全 文 ：黄花倒水莲总皂苷对小鼠 × 细胞
亚群和 Œ2u的影响
李卫真
k温州医学院 第一附属医院 o浙江 温州 vuxsssl
≈摘要  目的 }为评价黄花倒水莲总皂苷免疫增强功效提供依据 ∀方法 }采用间接免疫荧光法检测小鼠 × 细
胞亚群 o采用 ≤²±„诱导 × 淋巴细胞产生 Œ2u法检测小鼠 Œ2u生成水平 ∀结果 }黄花倒水莲总皂苷能显著提高 ׫
细胞亚群的数量 o增高 ׫r׶细胞亚群的比值 ~提高 Œ2u生成的水平k统计学处理 Π s .sx或 Π s qstl ∀结论 }
黄花倒水莲总皂苷对小鼠的细胞免疫功能有明显增强作用 ∀
≈关键词  黄花倒水莲总皂苷 ~免疫药理 ~× 细胞亚群 ~Œ2u
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsv2sut|2sv
黄花倒水莲是远志科远志属植物 Πολψγαλα αυ2
ρεοχαυδα ⁄∏±±的根 o是一味应用广泛的民间药物 ∀
分布于湖南 !广东 !广西 !贵州 !云南等地 o该药尤多
用于补益方面 o故民间称之为 / 土黄芪0 !/ 土党
参0≈t  ∀通过化学成分研究发现 o皂苷是其主要成分
之一 ∀前期的研究发现 o黄花倒水莲总皂苷
k°„⁄×≥l能显著提高血清中溶血素的生成≈u  o并能
体外抑制乙型肝炎表面抗原≈v  o可见其能促进抗体
的生成 o即对机体的体液免疫功能有调节作用 ∀本
课题主要从细胞因子方面对其总皂苷的免疫药理活
性进行研究 ∀
1 实验材料
1 q1 药物的制备
黄花倒水莲总皂苷采用大孔吸附树脂法 o取药
材 v ®ªo提得 °„⁄×≥ vz ªo临用前用蒸馏水稀释 ∀
1 q2 动物
小白鼠 o‘Œ‹ 品系 o购于湖南中医学院动物室 ∀
1 q3 试剂
环磷酰胺k≤ ≠l o上海华联制药有限公司 ouss
°ªr支 ~抗 v×w ¦„¥o抗 ¼·u ¦„¥o临用前加抗体
稀释液ks qtx °²¯#pt°…≥ o含 s qt h ‘¤‘v ou h小
牛血清l至 tΒts的浓度 ~ƒŒ× ≤2兔抗大鼠 ŒªŠ o临用
前以同样的抗体稀释液 s qtx °²¯#pt°…≥稀释至 t
Βy的浓度 o购于北京医科大学免疫教研室 ~tx°²¯ #
≈收稿日期  usst2sx2tw
≈通讯作者  电话 }ksxzzl{yz{xzx ∞°¤¬¯}º½¶·ƒ ±¨ ·¨¤¶¨ q¦²°
p t°…≥抗体稀释液 o自制 ~‹¤±®¶. 液k³‹z qul o自
制 ~⁄‘ƒ…液 o自制 ot h u ow2二硝基氟苯 o溶于丙酮2
麻油kt Βtl液中 ∀ ≤ ׏细胞依赖株 otyws培养液 o
≤²±„k刀豆球蛋白 „l ov ‹2ק• k比活性 uu ≤¬#°°²¯#
pt o中国科学院原子能研究所l oŒ2u标准液k≥¬ª2
°¤公司l o湖南医科大学免疫教研室提供 ∀
1 q4 仪器
{u2t型电动离心机 o上海医用分析仪器厂 ~
…÷xs 系统生物显微镜 o奥林巴斯光学工业株式会
社 ~vz ε ≤ ’u 恒温培养箱 o• 2tu⁄型 o日本三菱株
式会社 ~|y 孔平底聚乙烯培养板 o意大利 …• „ ˜‘
公司生产 ~多头细胞收集器 o⁄≠ ‘„×∞≤ ‹ 公司生
产 ~≥2v{st型液闪仪 o…¨ ¦®°¤±公司出产 ∀
2 实验方法及结果
2 q1 °„⁄×≥对迟发型超敏反应小鼠 × 细胞亚群水
平的影响≈w 
取体重为kus ? ul ª的小鼠 ws 只 o雌雄各半 o随
机分成 w组 }空白组 !药物组 !抑制模型组 !抑制加药
物组 ∀空白和抑制模型组 ¬ª蒸馏水 ks qu °#
tsªp tl o药物和抑制加药物组¬ª °„⁄×≥液kxs °ª#
®ªp t os qu °#tsªp tl o每天给药 t次 ∀
采用小鼠迟发型超敏反应测定方法 o致敏原为
