全 文 ：算含量，见图４。
图４ 总黄酮洗脱曲线
从图４可以看出，当洗脱液用量为３ＢＶ时，基
本上将总黄酮洗净。
２．１３ 分离的山楂总黄酮纯度考查 取３０ｇＡＢ－８
（干重），经处理后，湿法装柱（２ｃｍ×２０ｃｍ），树脂
床体积约为１５ｍＬ。再取山楂水溶液（总黄酮２４７５
ｍｇ·ｍＬ－１）５ｍＬ上树脂柱，收集洗脱液，定溶至１００
ｍＬ，测定总黄酮的含量，取４０ｍＬ，水浴蒸干，于１０５
℃ 干燥３ｈ，测定干膏收率，计算总黄酮的纯度，结
果见表７。
从表７可以看出，经ＡＢ－８大孔树脂处理后的
总黄酮可达８０％以上，且具有良好的重复性。
３ 结论
表７ 总黄酮纯度测定
实验
次数
洗脱液中总黄酮
／ｍｇ·ｍＬ－１
干膏重
／ｇ
总黄酮纯度
／％
１ ０５６ ００６６８７ ８３７５
２ ０５８ ００６７４６ ８５９８
３ ０５７ ００６５２０ ８６６７
平均 ０５７ ００６６５１ ８５５７
通过对影响大孔树脂吸附及解吸的各种因素系
统研究，最后确定了大孔树脂分离山楂总黄酮的最
佳工艺为树脂型号为天津南开大学化工厂的ＡＢ－８
型大孔树脂，药液浓度为０４ｇ·ｍＬ－１（相当于原生
药），药液ｐＨ为３～４，吸附速率为１ＢＶ·ｈ－１时吸
附效果最好，上柱量为６倍树脂床体积。洗脱最佳
工艺为３倍树脂床体积的７５％乙醇以５ＢＶ·ｈ－１的
速率洗脱效果最佳。经 ＡＢ－８处理后的山楂总黄
酮可达８０％以上。
［参考文献］
［１］ 李源君，姜成忠，吴宝财．中药纯化过程中大孔树脂的预处理
与再生［Ｊ］．黑龙江科技信息，２００４，（１１）：２００．
［２］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：２２．
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放军药学学报，２００３，１９（６）：４５２．
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００７０１２３
［通讯作者］ 周亚伟，Ｔｅｌ：（０１０）６２５３８００７，Ｅｍａｉｌ：ｙｗｚｈｏｕ＠
ｐｋｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
白藜芦醇小麦醇溶蛋白纳米粒包封率测定方法研究
王新春１，侯世祥１，李 文２，周亚伟２
（１．四川大学 华西药学院，四川 成都 ６１００４１；２．北大世佳研究中心，北京 １０００８４）
白藜芦醇（Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，ＲＥＳ）是从中药虎杖中提
取出来的植物生理活性成分，是一种天然二苯乙烯
类活性物质，具有抑制血小板聚集、抗菌、抗癌及保
肝护肝等多种生物学作用［１２］，但其水溶性差，生物
利用度低［３］，影响了其在医药领域的广泛应用。因
此，寻找改善白藜芦醇的水溶性，提高其生物利用度
的研究具有非常重要的意义。口服新型纳米给药系
统是提高其口服生物利用度的有效药剂学手段之
一。小麦醇溶蛋白是从中国优质纯系小麦粉中提
取、纯化后得到的一种具有疏水和亲水特性的两性
蛋白质，可以作为新型纳米给药系统的药物载
体［４６］。本研究以天然新型载体材料小麦醇溶蛋白
包裹白藜芦醇，制备口服纳米给药系统，以达到提高
其体内生物活性的目的。
在纳米粒研究过程中，包封率是纳米粒质量评
定的重要指标，本实验建立了 ＲＥＳＮＰ包封率的测
定方法，该法操作简单、可行、准确性较好。为小麦
醇溶蛋白纳米给药系统的研究奠定了一定的基础。
１ 材料
透析袋（进口分装，相对分子质量 １２０００～
１４０００，批号２００３０１２４）；ＵＶ－２５０１ＰＣ紫外分光度
计（日本岛津）；ＴＨＺ－Ｃ振荡仪（江苏太苍市实验仪
器厂）；白藜芦醇（＞９８％，怀化市洪江金泰生物有
限责任公司，批号 ｐｒｓ０５４２）；白藜芦醇对照品（中国
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第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７
