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k Ё s qsxl qΧονχλυσιον :× «¨ °²§¨¯ º¤¶°¤§¨ ¶∏¦¦¨¶¶©∏¯ ¼¯ q¤µª¨ §²¶¨ ªµ²∏³o¶°¤¯¯§²¶¨ ªµ²∏³¤±§ / ¬∏¨2¶«∏¤±2¬¬±2°¤¬2±¬±ª0ªµ²∏³
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[ Κεψ ωορδσ] ≠¬2≥«¨ ±2‹∏²2÷∏¨ ƒ¤±ª ~¥¯²²§¶·¤¶¬¶°²§¨¯~ªµ¤±∏¯¨ °¨°¥µ¤±¨ ³µ²·¨¬± twskŠ  °2twsl ~²¬¼ª¨ ±¬¦©µ¨¨µ¤§¬¦¯¨
≈责任编辑 方文贤 
蓝萼香茶菜对大鼠全心缺血2再灌注时
心肌¦2©²¶基因表达的影响
刘兰娣t o叶丽卡t o潘东军t o姜彦多t o张铁铮u o杨 辉v
kt q解放军第 usu 医院 o辽宁 沈阳 ttsssv ~
u q沈阳军区总医院 o辽宁 沈阳 ttsstx ~
v q辽宁省人民医院 o辽宁 沈阳 ttsstyl
≈摘要  目的 }研究蓝萼香茶菜对大鼠全心缺血2再灌注时心肌 ¦2©²¶基因表达的影响 ∀方法 }采用 ¤±ª¨ ±2
§²µ©©离体全心缺血2再灌注损伤模型 o• ¬¶·¤µ大鼠 ws 只 o随机分为 x 组 o每组 { 只 ∀ ‘组为单纯 Ž2‹ 液灌注对照
组 ~≤‘组为缺血2再灌注对照组 ok高 ÷ ‹ o中 ÷  o低 ÷浓度l蓝萼香茶菜灌注 v组k浓度分别为 x h ot h os qu h l ∀
采用免疫组化 ≥° 法 o用相应的 ¦2©²¶抗体检测心肌细胞中 ¦2©²¶基因表达情况 ∀用计算机图像分析系统分析 ¦2©²¶
基因表达情况 ∀结果 }与 ‘组相比 o≤ ‘o÷ ‹ o÷  o÷组 ¦2©²¶基因表达水平明显提高k Π s qstl ∀与 ≤ ‘组相比
÷ ‹ o÷  o÷组 ¦2©²¶基因表达水平明显降低k Π s qsxl ∀ ÷  o÷组较 ÷ ‹ 组 ¦2©²¶基因表达水平明显降低k Π
s qstl !÷  较 ÷组相比 ¦2©²¶基因表达下降k Π s qsxl ∀结论 }蓝萼香茶菜能显著抑制心肌 ¦2©²¶基因的表达 o它
保护缺血2再灌注心肌损伤可能部分与其抑制 !下调 ¦2©²¶基因的蛋白表达有关 ∀蓝萼香茶菜具有与剂量相关的心
肌保护作用 o但并非浓度越大越有效 ∀
≈关键词  蓝萼香茶菜 ~心肌再灌注损伤 ~基因 ~¦2©²¶
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svx{2sw
心肌缺血2再灌注所致的心肌细胞死亡以往多
认为是细胞坏死 o近来研究提示尚有心肌细胞凋
亡≈t  ∀细胞凋亡涉及多种基因的复杂变化 o其中
¦2©²¶基因表达变化与凋亡的关系倍受关注 ∀唇形
科植物蓝萼香茶菜 Ραβδοσια ϕαπονιχα k…∏µ° ƒl
≈收稿日期  usst2tu2tu
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|zzs|twl
≈通讯作者  ר¯ }ksuwluvsxv{zt ƒ¤¬}ksuwluv{zvxzx ∞2
°¤¬¯}³§­§¬¦®ƒ ¶¬±¤q¦²°
‹¤µ¤√¤µq γλαυχοχαλψξ k ¤¬°l‹¤µ¤o经国内十几年
的研究 o发现有很多的改善微循环作用和抑制血小
板凝集作用≈u ov  o对心脏营养性血流量和冠脉流量
