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StudiesonseedsgerminationandseedlingsgrowthofNotopterygiumincisum
SHIJing1,JIANGShunyuan2,MAXiaojun1,SUNHui3,ZHOUYi2
(1.InstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100094,China;
2.SichuanInstituteofChineseMeteriaMedica,Chengdu610041,China;
3.DepartmentofEnvironmentalScienceandEngineering,SichuanUniversity,Chengdu610065,China)
[Abstract] Objective:Toinvestigatetheappropriateculturemedium,processofseedsgerminationandseedlingsgrowth,and
opticalmeasuresforseedlingmanagementofNotopterygiumincisum.Method:Germinationtimeandduration,germinationpotential
andgerminationratioweredeterminedthroughcontroledtemperature,photoperiod,culturemediumandseedlingdepthinilumination
incubators.Result:Theappropriatetemperaturewas15℃,andthemostsuitableculturemediumwasA6(mixtureofsawdust,ver
miculite,charcoal,andperliet),andthemostsuitableseminationdepthis115cm.Conclusion:Highqualifiedseedlingscanbe
germinatedthroughthedormancybrokenseeds,andsoilandotherculturemediumswithhighorganicmatercontentandloosingtexture
aresuitableforgerminationandseedlingsraisingofNincisum.
[Keywords] Notopterygiumincisum;dormancybrokenseeds;germination;seedlingsraising
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20060110
[通讯作者] 杨文钰,Tel:(0835)2882612,Email:wenyuyang
@263.net
四川道地药材泽泻指纹图谱的建立及其质量研究
刘红昌,杨文钰,陈兴福
(四川农业大学 农学院,四川 雅安 625014)
[摘要] 目的:建立泽泻药材的指纹图谱,研究四川不同产区泽泻药材的质量,为科学评价及有效控制其质量
提供参考。方法:采用梯度洗脱法进行色谱分离,使用“中药指纹图谱相似度计算软件”进行数据处理。结果:17
批样品得到的色谱指纹图谱有26个共有峰,16和22号峰分别被鉴定为24乙酰泽泻醇A和23乙酰泽泻醇B。结
论:泽泻药材的指纹图谱特征性及专属性强,可结合含量测定用于全面控制其质量,确保每批产品的均一性。
[关键词] 泽泻;道地药材;指纹图谱
[中图分类号]S567;R2841 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18184404
泽泻为泽泻科植物泽泻 Alismaplantagoaquati caLinn的干燥球茎。对其质量控制,目前是将其完
整的样品通过化学分析手段,以单一有效成分含量
作为其质量控制的指标[1,2],但这无疑将中药材本
身内部各种成分的综合作用和相互关系割裂开来,
不能准确反映中药材的质量,所以整体的综合分析
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将成为中药质量监控的必然举措[3]。因此,有必要
建立泽泻药材有效的质量评价方法,对不同产区泽
泻质量进行系统比较研究,确保其药材质量稳定。
本实验按国家食品药品监督管理局2000年颁
发的“关于注射剂用中药材指纹图谱研究技术要
求”及根据周玉新和洪筱坤[4,5]的中药数字化色谱
指纹谱研究方法,对四川道地药材泽泻进行了
HPLC醇提物指纹图谱的方法建立。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪,eppendorf高速冷冻离
心机等;对照品23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇
A购自南京中医药大学植物药深加工工程研究中
心,乙腈为色谱纯(美国fisher进口分装),其余试剂
均为分析纯。
1.2 材料
样品于2004年12月下旬采集(表1)。
表1 泽泻样品来源
No 产地 No 产地
