免费文献传递   相关文献

不同采收期泽泻化学成分动态变化的研究



全 文 :[11] SarwarM,KremerRJ.Enhancedsuppressionofplantgrowth
throughproductionofLtryptophanderivedcompoundsbydelete
riousrhizobacteria[J].PlantandSoil,1995,172(2):261.
[12] AlstrmS,BurnsRG.Cyanideproductionbyrhizobacteriaasa
possiblemechanismofplantgrowthinhibition[J].BiolFertil
Soil,1989,7(3):232.
[13] BenizriE,PiutiS,VergerS,etal.Replantdiseases:Bacterial
communitystructureanddiversityinpeachrhizosphereasdeter
minedbymetabolicandgeneticfingerprinting[J].SoilBiolBio
chemistry,2005,37(9):1738.
[14] KremerRJ,CaesarAJ,SouissiT.Soilbornemicroorganismsof
euphorbiaarepotentialbiologicalcontrolagentsoftheinvasive
weedleafyspurge[J].ApplSoilEcol,2006,32(1):27.
[15] BakkerAW,SchippersB.Microbialcyanideproductioninthe
rhizosphereinrelationtopotatoyieldreductionandPseudomonas
sppmediatedplantgrowthstimulation[J].SoilBiolBiochem,
1987,19(4),451. [责任编辑 张宁宁]
不同采收期泽泻化学成分动态变化的研究
刘红昌,杨文钰,陈兴福
(四川农业大学 农学院,四川 雅安 625014)
[收稿日期] 20060112
[通讯作者] 杨文钰,Tel:(0835)2882612
  泽泻为泽泻科泽泻属植物泽泻 Alismaorientalis
(Sam.)Juzep.的干燥球茎,在四川地区,现主要分布
于川西平原的彭山县谢家镇、都江堰市大观镇和石
羊镇、乐山市五通桥区蔡京镇。国内外对泽泻的化
学成分及其含量、药理作用等方面已作了深入的研
究[1],关于泽泻不同采收期的研究也有一定初
报[2,3],但仅凭传统栽培经验或根据某一个成分含
量的高低来确定最佳采收期,不具客观性和科学性。
目前关于泽泻不同采收期化学成分的动态变化即质
量动态变化的深入研究还未见相关报道。本试验研
究了泽泻不同采收期化学成分的动态变化,为生产
实践中确定最佳的采收期提供一定的科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料 本试验于2004年7月~2005年1月在
四川农业大学教学农场进行,供试材料泽泻种子购
于四川省乐山市五通桥区蔡京镇。采用单因素随机
区组设计,于7月20日育苗,9月10日移栽。小区
面积148m2,前作为水稻,设置3次重复。于当年
的11月15日开始取样,之后每隔7d取样一次,直
至最后收获,共取样8次。
1.2 仪器与试药 Agilent高效液相色谱仪,eppen
dorf高速冷冻离心机等。对照品23乙酰泽泻醇 B
和24乙酰泽泻醇A购自南京中医药大学植物药深
加工工程研究中心。乙腈为色谱纯(美国 fisher公
司生产),其余试剂均为分析纯。水为超纯水,即将
蒸馏水通过超纯水器(过022μm膜)。采用“中药
指纹图谱相似度计算软件”和DPS统计软件进行数
据处理。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 AgilentZORBAXExtendC18色谱
柱(46mm×250mm,5μm);流动相为乙腈水,采
用梯度洗脱,乙腈的体积变化:35%~75%~100%;
时间梯度0~40min~60min;流速08mL·min-1;
柱温25℃;检测波长210nm;进样量10μL。
2.2 对照品和供试品溶液的制备
精密称取于60℃干燥至恒重的23乙酰泽泻醇
B和24乙酰泽泻醇A各20mg和90mg,分别置
于25mL量瓶中,用乙腈溶解并定容,再在混匀器上
混匀备用。精密称取于60℃干燥至恒重的各样品
(60目)1000g,分别置于圆底烧瓶中,加入20mL