药品生物制品检定所提供，批号 １１１５３５２００５０２）；
小麦醇溶蛋白（自制）；小麦醇溶蛋白对照品（Ｓｉｇｍａ
公司）；普朗尼克 Ｆ６８（南京威尔化工业有限公司）；
乙醇等试剂均为国产分析纯。
２ 方法
２．１ ＲＥＳＮＰ的制备 依据文献方法［７］，采用溶剂
非溶剂法制备 ＲＥＳＮＰ。将处方量的白藜芦醇、小
麦醇溶蛋白以适量７０％乙醇溶解，在２５０ｒ·ｍｉｎ－１
机械搅拌条件下，将所得的乙醇混合溶液注入到含
Ｆ６８的水性溶液中，室温搅拌５ｍｉｎ，得到呈蓝色乳光
的纳米粒胶体分散液，加入４％蔗糖及２％海藻糖，
搅拌使溶，过０４５μｍ滤膜，滤液置 －２０℃冰箱中
预冻１２ｈ，冷冻干燥，即得 ＲＥＳＮＰ，置干燥器中保
存。
２．２ ＲＥＳＮＰ中药物浓度的测定 采用紫外分光
光度法测定 ＲＥＳＮＰ药物浓度。精密移取 ０２ｍＬ
纳米粒溶液，以７０％乙醇溶液１０ｍＬ消解纳米粒，
空白纳米粒溶液同法处理后以７０％乙醇为空白对
照，测定紫外吸收光谱，白藜芦醇在３０６ｎｍ处有最
大吸收，空白纳米粒无干扰。因此，以不同质量浓度
的白藜芦醇对照品７０％乙醇溶液在３０６ｎｍ处的吸
光度差值Ａ对药物质量浓度 Ｃ求得标准曲线。回
归方程Ｃ＝７００７２Ａ＋００１８６，ｒ＝０．９９９９，１５０～
６００μｇ·ｍＬ－１线性关系良好。
２．３ 反相透析时间的确定 取纳米粒溶液２５ｍＬ
置于透析袋外，蒸馏水１ｍＬ于透析袋内，扎紧透析
袋两端，于振荡仪（２５℃，７０ｒ·ｍｉｎ－１）振摇，分别于
２，４，６，８，１０，１２，１４，１６，１８，２４ｈ取出１个样品，精密
吸取透析袋内液０２ｍＬ至１０ｍＬ量瓶中，以７０％
乙醇定容，紫外法测定药物浓度。
２．４ 反相透析袋内及袋外体积比的考察 分别取
ＲＥＳＮＰ５０ｍＬ置于透析袋外，分别在透析袋内加入
蒸馏水１，２，５ｍＬ，扎紧各透析袋两端，同时于振荡
仪（２５℃，７０ｒ·ｍｉｎ－１）振摇，１４ｈ取出各样品，精
密吸取各透析袋内液，样品同２．３法进行稀释，紫外
法测定药物浓度。
２．５ 白藜芦醇的加样回收率考察 以７０％乙醇配
制一系列白藜芦醇标准溶液，分别与空白小麦醇溶
蛋白纳米粒混合，得标准混合液。移取该标准混合
液２５ｍＬ置于透析袋外，蒸馏水１ｍＬ加于透析袋
内，搅拌透析袋外液，透析１４ｈ后，精密吸取透析袋
内液，同２．３法进行稀释，紫外法测定药物浓度 Ｃ１，
透析前标准混合液中加人适量７０％乙醇溶液消解
纳米粒，以７０％乙醇溶液定容，采用上述紫外法测
定药物浓度Ｃ２，则反透析法的加样回收率计算公式
为：
加样回收率＝（Ｃ１×２６）／（Ｃ２×２５）×１００％
２．６ 反相透析法测定包封率 移取３批 ＲＥＳＮＰ
２５ｍＬ置于５０ｍＬ锥形瓶中，蒸馏水１ｍＬ置于预先
用水饱和透析袋内，两端扎紧，于振荡仪（２５℃，７０ｒ
·ｍｉｎ－１）振摇，透析１４ｈ。精密吸取透析袋内液，
同２．３法进行稀释、定容，测定游离药物浓度 Ｃｆｒｅｅ；
另取未透析的 ＲＥＳＮＰ，加人适量７０％乙醇溶液消
解纳米粒，以７０％乙醇溶液定容，紫外法测定 ＲＥＳ
ＮＰ中总药物浓度Ｃｔｏｔａｌ，药物包封率计算公式如下：
包封率＝（Ｃｔｏｔａｌ×２５－Ｃｆｒｅｅ×２６）／（Ｃｔｏｔａｌ×２５）×１００％
３ 结果
３．１ 反向透析时间 透析袋内液浓度变化曲线见
图１。由图可见，１２ｈ浓度达到最大值，１６～２４ｈ透
析袋内液浓度不再变化，说明透析已经达到平衡。
因此反透析时间定为１４ｈ。
图１ 透析袋内白藜芦醇浓度时间曲线图
３．２ 反相透析透析袋内及袋外体积比的考察 透
析１４ｈ后，各体积比测得的药物包封率实验结果见
表１。
表１ 透析袋内与袋外体积比对样品包封率的影响
体积化 包封率／％
５∶５ ６３７１±０２５
２∶５ ７１３７±０３１
１∶５ ７２４４±０１８
３．３ 反相透析回收率考察结果 白藜芦醇加样回
收率考察结果见表２。可见，白藜芦醇的加样回收
率大于９５％，符合ＲＥＳＮＰ包封率测定方法要求。
表２ 反相透析法药物加样回收率（ｎ＝９）
加入量
／μｇ·ｍＬ－１
测得量
／μｇ·ｍＬ－１
