全 文 ：黄连总生物碱对大鼠胃黏膜损伤的
保护作用及其机制研究
鲁劲松，刘玉庆，李　明，李宝生，徐　雁
（北京中医药大学 东直门医院，北京 １００７００）
［摘要］　目的：采用幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃炎动物模型考察黄连总生物碱（ＴＡ）对黏膜炎症反应的作
用及可能机制。方法：幽门螺旋杆菌脂多糖（ＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉＬＰＳ）灌胃，连续４ｄ即可引起急性胃炎的黏膜反应
症状，分组给予５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１ＴＡ后，组织学观察病变及用药后的改善情况；一氧化氮合酶检测试剂盒检测
ＴＡ对组成型（ｃＮＯＳ）和诱导型（ＮＯＳ２）一氧化氮合酶的影响；肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）检测试剂盒测定ＴＡ对胃黏膜
ＴＮＦα生成的影响。结果：Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ可显著刺激胃黏膜上皮细胞凋亡，增强黏膜组织 ＮＯＳ２的表达，并降低
ｃＮＯＳ的表达，同时增加血清中ＴＮＦα含量。高、中、低剂量ＴＡ可显著降低Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ诱导的胃黏膜上皮细胞凋
亡发生，同时抑制ＮＯＳ２的表达，增强ｃＮＯＳ的表达，并抑制血清中ＴＮＦα的含量。结论：ＴＡ对Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ引起
的大鼠胃部炎症有保护作用，其机制可能是由于 ＴＡ抑制胃炎时黏膜细胞的凋亡有关，同时 ＴＡ可通过影响 ｃＮＯＳ
和ＮＯＳ２的表达调节ＮＯ的生成，并抑制ＴＮＦα生成，从而减轻胃部炎症反应的发生。
［关键词］　黄连总生物碱；幽门螺旋杆菌脂多糖；胃炎；ｃＮＯＳ；ＮＯＳ２；ＴＮＦα
［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００７）１３１３３３０４
［收稿日期］　２００６１０２２
［通讯作者］　鲁劲松，Ｔｅｌ：（０１０）８４０１３３９４，Ｅｍａｉｌ：Ｌｕｊｉｎｓｏｎｇ
２００８＠１６３．ｃｏｍ
　　幽门螺旋杆菌 Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ感染已被公认
为胃炎、胃溃疡以及胃癌的重要致病因素［１］。幽门螺
旋杆菌的细胞壁脂多糖（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ）是 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ
产生毒性作用的重要媒介之一，它可显著上调胃黏膜
前炎性因子ＴＮＦα，白细胞介素（ＩＬｓ）等的表达，刺激
核转录因子（ＮＦｋＢ）的核转位，干扰一氧化氮合酶
（ＮＯＳ）的平衡，促进 ＮＯ过度生成，影响细胞周期的
调控和细胞增殖［２］。
黄连是毛茛科植物黄连 ＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓＦｒａｎｃｈ
的根茎，性寒、味苦，能清热燥湿，泻火解毒。主要成
分为小檗碱、表小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、巴马亭、
药根碱、木兰花碱等生物碱，总生物碱（ＴＡ）的含量高
达１０％，其中小檗碱占８５％以上［３］。研究证实黄连
提取物对多种炎症动物模型有明显保护作用［４］。李
备等［５］研究证实，黄连总生物碱能显著抑制水浸应激
性、幽门结扎性等急性实验性胃溃疡形成，促进醋酸
灼烧型慢性胃溃疡的愈合，并可通过抑制胃酸分泌、
抑制ＮＯ和活性氧簇释放等方面抑制乙醇引起的胃
黏膜损伤，且黄连总碱的疗效优于小檗碱。此外研究
发现，黄连可能具有独特的抗消化性溃疡（ｐｅｐｔｉｃｕｌ
ｃｅｒ，ＰＵ）作用，但当前的研究工作多集中于黄连的方
剂及主要成分分析方面，未见黄连（如煎剂、总碱等）
防治ＰＵ的系统研究文献报道。本研究利用Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ
ＬＰＳ诱导的胃炎动物模型，考察了ＴＡ对胃黏膜炎症
反应的保护作用及可能机制。
１　材料
１．１　动物　ＳＰＦ级 ＳＤ大鼠，雄性，体重１８０～２００
ｇ，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证编
号：ＳＣＸＫ（京）２００２２００３。
１．２　药物与试剂　ＴＡ由北京中医药大学植物化学
教研室提供并鉴定，总碱纯度＞９５％。
ＮＯＳ检测试剂盒（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公司，批号２０４５００）；
ＴＮＦα检测试剂盒（Ｒ＆Ｄ公司，批号ＲＴＡ００），细胞凋
亡原位末端标记（ＴＵＮＥＬ）检测试剂盒（ＲｏｃｈｅＭｏｌｅｃｕ
ｌａｒＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ公司，批号９０１６１２３３）。
