全 文 :参芪五味子胶囊的镇静、抗应激和免疫调节作用
曹永孝,郑建普,刘 静,姚鸿萍
(西安交通大学 医学院 环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西 西安 710061)
[收稿日期] 20040615
[通讯作者] 曹永孝,Tel:(029)82655140,Email:yxy@xjtu.
edu.cn
参芪五味子胶囊是由参芪五味子片改变剂型的
新制剂,有健脾益气、宁心安神之功效,用于心悸气
短、动则气喘易汗、少寐多梦、倦怠乏力、健忘等症。
本实验拟研究其主要药效学,为临床应用提供实验
依据。
1 材料
11 主要仪器 YLS-1A多功能小鼠自主活动记
录仪,山东省医学科学院设备供应站生产。
12 试剂和药物 参芪五味子胶囊和参芪五味子
片,均由甘肃独一味生物制药有限责任公司提供,批
号分别为02090309和020517。
13 动物 ICR小鼠,体重18~22g,雌雄兼用,购
于西安交通大学实验动物中心,合格证号:陕动证字
08004号。
2 方法与结果
每项试验均取小鼠 50只,随机分 5组:正常对
照组(05%羧甲基纤维素钠);参芪五味子胶囊(含
生药)20,10和05g·kg-1组;参芪五味子片10g
·kg-1组;各组均按10mL·kg-1灌胃给药,每天1次,
连续5d。
统计学处理:时间资料采用序值法检验;比率资
料采用确切概率法进行检验;其他数据采用 t检验。
21 镇静作用
211 对戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响[1]
末次给药1h后,各组均ip戊巴比妥钠45mg·kg-1,
观察小鼠睡眠时间,翻正反射消失至恢复时间为睡
眠时间。表1结果显示,参芪五味子片组、参芪五味
子胶囊3个剂量组与正常对照组比较,入睡潜伏期
均缩短,睡眠时间均显著延长,表明参芪五味子胶囊
与戊巴比妥钠有协同催眠作用,相同剂量的参芪五
味子胶囊和参芪五味子片的入睡潜伏期和睡眠时间
均无显著性差别。
212 对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影
响[1] 末次给药45min后,各组均ip戊巴比妥钠35
mg·kg-1,记录睡眠小鼠只数(以注射戊巴比妥钠后
10min内翻正反射消失1min以上者确定为入睡),
计算各组睡眠率。结果显示,参芪五味子片组、参芪
五味子胶囊 10,20g·kg-1组的睡眠率分别为
50%,50%和 60%,与正常对照组睡眠率 0%比较
(确切概率法检验),小鼠睡眠率均显著提高,表明参
芪五味子胶囊有催眠作用。
213 对小鼠自主活动的影响[2] 用小鼠自主活
动记录仪记录清醒状态下小鼠 30min内自主活动
的次数(每个计数室放1只小鼠,5个计数室同时使
用),按自主活动次数将小鼠分层随机分组。末次给
药后 45min再用同法记录各组小鼠 30min内自主
活动的次数,结果以差值(药前 -药后)表示。表 2
结果显示,参芪五味子片组,参芪五味子胶囊3个剂
量组与正常对照组比较,小鼠自主活动次数均有减
少趋势,但无统计学意义。
表1 参芪五味子胶囊对戊巴比妥钠致
小鼠睡眠时间的影响(珋x±s,n=10)
组别 剂量/g·kg-1 入睡潜伏期/min 睡眠时间/min
正常对照组 - 4.5±1.5 36.2±16.4
参芪五味子胶囊 0.5 2.9±0.71) 70.3±40.31)
1.0 2.9±0.51) 83.1±29.32)
2.0 2.6±0.72) 103.4±33.82)
参芪五味子片 1.0 2.6±0.72) 104.9±28.82)
注:与正常对照组比较1)P<005,2)P<001
表2 参芪五味子胶囊对小鼠自主
活动的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
自主活动次数
药前 药后 差值
正常对照组 - 975±3511032±255 -57±324
参芪五味子胶囊 0.5 973±346 813±407 160±337
1.0 967±346 784±306 183±302
2.0 966±346 864±367 102±379
参芪五味子片 1.0 964±341 721±308 243±382
22 抗应激作用
221 对小鼠游泳时间的影响[3] 玻璃缸
·1361·
第30卷第20期
2005年10月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol30,Issue 20
October,2005
(40cm×30cm×20cm)内注水,水深15cm,水温18
℃。末次给药 45min后,将小鼠放入玻璃缸内游
泳,以小鼠没水 15s不出水面为终止时间,计时。
表3结果显示,参芪五味子片组、参芪五味子胶囊
20,10g·kg-1组与正常对照组比较,小鼠游泳时间
均显著延长;参芪五味子胶囊 05g·kg-1组有延长
游泳时间趋势,但无统计学意义。表明参芪五味子
