全 文 :量大于57%。
防风的止痛作用是其多种化合物共同作用的结
果,其各种成分含量的改变,尤其是在方剂中与其他
药物的不同配伍,会使其止痛作用发生质变和量变。
本研究结果为阐明防风色原酮类成分群的药效物质
基础提供了实验依据。
[参考文献]
[1] 薛宝云,李 文,李 丽,等.防风色原酮苷类成分的药理活性
研究[J].中国中药杂志,2000,25(5):297.
[2] EmiOkuyama,Tetsuyahasegawa,TakamitsuMatsushita,etal.
AnalgesiccomponentsofSaposhnikoviaRoot(Saposhnikoviadivar
icata)[J].ChemPharmBul,2001,49(2):154.
Isolationpreparationanddeterminationofchromonesfrom
Saposhnikoviadivaricata
ZHANGCun,XIAOYongqing,LILi,PANGZhen,LIGuiliu
(InstituteofChineseMateriaMadica,ChinaAcademyofChineseMedicialSciences,Beijing100700,China)
[Abstract] Objective:TocomparethecontentsofchromonesinthediferentisolationandpurificationproceduresfromSaposh
nikoviadivaricata.Method:TheseparationofsixchromoneswasdeterminedsimultaneouslybyHPLConaKromasilC18columnat35
℃ withthemethanol01% phosphoricacidingradientelutionasthemobilephrase.Thedetectionwavelengthwassetat254nmand
theflowratewas10mL·min-1.Result:Altheobtainedcorelationcoeficientofthesixcomponentswasover09995andtheav
eragerecoverieswerenotlessthan97% (RSD<5%),respectively.Conclusion:Themethodissimple,accuratewithgoodrepro
ducibility.Resultsshowedthebeterpreparationprocedureiswaterdecoctionandethanolprecipitationwithresinseparationandsilica
gelpurification.
[Keywords] Saposhnikoviadivaricata;chromones;preparation;HPLC;determination
[责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080311
[通讯作者] 聂黎行,Tel:(010)67095313,Email:nielixing@
163.com
4种中药注射液中重金属及有害元素残留量
检测方法研究
聂黎行,金红宇,王钢力,田金改,林瑞超
(中国药品生物制品检定所,北京 100050)
[摘要] 目的:建立了4种中药注射液中重金属及有害元素的残留量的测定方法。方法:采用石墨炉原子吸
收分光光度法测定铅、镉、铜,原子荧光法测定砷、汞。对样品的前处理方法进行了优化。结果:5种重金属元素的
回收率在91%~112%,精密度<2%。铅、镉、铜、砷、汞的检出限分别为028,0014,049,019,0061μg·L-1。
结论:方法简便、灵敏、准确、可靠,值得推广。
[关键词] 重金属及有害元素;中药注射液;原子吸收分光光度法;原子荧光法
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)23276404
中药作为天然药物,因毒副作用小、疗效好而受
到人们的青睐,但由于中药在栽培、贮存、炮制等过
程中可能不同程度受到有毒有害物质的污染,其安
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ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.33,Issue 23
December,2008
