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Establishment of chromatographic fingerprint and quality assessment on Sichuan native medicinal plant Alisma plantago-aquatica

四川道地药材泽泻指纹图谱的建立及其质量研究



全 文 :[1] 王幼平,溥发鼎,王萍莉,等.中国特有属———羌活属系统分类
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StudiesonseedsgerminationandseedlingsgrowthofNotopterygiumincisum
SHIJing1,JIANGShunyuan2,MAXiaojun1,SUNHui3,ZHOUYi2
(1.InstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100094,China;
2.SichuanInstituteofChineseMeteriaMedica,Chengdu610041,China;
3.DepartmentofEnvironmentalScienceandEngineering,SichuanUniversity,Chengdu610065,China)
[Abstract] Objective:Toinvestigatetheappropriateculturemedium,processofseedsgerminationandseedlingsgrowth,and
opticalmeasuresforseedlingmanagementofNotopterygiumincisum.Method:Germinationtimeandduration,germinationpotential
andgerminationratioweredeterminedthroughcontroledtemperature,photoperiod,culturemediumandseedlingdepthinilumination
incubators.Result:Theappropriatetemperaturewas15℃,andthemostsuitableculturemediumwasA6(mixtureofsawdust,ver
miculite,charcoal,andperliet),andthemostsuitableseminationdepthis115cm.Conclusion:Highqualifiedseedlingscanbe
germinatedthroughthedormancybrokenseeds,andsoilandotherculturemediumswithhighorganicmatercontentandloosingtexture
aresuitableforgerminationandseedlingsraisingofNincisum.
[Keywords] Notopterygiumincisum;dormancybrokenseeds;germination;seedlingsraising
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20060110
[通讯作者] 杨文钰,Tel:(0835)2882612,Email:wenyuyang
@263.net
四川道地药材泽泻指纹图谱的建立及其质量研究
刘红昌,杨文钰,陈兴福
(四川农业大学 农学院,四川 雅安 625014)
[摘要] 目的:建立泽泻药材的指纹图谱,研究四川不同产区泽泻药材的质量,为科学评价及有效控制其质量
提供参考。方法:采用梯度洗脱法进行色谱分离,使用“中药指纹图谱相似度计算软件”进行数据处理。结果:17
批样品得到的色谱指纹图谱有26个共有峰,16和22号峰分别被鉴定为24乙酰泽泻醇A和23乙酰泽泻醇B。结
论:泽泻药材的指纹图谱特征性及专属性强,可结合含量测定用于全面控制其质量,确保每批产品的均一性。
[关键词] 泽泻;道地药材;指纹图谱
[中图分类号]S567;R2841 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2007)18184404
  泽泻为泽泻科植物泽泻 Alismaplantagoaquati caLinn的干燥球茎。对其质量控制,目前是将其完
整的样品通过化学分析手段,以单一有效成分含量
作为其质量控制的指标[1,2],但这无疑将中药材本
身内部各种成分的综合作用和相互关系割裂开来,
不能准确反映中药材的质量,所以整体的综合分析
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将成为中药质量监控的必然举措[3]。因此,有必要
建立泽泻药材有效的质量评价方法,对不同产区泽
泻质量进行系统比较研究,确保其药材质量稳定。
本实验按国家食品药品监督管理局2000年颁
发的“关于注射剂用中药材指纹图谱研究技术要
求”及根据周玉新和洪筱坤[4,5]的中药数字化色谱
指纹谱研究方法,对四川道地药材泽泻进行了
HPLC醇提物指纹图谱的方法建立。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪,eppendorf高速冷冻离
