全 文 ：高效毛细管电泳法研究口服铝制剂
对小鼠血清和脑组织中铝含量的影响
伍迎红 o周钟鸣 3 o王彦礼
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要 目的 }用高效毛细管电泳仪测定小鼠血清和脑组织中铝含量的方法 o研究口服白矾 !氢氧化铝和氯化铝
对小鼠血清和脑组织中铝含量的影响 ∀方法 }白矾 !氢氧化铝和氯化铝按照铝含量相同的 u个剂量 tw qux oxz °ª#®ªpt
#§pt ¬ª给药 ys §后 o用高效毛细管电泳仪测定小鼠血清和脑组织中铝含量 ∀结果 }血清铝测定的回收率为 |y qx h ∗
tsv h o脑铝测定的回收率为 |u qu h ∗ tsx qv h o有较好的准确性和稳定性 ∀白矾 !氢氧化铝和氯化铝各组均出现血清
铝含量比对照组显著升高k Π s qsstl o各大剂量组脑铝含量比对照组显著升高k Π s qsstl ~停药 u周后 o除氯化铝大
剂量组脑铝含量仍高于对照组外k Π s qstl o其余各组均恢复正常 ∀结论 }高效毛细管电泳法可用于测定小鼠血清和
脑组织中的铝含量 ∀小鼠口服白矾 !氢氧化铝和氯化铝等含铝化合物 ys §后 o均有血 !脑铝含量升高 ~停药 tw §后血
铝可恢复正常 o氯化铝大剂量组小鼠脑铝恢复较慢 ∀说明铝在小鼠体内的代谢 !排泄与所用含铝化合物的化合状态
有关 ∀
≈关键词 高效毛细管电泳仪 ~白矾 ~氢氧化铝 ~氯化铝 ~血清 ~脑 ~铝含量
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlst2ssx|2sv
近年来 o随着毛细管电泳及其检测技术的迅速
发展 o对无机离子的毛细管电泳k≤∞l分离分析研究
取得了很大发展 o而且以其高效 !快速 !灵敏 !运行成
本低等优点显示了该方法在离子分析领域广阔的应
用前景 ∀目前对铝离子检测的报道有用吡啶2硫酸
缓冲系的 o有用咪唑2乳酸缓冲系的等≈t ∀笔者研究
了在苄胺2甲醇体系中小鼠血清和脑铝含量的毛细
管电泳分析 ∀很多研究发现铝有神经毒性≈t o并且
在阿尔茨海默氏老年性痴呆k⁄l病变的组织中也
发现铝含量升高≈u o铝的毒性与其化合状态 !给药途
径和动物的种类也有关系≈v ∀白矾 ¯ k≥w lu #
tuu o纯度 || h主要用于炮制中药 o并且广泛用
于水处理和食品添加 ~氢氧化铝 ¯ klv 也是常用
药物 ~氯化铝 ¯ ≤¯ v 的神经毒性已明确 ∀因此研究铝
的体内代谢 !排泄机制有重要意义 ∀本研究比较了
这 v种化合物对小鼠血 !脑铝含量的影响及停药后
的恢复情况 ∀
1 实验材料
1 .1 动物
≈收稿日期 ussv2su2tu
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kv|wzs{xzl
≈通讯作者 3 周钟鸣 oר¯ }kstslywstwwtt2u|{t
小鼠 o雄性 o体重kus ? ul ªo由北京市生物
制品研究所提供 ∀
1 .2 药品
白矾 o购自同仁堂东城药品批发站 ~氢氧化铝
¯ klv o北京化工厂 o批号 ||stsv ~氯化铝k¯ ≤¯ vl o
北京红星化工厂 o批号 |{swuv ∀
1 .3 试剂
铝标准物质 k国家有色金属研究院 o批号
||stsxl ~苄胺k¥¨ ±½¼¯¤°¬±¨ o|| h o≥¬ª°¤l ~甲醇k色谱
纯 o天津四友试剂公司 o批号 sttusvl ∀
1 .4 仪器
高效毛细管电泳仪k
∞≤o⁄±l ~熔融石
英毛细管 oxs Λ° ≅ wz ¦°k河北永年光纤厂l o有效长
度 ws ¦°~³ 计k
∞≤o5ztl ~电热自控消化炉
k核工业部第五研究所l ∀
2 实验方法
2 .1 实验分组
小鼠随机分为 z组 o每组 us只 o分别为正常对
照组 o白矾 s qux ot ª#®ªpt组 o氢氧化铝 s qty os qsw ª#
®ªpt组 o氯化铝 s qxt os qtv ª#®ªpt组 o换算成铝含量
均为 xz otw qux °ª#®ªpt ∀给药 ys §后 o取血 !脑进行
各项指标的测定 ∀
#|x#
第 u|卷第 t期
ussw年 t月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ t