都有明显改善≈w  ∀本研究采用离体心脏灌注模型观
察蓝萼香茶菜对大鼠全心缺血2再灌注时心肌 ¦2©²¶
基因表达的影响 ∀
1 材料与方法
1 q1 主要试剂与器材
1 q1 q1 试剂 Ž¨µ¥¶2‹ ±¨¶¨¯¨¬·kŽ2‹l液k °°²¯ #
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第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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pt l }‘¤≤¯tt{ oŽ≤¯w qz o≤¤≤ u¯ u qx oŽ‹u °’w
t qu o ª≥’w#z‹u’t qu o‘¤‹≤ ’vux o葡萄糖 tt qt ∀
³‹ z qvx ∗ z qwx o由本院药理实验基地配制 ∀戊巴
比妥钠 o北京通县育才精细化工厂 ²·}szsxst ∀肝
素钙注射液 o云南生化制药股份有限公司 ²·}
|{svx ∀蓝萼香茶菜 o采自辽宁中部山区 o经第二军
医大学药学院郑汉臣教授鉴定 o生药用乙醇回流 v
次提取 o提取液回收乙醇 o浓缩后加到 s qx h 淀粉糊
中 o挥去乙醇 o浓度为 t ®ª#ptk解放军第 usu医院
临床药理基地提供l ∀兔抗鼠 ¦2©²¶单克隆抗体k北
京中山生物工程有限公司l ∀ ≥° 免疫组化试剂盒
k北京中山生物工程有限公司l ∀
1 q1 q2 实验器材 ׍≤ ÷ • 型图像分析系统k中
国l ∀ ¤±ª¨ ±§²µ©©逆灌装置k中国l ∀ ’ ¼¯°³∏¶…÷2
ws显微镜k日本l ∀’ ¼¯°³∏¶…÷2ys显微镜k日本l ∀
超级恒温水浴锅k中国l ∀
1 q2 动物 • ¬¶·¤µ大鼠 ws 只k一级动物l o体重
kuxs ? xsl ª o雌雄不拘k沈阳军区陆军总院医学动
物实验科提供l ∀
1 q3 方法
1 q3 q1 试验分组及药物处理 • ¬¶·¤µ大鼠 ws 只 o
随机分为 x 组 o每组 { 只 ∀ ‘组为单纯 Ž2‹ 液灌注
组 o用不含任何药液的 Ž2‹ 液预灌 tx °¬±o再继续
灌注 {s °¬± ~≤‘组为缺血2再灌注对照组 oŽ2‹ 液
预灌 tx °¬±o再续灌 us °¬±o心脏停跳全心缺血 vs
°¬±后 o再灌注 vs °¬± ~其余 v 组分别为高k ÷ ‹
组l !中k÷  组l !低k÷组l浓度香茶菜灌注组k香
茶菜浓度分别为 x h ot h os qu h l o用不含任何药液
的 Ž2‹ 液预灌 tx °¬±后 o于缺血前用含 v种浓度香
茶菜的 Ž2‹ 液继续灌注 us °¬± o后续步骤同 ≤‘
组 ∀
1 q3 q2 动物模型 实验动物均采用 v h 戊巴比妥
钠kvs °ª#®ªp tl !肝素kxss ˜#®ªp tl腹腔注射 o麻
醉后无菌条件下摘取心脏 o于冰盐水ks ∗ w ε l内迅
速行主动脉插管 o并与 ¤±ª¨ ±§²µ©©灌注装置连接 o
以 |x h ’u和 x h ≤ ’u饱和的 Ž2‹ 液行逆行恒压灌
注 ∀温度控制在kvz ? s qul ε o灌注压 { q{u ®°¤o并
于灌注过程中持续通入 |x h ’u和 x h ≤ ’u混合气 ∀
各组灌注完成后留取左室前壁心肌标本 ∀
1 q3 q3 免疫组化染色k≥° 法l 按操作说明书进
行 ∀
1 q3 q4 观察指标及结果评定 ¦2©²¶阳性染色部位
主要为胞浆 o阳性细胞可见细胞浆内出现棕黄色颗
粒 ∀应用 ׍≤ ÷ • 型图像分析系统进行处理 o得出