心机等;对照品23乙酰泽泻醇 B和24乙酰泽泻醇
A购自南京中医药大学植物药深加工工程研究中
心,乙腈为色谱纯(美国fisher进口分装),其余试剂
均为分析纯。
1.2 材料
样品于2004年12月下旬采集(表1)。
表1 泽泻样品来源
No 产地 No 产地
  四川都江堰市石羊镇 10 红星村
1 元定村   四川乐山市五通桥区蔡京镇
2 官田村 11 团山村
3 柯家村 12 李子村二组
4 青智村 13 永镇村二组
5 青平村 14 瓦耳井村
  都江堰大观镇 15 中心村
6 谷旺村   四川彭山县谢家镇
7 平清村 16 曾湃村
8 万安村 17 陈桥村
9 友爱村    
1.3 数据处理软件
使用国家食品药品监督管理局采用的“中药指
纹图谱相似度计算软件”进行数据处理。
2 结果与分析
2.1 色谱条件
HypersilODS柱(46mm×250mm,5μm),流
速08mL·min-1;柱温25℃;进样量10μL;检测
波长210nm。流动相为乙腈水,乙腈的体积变化为
0~40min:35%~75%;40~60min:75%~100%。
2.2 重复性试验
取蔡京镇李子村二组样品10份,在优化条件下
测定,各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD分别在025%和19%以内。
2.3 稳定性试验
取石羊镇平清村样品供试液分别在0,2,4,6,
8,12,24,48,72h测定,各主要色谱峰的相对保留时
间和相对峰面积的 RSD分别在089%和36%以
内。
2.4 精密度试验
取蔡京镇中心村的供试品溶液,连续进样10次
测定,各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积
的RSD分别在035%和28%以内。
2.5 供试品溶液制备
精密称取于60℃干燥至恒重的过20目的样品
1000g,置于 500mL圆底烧瓶中,加入 20mL甲
醇,浸泡12h,然后置回流提取器中在70℃下回流
提取3h,残渣用甲醇10mL洗涤2次,合并滤液,置
于旋转蒸发仪中挥尽甲醇,用色谱纯乙腈溶解,过滤
并定容至10mL,置混匀器上混匀,12000r·min-1
离心20min,再过045μm一次性滤膜备用。
2.6 对照品溶液的制备
精密称取于60℃干燥至恒重的23乙酰泽泻醇
B和24乙酰泽泻醇A各20mg和90mg,分别置
于25mL量瓶中,用色谱纯乙腈定容,置混匀器上混
匀,12000r·min-1离心20min,再过045μm滤膜
备用。
2.7 样品测定
在优化的条件下,将供试品溶液分别进样、测定
各批次样品并记录其色谱图。
2.8 泽泻药材指纹谱的建立[5]
2.8.1 主要色谱峰的鉴定及内参照峰的选择和定
位 在优化色谱条件下,测定23乙酰泽泻醇 B和
24乙酰泽泻醇A的对照品图谱,二者分别在4265
min和3036min出现色谱峰。与样品图谱中相应
色谱峰进行比较,发现16和22号色谱峰的保留时
间及紫外光谱分别与对照品的吻合,故样品图谱中
16和22号特征峰分别被鉴定为24乙酰泽泻醇 A
与23乙酰泽泻醇 B。在各产区样品图谱中,23乙
酰泽泻醇 B的色谱峰和相邻色谱峰分离良好,峰位
居中,且为所有样品所共有,所以确定23乙酰泽泻
醇B为内参照峰。
2.8.2 共有峰和重叠率 确定相对保留时间比较
窗口阈值为±1%,则17批样品有26个共有峰(表
2)。都江堰产区样品出峰数较多(42个)且17批样
品的共有峰均能在其中找到,因此以都江堰产区样
品为泽泻的标准药材,其余产区样品与它比较。由
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于各产区生态环境各异,虽属同一品种,但仍存在产
地差异。产区药材图谱重叠率均在70%以上。
表2 泽泻药材共有峰的指纹谱
峰号
保留时间
/min
相对保留
时间
峰面积
相对峰
面积
峰面积
比率/%
1 253 006 6751 034 22~42
2 360 009 2285 004  
3 431 010 2835 010  
4 528 012 3691 005  
5 718 017 2591 009  
6 776 018 616 002  
7 920 022 4494 014  
8 1391 033 1195 003  
9 1630 039 985 003  
10 2137 040 3461 002  
11 2315 050 2235 015  
12 2490 054 6331 011  
13 2614 059 560 010  
14 2739 062 1660 002  
15 2829 063 1266 001  
16 3031 064 18779 036 136~173
17 3358 074 2151 013  
18 3465 074 1893 012  
19 3543 079 103782 201 506~607
20 3878 089 584 003  
21 3974 091 820 003  
22 4250 100 29229 100 146~216
23 5390 104 1686 002  
24 5356 127 2983 0045  
25 5633 133 417 002  
26 5826 139 395 001  
  泽泻药材的标准指纹图谱见图1,整个图谱可
分为3个部分:保留时间2~10min,出现6个色谱
峰,其主要特征峰1和4在此区域出现;保留时间
10~30min,有9个色谱峰,其主要特征峰7,9和12