⁄‘ƒ…o于第 u天以 uxs Λª# °p t ⁄‘ƒ…给小鼠致
敏 o并给抑制模型组 !抑制加药物组小鼠 ¬³ ≤ ≠ {s
°ª#®ªp t o制备 ⁄× ‹ 反应低下的模型k以致敏之日
为第 s天l o致敏后第 w天于每鼠腹腔以同样浓度的
⁄‘ƒ… ts ˏ攻击 ouw «后 o处死小鼠 ∀
#|tu#
第 uz卷第 v期
ussu年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qv
¤µ¦«qoussu
采用 ¦„¥间接免疫荧光法 o小鼠断头处死 o无
菌取脾 o置 ‹¤±®. ¶液中轻轻捻碎 o经 tss目筛网过
滤 o将悬液置於离心管内离心 oku sss µ#°¬±p tl o弃
上清 o细胞用 ‹¤±®. ¶液悬浮 o调整细胞数至 t ≅ tsy#
°p t o在压积细胞ku ≅ tsyr管l中加入抗 v×w o¼·u
的 ¦„¥各 xs ˏo混匀置 w ε ovs °¬±作用 o用
‹¤±®. ¶液洗 v次ku sss µ# °¬±p tl o弃上清 o再分别
加 ƒŒ× ≤2兔抗大鼠 ŒªŠ xs ˏo混匀置 w ε ovs °¬±
作用 o用 ‹¤±®. ¶液洗 v次ku sss µ#°¬±p tl o弃上清 o
涂片 o置系统生物显微镜下观察 o对照组不加
¦„¥o计数 uss个淋巴细胞 o求出荧光阳性细胞百
分率 o及 v×wr¼·u细胞比值 o结果如表 t ∀
表 t °„⁄×≥对迟发型超敏反应小鼠
× 细胞亚群水平的影响k ξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªp t
v×wr¼·u
细胞比值
空白组 t qvy| ? s qszs
°„⁄×≥ 组 xs t qz{z ? s qttsul
≤ ≠ 组 s q{ys ? s qsyytl
°„⁄×≥ n ≤ ≠ 组 xs t quv| ? s qs{yvl
注 }与空白组比较 tl Π s .sx u) Π s qst 与 ≤ ≠ 组比较
vl Π s qst k表 u同l
从表 t可知 o°„⁄×≥能显著提高正常小鼠和防
护 ≤ ≠ 所致 × 细胞介导的迟发型超敏反应免疫抑制
小鼠的 ×细胞亚群的v ×w r¼·u细胞比值k Π 
s qstl ∀说明 °„⁄×≥能够提高小鼠的 × 淋巴细胞
亚群中的 ׫细胞 o能增强小鼠的细胞免疫功能 ∀
2 q2 °„⁄×≥ 对 ≤²±„ 诱导的小鼠脾 × 淋巴细胞
Œ2u的生成≈x oy 
取体重为kus ? ulª的小鼠 ws只 o按性别随机
分成 w组 o空白组 !药物组 !抑制模型组 !抑制加药物
组灌胃给药方法同前 ∀
2 q2 q1 Œ2u诱生 于第 z天 o处死小鼠后按上述方
法制备脾细胞悬液 o用 ‹¤±®. ¶液洗 u次ku sss µ#
°¬±p tl o用 • ° Œ2tyws培养基调整细胞浓度为 x ≅
tsy#°p t作为小鼠 Œ2u的产生细胞 o取 t °加入
uw孔培养板中 o然后每孔加入 ≤²±„ t °k终浓度
u qx Λª#°p tl o于 ≤ ’u培养箱内培养 uw «o离心 ts
°¬±沉淀细胞 o收集上清液 o作为Œ2u的粗制品 o
p us ε 保存待测 ∀
2 q2 q2 Œ2u 活性检测 采用 Œ2u 依赖细胞株
≤ ׏2u进行 ∀取传代 w{ «o生长良好的 ≤ ׏2u细
胞 o用 • ° Œ2tyws完全培养基洗涤 u次 o然后调整
浓度为 t ≅ tsx#°p t ∀将经系列倍比稀释的样品kv
个浓度l !培养基k对照用l各 s qt °加入 |y孔培养
板中 o每稀释度重复u孔 o然后加入 ≤ ׏2u细胞
s qt °k含 t ≅ tsw个细胞l ∀置于 vz ε !饱和湿度 !
