全 文 ：成分均衡释放的关键技术问题 o为中药复方缓释制
剂的开发提供范例 ∀
≈参考文献
≈t 朱盛山 o袁旭江 o李苑新 q复方丹参缓释片中水溶性成分体外
释放度研究 ≈ q中国中药杂志 oussyovtktlvzq
≈u 中国药典 ≈≥ q二部 qussx}附录 zwot{sq
≈责任编辑 鲍 雷
y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮吸附与解吸性能的考察
郑国华 3 o李能发 o许 洁
k湖北中医学院 o湖北 武汉 wvssytl
≈收稿日期 ussz2su2st
≈基金项目 湖北省科技厅科技攻关项目 kussuvst≤tzl
≈通讯作者 3 郑国华 oר¯}ksuzlyutsttsuo∞2°¤¬¯}½ª«tuuz
¶¬±¤q¦²°
霉茶为葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄 Αµ πε2
λοπσισµ εγαλοπηψλλα的枝叶 o具有降高血压 !降胆固醇
之功效 o民间将其叶置沸水中稍烫 o沥干 o摊放通风
处至表面上有白霉 o泡茶服 o称为霉茶 o临床上用于
治疗原发性高血压病 ≈t ∀霉茶主要有效成分蛇葡
萄素等为黄酮类化合物 ∀目前霉茶有效部位的纯化
方法尚为空白 o本试验采用大孔树脂吸附技术对其
进行纯化 o考察 y种大孔吸附树脂的吸附量 !解吸
率和解吸物总黄酮含量 ≈u o以期筛选出可用于纯化
霉茶总黄酮的大孔吸附树脂 o为制备霉茶总黄酮的
标准提取物及其工业化生产奠定基础 ∀
1 材料
∞≤ p ⁄yws型紫外分光光度仪及其配
套工作站 ~ ·¨¯ µ¨p ײ¯ §¨² u{x型分析天平 ~≠
pw型调速多用振荡器 ∀
蛇葡萄素对照品自制 k经四大光谱鉴定 l∀霉
茶 ussx年 x月购于湖北省恩施州来凤县 o经鉴定教
研室鉴定为 Αµ πελοπσισµ εγαλοπηψλλα ⁄¬¨ ¶¯ ·¨q ¬¯ª的
茎叶 ∀壳聚糖 !乙醇 !三氯化铝为分析纯 ∀
p {o
⁄tsto⁄vst来自南开大学 ~≥°{uxo≥°{xs和 °us
大孔吸附树脂为日本三菱化工生产 ∀
2 方法与结果
2q1 霉茶总黄酮的测定 标准品溶液的配制 }精密
称取真空 zs ε 干燥至恒重的蛇葡萄素对照品 w1sw
°ªo乙醇溶解并定容至 tss °o备用 ∀
标准曲线的绘制 }精密吸取蛇葡萄素对照品溶
液 s1xot1sou1sov1sow1s °分别置 ts °量瓶中 o
各精密加入 xh ≤¯ v¯溶液 u °o乙醇稀释至刻度 o
摇匀 o室温放置 ws °¬±∀以乙醇为空白 ovtt ±°下
测定吸收度 o计算 ≈v 得回归方程 Ψ zv1||t tΞ p
u1u{ ≅ tspv oρs1||| |∀
供试品溶液总黄酮含量的测定 }供试品溶液适
量 o置 ts °量瓶中 o加 xh ≤¯ v¯溶液显色 o按上述
方法操作 ovtt ±°下测定吸光度 o计算供试品溶液
总黄酮的含量 ∀
2q2 霉茶溶液的制备 取霉茶药材适量 o用 |倍量
的 zsh乙醇回流 u次 o合并滤液 o浓缩至每 y °浓
缩液相当于 t ª生药材 o加 s1wh的壳聚糖醋酸溶液
进行澄清 o过滤 o滤液稀释 o溶液备用 ∀测定其总黄
酮质量浓度为 x1|sx x °ª# °pt ∀
2q3 大孔树脂的预处理及含水量的测定 各树脂
分别用乙醇浸泡 uw «o充分溶胀 o用 |xh的乙醇冲
洗 o至洗出液加适量蒸馏水无白色浑浊现象 o再用蒸
馏水洗至无醇味 o备用 ∀处理后的树脂密封保存 o备
用 ∀取少量树脂 o用干燥法测定含水量 o见表 t∀