全性近来受到广泛关注。重金属及有害元素残留量
成为焦点问题之一。目前,国内外将铅(Pb)、镉
(Cd)、铜(Cu)、砷(As)和汞(Hg)作为主要监控指
标。药典[1]对金银花、甘草等5种中药材中Pb,Cd,
Cu,As,Hg的残留量规定了检测方法和限度要求。
近年来,中药中重金属残留问题引起了越来越多的
国内学者的关注[23],但有关中药注射液中重金属残
留的检测鲜有报道[4],注射液中砷、汞的检测尚未
见报道。国家食品药品监督管理局为贯彻落实国务
院常务会议精神,针对当前药品安全风险现状,对注
射剂等高危、高风险品种进一步采取措施严格监管,
开展了中药注射剂质量标准提高工作。作者建立了
石墨炉原子吸收分光光度法和原子荧光法测定4种
中药注射液中铅、镉、铜、砷、汞残留量的方法,为进
一步提高中药注射液的质量,保证其用药安全提供
了实验依据。
1 仪器与试药
Mars5微波消解仪(CEM公司),AFS-9130双
道原子荧光光度计(北京吉天仪器有限公司),SO
LAARM6原子吸收光谱仪(Thermo公司)。分析纯
磷酸二氢铵、硝酸镁、碘化钾、抗坏血酸、硼氢化钠、
氢氧化钠(北京化学试剂公司),优级纯盐酸、硫酸
(北京化工厂),MOS级硝酸(北京化学试剂研究
所),水为超纯水(由 MILLIPORE超纯水系统制
备)。铅、镉、铜、砷、汞单元素标准溶液购于国家标
准物质研究中心,用2%硝酸稀释后使用。生脉注
射液来自四川省宜宾五粮液集团宜宾制药有限责任
公司、吉林省集安益盛药业股份有限公司、雅安三九
药业有限公司、上海和黄药业、江苏苏中药业集团股
份有限公司、常熟雷允上制药有限公司、山西太行药
业股份有限公司、四川川大华西药业股份有限公司,
参麦注射液来自正大青春宝药业有限公司、河北神
威药业有限公司、四川川大华西药业股份有限公司、
四川三精升和制药有限公司、雅安三九药业有限公
司、参附注射液来自雅安三九药业有限公司、肿节风
注射液来自广东省博罗先锋药业集团有限公司、福
建古田药业有限公司、通化华夏药业有限责任公司、
浙江国境药业有限公司、广西梧州制药(集团)股份
有限公司、江西天施康中药股份有限公司。
原子吸收工作条件和石墨炉升温程序分别见表
1和表2,原子荧光仪器工作条件见表3。
表1 原子吸收仪工作条件
参数 Pb Cd Cu
灯电流(mA) 50 56 40
波长(nm) 2833 2288 3248
狭缝(通带)(nm) 05 05 05
背景校正 塞曼 塞曼 塞曼
进样量(μL) 100 100 100
基体改进剂(含1%磷酸二氢铵和 50 50 无
02%硝酸镁的溶液)(μL)
读数方式 峰高 峰高 峰高
表2 石墨炉升温程序
参数 Pb Cd Cu
石墨管类型 ELC ELC ELC
干燥温度(℃) 120 110 110
保持(s) 25 20 20
灰化温度(℃) 600,1000 800 800
保持(s) 15,5 25 20
原子化温度(℃) 1450 1300 2100
保持(s) 3 3 3
清除温度(℃) 2500 2100 2500
保持(s) 2 2 3
表3 原子荧光仪工作条件
参数 As Hg
原子化器高度(mm) 8 8
载气(Ar)流量(mL·min-1) 400 800
屏蔽气(Ar)流量(mL·min-1) 500 800
灯电流(mA) 70 25
光电倍增管负高压(V) 280 280
还原剂 含1%硼氢化钠和03%氢氧化钠的溶液 含005%硼氢化钠和02%氢氧化钠的溶液
载液 盐酸(1~100) 盐酸(1~100)
读数方式 峰面积 峰面积
2 方法
2.1 供试品溶液的制备
精密量取样品3mL于微波消解罐内,加入硝酸
40mL,置 Mars5微波消解仪内消解,消解程序见
表4。消解完毕后,使消解罐自然冷却至室温,置电
热板上130℃赶酸30min,放冷,用水转移至10mL
比色管中,并稀释至刻度,即得供试品溶液。随行
做试剂空白。
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表4 微波消解程序
步骤 温度/℃ 升温时间/min 保持时间/min
1 110 3 3
2 150 3 3
3 180 3 9
2.2 测定方法
2.2.1 Pb,Cd,Cu的测定 均采用随行标准曲线法
测定,使用仪器自动配制标准系列见表5,以吸光度
为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标绘制标准曲线,同
法测定试剂空白溶液和供试品溶液,然后根据供试
品溶液吸光度从标准曲线上读出相应的浓度,计算
含量。
表5 标准曲线浓度范围