¤±∏¤µ¼oussw
2 .2 样品的处理
血清的处理 }小鼠摘眼球取血后 o离心分离出血
清 ∀取 tss Λ血清加入 wΒt的 v2≤¯ w uss Λo
放入电热自控消化炉k{s ε u «l o待消化液无色透
明后 o升温至 tus ε o加热至干 o加超纯水 tss Λ溶
解 o用针筒式滤器k孔径 s qwx Λ°l过滤至毛细管电泳
仪微量样品瓶中 o待测 ∀
脑组织的处理 }断头 o开颅取小鼠脑组织 o用超
纯水冲干净 o定量滤纸吸干水分后 o精密称取 uss
°ªo放入刻度试管中 o加入 u °wΒt的 v2≤¯ w o
在电热自控消化炉上k{s ε u «l o待消化液无色透
明后 o升温至 tus ε o加热至干 o加超纯水 tss Λ溶
解 o用针筒式滤器过滤至毛细管电泳仪微量样品瓶
中 o待测 ∀
2 .3 仪器条件
电解质缓冲液选用 ts °°²¯ 苄胺 ows h甲醇 o³
u qv o用前新鲜配制 o用t °²¯ #pt ≤¯ 调节³至
u qv ∀毛细管卡盒由液体冷却系统恒温 ux ε o检测
窗孔 tss Λ° ≅ {ss Λ°∀溶液由正极进样 o负极检测 o
采用 v qwx ≅ tsz °¤氮气进样 u ¶∀间接紫外检测 utw
±° o分离电压 tx ®∂ ∀为保证电渗流及迁移时间的
重现性 o毛细管每天用 s qt °²¯ #pt ¤ 冲洗 ts
°¬±o然后用 s qt °²¯#pt ≤¯ 冲洗 ts °¬±o再用水冲
ts °¬±o最后用缓冲液冲洗 ts °¬± ∀每两次进样之
间用缓冲液冲洗 u °¬±∀
2 .4 标准曲线测定
2 .4 .1 灵敏度实验 在现有实验条件下达到了对
水溶液中 vss ≅ tsp | ª铝的检测 ∀
2 .4 .2 铝标准物质标准曲线测定 精密吸取铝标
准溶液 o配成 x ots otx Λª#pt的标准系列测定 o以铝
含量为横坐标 o峰面积为纵坐标做图 o得回归方程
Ψ t {su qyw Ξ n uu qz oρ s q||| | ∀
2 .4 .3 混合血清加标准消化后测定 加内标量为
s qux os qx os qzx oot °ª#pt o得回归方程为 Ψ
xu{ q{sy { Ξ n tu {x{ qu oρ s q||s s ∀线性良好 o ≥⁄
在 t q{t h ∗ z quu h ∀
2 .4 .4 血清消化后 o混合加标准测定 加内标量为
s qux os qx os qzx ot °ª#pt o得回归方程为 Ψ
t s|t qx|v Ξ oρ s q|zx t o ≥⁄ t q{t h ∗ z quu h ∀
2 .4 .5 同一脑组织消化后加标准测定 加标量为
s qsx os qszx os qt °ª#pt o方程 Ψ x x|v qx|x Ξ n
wz s{y qy oρ s q||y u o ≥⁄ u qut h ∗ w qy| h ∀
2 .5 样品消化回收试验
在脑组织和血清消化处理前和样品消化处理后
加入一定量铝与单纯样品测定的铝进行比较做回收
试验 o结果见表 t ∀
表 t 小鼠血清 !脑铝测定的回收试验k ξ ? σoν xl
样品 血清Π°ª#pt ≥⁄Πh 脑ΠΛª#ªpt ≥⁄Πh
样品 s qvs| ? s qss{ u q| t qxys ? s qswt u q|
s qxsz ? s qss{ u qz u qsxt ? s qs{{ w q{
≤ s qxsz ? s qstw t q||z ? s qstz
回收率Πh tss qv ? u qxzv |z qy{ ? w qvzz
≤回收率Πh || qy ? t qvux |{ q|w ? v qxyu
注 }样品
为 n s qu °ª#pt铝消化后 o样品 ≤ 为 消化后 n
s qu °ª#pt铝
3 含量测定
根据上述条件 o测得正常小鼠血清铝含量为
s qvst °ª#pt o脑铝含量为 t qu{x Λª#ªpt ∀
4 精密度
取铝标准溶液 !血清及脑的测定样品各 t份 o在
室温下放置 o分别于 s ot ou ov ow o{ ouw «测定 o重复进
样 x次 o铝离子峰面积的相对标准偏差分别为
t q{t h ot qy| h和 t q|v h ∀
5 特异性
血清及脑铝测定的电泳图见图 t ou ∀