２　方法
２．１　Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ的制备　采用临床分离的 Ｈ．
ｐｙｌｏｒｉ（ＡＴＣＣＮｏ．４３５０）用于Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ的制备。
收集培养的Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ，蒸馏水洗涤３次，乙醇和丙酮
处理，干燥后用热酚水法提取内毒素，用苯酚氯仿
石油醚（２∶５∶８）纯化内毒素［６］。
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２．２　动物模型制备及给药［１４］　ＳＤ大鼠分为空白
组、模型组、ＴＡ高、中、低剂量组，每组１０只。实验
开始前２ｈ禁水，提前３ｄ灌胃５０，１００，２００ｍｇ·
ｋｇ－１ＴＡ和相应的溶剂，随后给每只大鼠５０μｇ的
Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ灌胃造模，连续４ｄ，并同时继续给药
１０ｄ，末次给药后处死大鼠分离胃体，部分投入液氮
保存用以组织匀浆测定，另一部分用 １０％甲醛固
定，石蜡包埋，连续切片用于检测相关指标。
２．３　黏膜组织学检测　胃黏膜组织切片，厚度为４
μｍ／片，ＨＥ染色，组织病理学炎症程度根据 Ｓｙｄｎｅｙ
分类法［８］，并结合 Ｒａｕｗｓ评分法［９］评价胃黏膜损伤
的严重程度，包括如下４项标准：①固有层炎性浸润
密度（０～２）；②固有层多形核白细胞密度（０～３）；
③上皮内多形核白细胞（０～３）；④浅表糜烂（０～
２），其中０代表无，１代表轻度，２代表中度，３代表
重度。
２．４　胃黏膜细胞凋亡的检测　切片脱腊、逐级乙醇
化至复水化；蛋白酶Ｋ（１５ｍｇ·Ｌ－１）室温下１２００ｒ
·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ；含
０３％Ｈ２Ｏ２的甲醇室温阻断３０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３次，
每次５ｍｉｎ；０１％ ＴｒｉｔｏｎＸ１００渗透２ｍｉｎ（４℃），
ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ；ＴＵＮＥＬ标记液体３７℃孵
育６０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ；ＣｏｎｖｅｒｔｅｒＰＯＤ
液孵育３０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ；１０％山羊
血清封闭１０ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗３次，每次５ｍｉｎ；００１％
ＤＡＢ显色５１０ｍｉｎ；水冲洗、苏木精衬染、脱水、透
明、封片。光镜下阳性细胞核为黄褐色。定量分析：
随机选择５个视野，计算细胞凋亡指数（ＡＩ）。
ＡＩ＝阳性细胞数／计数细胞核总数×１００％
２．５　ｃＮＯＳ和ＮＯＳ２活性检测　用 ＮＯＳ检测试剂
盒测定胃黏膜中 ＮＯ合酶的活性（所有操作均在４
℃下进行）。取胃黏膜组织，根据组织质量（比例为
５０ｍｇ·ｍＬ－１样本缓冲液）加入含有１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＥＤＴＡ（ＮＯＳ２）或６ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＣａＣｌ２（ｃＮＯＳ）的样本
缓冲液，超声制备匀浆，８００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ。
取１０μＬ上清，加入７９０μＬＰＢＳ和２００μＬ蛋白测
定液（ＢｉｏＲａｄ）混和均匀，反应１０ｍｉｎ后，５９５ｎｍ吸
光度值测定蛋白质浓度。各样本依据蛋白质浓度配
成相同含量，取１０μＬ与４０μＬ反应缓冲液（含有
５０ｍＣｉ·ｍＬ－１Ｌ［２，３，４，５３Ｈ］ａｒｇｉｎｉｎｅ，１０ｍｍｏｌ·
Ｌ－１ ＮＡＤＰＨ，５ｍｍｏｌ· Ｌ－１ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｉｏｐｔｅｒｉｎ，５０
ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＴｒｉｓＨＣｌ，ｐＨ７４）混和，２５℃孵育 ３０
ｍｉｎ，每管加入４００μＬ终止缓冲液（５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＨＥＰＥＳ，ｐＨ５５，５ｍｍｏｌ·Ｌ－１ＥＤＴＡ）终止反应，随
后加入１００μＬＤｏｗｅｘ５０Ｗ（Ｎａ１）树脂。将混合物
转入离心管，瞬时离心３０ｓ，抽取分离的澄清液体，
加入内含 ５ｍＬ液闪液的液闪瓶中，Ｂｅｃｋｍａｎ
（ＬＳ６０００ＴＡ）液闪仪计数。
２．６　ＴＮＦα检测　抗凝条件下取血，室温放置２ｈ，
２５００ｒ·ｍｉｎ－１离心１５ｍｉｎ后取血清分装于 ＥＰ管
中，置于－２０℃冰箱中冷藏。ＥＬＩＳＡ双抗夹心法检
测血清中ＴＮＦα的含量。
２．７　统计方法　数据均以 珋ｘ±ｓ表示，ＳＰＳＳ１１５数