¦2©²¶蛋白阳性表达的相对面积k³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±
µ¨ ¤¯·¬√¨¤µ¨¤²©¦2©²¶ª¨ ±¨ °∞• „l ∀
1 q4 统计学处理 所得数据以均值 ? 标准差表示 o
采用 ∞÷ ≤∞进行 τ检验 ∀ Π s qsx 为有统计学差
异 oΠ s qst 为差异性显著 ∀
2 结果 ‘组 !≤‘组及 ÷ ‹ o÷  o÷各组大鼠心
肌细胞中 ¦2©²¶蛋白表达情况为 ‘组心肌细胞内未
见¦2©²¶蛋白阳性标记或少量标记 o≤‘组及 ÷ ‹ o
÷  o÷组胞浆中棕黄色颗粒明显增多 o≤‘组与
÷ ‹ o÷  o÷组相比表达更强 o÷组与 ÷  组相比
表达增强 !÷ ‹ 组与 ÷!÷  组相比表达增强k图 t
∗ xl ∀应用图像分析系统分析后 o结果见表 t ∀
表 t 各组心肌 ¦2©²¶蛋白阳性表达的相对面积 k ξ ? σl
组别 ‘组 ≤ ‘组 ÷ ‹ 组 ÷  组 ÷组
¦2©²¶ t qzx ? t qyw uw qtv ? | q||tl tw qzx ? w qztt oul x qxs ? u qyxt ou ovl { qxs ? v qytt ou ov owl
注 }与 ‘组相比 tl Π s qst 与 ≤ ‘组相比 ul Π s qsx 与 ÷ ‹ 组相比 vl Π s qst 与 ÷  组相比 wl Π s qsx ÷ ‹ 组有 u 例再灌
注过程中心脏复跳不满意
图 t ‘组 ¦2©²¶蛋白染色 ≅ wss 图 u ≤ ‘组 ¦2©²¶蛋白染色 ≅ wss
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第 u{卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 v ÷ ‹ 组 ¦2©²¶蛋白染色 ≅ wss
图 w ÷  组 ¦2©²¶蛋白染色 ≅ wss
图 x ÷组 ¦2©²¶蛋白染色 ≅ wss
3 讨论 细胞凋亡这一概念于 t|zu 年由 Ž¨µµ等
首次提出≈x  o近年来研究认为 o异常的细胞凋亡是多
种疾病发病的重要原因之一 ∀已有多项研究表明 }
鼠 !兔和人类的心肌细胞在经过一定时间的缺血缺
氧或缺血2再灌注后 ~可出现明显的凋亡现象≈t oy  ∀
细胞凋亡具有复杂的分子调控机制 o许多基因都参
与凋亡的发生 o¦2©²¶为凋亡促进基因 ∀本研究应用
免疫组化方法 o观察了¦2©²¶原癌基因在大鼠离体全
心缺血2再灌注损伤模型中的表达情况以及蓝萼香
茶菜对其表达的影响 ∀¦2©²¶原癌基因属于即刻早期
基因k¬°° §¨¬¤·¨2 ¤¨µ¯¼ ª¨ ±¨ oŒ∞Šl家族 o其特征为静
止的细胞在受外界刺激时快速早期表达 ∀在大多数
情况下 o当细胞受到一定刺激后 x °¬±内 ¦2©²¶基因
的转录就开始启动 o然后编码合成分子量为 xx ®⁄¤
的蛋白质 ∀¦2©²¶基因存在于正常心肌 !血管平滑肌
和内皮细胞中 o参与正常细胞的生长发育 o它即是心
血管系统发育所必须的基因 o也是心血管系统应激
反应所必需的基因≈z  ∀近年来的研究表明 o¦2©²¶基
因亦可参与心肌缺血再灌注损伤 ∀蓝萼香茶菜有很
多的改善微循环作用和抑制血小板凝集作用 o以其
浸膏片用于临床 o对冠心病心绞痛疗效显著≈u ov  o对
心脏营养性血流量和冠脉流量都有明显改善≈w  ∀
本研究应用免疫组化 ≥°法显示 ¦2©²¶蛋白表达
及蓝萼香茶菜对其表达的影响 o结果显示缺血2再灌
