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1987,19(4),451. [责任编辑 张宁宁]
不同采收期泽泻化学成分动态变化的研究
刘红昌,杨文钰,陈兴福
(四川农业大学 农学院,四川 雅安 625014)
[收稿日期] 20060112
[通讯作者] 杨文钰,Tel:(0835)2882612
泽泻为泽泻科泽泻属植物泽泻 Alismaorientalis
(Sam.)Juzep.的干燥球茎,在四川地区,现主要分布
于川西平原的彭山县谢家镇、都江堰市大观镇和石
羊镇、乐山市五通桥区蔡京镇。国内外对泽泻的化
学成分及其含量、药理作用等方面已作了深入的研
究[1],关于泽泻不同采收期的研究也有一定初
报[2,3],但仅凭传统栽培经验或根据某一个成分含
量的高低来确定最佳采收期,不具客观性和科学性。
目前关于泽泻不同采收期化学成分的动态变化即质
量动态变化的深入研究还未见相关报道。本试验研
究了泽泻不同采收期化学成分的动态变化,为生产
实践中确定最佳的采收期提供一定的科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料 本试验于2004年7月~2005年1月在
四川农业大学教学农场进行,供试材料泽泻种子购
于四川省乐山市五通桥区蔡京镇。采用单因素随机
区组设计,于7月20日育苗,9月10日移栽。小区
面积148m2,前作为水稻,设置3次重复。于当年
的11月15日开始取样,之后每隔7d取样一次,直
至最后收获,共取样8次。
1.2 仪器与试药 Agilent高效液相色谱仪,eppen
dorf高速冷冻离心机等。对照品23乙酰泽泻醇 B
和24乙酰泽泻醇A购自南京中医药大学植物药深
加工工程研究中心。乙腈为色谱纯(美国 fisher公
司生产),其余试剂均为分析纯。水为超纯水,即将
蒸馏水通过超纯水器(过022μm膜)。采用“中药
指纹图谱相似度计算软件”和DPS统计软件进行数
据处理。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 AgilentZORBAXExtendC18色谱
柱(46mm×250mm,5μm);流动相为乙腈水,采
用梯度洗脱,乙腈的体积变化:35%~75%~100%;
时间梯度0~40min~60min;流速08mL·min-1;
柱温25℃;检测波长210nm;进样量10μL。
2.2 对照品和供试品溶液的制备
精密称取于60℃干燥至恒重的23乙酰泽泻醇
B和24乙酰泽泻醇A各20mg和90mg,分别置
于25mL量瓶中,用乙腈溶解并定容,再在混匀器上
混匀备用。精密称取于60℃干燥至恒重的各样品
(60目)1000g,分别置于圆底烧瓶中,加入20mL
甲醇,浸泡12h,然后置回流提取器中在70℃下回
流提取3h,残渣用甲醇10mL洗涤2次,合并滤液,
再置于恒温水浴锅中在70℃下挥尽甲醇,用乙腈溶
解,过滤并定容至 10mL,混匀,离心(12000r·
min-1)20min,过045μm滤膜,即为待测样品。
2.3 方法学考察
2.3.1 重复性试验 取 12月 22日采收样品 10
份,在上述色谱条件下测定,以标品23乙酰泽泻醇
B的色谱峰的保留时间和峰面积为1,计算其他各
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第32卷第17期
2007年9月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.32,Issue 17
September,2007
色谱指纹峰的相对保留时间及相对峰面积。各主要
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD分别
在025%和19%以内。
2.3.2 精密度试验 取1月5日采收样品供试液,
连续进样10次,各主要色谱峰的相对保留时间和相
对峰面积的RSD分别在035%和28%以内。
2.3.3 稳定性试验 取12月29日采收样品供试
液分别在0,2,4,6,8,12,24,48,72h测定,各主要
色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的 RSD分别
在089%和36%以内。
2.4 样品测定 在上述色谱条件下,将供试品溶液
分别进样、测定各采收期样品并记录其色谱图。
2.5 样品中23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇 A
含量的测定 采用梯度条件并参照文红梅等[3]的
方法测定样品中23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻
醇A的含量,以二者的浓度对峰面积平均值作图,
求得其线性回归方程分别为:23乙酰泽泻醇 B
A=-148+114×106×CB,r=09999,线性范围
008~04μg·mL-1;24乙酰泽泻醇 AA=391+
727×105×CA,r=09999,线性范围024~186
μg·mL-1。色谱图见图1。
图1 23乙酰泽泻醇B和24乙酰泽泻醇A的
RPHPLC图谱
2.6 不同采收期样品的质量变化 泽泻指纹图谱
及不同采收期样品的指纹图谱重叠图见图2A,B。
由表1可知,10个主要共有峰的峰面积即所代表的
10个主要共有成分的含量随着泽泻生育期的进行
而逐渐上升,在当年的12月22日,除23乙酰泽泻
醇B色谱峰的峰面积还继续上升外,其余9个共有
峰的峰面积均达到最大值,之后均迅速下降。各峰
峰面积增加的幅度各不相同,其中两个标品增加的
幅度最大。23乙酰泽泻醇 B的峰面积在12月29
日达到最大值,之后剧烈下降。不同采收期样品中
23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇 A含量及主要
共有峰总峰面积差异分析见表2。
图2 泽泻指纹图谱及不同采收期样品的
HPLC指纹图谱重叠图