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
１６２ １５５ ９９５
２３８ ２２５ ９８３ ９９３ ０９１
４９３ ４７５ １００２
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３．４ 反透析法测定ＲＥＳＮＰ包封率结果
３批ＲＥＳＮＰ样品按上述反透析法测定包封率，
结果批号０６０６０２，０６０６０６，０６０６０８的３批样品 ＲＥＳ
ＮＰ包封率分别为（７４１３±０２２）％，（７１２６±
０１７）％，（７５０８±０３１）％，平均值为（７３５０±
１９８）％。
４ 讨论
在建立反向透析法测定药物包封率的方法时，
比较考察了柱分离法、超滤法、超速离心法、反相透
析法及盐析法。小麦醇溶蛋白载体材料自身的黏性
性质使上样后的纳米粒与柱填料发生了死吸附现
象，达不到分离纳米粒的目的。超速离心法使具有
一定粘性的纳米粒在沉降的同时会导致部分药物也
一并沉淀下来，结果使各样品所测包封率皆大于
９０％，不能为处方优化提供准确的结果。依据小麦
醇溶蛋白在盐溶液中沉淀的性质，考察了盐沉淀法
分离纳米粒的方法，但因白藜芦醇在盐溶液中溶解
度亦降低，致使所测的药物的浓度与真实的药物浓
度不相吻合，不能准确反映药物的包封率。超滤法
虽具有快捷和可靠的特点，但存有价格昂贵的不足，
且滤膜对药物的吸附试验结果表明，超滤管的滤膜
对药物有一定的吸附性，不能用于白藜芦醇小麦醇
溶蛋白纳米粒包封率的测定。本研究建立的反相透
析法具有准确、经济及简便的特点，因此，更适合小
麦醇溶蛋白纳米粒制备工艺优化时包封率的测定。
透析袋内及袋外体积比的研究结果表明，小麦
醇溶蛋白纳米粒周围的游离药物由２５ｍＬ变为２６
ｍＬ，稀释倍数较小，不仅可以较好地避免因小麦醇
溶蛋白纳米粒与游离药物动态平衡被打破所导致的
渗漏问题，而且该体积比得到的样品能够较好地满
足后续样品测定的需要，因此，袋内袋外体积比确定
为１∶２５。
在进行小麦醇溶蛋白纳米粒透过试验考察时，
依据文献［８］采用了简单、快速的ＵＶ测定法及高灵
敏度的Ｂｒａｄｆｏｒｄ染色法进行透析袋内小麦醇溶蛋白
的测定，结果表明纳米粒不能透过透析袋。再者，依
据本研究所采用的小麦醇溶蛋白载体材料的平均相
对分子质量在５０×１０３～１００×１０３，试验所用透析袋
的截留相对分子质量１２×１０３～１４×１０３的结果，也
可以推测纳米粒不会透过透析袋。
［参考文献］
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［７］ ＤｕｃｌａｉｒｏｉｒａＣ，ＯｒｅｃｃｈｉｏｎｉｂＡＭ，ＤｅｐｒａｅｔｅｒｅｃＰ，ｅｔａｌ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｏｆｇｌｉａｄｉｎｓｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓａｓｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｓ：ａｓｔｕｄｙｏｆｔｈｒｅｅ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｄｒｕｇｓ［Ｊ］．ＩｎｔＪＰｈａｒｍ，２００３，２５３：１３３．
［８］ 汪家政，范 明．蛋白质技术手册［Ｍ］．北京：科学技术出版
社，２０００：３８．
［责任编辑 鲍 雷］
［收稿日期］ ２００６０７１２
［基金项目］ 河南省教育厅基金资助项目（２００５１０４７１０１５）
［通讯作者］ 魏明，Ｔｅｌ：（０３７１）６６２４６６１２
中药凝胶剂在食管疾病中的作用探析
魏 明
（河南中医学院 第一附属医院科技中心，河南 郑州 ４５００００）
目前，食管疾病内科治疗方案主要药物口服和
内镜下治疗２个途径。口服药物进入机体后通过胃
肠吸收进入血液后，与机体间发生一系列的相互作
用，不仅会影响药物作用的强弱和持续时间的长短，
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