x h ≤ ’u培养箱中孵育 uw «后 o收获前加入v ‹2ק•
ks qxΛ≤¬r孔l o继续培养 ty «o用多头细胞收集器将
细胞收集在玻璃纤维滤膜上 o干燥将每个样品的滤
片取下 o后置 t ∗ u °的闪烁液中 o在液闪仪测定样
品的每分钟脉冲数k¦³°l o计算生长指数 ∀结果见
表 u ∀
生长指数 ŠŒ€样本组k¦³°l值r对照样本组k¦³°l值
表 u °„⁄×≥对 ≤²±„诱导的小鼠
脾 × 淋巴细胞 Œ2u的生成 k ξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªp t
生长
指数
空白组 tw q{ ? v qx|
°„⁄×≥ 组 xs t| qvt ? w qzxxtl
≤ ≠ 组 y qvy ? u qtyul
°„⁄×≥ n ≤ ≠ 组 xs ty qv{ ? v qwvvl
从表 u可知 o°„⁄×≥能显著提高正常小鼠 Œ2u
的生长指数k°  s qsxl和防护 ≤ ≠ 所致免疫力低下
小鼠 Œ2u的生长指数k°  s qstl ∀说明 °„⁄×≥能
显著提高 × 淋巴细胞分泌生成 Œ2u细胞因子 o对细
胞因子有促进作用 ∀
3 讨论
现代研究发现中医的/虚症0多表现为细胞免疫
功能的低下≈z  ∀在机体的细胞免疫中 × 细胞担负
了重要的作用 o׫k辅助性 × 细胞l和 ׶k抑制性 ×
细胞l对免疫网络的调控具有中心枢纽的作用 ∀Œ2u
原称 × 细胞生长因子kצ¨¯¯ ªµ²º·«©¤¦·²µ× ≤Šƒl o
Œ2u不仅能促进 × 细胞的生长 o还可增强 ‘Ž细胞
和淋巴因子活化的杀伤细胞k„Žl o促进干扰素的
生成 o并可直接促进 …细胞的增殖与抗体合成≈{  ∀
许多资料表明 o大剂量注射 ≤ ≠ 对 × 细胞功能有一
定的损伤 o且免疫细胞的不同亚类对 ≤ ≠ 的敏感性
也存在着明显的差异≈|  ∀王兴旺等又发现 o在
⁄‘…ƒ 致敏当天给小鼠 ¬³ ≤ ≠ {s °ª#®ªp t o导致
⁄× ‹反应降低 o同时 v×w 细胞数量减少 ov×wr
¼·u比值降低 o推测这可能与 ≤ ≠ 选择性杀伤 ׫前
体细胞有关≈ts  ∀本次实验结果与其一致 ∀从结果
可知 o°„⁄×≥ 能提高 ׫r׶细胞的比值 o可认为
°„⁄×≥能作用于 × 细胞 o通过增加 ׫细胞改变其
׫r׶细胞亚群比值水平 ∀由于 ≤ ≠ 能抑制 × 细胞
#suu#
第 uz卷第 v期
ussu年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qv
¤µ¦«qoussu
的增殖 o对 Œ2u的生成也产生影响 ∀ °„⁄×≥ 能防
护 ≤ ≠ 所致免疫力低下的 ≤²±„诱导脾 × 细胞产生
Œ2u的反应 o可推测 °„⁄×≥能使 × 细胞增殖活化 o
使 Œ2u的分泌增多 ∀这可能是其提高机体免疫能
力的机理之一 ∀亦为黄花倒水莲的/补益气血0 !/健
脾0 !/补虚0等的补益功效提供了一定的实验依据 ∀
≈参考文献 
≈t  5全国中草药汇编6编写组 q全国中草药汇编k上册l q北京 }人
民卫生出版社 ot|zx qzyx q
≈u  秦华珍 q黄花倒水莲的抗应激作用 q广西中医药 ot||y ot|
kvl }xu q
≈v  王伟华 q黄花倒水莲对乙肝病毒体外抑制作用的初步观察 q
湖南中医药导报 ot||y oy }vt q
≈w  张国良 o左大鹏 o叶长生 o等 q应用单克隆抗体检测 × 细胞亚
群 q广东医学 ot|{x oyk{l }uv q