据分析系统对组间数据进行Ｆ检验。
３　结果
３．１　对胃黏膜炎症反应的影响　组织学检测显示，
模型组有明显的炎症反应，其特点表现为：黏膜固有
层淋巴细胞和浆细胞浸润、水肿、充血，以及上皮细
胞自固有层向黏膜层迁移。大鼠给予 ５，１００，２００
ｍｇ·ｋｇ－１ＴＡ后，高、中、低剂量组均可显著减少 Ｈ．
ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ引起的胃黏膜炎症反应。见表１。
３．２　对胃黏膜细胞凋亡的影响　正常大鼠胃黏膜
存在少量凋亡细胞，给予Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ后，黏膜细胞
ＡＩ值比正常组显著增强，经灌服ＴＡ后，可见细胞凋
亡受到抑制，其中高、中剂量组表现出显著性差异。
见表１。
表１　ＴＡ对胃黏膜损伤评分和胃黏膜细胞凋亡指数的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ 胃黏膜损伤评分 ＡＩ
空白 － ０２±０１ ３１±０９
模型 － ５４±０４１） １８８±２１１）
ＴＡ　 ５０ ５０±０５２） １７４±１３
　 １００ ４４±０５３） １５６±１７２）
　 ２００ ３７±０５４） １３０±２３４）
　　注：与空白组比１）Ｐ＜０００１；与模型组比２）Ｐ＜００５，３）Ｐ＜
００１，４）Ｐ＜０００１（表２，３同）
３．３　对血清中 ＴＮＦα含量的影响　Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ
诱导的胃炎大鼠血清中 ＴＮＦα含量比正常大鼠明
显增高，经灌服ＴＡ后ＴＮＦα的生成受到抑制，其中
高、中剂量组抑制作用显著。见表２。
３．４　对 ＮＯＳ２活性的影响　胃炎模型大鼠胃黏膜
组织中 ＮＯＳ２的活性比正常组增高了６６２倍，而
ｃＮＯＳ的活性则下降了５６７％。应用２００ｍｇ·ｋｇ－１
ＴＡ后，可见大鼠胃黏膜组织中的 ＮＯＳ２活性比模
型组显著下降，同时 ｃＮＯＳ的活性明显增加。见表
３。
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表２　ＴＡ对胃炎大鼠血清ＴＮＦα含量的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量／ｍｇ·ｋｇ－１ ＴＮＦα／ｐｇ·Ｌ－１
空白 － １６５±３７
模型 － １４２９±２７４１）
ＴＡ　 ５０ １３９１±３２８
　 １００ １０９８±２５２２）
　 ２００ ８７２±１８６４）
表３　ＴＡ对胃炎大鼠胃黏膜中ｃＮＯＳ，ＮＯＳ２一氧化氮
合酶活性的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
ｃＮＯＳ
／１０５ｃｐｍ·ｍｇ－１
ＮＯＳ２
／１０５ｃｐｍ·ｍｇ－１
空白 － ３１±０４ ０５±０１
模型 － １３±０３１） ３５±０８１）
ＴＡ　 ５０ １６±０３ ２７±０５２）
　 １００ １８±０２４） ２２±０５３）
　 ２００ ２２±０３４） １７±０７４）
４　讨论
本研究利用Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ４周即可诱导出与胃
炎相似的胃黏膜炎症反应动物模型，并考察了 ＴＡ
对胃黏膜病理损伤、上皮细胞凋亡，胃黏膜 ｃＮＯＳ和
ＮＯＳ２的表达，及对胃炎大鼠血清中 ＴＮＦα表达的
影响。结果表明，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ可显著提高 ＴＮＦα
及其他前炎性细胞因子［１０］的表达，并引起显著的胃
黏膜病理损伤，同时增加上皮细胞的凋亡，使胃黏膜
ｃＮＯＳ和 ＮＯＳ２表达发生病理性改变，而 ＴＡ对 Ｈ．
ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ诱导的以上胃炎症状都有不同程度的改
善作用。
胃黏膜上皮细胞的凋亡是各种胃黏膜损伤，乃
至胃溃疡发生的一个重要指标，本研究中可见 Ｈ．
ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ可引起显著的胃黏膜上皮细胞凋亡，这与
其诱导的炎症因子 ＴＮＦα等的释放导致级联反应
密切相关，同时，Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ可刺激产生氨、氯胺、
ＮＯ等可直接诱导凋亡［１１］。ＮＯＳ２表达增加可促进
ＮＯ相关物质的生成，抑制 ＮＦκＢ的活化，导致凋
亡；而ｃＮＯＳ则可通过抑制半胱氨酸蛋白酶的活化
而抑制凋亡的发生，因此二者的平衡对 Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ
ＬＰＳ诱导的凋亡具有非常重要的作用［１１］。在此 ＴＡ
可通过促进 ｃＮＯＳ的表达，抑制 ＮＯＳ２的表达进而
影响Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳ诱导的胃黏膜炎症及上皮细胞的
凋亡。
