条，剪取５～８ｃｍ长的顶芽作为插条。
１．１．４ 真菌 按文献方法分离纯化蛇足石杉的内
生真菌和根表真菌［９，１０］。供试真菌包括分离自茎的
内生真菌７株，分离自叶的内生真菌４株，根表真菌
６株。纯化后的菌株接种到１００ｍＬ液体ＰＤＡ（马铃
薯培养基）中，１２０ｒ·ｍｉｎ－１，２８℃摇瓶培养７ｄ，纱
布滤去液体培养基，菌丝备用。
１．２ 扦插土壤处理方法
土壤Ⅰ：取自安徽省宣城市境内山区蛇足石杉
原生境土壤与河沙按３∶１混合，土壤中保留了原生
境土壤微生物；土壤Ⅱ：安徽省宣城市溪口镇原生境
土壤，经１２１℃高压灭菌３ｈ后，该土及河沙按３∶１
混匀，接种蛇足石杉中分离到的内生真菌和根表真
菌，高压灭菌的目的是杀灭原生境土壤中的微生物；
土壤Ⅲ：安徽省宣城市溪口镇原生境土壤，经１２１℃
高压灭菌３ｈ后，由该土及河沙按３∶１混匀。处理
后的土壤分别装入盆口直径为８ｃｍ的陶土花盆中，
土层厚度５ｃｍ。每种土壤设５个重复。
１．３ 扦插试验处理方法
每个盆中插６株，株间距３ｃｍ，插条深度为插
条的 １／２。扦插后，移入人工气候箱中培养，湿度
９０％，光照３３％（经测定８００～１２００ｌｘ）。白天温度
２２℃，１４ｈ，夜间１４℃，１０ｈ。
１．４ 指标测定方法
１．４．１ 生根率的测定 扦插 １２０ｄ后，将插条拔
出，用少量自来水冲洗后，记录生根情况。
１．４．２ 根系活力的测定 采用 ＴＴＣ还原法进行测
定［１１］，单位根鲜重的四氮唑还原量 ＝四氮唑还原
量／（根重×时间），测定波长４８５ｎｍ，ＴＴＣ标准回归
方程Ａ＝００３３９Ｃ－０００７２，ｒ＝０９９７１，式中 Ａ为
吸光度，Ｃ为样品浓度（下同）。
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１．４．３ 可溶性蛋白的测定 取上清液用考马斯亮
蓝Ｇ２５０染色法进行测定［１１］，牛血清白蛋白标准回
归方程Ａ＝０００６６Ｃ＋０００９５，ｒ＝０９９６３。
１．４．４ 可溶性糖含量的测定 称取新鲜材料，沸水
提取３０ｍｉｎ，取定容后的滤液用蒽酮比色法测定可
溶性糖。测定波长 ４８５ｎｍ，葡萄糖回归方程 Ａ＝
０００６４Ｃ＋０１２５４，ｒ＝０９９７７。
１．４．５ 多酚氧化酶活性的测定 按文献方法进行
测定［１２］。于波长４２０ｎｍ处比色测定，每分钟引起
吸光度改变０００１单位所需的酶量定义为１个酶活
单位。
１．４．６ 过氧化物酶活性的测定 按文献方法进行
测定［１３］。于波长４７０ｎｍ处比色测定，每分钟引起
吸光度改变０００１单位所需的酶量定义为１个酶活
单位。
１．４．７ 黄酮类化合物含量的测定 精密吸取０２
ｍｇ·ｍＬ－１芦丁对照液 １０，２０，３０，４０，５０，６０
ｍＬ，分别置２５ｍＬ量瓶中，各加水６ｍＬ，加５％亚硝
酸钠溶液１ｍＬ，混匀，放置６ｍｉｎ，加１０％硝酸铝溶
液１ｍＬ，混匀，放置６ｍｉｎ，加４％氢氧化钠试液１０
ｍＬ，再加水至２５ｍＬ，放置１５ｍｉｎ，不加芦丁的试剂
作空白对照。分光光度法在５００ｎｍ波长处测定吸
光度，所取对照品液和吸光度经回归处理，回归方程
Ａ＝０４３８６Ｃ－００２２，ｒ＝０９９９７。蛇足石杉样品烘
干，用研钵研碎，过２０目筛，称取１ｇ左右，以９０％
甲醇为溶剂采用索氏提取器，加热回流６ｈ，过滤后
甲醇定容至１００ｍＬ，取上述样品液６ｍＬ，按标准曲
线相同方法于５００ｎｍ处测定吸光度，计算总黄酮的
含量。
１．４．８ 石杉碱甲含量的测定 石杉碱甲的提取和
检测参照 ＭａＸＱ的方法［１］。ＨＰＬＣ３０８ｎｍ下检
测，石杉碱甲回归方程 Ａ＝８８００８Ｃ＋６７７０６，ｒ＝
０９９９７。式中Ａ为峰面积，Ｃ为样品质量浓度。
２ 结果与分析
２．１ 微生物对蛇足石杉扦插生根效应的影响
在３种不同处理的土壤条件下蛇足石杉扦插生
根情况如表 １所示。在土壤Ⅱ中生根率最高为
８３％，土壤Ⅰ为７７％，分别比在土壤Ⅲ中生根率高
出１６％和１０％。在土壤Ⅰ中平均每株生根１．７条，