注组的心肌组织中 ¦2©²¶基因表达较对照组明显增
高 ∀该结果表明缺血及再灌注损伤确可诱导 ¦2©²¶
基因的表达 ∀同时也证实 o¦2©²¶基因这种凋亡相关
基因参与了心肌缺血与再灌注损伤过程 ∀心肌缺血
2再灌注损伤诱导 ¦2©²¶基因表达的可能机制 o与蛋
白合成受抑制及 ≤¤u n oŒ°v o¦„  ° 等第二信使密切
相关≈{  ∀在上述因素的刺激下 o¦2©²¶基因迅速表达 o
其表达产物©²¶蛋白由胞浆转入核内形成 „°2t ∀继
而作用于 ⁄‘„ 特殊序列调节相关基因的转录 o发挥
第三信使的作用以调控细胞凋亡过程 ∀本研究结果
表明缺血2再灌注组 ¦2©²¶蛋白表达均较对照组明显
增加k Π s qstl o而 ÷o÷  o÷ ‹ 组 ¦2©²¶表达明显
少于 ≤‘组 o说明蓝萼香茶菜可抑制心肌 ¦2©²¶蛋白
表达 ∀本实验在心肌缺血2再灌注前预灌蓝萼香茶
菜 o致使心肌¦2©²¶基因表达减少 o表明心肌缺血2再
灌注损伤轻 o心肌受到一定的保护 ∀同时本实验结
果提示 o高浓度蓝萼香茶菜直接抑制心肌 o具有负性
变时变力作用 ∀无论蓝萼香茶菜浓度高低 o均明显
降低¦2©²¶基因表达 o但高浓度蓝萼香茶菜具有一定
的心肌细胞毒性作用 ∀本文高浓度蓝萼香茶菜组
k÷ ‹ 组l与缺血2再灌注对照组k≤‘组l相比虽有显
著性差异k Π s qsxl o但不及中 !低浓度组k÷  o÷
组l¦2©²¶基因表达减少明显k Π s qstl o低浓度组不
及中浓度组¦2©²¶基因表达减少明显k Π s qsxl o说
明蓝萼香茶菜具有与剂量相关的心肌保护作用 o但
并非浓度越大越有效 ∀
4 结论
缺血及再灌注损伤可诱导凋亡相关基因 ¦2©²¶
基因的表达 ∀缺血2再灌注前预灌蓝萼香茶菜可明
显减少凋亡相关基因 ¦2©²¶基因的表达 o提示其对心
肌缺血2再灌注损伤具有保护作用 ∀蓝萼香茶菜具
有与剂量相关的心肌保护作用 o但并非浓度越大越
有效 ∀
≈参考文献 
≈t  ƒ¯ ¬¶¶‹ o Š¤··¬±ª¨µ⁄q „³²³·²¶¬¶¬± Œ¶¦«¨ °¬¦¤±§ • ³¨¨ µ©∏¶¨§ • ¤·
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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研究 q药学通报 ot|{v ot{kwl }xv q
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板活化因子及花生四烯酸代谢的影响 q中国药理学与毒理学
杂志 ot||u oyktl }xu q
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的初步实验研究 q新兴医药研究 ot||w owkvl }{ q
≈x  Ž¨µµƒ • o • ¼¯ ¬¯¨ „ ‹ o≤∏µµ¬¨ „ • q„³²³·²¶¬¶}„ …¤¶¬¦…¬²¯²ª¬2
¦¤¯ °«¨ ±²° ±¨²± º¬·« • ¬§¨2• ¤±ª¬±ªŒ°³¯¬¦¤·¬²±¶¬± ׬¶¶∏¨ Ž¬±¨ ·2
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Εφφεχτσ οφ ς αργλαυχοχαλψξ ον χ2φοσ Γενε Εξπρεσσιον δυρινγ
Γλοβλ Μψοχαρδιαλ Ισχηεµια2Ρεπερφυσιον ιν Ρατ