元素 线性范围/μg·L-1
Pb 5~80
Cd 08~8
Cu 10~50
As 1~10
Hg 01~10
2.2.2 As的测定 精密量取砷标准储备液(1mg
·L-1)1mL,加 25%碘化钾溶液(临用前现配)1
mL,摇匀,加 10%抗坏血酸溶液(临用前现配)1
mL,摇匀,再加硫酸溶液(1~10)25mL,加水稀释并
定容至100mL,摇匀,作为主标液(10μg·L-1)。
仪器自动配置标准系列(表5),测定荧光强度值,以
荧光值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。精
密量取供试品溶液1mL,加25%碘化钾溶液(临用
前现配)1mL,摇匀,加10%抗坏血酸溶液(临用前
现配)1mL,摇匀,再加硫酸溶液(1~10)25mL,加
水稀释并定容至 10mL,摇匀,同法测定荧光强度
值,从标准曲线上读出供试品中砷的浓度,计算含
量。
2.2.3 Hg的测定 精密量取汞标准液(100μg·
L-1)1mL,置100mL量瓶中,加20%硫酸溶液10
mL,再加水稀释至刻度,摇匀,作为主标液(1μg·
L-1)。仪器自动配置标准系列(表5),测定荧光强
度值,以荧光值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准
曲线。精密量取供试品溶液1mL置10mL比色管
中,加20%硫酸1mL,加水稀释至刻度,摇匀。同法
测定荧光值,从标准曲线上读出供试品中汞的浓度,
计算含量。
3 结果与讨论
3.1 精密度和检出限
对样品进行 6次重复测定,吸收值 RSD低于
2%,见表6。连续测定空白溶液11次,用3倍空白
溶液吸收值的标准偏差除以标准曲线斜率即为各元
素检出限,见表6。
表6 精密度和检出限
元素 精密度/% 检出限/μg·L-1
Pb 102 028
Cd 165 0014
Cu 181 049
As 101 019
Hg 101 0061
3.2 准确性
采用3水平加样回收实验,取已知各元素残留
量的4种注射液各 15mL,分别加入 3个水平的
Pb,Cd,Cu,As,Hg标准溶液,每个水平平行处理 3
份样品,依法测定其含量,计算回收率,结果4种注
射液的5种重金属元素的回收率在91% ~112%,
精密度<2%。
3.3 空白干扰
重金属元素的残留测定属痕量分析范畴,环境、
试剂、器皿都可能给分析带来极大干扰。硝酸试剂
必须采用高纯试剂,实验用水以蒸馏水为好。本实
验比较了4种净化水,结果以经 Milipore超纯水系
统过滤的蒸馏水,砷、铜等元素空白吸收最低,效果
最好。所用器皿均在使用前以硝酸溶液(1→3)浸
泡过夜,再冲洗后使用。供试液及标准液均不宜在
玻璃器皿中长时间存放。每次测定必须随行空白试
验,以保证分析结果可靠。
3.4 样品经消解处理的必要性
由于注射液为液体,理论上在原子吸收和原子
荧光分析中,可以直接进样测定。但由于待测元素
在样品中不一定会以单一的无机游离状态存在,可
能有多种形态、价态存在方式;另一方面,样品中的
复杂基质可能对测定起到掩蔽、干扰等作用。因此,
有必要对样品是否需要消解进行对比考察。同一样
品分别采用以下3种不同方法进行前处理:A原液
直接测定;B取样3mL,加水稀释并定容至10mL;C
取样3mL,加硝酸5mL消解,赶酸后用水转移并定
容至10mL,测定其5种元素含量,见表7。结果表
明,未经消解的样品检出量明显低于消解过的样品,
说明应对样品进行有机破坏后再测定。
3.5 加热赶酸对测定的影响
消解完毕后,溶液中含较多的氮氧化物,需加热
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表7 不同前处理方法的考察
前处理
方法
质量浓度/μg·L-1
Pb Cd As Hg Cu
A 205 - 140 - 1391
B 595 - 299 - 2681
C 584 030 4942 641 4485
排除,以免对后续测定造成影响。分别考察了不同
硝酸残留浓度和加热温度对测定的影响。精密量
取各元素标准液适量,平行制备含 Pb,Cd,Cu,As,
Hg对照品各 02,002,02,05,005μg的混合
溶液4份,分别加硝酸0,1,3,5mL,再加水定容至
10mL,摇匀,按前法,测定5种元素含量,结果见表
8。由表可见,不同酸浓度下的混标液质量浓度差
别不大,说明硝酸浓度对5种元素的测定无显著影
响。
表8 不同酸度对混标溶液测定结果的影响
加酸量
/mL
质量浓度/μg·L-1
Pb Cd As Hg Cu
0 1961 243 5164 595 2181