在土壤Ⅱ中平均每株生根１６条，在土壤Ⅲ中平均
每株生根数为１４条。结果表明，土壤中的微生物
影响了蛇足石杉扦插生根率。在原生境土壤、接种
了内生真菌和根表真菌的土壤中扦插的蛇足石杉生
根情况好于在无菌原生境土壤与河沙混合处理的土
壤中生根情况。插条的切口处长出新根的比率：土
壤Ⅰ最高为 ５３％，土壤Ⅱ为 ４３％，土壤Ⅲ最低为
３０％。３种土壤条件下，插条切口处生根率差别较
大，说明原生境土壤中的一些微生物能够促进插条
切口处愈伤组织形成和分化，内生真菌和根表真菌
也表现出相同作用。
２．２ 微生物对蛇足石杉根系活力的影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉的根系活力如表
１所示。在土壤Ⅱ中扦插蛇足石杉根系活力最高，
其次为土壤Ⅰ，土壤Ⅲ中生根插条的根系活力最低。
表１ 不同土壤条件下扦插蛇足石杉的生根效应（ｎ＝３０）
土壤类型
切口处生根率
／％
生根率
／％
生根数
／条／株
Ⅰ ５３ ７７ １７
Ⅱ ４３ ８３ １６
Ⅲ ３０ ６７ １４
试验结果表明，土壤中缺少某些微生物，蛇足石
杉根系活力可能会降低，内生真菌和根表真菌对蛇
足石杉保持较高的根系活力起到积极作用。但３种
土壤条件下扦插蛇足石杉的根系活力差异没有达到
显著水平。
２．３ 微生物对蛇足石杉可溶性蛋白含量的影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉的可溶性蛋白含
量如表２所示。３种土壤条件下蛇足石杉叶片中可
溶性蛋白含量差异不大。土壤Ⅱ上扦插的蛇足石杉
茎中可溶性蛋白质量分数最高，为６０７４ｍｇ·ｇ－１
（ＦＷ），显著高于土壤Ⅲ上扦插的蛇足石杉。而土
壤Ⅰ与土壤Ⅱ、土壤Ⅰ与土壤Ⅲ上扦插的蛇足石杉
茎中可溶性蛋白含量差异没有达到显著水平。植物
体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶
类，是了解植物体代谢水平的一个重要指标。试验
结果表明，土壤中的微生物对蛇足石杉茎中可溶性
蛋白含量影响较大，接种内生真菌和根表真菌的土
壤中扦插的蛇足石杉茎中的可溶性蛋白含量高，可
能是其生根率高的原因之一。
２．４ 微生物对蛇足石杉可溶性糖含量的影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉的可溶性糖含量
如表２所示。土壤Ⅰ上扦插的蛇足石杉叶片中可溶
性糖质量分数最高，为１０２９％（ＦＷ），显著高于和
土壤Ⅱ土壤Ⅲ上扦插的蛇足石杉。茎中可溶性糖含
量，同样土壤Ⅰ中扦插植株质量分数最高为８０２％
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（ＦＷ），显著高于土壤Ⅲ上扦插的蛇足石杉，与土壤
Ⅱ上扦插植株差异不显著。可溶性糖是植物体内碳
水化合物的重要存在形式，光合速率、植物抗逆性、
植物生长发育过程关系密切，一定程度上反应植物
碳素代谢水平。试验结果表明，土壤中微生物构成
影响了蛇足石杉叶、茎中可溶性糖含量，原生境土壤
中的微生物能够提高蛇足石杉可溶性糖含量。
２．５ 微生物对蛇足石杉ＰＰＯ，ＰＯＤ活性的影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉 ＰＰＯ，ＰＯＤ活性
如表２所示。ＰＰＯ是植物体内普遍存在的一类末端
氧化酚，它与植物的愈伤反应有密切关系，而且还与
木质素及其他一些与酚有关的细胞组分的合成有
关。土壤Ⅰ上扦插的蛇足石杉 ＰＰＯ活性最高，３种
土壤条件下扦插植株 ＰＰＯ活性差异没有达到显著
水平。ＰＯＤ与植物防御体系有关，ＰＯＤ活性升高也
是植物衰老的标志。试验结果表明，蛇足石杉体内
ＰＯＤ活性较低，土壤Ⅲ上扦插的蛇足石杉ＰＯＤ活性
最高，土壤中的真菌对植株中 ＰＯＤ活性影响不大。
土壤中的微生物结构改变，植株体内ＰＰＯ与ＰＯＤ活
性也发生一定变化，但两者变化趋势不同，去除原生