四川都江堰市石羊镇 10 红星村
1 元定村 四川乐山市五通桥区蔡京镇
2 官田村 11 团山村
3 柯家村 12 李子村二组
4 青智村 13 永镇村二组
5 青平村 14 瓦耳井村
都江堰大观镇 15 中心村
6 谷旺村 四川彭山县谢家镇
7 平清村 16 曾湃村
8 万安村 17 陈桥村
9 友爱村
1.3 数据处理软件
使用国家食品药品监督管理局采用的“中药指
纹图谱相似度计算软件”进行数据处理。
2 结果与分析
2.1 色谱条件
HypersilODS柱(46mm×250mm,5μm),流
速08mL·min-1;柱温25℃;进样量10μL;检测
波长210nm。流动相为乙腈水,乙腈的体积变化为
0~40min:35%~75%;40~60min:75%~100%。
2.2 重复性试验
取蔡京镇李子村二组样品10份,在优化条件下
测定,各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD分别在025%和19%以内。
2.3 稳定性试验
取石羊镇平清村样品供试液分别在0,2,4,6,
8,12,24,48,72h测定,各主要色谱峰的相对保留时
间和相对峰面积的 RSD分别在089%和36%以
内。
2.4 精密度试验
取蔡京镇中心村的供试品溶液,连续进样10次
测定,各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD分别在035%和28%以内。
2.5 供试品溶液制备
精密称取于60℃干燥至恒重的过20目的样品
1000g,置于 500mL圆底烧瓶中,加入 20mL甲
醇,浸泡12h,然后置回流提取器中在70℃下回流
提取3h,残渣用甲醇10mL洗涤2次,合并滤液,置
于旋转蒸发仪中挥尽甲醇,用色谱纯乙腈溶解,过滤
并定容至10mL,置混匀器上混匀,12000r·min-1
离心20min,再过045μm一次性滤膜备用。
2.6 对照品溶液的制备
精密称取于60℃干燥至恒重的23乙酰泽泻醇
B和24乙酰泽泻醇A各20mg和90mg,分别置
于25mL量瓶中,用色谱纯乙腈定容,置混匀器上混
匀,12000r·min-1离心20min,再过045μm滤膜
备用。
2.7 样品测定
在优化的条件下,将供试品溶液分别进样、测定
各批次样品并记录其色谱图。
2.8 泽泻药材指纹谱的建立[5]
2.8.1 主要色谱峰的鉴定及内参照峰的选择和定
位 在优化色谱条件下,测定23乙酰泽泻醇 B和
24乙酰泽泻醇A的对照品图谱,二者分别在4265
min和3036min出现色谱峰。与样品图谱中相应
色谱峰进行比较,发现16和22号色谱峰的保留时
间及紫外光谱分别与对照品的吻合,故样品图谱中
16和22号特征峰分别被鉴定为24乙酰泽泻醇 A
与23乙酰泽泻醇 B。在各产区样品图谱中,23乙
酰泽泻醇 B的色谱峰和相邻色谱峰分离良好,峰位
居中,且为所有样品所共有,所以确定23乙酰泽泻
醇B为内参照峰。
2.8.2 共有峰和重叠率 确定相对保留时间比较
窗口阈值为±1%,则17批样品有26个共有峰(表
2)。都江堰产区样品出峰数较多(42个)且17批样
品的共有峰均能在其中找到,因此以都江堰产区样
品为泽泻的标准药材,其余产区样品与它比较。由
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于各产区生态环境各异,虽属同一品种,但仍存在产
地差异。产区药材图谱重叠率均在70%以上。
表2 泽泻药材共有峰的指纹谱
峰号
保留时间
/min
相对保留
时间
峰面积
相对峰
面积
峰面积
比率/%
1 253 006 6751 034 22~42
2 360 009 2285 004
3 431 010 2835 010
4 528 012 3691 005
5 718 017 2591 009
6 776 018 616 002
7 920 022 4494 014
8 1391 033 1195 003
9 1630 039 985 003
10 2137 040 3461 002
11 2315 050 2235 015
12 2490 054 6331 011
13 2614 059 560 010
14 2739 062 1660 002
15 2829 063 1266 001
16 3031 064 18779 036 136~173
17 3358 074 2151 013
18 3465 074 1893 012
19 3543 079 103782 201 506~607
20 3878 089 584 003
21 3974 091 820 003
22 4250 100 29229 100 146~216
23 5390 104 1686 002
24 5356 127 2983 0045
25 5633 133 417 002
26 5826 139 395 001
泽泻药材的标准指纹图谱见图1,整个图谱可
分为3个部分:保留时间2~10min,出现6个色谱
峰,其主要特征峰1和4在此区域出现;保留时间
10~30min,有9个色谱峰,其主要特征峰7,9和12
均在此区域;保留时间30~60min,共有11个色谱
峰,其主要特征峰16,19,22,24和26均在此区域。
最强峰为19号色谱峰,其次为22,16和24号峰,相