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ＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｏｎＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉＬＰＳｉｎｄｕｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｌｅｓｉｏｎｉｎｒａｔｓ
ＬＵＪｉｎｓｏｎｇ，ＬＩＵＹｕｑｉｎｇ，ＬＩＭｉｎｇ，ＬＩＢａｏｓｈｅｎｇ，ＸＵＹａｎ
（ＤｏｎｇｚｈｉｍｅｎＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＢｅｉｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓａｎｄｉｔｓｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓ（ＴＡ）ｆｒｏｍｒｈｉｚｏｍａＣｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
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Ｊｕｌｙ，２００７
ｏｎＨ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳｉｎｄｕｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｌｅｓｉｏｎｉｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｈ．ｐｙｌｏｒｉｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｒａｔｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｙｆｏｒ４ｄａｙｓｔｏ
ｉｎｄｕｃｅａｐａｔｅｒｎｏｆｍｕｃｏｓａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓｒｅｓｅｍｂｌｉｎｇｔｈａｔｏｆａｃｕｔｅｇａｓｔｒｉｔｉｓＡｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１ＴＡ，ｗｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｏｎｇａｓｔｒｉｃｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｎｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆｃＮＯＳａｎｄＮＯＳ２，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＴＮＦαａｎｄｔｈｅｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｕｓ
ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｈ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｄｕｃｅｔｈｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｕｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮＯＳ２ａｎｄｄｅｃｌｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃＮＯＳ，ａｎｄｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＴＮＦαｉｎｓｅｒｕｍ．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ５０，１００，２００
ｍｇ·ｋｇ－１ＴＡｌｅｄｔｏｒｅｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｅｘｔｅｎｔｏｆｍｕｃｏｓａｌｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃｈａｎｇｅｓｅｌｉｃｉｔｅｄｂｙＨ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ，ｔｈｉｓｅｆｅｃｔｏｆＴＡｗａｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｅｃｒｅａｓｅｉｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆＴＮＦαｉｎｓｅｒｕｍ，ｄｅｃｌｉｎｅｉｎＮＯＳ２，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅ
ｉｎｃＮＯＳ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｆｉｎｄｉｎｇｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔＴＡｉｓａｐｏｔｅｎｔｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅａｇｅｎｔａｇａｉｎｓｔＨ．ｐｙｌｏｒｉＬＰＳｉｎｄｕｃｅｄｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａｌｉｎｆｌａｍ
ｍａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｃｏｎｃｅｒｎｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙｂｅｒｅｌａｌｅｄｔｏｉｔｓｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ａｎｄｔｈｅｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ
ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｂｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃＮＯＳａｎｄｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｅｖｅｎｔｓｐｒｏｐａｇａｔｅｄｂｙＮＯＳ２，ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＴＮＦα．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｔｏｔａｌａｌｋａｌｏｉｄｓｆｒｏｍＣｏｐｔｉｓ；Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ａｃｕｔｅｇａｓｔｒｉｔｉｓ；ｃＮＯＳ；ＮＯＳ２；ＴＮＦα
［责任编辑　古云侠］
远志皂苷对 β淀粉样蛋白１４０诱导的体外培养
皮层神经细胞损伤的保护作用
陈　勤，李磊珂
（安徽大学 生命科学学院 安徽省中药研究与开发重点实验室，安徽 合肥 ２３００３９）
［摘要］　目的：研究远志皂苷（ＴＥＮ）对β淀粉样蛋白１４０（Ａβ１４０）诱导的原代培养神经细胞损伤的保护作用。
方法：以原代培养大鼠皮层神经细胞，用２５μｍｏｌ·Ｌ－１聚集状的Ａβ１４０建立神经细胞损伤模型。将培养的神经细胞
分为Ａβ１４０模型组和Ａβ１４０＋远志皂苷（５０，１００，２００μｍｏｌ·Ｌ
－１）处理的低、中、高剂量组，同时设立正常组。在倒置
显微镜下观察远志皂苷给药前后神经细胞的形态学变化，用ＭＴＴ比色法检测神经细胞活性，采用ＬＤＨ比色法检测
神经细胞膜的损伤程度。结果：与正常组相比，２５μｍｏｌ·Ｌ－１Ａβ１４０处理２４ｈ，可使神经细胞的形态发生改变和活力
显著下降，在显微镜下可见神经元失去贴壁能力或易脱落，突起变短。远志皂苷中、高剂量组均能显著降低神经细
胞的坏死百分率，减少ＬＤＨ的释放，明显提高神经细胞的存活率。结论：凝聚态Ａβ１４０对培养的皮层神经细胞有一
定的毒性效应，而远志皂苷对Ａβ１４０引起的神经细胞毒性有明显的保护作用。
［关键词］　远志皂苷；β淀粉样蛋白；皮层神经细胞
［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００７）１３１３３６０４
［收稿日期］　２００６０６２６
［基金项目］　安徽省教育厅自然科学基金（ＫＪ０２８）
［通讯作者］　陈勤，Ｔｅｌ：（０５５１）５１０８１４３８００６，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｑ
ｉｎ１６９＠１６３．ｃｏｍ
　　远志皂苷（ｔｅｎｕｉｇｅｎｉｎ，ＴＥＮ）系远志科植物远志
ＰｏｌｙｇａｌａｔｅｎｕｉｆｏｌｉａＷｉｌｄ．或宽叶远志 Ｐ．ｓｉｂｉｒｉｃａＬ．
的主要有效成分之一。前期研究表明［１，２］，远志皂
苷能明显提高拟痴呆大鼠的学习记忆能力，可显著
升高脑内Ｍ受体密度和增强胆碱乙酰转移酶活性，
能有效地抑制脑胆碱酯酶活性，对 Ａβ引起的神经
细胞的超微结构有明显的保护作用。本研究采用体
外原代神经细胞培养方法来观察ＴＥＮ对Ａβ１４０诱导
的大脑皮层神经细胞损伤的保护作用。
１　材料
１．１　药品与试剂　ＴＥＮ远志皂苷（批号０１０３２６），
由本室自制，含远志皂苷甲素，远志皂苷乙素等成
分，经高效液相色谱法测定，其中远志皂苷甲素含量
为７２％。Ａβ１４０（ａｍｙｌｏｉｄｂｅｔａｐｒｏｔｅｉｎ１４０），Ｓｉｇｍａ公
司产品，临用前精密称取适量干粉，以无菌生理盐水
溶解成１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１溶液，分装并贮存于 －２０
℃，用时融化，稀释。将１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ａβ１４０溶液
于 ３７℃，５％ＣＯ２培养箱中孵育１周，并不时小心搅
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第３２卷第１３期
２００７年７月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
　　　　　　　
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ　１３
Ｊｕｌｙ，２００７