Œ˜ ¤±2§¬t o ≠ ∞ ¬2®¤t o°„‘ ⁄²±ª2­∏±t oŒ„‘Š ≠¤±2§∏²t o ‹ „‘Š ׬¨2½«¨ ±ªu o ≠ „‘Š ‹∏¬v
kt q ‘²qusu ‹²¶³¬·¤¯ ’© °„ o≥«¨ ±¼¤±ª ttsssv o¬¤²±¬±ªo≤«¬±¤~
u q Š ±¨¨ µ¤¯ ‹²¶³¬·¤¯ ’© ≥«¨ ±¼¤±ª ≤²°°¤±§²© °„ o≥«¨ ±¼¤±ª ttsstx o¬¤²±¬±ªo≤«¬±¤~
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨·¨°¬±¨ ·«¨ ©¨©¨ ¦·¶²© ∂¤µª¯¤∏¦²¦¤¯¼¬ ²± ¦2©²¶ª¨ ±¨ ¬¨³µ¨¶¶²± §∏µ¬±ª ª¯²¥¤¯ °¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2
µ¨³¨µ©∏¶¬²± q Μετηοδ :ƒ²µ·¼ • ¬¶·¤µµ¤·¶º µ¨¨ §¬√¬§¨ §¬±·²x ªµ²∏³¶}ªµ²∏³ ‘¤¶¦²±·µ²¯ ~ªµ²∏³ ≤‘¤¶¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±¦²±·µ²¯ ¤±§
ªµ²∏³ ÷ ‹ o ÷  ¤±§ ÷·µ¨¤·¨§ º¬·« ∂¤µª¯¤∏¦²¦¤¯¼¬ x h ot h os qx h µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼ ³µ¬²µ·²¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±q × «¨ ¬¶²¯¤·¨§µ¤·
«¨ ¤µ·¶º µ¨¨ ³¨µ©∏¶¨§¬± ¦²±§¬·¬²± ²©¦²±¶·¤±··¨°³¨µ¤·∏µ¨ ¤±§³µ¨¶¶∏µ¨ o¤±§·«¨ ± ·«¨ ¯¨ ©·√ ±¨·µ¬¦∏¯¤µ°¼²¦¤µ§¬∏°¶º µ¨¨ ¬¨·µ¤¦·¨§©²µ
∏¶¨ q × «¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¦2©²¶³µ²·¨¬± º¤¶§¨·¨¦·¨§¥¼¬°°∏±²¦«¨ °¬¦¤¯ ° ·¨«²§q× «¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¦2©²¶³µ²·¨¬± º µ¨¨ ∏´¤±·¬©¬¨§¥¼ ∏¶2
¬±ª¦²°³∏·¨µ¬°¤ª¨ ¤±¤¯¼¶¬¶¶¼¶·¨° q Ρεσυλτ : ≤²°³¤µ¨§ º¬·«·«¨ √¤¯∏¨¶²© ªµ²∏³ ‘o³µ²·¨¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±¶µ¨ ¤¯·¬√¨¤µ¨¤ ²©¦2©²¶ª¨ ±¨
k°∞• „lº µ¨¨ ¬±¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬± ªµ²∏³ ≤‘o ÷ ‹ o ÷  o ÷k Π s qstl o¥∏·§¨¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬± ªµ²∏³ ÷ ‹ o ÷  o ÷o
¦²°³¤µ¨§ º¬·«·«²¶¨ ²©ªµ²∏³ ≤‘k Π s qsxl q׫¨ °∞• „ ²©¦2©²¶ª¨ ±¨ ¬± ªµ²∏³ ÷  o ÷º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ²¯º µ¨·«¤±¬± ªµ²∏³