胶囊具有抗疲劳作用。相同剂量的参芪五味子胶囊
和参芪五味子片的游泳时间无显著性差别。
222 对小鼠常压耐缺氧时间的影响[4] 末次药
后45min将小鼠放入盛有 10g钠石灰的广口瓶
(125mL)中(每瓶 1只小鼠),用凡士林涂抹瓶口盖
严,立即计时。以呼吸停止为指标,观察小鼠因缺氧
而死亡的时间。表3结果显示,参芪五味子片组、参
芪五味子胶囊 20,10g·kg-1组与正常对照组比
较,均有显著性差异;参芪五味子胶囊05g·kg-1组
有延长存活时间趋势,但无统计学意义。表明参芪
五味子胶囊能延长常压缺氧小鼠的存活时间,具有
抗应激作用。同剂量的参芪五味子胶囊和参芪五味
子片的存活时间无显著性差别。
223 对氰化钾(KCN)中毒小鼠存活时间的影
响[5] 于末次给药1h后各组小鼠腹腔注射 KCN10
mg·kg-1,立即观察记录其存活时间。以停止呼吸作
为其死亡标准,若10min不死亡,按10min计。表3
结果显示,参芪五味子片组、参芪五味子胶囊3个剂
量组与正常对照组比较,均有显著性差异。表明参
芪五味子胶囊可延长KCN中毒小鼠的存活时间,具
有抗应激作用。同剂量的参芪五味子胶囊和参芪五
味子片的存活时间无显著性差别。
224 对小鼠耐寒时间的影响[6] 末次药后1h,
将小鼠放入-4℃冰箱内,计时。于放入冰箱后 1,
2,3h后分别将小鼠取出,统计各组小鼠存活数,计
算各组小鼠存活百分率。表 4结果显示,小鼠在
-4℃环境下1h各组小鼠均存活;2h后各组均有
死亡,但存活率的差异无统计学意义;3h后,参芪五
味子片组、参芪五味子胶囊 20g·kg-1组与正常对
照组比较,差异显著,表明大剂量参芪五味子胶囊有
耐寒作用,而参芪五味子片的耐寒作用强于参芪五
味子胶囊。
23 免疫调节作用
231 对网状内皮细胞吞噬碳粒的影响[3] 末次
表3 参芪五味子胶囊对小鼠游泳时间和常压缺氧及KCN
中毒存活时间的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
游泳时间
/min
存活时间/min
常压缺氧 KCN中毒
正常对照组 - 22.0±9.7 13.2±0.9 3.3±1.1
参芪五味子胶囊 0.5 34.7±31.4 14.9±2.4 6.0±3.21)
1.0 46.0±30.71)14.9±2.21) 5.8±3.61)
2.0 46.9±25.21)16.1±2.22) 7.0±3.32)
参芪五味子片 1.0 37.4±14.51)15.6±2.51) 8.2±3.02)
注:与正常对照组比较1)P<005,2)P<001
表4 参芪五味子胶囊对小鼠耐寒
时间的影响(珋x±s,n=10)
组别
剂量
/g·kg-1
2h后 3h后
死亡数 存活率/% 死亡数 存活率/%
正常对照组 - 3 70 10 0
参芪五味子胶囊 0.5 3 70 9 10
1.0 2 80 4 40
2.0 1 90 5 501)
参芪五味子片 1.0 0 100 2 802)
注:与正常对照组比较1)P<005,2)P<001
药后45min,尾静脉注入印度墨汁(用生理盐水稀释
4倍)10mL·kg-1,于注入墨汁后 30s及 8min从小
鼠眼眶后静脉丛取血25μL,立刻吹入01%Na2CO3
液2mL中,吸管于该液中吸入、吹出数次以充分洗
出吸管壁附着之血液,取血完毕以 25μL正常小鼠
血溶于2mL01% Na2CO3液校零,于 630nm处比
色,计算吞噬指数。表 5结果显示,参芪五味子片
组、参芪五味子胶囊 20,10g·kg-1组与正常对照
组比较,有显著性差异。表明参芪五味子胶囊具有
加速静脉内注入异物在血液中的廓清速度,从而提
高机体网状内皮系统吞噬异物的能力,具有提高机
体非特异性免疫功能的作用。
232 对绵羊红细胞诱导的特异性循环抗体水平
的影响 按文献[7]方法制备绵羊红细胞(SRBC)
20%和 10%悬液和豚鼠血清。取小鼠 50只,随机
分组同前。均按10mL·kg-1分别灌胃,每天1次,连
续8d。于第3天,每只小鼠均 ip20% SRBC悬液
02mL/只。末次给药后1h,按文献[3]方法进行溶
血素测定,计算每只小鼠样品的半数溶血值(HC50)。
表5结果显示,参芪五味子片组,参芪五味子胶囊3
个剂量组与正常对照组比较,均有显著性差异。表
明参芪五味子胶囊对抗 SRBC抗体形成有明显的促
进作用,其作用与参芪五味子片相当。
3 讨论
参芪五味子胶囊是由五味子、黄芪、党参、酸枣
·2361·
第30卷第20期
2005年10月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol30,Issue 20
October,2005
表5 参芪五味子胶囊对小鼠网状内皮细胞
吞噬碳粒和溶血素水平(HC50)的影响(珋x±s,n=10)
组别 剂量/g·kg-1 吞噬指数/10-3 HC50
正常对照组 - 33.0±23.7 123±100
参芪五味子胶囊 0.5 48.2±24.8 227±1041)