甲醇,浸泡12h,然后置回流提取器中在70℃下回
流提取3h,残渣用甲醇10mL洗涤2次,合并滤液,
再置于恒温水浴锅中在70℃下挥尽甲醇,用乙腈溶
解,过滤并定容至 10mL,混匀,离心(12000r·
min-1)20min,过045μm滤膜,即为待测样品。
2.3 方法学考察
2.3.1 重复性试验 取 12月 22日采收样品 10
份,在上述色谱条件下测定,以标品23乙酰泽泻醇
B的色谱峰的保留时间和峰面积为1,计算其他各
·7081·
第32卷第17期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 17
September,2007
色谱指纹峰的相对保留时间及相对峰面积。各主要
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD分别
在025%和19%以内。
2.3.2 精密度试验 取1月5日采收样品供试液,
连续进样10次,各主要色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积的RSD分别在035%和28%以内。
2.3.3 稳定性试验 取12月29日采收样品供试
液分别在0,2,4,6,8,12,24,48,72h测定,各主要
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD分别
在089%和36%以内。
2.4 样品测定 在上述色谱条件下,将供试品溶液
分别进样、测定各采收期样品并记录其色谱图。
2.5 样品中23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇 A
含量的测定 采用梯度条件并参照文红梅等[3]的
方法测定样品中23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻
醇A的含量,以二者的浓度对峰面积平均值作图,
求得其线性回归方程分别为:23乙酰泽泻醇 B
A=-148+114×106×CB,r=09999,线性范围
008~04μg·mL-1;24乙酰泽泻醇 AA=391+
727×105×CA,r=09999,线性范围024~186
μg·mL-1。色谱图见图1。
图1 23乙酰泽泻醇B和24乙酰泽泻醇A的
RPHPLC图谱
2.6 不同采收期样品的质量变化 泽泻指纹图谱
及不同采收期样品的指纹图谱重叠图见图2A,B。
由表1可知,10个主要共有峰的峰面积即所代表的
10个主要共有成分的含量随着泽泻生育期的进行
而逐渐上升,在当年的12月22日,除23乙酰泽泻
醇B色谱峰的峰面积还继续上升外,其余9个共有
峰的峰面积均达到最大值,之后均迅速下降。各峰
峰面积增加的幅度各不相同,其中两个标品增加的
幅度最大。23乙酰泽泻醇 B的峰面积在12月29
日达到最大值,之后剧烈下降。不同采收期样品中
23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇 A含量及主要
共有峰总峰面积差异分析见表2。
图2 泽泻指纹图谱及不同采收期样品的
HPLC指纹图谱重叠图
3 结论
本试验首次通过指纹图谱研究泽泻化学成分的
变化规律,克服了过去以某一个成分含量的高低或
以传统栽培经验来确定采收期的不科学和不客观的
缺点。以多成分的含量变化来确定最佳的采收期,
更具科学性和客观性,可为生产实践中泽泻药材规
范化栽培的操作规程提供可靠的科学依据。研究表
表1 不同采收期样品主要共有峰平均峰面积比较(n=3)
采收期
主要共有峰平均峰面积
1 2 3 4 51) 6 7 82) 9 10
1115 2123 2229 1738 1517 3341 1036 25024 8046 2632 924
1122 3042 2280 1815 2077 6244 1292 29905 11765 2964 1514
1201 3131 3414 3040 2372 7508 1735 36944 15153 3821 1632
1208 3937 3414 3152 2388 8165 2183 42538 18592 4139 2889
1215 4196 3547 3677 3493 10715 3260 42752 20076 5866 4886
1222 4731 6564 7413 9715 12839 5493 53336 32117 13631 11445
1229 3888 5255 7370 7631 9906 5357 33960 33156 11051 10421
0105 2380 2018 2328 894 4227 3639 29431 20929 2445 1340