3 结论
本试验首次通过指纹图谱研究泽泻化学成分的
变化规律,克服了过去以某一个成分含量的高低或
以传统栽培经验来确定采收期的不科学和不客观的
缺点。以多成分的含量变化来确定最佳的采收期,
更具科学性和客观性,可为生产实践中泽泻药材规
范化栽培的操作规程提供可靠的科学依据。研究表
表1 不同采收期样品主要共有峰平均峰面积比较(n=3)
采收期
主要共有峰平均峰面积
1 2 3 4 51) 6 7 82) 9 10
1115 2123 2229 1738 1517 3341 1036 25024 8046 2632 924
1122 3042 2280 1815 2077 6244 1292 29905 11765 2964 1514
1201 3131 3414 3040 2372 7508 1735 36944 15153 3821 1632
1208 3937 3414 3152 2388 8165 2183 42538 18592 4139 2889
1215 4196 3547 3677 3493 10715 3260 42752 20076 5866 4886
1222 4731 6564 7413 9715 12839 5493 53336 32117 13631 11445
1229 3888 5255 7370 7631 9906 5357 33960 33156 11051 10421
0105 2380 2018 2328 894 4227 3639 29431 20929 2445 1340
注:1)24乙酰泽泻醇A,2)23乙酰泽泻醇B
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表2 不同采收期样品23alisolB和24alisoA含量
及主要共有峰总峰面积差异分析(n=3)
采收期 23alisolB 24alisolA
主要共有峰
总峰面积
显著水平
5% 1%
1115 0099 0028 486097 A/A/A -
1122 0118 0035 629877 A/B/B a/b/b
1201 0141 0079 787477 AB/C/C c/c/c
1208 0178 0087 913978 AB/D/D d/d/d
1215 0203 0089 102476 C/D/Dd/-/-
1222 0227 0112 1572835 C/E/E e/e/e
1229 0249 0060 1279951 - -
0105 0199 0046 696311 - -
明,在盆周山区,泽泻的最佳采收期为12月下旬,采
收过早或过迟均影响到泽泻的总体质量,这与过去
的研究方法是不同的[2,3]。采收过早,各成分含量
均未达到其最大值;采收过晚,各成分含量均开始下
降,总体质量均不佳,而且到后期,由于气温下降,也
不利于采收。但采收过晚,泽泻总体质量下降的原
因还值得进一步研究。
[参考文献]
[1] 徐 晖.泽泻药理作用研究进展[J].湖南中医杂志,2004,20
(3):77.
[2] 陈 明.泽泻丰产的栽培技术[J].中国中药杂志,1994,19
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[3] 文红梅,李 伟,彭国平,等.泽泻不同采收期23乙酰泽泻醇
B含量变化[J].中药材,1998,21(12):595.
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20060520
[基金项目] 国家科技攻关计划分支课题(2001BA701A6007)
[通讯作者] 斯拉甫·艾白,Tel:(0991)2557732,Email:aibai
@263.com
阜康阿魏的最佳采收期研究
斯拉甫·艾白1,希尔艾力·吐尔逊1,凯撒·苏来曼2
(1.新疆维吾尔自治区维吾尔医研究所,新疆 乌鲁木齐 830001;
2.新疆维吾尔自治区中药民族药研究所,新疆 乌鲁木齐 830002)
阿魏是伞形科植物新疆阿魏 Ferulasinkiangen
sisK.M.Shen或阜康阿魏FerulafukanensisK.M.
Shen的树脂[1]。维吾尔医中叫“英”,性三级干热,
消食健胃,通经止痛,祛风寒,排泄多余黏液质,强筋
健脑[2]。阿魏酸是阿魏中主要的有机酸类成分。
阿魏药材用快刀在其主茎的中上部向下环切,反复
收集乳汁。通风处阴干,即成块状凝固的阿魏树
脂[3]。因此,为了掌握阿魏的生长规律,确定阿魏
的最佳的采收期,作者考察了不同时期阜康阿魏根
中阿魏酸的含量变化。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 Waters制备高效液相色谱仪,包括Wa
tersDelta600泵,Waters2996PDA检测器,Waters
717自动进样器;Sartorius电子天平(北京赛多利斯
仪器系统有限公司)。
1.2 试剂 乙腈、甲醇为色谱级,其他试剂均为分
析纯。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,
批号0766200011);药材为阜康阿魏的根,采收期
分别为:20040412,20040516,20040613,2004
0715,20050415,20050513,20050617,200507
14,20050812。阜康阿魏由新疆中药民族研究所
凯撒·苏来曼提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与色谱适用性 色谱柱:WatersSym
metryRpC18(39mm×150mm,5μm);检测波长
323nm;流动相乙腈01%磷酸溶液(16∶84);流速
10mL·min-1;柱温25℃。理论塔板数按阿魏酸
峰计算应不低于3500。色谱图见图1。
图1 供试品HPLC图
A.对照品;B.供试品;a.阿魏酸
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