≈x  钱玉昆 q实用免疫新技术 q北京 }北京医科大学 !协和医科大
学联合出版社 ot||v qvy q
≈y  严 杰 o罗海波 o陆德源 q现代微生物学实验技术及其应用 q
北京 }人民卫生出版社 ot||z qty{ q
≈z  董振华 q中医有关免疫学思想的探讨 q山西中医 ot|{y ouktl }
wt q
≈{  陆德源 q现代免疫学 q上海 }上海科学技术出版社 ot||x qxy q
≈|  黄 沁 q免疫药物学 q上海 }上海科学技术出版社 ot|{y q{y q
≈ts  王兴旺 q白芍总苷调节小鼠免疫功能的机理 q中国药理学通
报 ot||s oykyl }vyv q
≈责任编辑 方文贤 
淫羊藿黄酮磷脂复合物防治去势
大鼠骨丢失的实验研究
江永南t o莫红缨u o陈济民v
kt q广州铁路中心医院 o广东 广州 xtss{s ~
u q广州呼吸疾病研究所 o广东 广州 xtstus ~
v q沈阳药科大学 药剂教研室 o辽宁 沈阳 ttsstxl
≈摘要  目的 }观察淫羊藿黄酮磷脂复合物防治去势大鼠骨质疏松症模型骨丢失的药效 ∀方法 }w月龄 ≥⁄大
鼠背侧行完整双侧卵巢摘除术 o建立骨疏松模型 ~通过双能 ÷ 线扫描大鼠骨密度k… ⁄l ~放免法测定血清中雌二醇
k∞ul的含量 ~∞„≥„法测定血清中白介素2ykŒ2yl的含量 o比较 !确定淫羊藿黄酮磷脂复合物的药效 ∀结果 }高剂
量组 !尼尔雌醇组和假手术组的敏感区域k第 v腰椎 !股骨远端和胫骨的近端l的骨密度 !血清 ∞u 明显高于模型组
k Π s qstl o而血中 Œ2y的水平明显低于模型组k Π s qstl ∀结论 }运用 w月龄 ≥⁄雌性大鼠建立的骨质疏松模型
是可行的 o淫羊藿黄酮磷脂复合物可有效改善骨质疏松症大鼠的骨密度 o提高血中 ∞u o降低 Œ2y水平 ∀
≈关键词  淫羊藿黄酮 ~磷脂复合物 ~雌二醇 ~Œ2y ~药效学
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  … ≈文章编号  tsst2xvsukussulsv2suut2sw
淫羊藿是传统补肾壮阳药 o主成分为黄酮 !淫羊
藿苷和多糖 ∀现代研究发现其具有抗骨质疏松作
用≈t  o免疫调节作用≈u  o心脑血管扩张作用≈v  o但其
主要成分淫羊藿苷的水溶性差 o生物利用度低≈w  ~国
外文献报道≈x  o天然活性成分与磷脂在一定条件下
进行复合 o得到天然活性成分磷脂复合物k³«¼·²
≈收稿日期  usst2s|2tv
≈基金项目  广州铁路k集团l公司科技开发项目kusss2v2uvl
≈通讯作者  电话 }ksuslytvuzsxz 传真 }ksuslytvuttzz ∞2
°¤¬¯}­¼±ut|yz ƒ tyv q±¨ ·
¶²° ¶¨或 ³«²¶³«²¯¬³¬§¦²°³¯ ¬¨l o其理化性质和生物
特性较原化合物均有不同程度的改变 o具有较强的
亲脂性 o可有效地提高天然活性成分在体内的吸收 o
显著地改变其生物有效性 ∀为验证工艺的可行性 o
本研究运用去卵巢大鼠造成的骨质疏松模型 o在单
一因素条件下比较不同剂量组的淫羊藿黄酮磷脂复
合物和尼尔雌醇对去势大鼠骨质疏松的防治作用 ∀
1 实验器材与材料
1 q1 实验动物
≥⁄雌性大鼠kuus ? usl ªkw月龄l o购自中山医
科大学实验动物中心 ∀
#tuu#
第 uz卷第 v期
ussu年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ quz o‘²qv
¤µ¦«qoussu