境土壤中的真菌后，植株体内 ＰＰＯ活性降低，ＰＯＤ
则表现出升高趋势。
表２ 不同土壤条件下蛇足石杉生理生化指标及新复极差测试结果（ｎ＝６）
土壤类型
根系活力
／μｇ·ｇ－１·ｈ－１
叶片可溶性蛋白
／ｍｇ·ｇ－１
茎可溶性蛋白
／ｍｇ·ｇ－１
叶片可溶性糖
／％
茎可溶性糖
／％
多酚氧化酶
／Ｕ·ｇ－１
过氧化物酶
／Ｕ·ｇ－１
Ⅰ ８４１５ａ ７７４ａ ５１９０ａｂ １０２９ａ ８０２ａ ２５０３ａ ７９０８ａ
Ⅱ ８５２６ａ ７０５ａ ６０７４ａ ６６５ｂ ６２３ａｂ ２４１３ａ ８４４３ａ
Ⅲ ７５６７ａ ７００ａ ３８３９ｂ ６００ｂ ４６７ｂ ２０８１ａ １０３１８ａ
２．６ 微生物对蛇足石杉黄酮类化合物含量影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉黄酮类化合物含
量如表３所示。土壤Ⅰ与土壤Ⅱ上扦插的蛇足石杉
黄酮类化合物质量分数接近，分别为１３１４２，１３１４６
ｍｇ·ｇ－１（ＤＷ），显著高于土壤Ⅲ上扦插的植株。
试验结果表明，土壤中微生物结构影响了蛇足石杉
中黄酮类化合物含量，在缺少原生境土壤微生物的
土壤上扦插的植株黄酮类化合物含量降低，土壤接
种了内生真菌和根表真菌后与原生境土壤上扦插植
株黄酮类化合物含量接近，由此推测内生真菌和根
表真菌对于蛇足石杉体内黄酮类化合物的积累有重
要作用。
表３ 不同土壤条件下蛇足石杉黄酮类化合物、石杉碱甲
质量分数及新复极差测试结果（ｎ＝６）
土壤类型
黄酮类化合物
／ｍｇ·ｇ－１
石杉碱甲
／μｇ·ｇ－１
Ⅰ １３１４２ａ ８１３９９ａ
Ⅱ １３１４６ａ ８１１０４ａ
Ⅲ １０７９０ｂ ８０２４８ａ
２．７ 微生物对蛇足石杉内石杉碱甲含量的影响
不同土壤条件下扦插蛇足石杉内石杉碱甲含量
如表３所示。在本试验条件下，３种土壤条件下扦
插蛇足石杉植株体内石杉碱甲质量分数差异不大，
为８０μｇ·ｇ－１（ＤＷ）左右。推测原因是石杉碱甲在
蛇足石杉中的代谢速度较慢。从本试验结果来看，
土壤中微生物种类在短时间内对蛇足石杉的石杉碱
甲含量影响很小，长时间的土壤微生物环境差异是
否对石杉碱甲含量产生影响还需进一步研究。从试
验结果来看，一些微生物对蛇足石杉的生长发育有
促进作用，同时其体内石杉碱甲含量没有降低，也意
味着石杉碱甲总量的提高。
３ 讨论
３．１ 土壤微生物与蛇足石杉生长发育的关系
本研究结果表明原生境土壤中微生物对蛇足石
杉扦插生根、维持较高代谢水平有重要作用，推测蛇
足石杉在形成植株后仍与土壤中真菌有共生关系。
蛇足石杉异地扦插时应该尽量带原生境土壤，提高
生根率和成活率。用客土方式使原生境土壤微生物
在异地土壤中定殖存在不少问题，如受到土著微生
物的拮抗无法成为优势种群、无法确定量效关系等，
不利于规范化栽培。
３．２ 内生真菌和根表真菌与蛇足石杉生长发育的
关系
本研究结果表明，去除了原生境土壤微生物后
蛇足石杉扦插生根率、体内代谢水平、一些化合物的
积累受到不同程度影响，而接入内生真菌和根表真
菌后，蛇足石杉的各项生理指标与在原生境土壤上
生长植株接近，说明内生真菌和根表真菌是一类与
蛇足石杉生长发育关系密切的微生物。内生真菌和
根表微生物与植物相互作用的机理还需要进一步研
究。与客土方式改造异地微生物的方法相比，内生
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真菌和根表微生物在实际应用中可操作性更强，采
用多次施用的方法能使其成为优势种群，可应用于
蛇足石杉的大规模人工栽培。
［参考文献］
［１］ ＭａＸＱ，ＴａｎＣＨ，ＺｈｕＤＹ，ｅｔａｌ．Ｉｓｔｈｅｒｅａｂｅｔｅｒｓｏｕｒｃｅｏｆｈｕ
ｐｅｒｚｉｎｅａｔｈａｎｈｕｐｅｒｚｉａｓｅｒａｔａｈｕｐｅｒｚｉｎｅａｃｏｎｔｅｎｔｏｆｈｕｐｅｒｚｉａｃｅａｅ
ｓｐｅｃｉｅｓｉｎｃｈｉｎａ［Ｊ］．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００５，５３：３９３．