表 t 已处理的 y种大孔树脂的性质和含水量
树脂类型 极性 含水量 rh 孔径 r! 比表面积 r°u # ªpt
p { 弱 yt1sw tus ∗ tys wys ∗ xus
⁄tst 非 yz1{u u{s ∗ vss w{s ∗ x{s
⁄vst 强 yy1{y tss ∗ tys uxs ∗ vss
≥°{ux 非 xy1|{ xz t sss
≥°{xs 非 xs1tt v{ t sss
°us 非 xz1|z uss yss
2q4 y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮的静态吸附
性能的考察 精密称取上述 y种大孔吸附树脂 o每
份相当于相应干树脂 us1ss ªo置 t sss °锥形瓶
#syxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
中 o分别加入 xss1ss °霉茶溶液 o置震荡器中振摇
y «o于 touowoyo{ouw «吸取上清液 t1ss °o按 2q1
项下操作 o测定吸收度 o计算大孔树脂对总黄酮的吸
附量 o见表 uo并绘制 y种大孔吸附树脂对霉茶总黄
酮的静态吸附的等温吸附曲线 o见图 t∀
表 u y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮的静态吸附
性能的考察
树脂
类型
吸附量 r°ª# ªpt
t « u « w « y « { « uw «
p { ws1xt zt1uy ts{1{w tu{1su tvu1{t tvw1|v
⁄tst uz1ts xz1|| ttu1wx tvz1yt twy1u{ tx{1{z
⁄vst yw1uv tws1tu tzt1st t{u1ut t{z1|y t|t1xv
≥°{ux vx1|y zy1sv tt{1ux tvw1yy twt1st tw{1xu
≥°{xs ws1uu {w1|u tvu1wy twz1uy txt1|s txy1wt
°us ux1{u wy1{| {w1vt tsx1yu ttu1vu tu|1tt
2q5 y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮的静态解吸
图 t y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮的静态吸附曲线
性能的考察 将上面 y种吸附饱和的树脂滤出 o水
洗 o滤纸吸干 o每种树脂等分成 u份 o每份相当于各
干树脂 ts1ss ªo各精密加入 xsh ozsh 乙醇 xss
°o置震荡器中振摇 y «o静置 uw«o精密量取 t1ss
°o按 2q1项下操作 o测定吸收度 o计算各解吸液中
总黄酮的量 ∀结合吸附量计算解吸率 o并测定各解
吸液中总黄酮的含量 ∀结果见表 v∀
表 v y种大孔吸附树脂对霉茶总黄酮的静态吸附性能的考察
树脂类型
吸附量
r°ª# ªpt
xsh乙醇
解析量 r°ª# ªpt 解析率 rh 总黄酮 rh
zsh乙醇
解析量 r°ª# ªpt 解析率 rh 总黄酮 rh
p { tvw1|v yz1|s xs1vu xz1tt z{1{{ x{1wy yv1u|
⁄tst tx{1{z w{1sz vs1uy yx1sy xt1uw vu1ux yz1wt
⁄vst t|t1xv x{1t| vs1v{ wz1uu wy1wz uw1uy ws1su
≥°{ux tw{1xu |x1uu yw1tt y{1tv tty1su z{1tu zt1uv