1 1907 235 5017 539 1891
3 1939 221 4931 545 1974
5 1964 233 4872 1974 1905
精密量取各元素标准液适量,平行制备含 Pb,
Cd,Cu,As,Hg标准品各 02,002,02,05,005
μg的混合溶液4份,各加硝酸5mL,分别于130℃
电热板上加热赶酸0,05,1,2h,放冷,再加水定容
至10mL,摇匀,测定含量,结果见表9。由表可见,
随着加热时间的增长,Pb,Cd,Cu,As,Hg的质量浓
度没有明显下降,说明130℃加热赶酸时间不超过
2h,不会造成Pb,Cd,Cu,As,Hg的损失。
表9 不同赶酸时间对混标溶液测定结果的影响
赶酸时间
/h
质量浓度/μg·L-1
Pb Cd As Hg Cu
0 1954 214 4872 539 2158
1 1926 203 5017 539 2097
3 1917 224 4931 471 2146
5 1932 218 5025 511 2114
3.6 样品测定结果
用所建立的方法对17个厂家的4种共计60批
注射液样品进行测定,所有样品各元素质量浓度分
布见表10。
表10 样品测定结果分布
质量浓度
批数
Pb Cd As Hg Cu
低于检出限 12 44 8 42 2
<10μg·L-1 26 16 7 18 18
10~100μg·L-1 19 0 43 0 40
>100μg·L-1 3 0 2 0 0
[参考文献]
[1] 中国药典.一部[S].2005:52.
[2] 秦樊鑫,张明时,胡继伟,等.氯化钯作基体改进剂 GFAAS法
测定中药材中微量铅的研究[J].光谱学与光谱分析,2007,27
(10):2123.
[3] 聂黎行,李向日,金红宇,等.同仁乌鸡白凤丸中重金属和农药
残留的测定[J].中国中药杂志,2007,32(23):2563.
[4] 宗水珍,汪学英,徐 娟.石墨炉原子吸收分光光度法测定茵
栀黄注射液及其中的铅镉[J].应用化学,2007,24(10):1219.
Studyofdeterminationmethodforheavymetalsandharmfulelements
residuesinfourtraditionalChinesemedicineinjections
NIELixing,JINHongyu,WANGGangli,TIANJingai,LINRuichao
(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicalProducts,Beijing100050,China)
[Abstract] MethodsfordeterminationofheavymetalsandharmfulresiduesintraditionalChinesemedicineinjectionwerees
tablished.Graphitefurnaceatomicabsorptionspectrometrywasusedfordeterminationoflead,cadmiumandcopper,atomicfluores
cencespectrometryforarsenicandmercury.Thepreprocessingmethodwasoptimized.Theaveragerecoveriesof5elementswerebe
tween91% and112% whiletheprecisionswerelessthan2%.Thedeterminationlimitoflead,cadmium,copper,arsenicandmercu
rywere028,0014,049,019,0061μg·L-1,respectively.Theproposedmethodwassimple,sensitive,accurateandreliable,
andcouldbeusedwidely.
[Keywords] heavymetalsandharmfulelementsresidues;traditionalchinesemedicineinjection;atomicabsorptionspectrome
try;atomicfluorescencespectrometry [责任编辑 鲍 雷]
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第33卷第23期
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