  注:1)24乙酰泽泻醇A,2)23乙酰泽泻醇B
·8081·
第32卷第17期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 17
September,2007
表2 不同采收期样品23alisolB和24alisoA含量
及主要共有峰总峰面积差异分析(n=3)
采收期 23alisolB 24alisolA
主要共有峰
总峰面积
显著水平
5% 1%
1115 0099 0028 486097 A/A/A -
1122 0118 0035 629877 A/B/B a/b/b
1201 0141 0079 787477 AB/C/C c/c/c
1208 0178 0087 913978 AB/D/D d/d/d
1215 0203 0089 102476 C/D/Dd/-/-
1222 0227 0112 1572835 C/E/E e/e/e
1229 0249 0060 1279951 - -
0105 0199 0046 696311 - -
明,在盆周山区,泽泻的最佳采收期为12月下旬,采
收过早或过迟均影响到泽泻的总体质量,这与过去
的研究方法是不同的[2,3]。采收过早,各成分含量
均未达到其最大值;采收过晚,各成分含量均开始下
降,总体质量均不佳,而且到后期,由于气温下降,也
不利于采收。但采收过晚,泽泻总体质量下降的原
因还值得进一步研究。
[参考文献]
[1]  徐 晖.泽泻药理作用研究进展[J].湖南中医杂志,2004,20
(3):77.
[2]  陈 明.泽泻丰产的栽培技术[J].中国中药杂志,1994,19
(12):722.
[3]  文红梅,李 伟,彭国平,等.泽泻不同采收期23乙酰泽泻醇
B含量变化[J].中药材,1998,21(12):595.
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20060520
[基金项目] 国家科技攻关计划分支课题(2001BA701A6007)
[通讯作者] 斯拉甫·艾白,Tel:(0991)2557732,Email:aibai
@263.com
阜康阿魏的最佳采收期研究
斯拉甫·艾白1,希尔艾力·吐尔逊1,凯撒·苏来曼2
(1.新疆维吾尔自治区维吾尔医研究所,新疆 乌鲁木齐 830001;
2.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所,新疆 乌鲁木齐 830002)
  阿魏是伞形科植物新疆阿魏 Ferulasinkiangen
sisK.M.Shen或阜康阿魏FerulafukanensisK.M.
Shen的树脂[1]。维吾尔医中叫“英”,性三级干热,
消食健胃,通经止痛,祛风寒,排泄多余黏液质,强筋
健脑[2]。阿魏酸是阿魏中主要的有机酸类成分。
阿魏药材用快刀在其主茎的中上部向下环切,反复
收集乳汁。通风处阴干,即成块状凝固的阿魏树
脂[3]。因此,为了掌握阿魏的生长规律,确定阿魏
的最佳的采收期,作者考察了不同时期阜康阿魏根
中阿魏酸的含量变化。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 Waters制备高效液相色谱仪,包括Wa
tersDelta600泵,Waters2996PDA检测器,Waters
717自动进样器;Sartorius电子天平(北京赛多利斯
仪器系统有限公司)。
1.2 试剂 乙腈、甲醇为色谱级,其他试剂均为分
析纯。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,
批号0766200011);药材为阜康阿魏的根,采收期
分别为:20040412,20040516,20040613,2004
0715,20050415,20050513,20050617,200507
14,20050812。阜康阿魏由新疆中药民族研究所
凯撒·苏来曼提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与色谱适用性 色谱柱:WatersSym
metryRpC18(39mm×150mm,5μm);检测波长
323nm;流动相乙腈01%磷酸溶液(16∶84);流速
10mL·min-1;柱温25℃。理论塔板数按阿魏酸
峰计算应不低于3500。色谱图见图1。
图1 供试品HPLC图
A.对照品;B.供试品;a.阿魏酸
·9081·
第32卷第17期
2007年9月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.32,Issue 17
September,2007