≥°{xs txy1wt tsz1{y y{1|y zy1xt tu|1{x {v1su z|1s|
°us tu|1tt yw1x| xs1sv yx1xx {s1ss yt1|y y|1uy
2q6 ≥°{xs大孔树脂动态吸附条件的考察 根据预试
验确定 ≥°{xs大孔树脂吸附条件优选为 }上样总黄酮
x1s °ª# °pt o流速 v °# °¬±pt o药液 ³不用调节
k原霉茶澄清溶液 ³wlo大孔树脂的径高比为 tΒy∀
2q7 ≥°{xs大孔树脂吸附曲线的绘制及上样量的
确定 取霉茶澄清后浸膏适量 o溶解并稀释成含总
黄酮 x1s °ª# °pt k相当于 t ª霉茶稀释至 ww
°lo以流速为 v °# °¬±pt上样于已处理好的径
高比为 tΒy的 ≥°{xs大孔树脂 k湿态 oty1s ªl上 ∀
收集流出液共 uy个
∂ kt
∂ uw °lo并测每次
流出液中总黄酮浓度 o见图 u∀
图 u ≥°{xs大孔树脂附曲线
根据上图吸附曲线可知当上样达 t{
∂时 o树
脂开始泄漏 o上样 uv
∂时 o达到饱和 ∀从而确定上
样量为 }每 t °的 ≥°{xs大孔树脂可以吸附 x °ª
# °pt的霉茶总黄酮溶液 |s °o即每 t ª湿树脂
可以吸附 tvx °ª总黄酮 ~或者上样量约为霉茶 k按
生药计 l}湿 ≥°{xs大孔树脂 kªΒªl tΒu∀
2q8 ≥°{xs大孔树脂动态解吸条件的考察 根据
预试验 o确定选用 zsh乙醇作洗脱剂 o乙醇洗脱用
量定为 x
∂ o水洗脱用量定为 u
∂ ∀
2q9 ≥°{xs大孔树脂纯化霉茶总黄酮试验的验证
取霉茶澄清后浸膏适量 o溶解并稀释成含总黄酮
x1s °ª# °pt o以流速为 v °# °¬±pt上样于 v份
已处理好的径高比为 tΒy的 ≥°{xs大孔树脂 k湿态 o
ty1s ªl上 o上样 t{
∂ ∀用水洗脱 u
∂后 o再用 x
∂的 zsh乙醇洗脱 o收集乙醇洗脱液 o测定其总黄
酮的量 ∀剩余洗脱液回收乙醇 o干燥 o称重 o计算浸
膏中总黄酮的含量 ∀结果见表 w∀
可知 o≥°{xs大孔树脂纯化霉茶总黄酮后 o霉茶
总黄酮的纯度达到了 z|1x|h o转移率也达到
{s1wth o工艺基本稳定可行 ∀
#tyxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz
表 w ≥°{xs大孔树脂纯化霉茶总黄酮试验的验证
²q 洗脱黄酮总量r°ª
浸膏总黄酮
rh
洗脱率
rh
总转移率
rh
t t ||v z|1ww |u1u| {s1st
u u stt z|1ut |v1tu {s1zv
v u ssy {s1tt |u1{y {s1xs
平均值 u ssw z|1x| |u1zy {s1wt
注 }洗脱率 洗脱黄酮总量 r黄酮上样总量 ≅ tssh ~总转移率
壳聚糖澄清工艺转移 ≅洗脱率 ≅ tssh
2q10 ≥°{xs大孔树脂纯化霉茶总黄酮放大试验及
循环使用 取霉茶药材 v sss ªo按照最佳提取工艺
和所选澄清工艺操作 o得到霉茶澄清液 o将其稀释成
含总黄酮 x1s °ª# °pt o以流速为 v °# °¬±pt上
样于 t sss °已处理好的径高比为 tΒy的 ≥°{xs
大孔树脂 k湿态 oyyz ªl上 o上样 t{
∂ ∀用水洗脱 u
∂后 o再用 x
∂的 zsh乙醇洗脱 o收集乙醇洗脱
液 o回收乙醇 o干燥 o称重 ∀浸膏粉碎 o过 tss目筛 o
取适量用乙醇溶解 o适当稀释 o测定总黄酮的含量 ∀
树脂继续用 |xh乙醇洗脱 x
∂ o蒸馏水洗至无醇
味 o再按上述方法重复吸附霉茶溶液 x次 ∀结果见
表 x∀