÷ ‹k Π s qstl o¤±§·«¨ °∞• „ ²©¦2©²¶ª¨ ±¨ ¬± ªµ²∏³ ÷  º µ¨¨ ²¯º µ¨·«¤±¬± ªµ²∏³ ÷k Π s qsxl qΧονχλυσιον : ∂¤µª¯¤∏¦²¦¤¯¼¬¦¤±
©¨©¨ ¦·¬√¨¯¼ §¨ ³µ¨¶¶·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©¦2©²¶ª¨ ±¨ ¬± °¼²¦¤µ§¬∏° º«¬¦« °¤¼ ¤¦¦²∏±·©²µ¬·¶³µ²·¨¦·¬²± ¤ª¤¬±¶·°¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ2
©∏¶¬²±¬±­∏µ¼ o¤±§·«¨ °¬§§¯¨¤±§·«¨ ²¯º ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²© ∂¤µª¯¤∏¦²¦¤¯¼¬ ¤µ¨ °²µ¨ ©¨©¨ ¦·¬√¨·«¤±·«¨ «¬ª«¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶q
[ Κεψ ωορδσ] √¤µª¯¤∏¦²¦¤¯¼¬~ °¼²¦¤µ§¬¤¯ µ¨³¨µ©∏¶¬²±¬±­∏µ¼ ~ª¨ ±¨ ¶ ~¦2©²¶
≈责任编辑 方文贤 
会议征文
药物分析杂志编委会定于 ussv年三季度在宁波召开全国药物分析溶出度法学术研讨会 ∀会上拟请有关专家做专题报告 }t qussx年版药
典药品溶出度新增品种情况介绍 ~u q药物溶出度法在缓释 !控释制剂中的应用 ~v q溶出度适用性实验 ∀
一 !征文内容 }药物分析溶出度法应用进展 }药物溶出度法在药物检验中的应用 ~药物溶出度法在缓释 !控释制剂中的应用 ~药物溶出度法
在传统中药制剂 !生化药物制剂及基因工程药物制剂中的应用 ~药物溶出度仪发展近况 ∀
二 !论文撰稿要求 }t q论文应是未公开发表的 ∀综述文章一般不超过 x sss字 ~研究论文一般不超过 v sss字 ~每篇文章需附 {ss字摘要 ∀
投稿时请一并附软盘或发 ∞2°¤¬¯至本刊信箱 ∀u q论文格式请按药物分析杂志 ussv年第 t期稿约要求书写 ~稿件应打印在稿纸上 ∀ v q每篇稿
件需附单位介绍信及 xs元稿件处理费 ∀w q征文截止日期 ussv年 |月 vs日k以邮戳为准l ∀ x q论文将在 ussv年药物溶出度专题学术研讨会
上进行交流 o并在药物分析论坛k正式出版物l中发表 o且酌收版面费 ∀
三 !投稿方式及联系人 }t q邮寄 }邮编 tsssxs o地址 }北京天坛西里 u号中国药品生物制品检定所内药物分析杂志编辑部 u q∞2°¤¬¯}¼º©¬½½
ƒ ³¨µ¬²§¬¦¤¯¶q±¨ ·q¦±o¼º©¬ƒ ±¬¦³¥³q²µªq¦±∀v q电话 }kstslyzsx{wuz传真 }kstslyzstu{t|联系人 }刘小帅 ∀w q来稿应注明/会议征文0字样 ∀欢
迎无论文人员参加会议 ∀
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第 u{卷第 w期
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中 国 中 药 杂 志
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