［２］ ＭａＸＱ，ＴａｎＣＨ，ＺｈｕＤＹ，ｅｔａｌ．Ａｓｕｒｖｅｙｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌｈｕ
ｐｅｒｚｉｎｅａｎａｔｕｒａｌｒｅｓｏｕｒｃｅｓｉｎＣｈｉｎａ：ｔｈｅｈｕｐｅｒｚｉａｃｅａｅ［Ｊ］．Ｊ
Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，１０４：５４．
［３］ 吴 荭，庄 平，冯正波，等．中国蛇足石杉资源调查与评估
［Ｊ］．自然资源学报，２００５，２０（１）：６９．
［４］ 鲁润龙，周忠泽，鲍时来，等．药用植物蛇足石杉的生物学特
性［Ｊ］．中国科学技术大学学报，１９９９，２９（１）：１１８．
［５］ 沈晓霞，俞旭平，盛束军．千层塔茎尖组织培养灭菌方法的研
究［Ｊ］．中国中药杂志，２００２，２７（６）：４５８．
［６］ ＦｒａｎｚＨａｄａｃｅｋ，ＧüｎｔｈｅｒＦ，Ｋｒａｕｓ．Ｐｌａｎｔｒｏｏｔｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓａｆ
ｆｅｃｔｇｒｏｗｔｈｂｅｈａｖｉｏｕｒｏｆｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｍｉｃｒｏｆｕｎｇｉ［Ｊ］．ＦＥＭＳＭｉｃｒｏ
ｂｉｏｌＥｃｏ，２００２，４１：１６１．
［７］ 邹文欣，谭仁祥．植物内生菌研究新进展［Ｊ］．植物学报，
２００１，４３（９）：８８１．
［８］ ＢｏｎｆａｎｔｅＰ．Ｐｌａｎｔｓ，ｍｙｃｏｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉａｎｄｅｎｄｏｂａｃｔｅｒｉａ：ａｄｉａｌｏｇ
ａｍｏｎｇｃｅｌｓａｎｄｇｅｎｏｍｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｌＢｕｌ，２００３，２０４：２１５．
［９］ 石 玮，罗建平，丁振华，等．千层塔内生真菌分离鉴定的初
步研究［Ｊ］．中草药，２００５，３６（２）：２８１．
［１０］ 日本土壤微生物会．土壤微生物研究法［Ｍ］．北京：科学出版
社，１９８３：５６９．
［１１］ 李合生．植物生理生化实验原理和技术［Ｍ］．北京：高等教育
出版社，２０００：１１９．
［１２］ 中国科学院上海植物生理研究所，上海市植物生理学会．现
代植物生理学实验指导［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９９：３１７．
［１３］ 张志良．植物生理学实验指导［Ｍ］．３版．北京：高等教育出版
社，１９９０：１５４．
Ｅｆｅｃｔｓｏｆｍｉｃｒｏｂｅｓｏｎｒｏｏｔｉｎｇａｎｄｏｎｓｅｖｅｒａｌｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄ
ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓｏｆｃｕｔｔｉｎｇｓｏｆＨｕｐｅｒｚｉａｓｅｒｒａｔａ
ＬＩＮａ１，ＣＨＥＮＪｕｎ１，ＣＨＥＮＧＸｉ１，ＺＨＵＤａｙｕａｎ２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ２１２０１３，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈ，ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅｓ，ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，
ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１０２３，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｅｓｏｆｈａｂｉｔａｔｓ，ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉａｎｄｒｏｏｔｓｕｒｆａｃｅｆｕｎｇｉｏｆＨｕｐｅｒｚｉａｓｅｒ
ｒａｔａｏｎｒｏｏｔｉｎｇｒａｔｅｏｆｔｈｅｃｕｔｉｎｇｓａｎｄｏｎｓｅｖｅｒａｌｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅｃｕｔｉｎｇｓｏｆＨ．ｓｅｒａｔａｗｅｒｅ
ｐｌａｎｔｅｄｏｎｓｏｉｌⅠｏｆｐｒｉｍａｒｙｈａｂｉｔａｔ，ｔｈｅｓｏｉｌⅡ ｈａｄｂｅｅｎｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉａｎｄｒｏｏｔｓｕｒｆａｃｅｆｕｎｇｉ，ｔｈｅｓｏｉｌⅢ ｈａｄｂｅｅｎａｕｔｏ
ｃｌａｖｅｄ，ｒｏｏｔｉｎｇｒａｔｅｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄ，ａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆＰＰＯａｎｄＰＯＤ，ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｈｕｐｅｒｚｉｎｅ
Ａｃｏｎｔｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＨ．ｓｅｒａｔａｔｈａｔｗｅｒｅｐｌａｎｔｅｄｏｎｓｏｉｌⅢ，ｓｏｉｌⅠａｎｄｓｏｉｌⅡ ｗｅｒｅｆｏｕｎｄｔｏｉｎ
ｃｒｅａｓｅｔｈｅｒｏｏｔｉｎｇｒａｔｅｂｙ１０％ ａｎｄ１６％，ｓｏｉｌⅡ ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｓｏｌｕｂｌｅｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｓｔｅｍｏｆＨ．ｓｅｒａｔａ（Ｐ＜０．０５），ＳｏｉｌⅠｉｎ
ｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｓｏｌｕｂｌｅｓｕｇａｒｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｌｅａｖｅｓａｎｄｓｔｅｍｏｆＨ．ｓｅｒａｔａ（Ｐ＜０．０５），ｓｏｉｌⅠａｎｄＳｏｉｌⅡ ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
Ｈ．ｓｅｒａｔａ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｓｏｉｌｍｉｃｒｏｂｅｓｆｒｏｍｐｒｉｍａｒｙｈａｂｉｔａｔ，ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉａｎｄｒｏｏｔｓｕｒｆａｃｅｆｕｎｇｉｐｒｏｍｏｔｅｒｏｏｔｉｎｇ，ｔｈｅｙ
ａｌｓｏｉｎｃｒｅａｓｅｐｌａｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｌｅｖｅｌｏｆＨ．ｓｅｒａｔａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｈｕｐｅｒｚｉａｓｅｒａｔａ；ｃｕｔｉｎｇ；ｒｏｏｔｉｎｇ；ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｄｅｘｅｓ
［责任编辑 张宁宁］
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第３３卷第８期
２００８年４月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ８
Ａｐｒｉｌ，２００８