参芪五味子胶囊 1.0 55.6±18.11) 322±1292)
参芪五味子胶囊 2.0 59.4±21.71) 230±961)
参芪五味子片 1.0 76.9±30.52) 315±1542)
注:与正常对照组相比较1)P<005,2)P<001
仁(炒)组成的中草药制剂。五味子具有润肺、滋肾、
止汗、止泻,涩精之功效,可以增强机体免疫功能,抑
制中枢神经系统,抑制呼吸系统,还有抗应激作用。
黄芪是临床上常用的中药,具有补气、固表、利尿、生
肌的作用。党参有补中益气,生津养血之功效,主治
气短心悸、体倦无力、食少便溏。酸枣仁有安心养
神、益阴敛汗、补中益肝等功能。
本实验发现,参芪五味子胶囊能明显缩短入睡
潜伏期,延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间,增加戊巴比
妥钠阈下睡眠剂量引起入睡的小鼠数,即对小鼠睡
眠的影响与戊巴比妥钠有协同作用;同时,还有减少
小鼠自主活动次数的趋势。结果提示参芪五味子胶
囊有镇静、催眠作用,因此可用于阴虚火旺之失眠患
者,起到定悸安神作用。
应激反应是机体受到各种有害刺激后产生的一
种非特异性紧张反应,长期在应激状态下生活可引
起人体气机紊乱,脏腑阴阳气血失调,导致机体免疫
力下降。疲劳、寒冷、缺氧均是应激原,因此抗疲劳、
耐寒、耐缺氧三项实验是反应机体抗应激功能的重
要指标,而抗应激功能的优劣可直接体现机体对外
界抵抗力的强弱。本实验发现,参芪五味子胶囊能
延长小鼠游泳时间,延长小鼠耐组织缺氧时间,增强
小鼠耐低温能力,表明此制剂具有增强体质的功能。
巨噬细胞的吞噬活性是机体非特异性免疫功能
的重要指标,参芪五味子胶囊能明显增强小鼠网状
内皮系统巨噬细胞的吞噬功能。另外,参芪五味子
胶囊还能使小鼠血清溶血素水平明显升高,使小鼠
分泌抗体功能增强。结果提示参芪五味子胶囊具有
增强非特异性免疫功能和体液免疫功能的作用。
总之,参芪五味子胶囊有明显的镇静作用、抗应
激作用,并能显著增强机体免疫功能。其作用与原
剂型参芪五味子片相当。
[参考文献]
[1] 张 智,闪增郁,陈燕萍,等.中药日月静对戊巴比妥钠小鼠
入睡个数和睡眠时间的影响.中国中医基础医学杂志,2002,
8(1):18.
[2] 魏凤环,莫志贤,王永刚.灌胃刺激对小鼠自主活动计数的影
响.中国药理学通报,2004,20(3):356.
[3] 陈 奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,1994.
780,750.
[4] 张玉亮,张 贞,朱成全,等.荣向路平衡阴阳口服液抗疲劳、
抗应激的实验研究.海军医学杂志,2002,23(1):6.
[5] 吴俊芳,史以菊,刘天培.小檗碱对小鼠和大鼠脑缺血的保护
作用.中国药理学与毒理学杂志,1995,9(2):100.
[6] 徐宇杰,王 枫,罗文纪,等.太子健冲剂对气虚小鼠抗应激
反应的影响.浙江中医学院学报,2001,25(5):53.
[7] 张光茹.藏药乙肝清胶囊对小鼠免疫功能的影响.青海医学
院学报,2002,23(1):8.
[责任编辑 古云侠]
(上接第1623页)
EfectofKanglaiteinjectiononcyclooxygenaseactivity
inlungcarcinomaA549cel
DONGQinghua,ZHONGXian,ZHENGShu
(The2ndAfiliatedHospitalofZhejiangUniversity,CancerInstitute,ZhejiangUniversity,Hangzhou310016,China)
[Abstract] Objective:TostudytheefectofKanglaiteinjectiononcyclooxygenaseactivityinlungcarcinomaA549celsMethods:
TheexpressionofmRNAofCOX1andCOX2weremeasuredbyRTPCRTheexpressionofCOX2proteinwasmeasuredbyWesternblot
Result:KanglaiteinjectioncouldselectivelydecreasedCOX2mRNAexpressionandproteinexpressionwhileCOX1mRNAexpressionwas
unchangedConclusion:KanglaiteinjectionisselectivelyinhibitoryagentofCOX2,andpossessinhibitoryefectsoncyclooxygenase2
[Keywords] Kanglaiteinjection;cyclooxygenase;lungcancer
[责任编辑 古云侠]
·3361·
第30卷第20期
2005年10月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol30,Issue 20
October,2005