表 x ≥°{xs大孔树脂纯化霉茶总黄酮放大试验及循环使用
²1 洗脱黄酮总量rª
浸膏总黄酮含量
rh
洗脱率
rh
总转移率
rh
t {v1w{w z|1ux |u1zy {s1wt
u {v1sux z|1yx |u1ux z|1|z
v {u1yv{ z{1uw |t1{u z|1ys
w {v1uvu z{1{z |u1w{ {s1tz
x {u1suy z|1su |t1tw z|1st
y {u1szt z|1tv |t1t| z|1sx
在放大试验和 w次循环使用中 o霉茶总黄酮的
纯度基本稳定 o且都高于 z{h o转移率也高于 z|h ∀
循环使用 y次后 o吸附总黄酮的洗脱率虽然有所下
降 o但仍在适用允许范围内 ∀因此 o≥°{xs大孔树脂
纯化霉茶总黄酮在 y次循环使用中的工艺稳定可
行 ∀
3 讨论
由表 u和表 v可知 o强极性大孔吸附树脂 ⁄vst
对霉茶总黄酮的吸附性能最好 o但解析率极低 o解吸
物总黄酮的含量较低 ~因为霉茶黄酮类化合物如蛇
葡萄素 !杨梅素含多个酚羟基 o显弱酸性 o而 ⁄vst
树脂显弱碱性 o对弱酸性黄酮类化合物和霉茶中鞣
质类化合物有较强的吸附 o不易解吸 ∀
p {在对
霉茶总黄酮的吸附性能 !解吸率和总黄酮含量上均
无明显优势 ~非极性树脂 ≥°{uxo≥°{xs对霉茶总黄
酮有较好的吸附性 o解吸总黄酮的含量也较高 o与其
孔径较小而具有较大的比表面积有关 ~非极性树脂
⁄tst吸附性优于 ≥°{ux和 ≥°{xso但其解吸率很
低 ~非极性树脂 °us对霉茶总黄酮的吸附性和解
吸率都不高 o可能与其比表面积小而孔径较大有
关 ≈w ∀
由表 v可知 ozsh乙醇较易将总黄酮从树脂上
解吸下来 o其中以非极性树脂 ≥°{xs的解吸率为高 o
洗脱总黄酮的纯度也最佳 o显示出良好的解吸性能 ∀
极性 !中极性树脂的解吸性较差 o可能是由于这类树
脂对黄酮有较强的吸附作用 ∀
综上所述 o由吸附容量 !解吸率和解吸物总黄酮
的含量综合比较 oy种大孔吸附树脂综合性能的排
列顺序为 ≥°{xs ≥°{ux
p { °us ⁄tst
⁄vst∀其中 o非极性树脂 ≥°{xs对于霉茶总黄酮的
分离纯化效果最佳 o并对其动态吸附试验 o验证 o放
大试验和循环使用等进行了考察 o结果表明非极性
树脂 ≥°{xs可用于纯化霉茶总黄酮 ∀纯化工艺为 }
霉茶总黄酮吸附溶液质量浓度为 x1s °ª# °pt o
≥°{xs大孔树脂柱径高比为 t Βyo流速 v °#
°¬±pt o上样 t{
∂ k即每 t °湿树脂上样 |s °l∀
用水洗脱 u
∂后 o再用 x
∂的 zsh乙醇洗脱 o收集
乙醇洗脱液 o回收乙醇 o干燥 o即得大孔树脂纯化的
霉茶总黄酮 ∀
≈参考文献
≈t 湖北省恩施医专门诊部 q草药霉茶治疗高血压 xs例疗效观察
≈ q中草药通讯 ot|z{ok{l}vyq
≈u 刘友平 o鄢 丹 o秦春梅 q大孔吸附树脂纯化中药有效成分的
影响因素 ≈ q中药新药与临床药理 oussvotwkvl}utuq
≈v 何桂霞 o何 群 o裴 刚 o等 q瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量
测定 ≈ q湖南中医药导报 ot|||oxktu}vslq
≈w 冯年平 o郁 威 q中药提取分离技术原理与应用 ≈ q北京 }中
国医药科技出版社 oussx}ttyq
≈责任编辑 鲍 雷
#uyxu#
第 vu卷第 uv期
ussz年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo ¶¶∏¨ uv
⁄ ¦¨¨°¥¨ µo ussz