对峰面积比值为 RA16∶RA19∶RA22∶RA24=(106~
115)∶(320~430)∶100∶(030~069)。
2.8.3 特征指纹曲线 综合共有峰信息,从中挑选
合适的色谱峰作为特征指纹。按以下 2个条件入
选:首先从共有峰样品数考虑,即达到总样品数
75%以上者;其次是具有特殊活性或具有对照品者。
以相对峰面积为纵轴,相对保留时间为横轴绘出泽
泻药材的特征指纹谱曲线图(图2)。
2.9 各产区药材指纹图谱相似度评价
各产区内药材相似度均在096以上,各产区间
图1 泽泻药材标准HPLC指纹图谱
图2 泽泻药材特征指纹谱曲线图
药材相似度也均在094以上,表明产区间药材质量
十分稳定,该结果表明产区样品质量稳定的重要性
及建立道地药材 GAP基地的必要性。各产区泽泻
药材指纹图谱见图3。
图3 不同产区泽泻药的HPLC指纹图谱重叠图
A,B,C,D分别为乐山、都江堰大观、石羊二镇和彭山样品
3 结论与讨论
本实验首次建立并研究了四川道地药材泽泻的
指纹图谱,进而研究评价其总体质量,可为科学、客
观地鉴定此药材提供一定的参考依据。使用“中药
指纹图谱相似度计算软件”,为大量复杂的色谱数
据的处理提供了方便,这是与王立析、杨冉和许丹
等[68]对泽泻指纹图谱研究方法的不同之处之一;其
二,他们对泽泻指纹图谱的研究均采用了等梯度洗
脱方法,此方法适用于分离组分不多、不太复杂的混
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合物,常用于中药中某一个有效成分或指标成分的
含量测定[5]。泽泻药材成分极其复杂,所以以往采
用等梯度洗脱法对泽泻指纹图谱的研究带有片面
性。采用梯度洗脱的方式,从而保证了分离的效果
和工作效率,而梯度洗脱中,基线的漂移是常见问
题,由此引起的积分困难使中药指纹图谱的数据处
理难以进行,过去常采用 Excel等计算软件进行数
据处理,误差较大[9],而“中药指纹图谱相似度计算
软件”的使用,可针对图象进行数据处理,在不作积
分计算的前提下,充分使用色谱中的全部图象信息,
直接对图象进行处理。
本法反映了泽泻药材的化学成分及其相对比
例,既可用于定性鉴别,也可用于定量分析,可对泽
泻药材的栽培、生产加工、贮藏运输、临床使用等各
个环节进行全面可靠的质量监控,为中药泽泻全面
深入的研究奠定了基础。
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Establishmentofchromatographicfingerprintandqualityassessmenton
SichuannativemedicinalplantAlismaplantagoaquatica
LIUHongchang,YANGWenyu,CHENXingfu
(ColegeofAgronomy,SichuanAgriculturalUniversity,Yaan625014,China)
[Abstract] Objective:ToestablishchromatographicfingerprintofSichuannativemedicinalplantAlismaplantagoaquaticaby
RPHPLCforthequalitycontrol.Method:Thegradientelutionmodewasappliedinchromatographicseparation,anddatawereana
lyzedby“ComputerAidedSimilarityEvaluation”softwaretocomparethequalityofAplantagoaquaticasamplesfromdiferenthabi
tats.Result:TheHPLCchromatographicfingerprintingofAplantagoaquaticawith26characteristicpeakswasestablishedfrom17
lotsofAplantagoaquaticasamples,peak16and22wereidentifiedas24acetylalisolAand23acetylalisolB,respectively.Con
clusion:ThechromatographicfingerprintingofAplantagoaquaticawithhighspecificitycanbeusedtocontrolitsqualityandassure
lottolotconsistencyTheRPHPLCfingerprintmethodisrepeatable,feasibleinanalysisofAplantagoaquatica.
[Keywords] Alismaplantagoaquatica;nativemedicinalplant;chromatographicfingerprint
[责任编辑 张宁宁]
本刊零售
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订本每年每本11000元。2003,2004年合订本每本21000元。2005,2006年合订本每本35000元。欢迎大家踊跃购买。
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