均在此区域;保留时间30~60min,共有11个色谱
峰,其主要特征峰16,19,22,24和26均在此区域。
最强峰为19号色谱峰,其次为22,16和24号峰,相
对峰面积比值为 RA16∶RA19∶RA22∶RA24=(106~
115)∶(320~430)∶100∶(030~069)。
2.8.3 特征指纹曲线 综合共有峰信息,从中挑选
合适的色谱峰作为特征指纹。按以下 2个条件入
选:首先从共有峰样品数考虑,即达到总样品数
75%以上者;其次是具有特殊活性或具有对照品者。
以相对峰面积为纵轴,相对保留时间为横轴绘出泽
泻药材的特征指纹谱曲线图(图2)。
2.9 各产区药材指纹图谱相似度评价
各产区内药材相似度均在096以上,各产区间
  
图1 泽泻药材标准HPLC指纹图谱
图2 泽泻药材特征指纹谱曲线图
药材相似度也均在094以上,表明产区间药材质量
十分稳定,该结果表明产区样品质量稳定的重要性
及建立道地药材 GAP基地的必要性。各产区泽泻
药材指纹图谱见图3。
图3 不同产区泽泻药的HPLC指纹图谱重叠图
A,B,C,D分别为乐山、都江堰大观、石羊二镇和彭山样品
3 结论与讨论
本实验首次建立并研究了四川道地药材泽泻的
指纹图谱,进而研究评价其总体质量,可为科学、客
观地鉴定此药材提供一定的参考依据。使用“中药
指纹图谱相似度计算软件”,为大量复杂的色谱数
据的处理提供了方便,这是与王立析、杨冉和许丹
等[68]对泽泻指纹图谱研究方法的不同之处之一;其
二,他们对泽泻指纹图谱的研究均采用了等梯度洗
脱方法,此方法适用于分离组分不多、不太复杂的混
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合物,常用于中药中某一个有效成分或指标成分的
含量测定[5]。泽泻药材成分极其复杂,所以以往采
用等梯度洗脱法对泽泻指纹图谱的研究带有片面
性。采用梯度洗脱的方式,从而保证了分离的效果
和工作效率,而梯度洗脱中,基线的漂移是常见问
题,由此引起的积分困难使中药指纹图谱的数据处
理难以进行,过去常采用 Excel等计算软件进行数
据处理,误差较大[9],而“中药指纹图谱相似度计算
软件”的使用,可针对图象进行数据处理,在不作积
分计算的前提下,充分使用色谱中的全部图象信息,
直接对图象进行处理。
本法反映了泽泻药材的化学成分及其相对比
例,既可用于定性鉴别,也可用于定量分析,可对泽
泻药材的栽培、生产加工、贮藏运输、临床使用等各
个环节进行全面可靠的质量监控,为中药泽泻全面
深入的研究奠定了基础。
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Establishmentofchromatographicfingerprintandqualityassessmenton
SichuannativemedicinalplantAlismaplantagoaquatica
LIUHongchang,YANGWenyu,CHENXingfu
(ColegeofAgronomy,SichuanAgriculturalUniversity,Yaan625014,China)
[Abstract] Objective:ToestablishchromatographicfingerprintofSichuannativemedicinalplantAlismaplantagoaquaticaby
RPHPLCforthequalitycontrol.Method:Thegradientelutionmodewasappliedinchromatographicseparation,anddatawereana
lyzedby“ComputerAidedSimilarityEvaluation”softwaretocomparethequalityofAplantagoaquaticasamplesfromdiferenthabi
tats.Result:TheHPLCchromatographicfingerprintingofAplantagoaquaticawith26characteristicpeakswasestablishedfrom17
lotsofAplantagoaquaticasamples,peak16and22wereidentifiedas24acetylalisolAand23acetylalisolB,respectively.Con
clusion:ThechromatographicfingerprintingofAplantagoaquaticawithhighspecificitycanbeusedtocontrolitsqualityandassure
lottolotconsistencyTheRPHPLCfingerprintmethodisrepeatable,feasibleinanalysisofAplantagoaquatica.
[Keywords] Alismaplantagoaquatica;nativemedicinalplant;chromatographicfingerprint
[责任编辑 张宁宁]
本刊零售
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订本每年每本11000元。2003,2004年合订本每本21000元。2005,2006年合订本每本35000元。欢迎大家踊跃购买。
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