图 t 高效毛细管电泳测定小鼠血清中铅含量
图 u 高效毛细管电泳测定小鼠脑中铅含量
6 结果
白矾 !氢氧化铝和氯化铝给药期及恢复期对小
鼠血 !脑铝含量的影响 }给药期各剂量组血铝含量均
升高 o各大剂量组脑铝含量也升高 o与对照组相比有
显著差异k Π s qsx oΠ s qsstl ~停药恢复 u周后 o
血铝含量均恢复至正常 o脑铝含量只有氯化铝大剂
量组仍高于对照组k Π s qstl ∀结果见表 u ∀
#sy#
第 u|卷第 t期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 u 白矾 !氢氧化铝和氯化铝给药期及恢复期对小鼠血铝k°ª#ptl !脑铝kΛª#ªptl含量的影响k ξ ? σl
组别
剂量
Πª#®ªpt
给药期
血清 脑
恢复期
血清 脑
对照 s s qvst ? s qstw t qzzv ? s qu|t s qvty ? s qswu t qu{x ? s qsyy
白矾 s qux s qwvv ? s qsuytl u qvvx ? s qtxx s qvuy ? s qstu t qwy| ? s qtzy
氢氧化铝 s qsw s qv{v ? s qsuvtl t q{|t ? s qu{v s quzw ? s qsws t qyz{ ? s quy{
氯化铝 s qtuz s qvz{ ? s qsvuvl u qvsy ? s qtvv s qwtx ? s qsvw t qzst ? s qwus
白矾 t s qxtw ? s qsv{vl u qzuv ? s qtuvtl s qv{{ ? s qsyx t qwxx ? s qtvx
氢氧化铝 s qtyx s qyuu ? s qsuwvl u qzsx ? s qvwttl s qu|s ? s qsww t qx{z ? s quyz
氯化铝 s qxs{ s qwyt ? s qsyytl v qw|| ? s qtz|vl s qvzz ? s qsz{ u qzxt ? s quzxul
注 }与对照组相比 o tl Π s qsx o ul Π s qst o vl Π s qsst
7 讨论
铝离子检测在毛细管电泳阳离子检测中并不多
见 ∀主要是因为铝离子在较低的 ³ 值情况下就可
以形成 ¯ klv 或 ¯ klun o ¯ klu n 等形式的
络合物 ∀由于物质形态复杂其电泳淌度影响因素较
多 o不易确认峰位置 ∀另外 o¯ v n与毛细管壁 ≥¬ p的
相互作用易导致峰形拖尾 !不对称现象严重 ∀
在毛细管电泳测定中 o流动相的组成及 ³值的
确定很关键 o实验发现当甲醇浓度太高时 o铝离子迁
移时间过长 o而且铝离子的络合形态浓度较大 o除了
影响电泳淌度外 o还严重影响峰的对称性 ~相反甲醇
浓度太低 o铝离子与其他离子不容易区分 ∀通过多
次实验 o我们确定以 ws h甲醇作为选择性改性剂 ~另
外由于铝离子形成 ¯ klu n 的 ³ 值可以很低 o通
过实验确定流动相的 ³值为 u qv ∀
为降低干扰 o减少组分的复杂性 o我们排除了蛋
白沉淀法等组织消化方法 o用消化法达到了较好的
样品制备效果 ∀
小鼠长期口服白矾 !氢氧化铝和氯化铝等含铝
化合物后 o均有血铝含量升高 o而且这 v种化合物中
的铝在血铝含量升高到一定水平后 o均可进入小鼠
脑中 ~停药后血铝可恢复正常 o氯化铝大剂量组小鼠
脑铝恢复较慢 ∀说明铝在小鼠体内的代谢 !排泄可
能与所用含铝化合物的化合状态有关 ∀
≈致谢 清华大学分析中心罗国安教授和王守罡同学
在毛细管电泳测定中给予支持 ∀
≈参考文献
≈t ∂ µ¨¤ °¤¦¤®²√¤o°¤√¨ ¯ ≤²∏©¤¯ o ¤µ¨¯ ≥·∏¯¬®q ≤¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶
²©¬±²µª¤±¬¦¦¤·¬²±¶q ϑ Χηροµατογρ Αot||| ok{vwl }uxz q
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Πηαρµαχολ Τηερot|{x ou| }uxx q
≈v µ¬¶«±¤± ≥ o ¦¤¦«¯¤± ⁄oµ¬¶«±¤±
q ¯ ∏°¬±∏° ·²¬¬¦¬·¼·² ¥µ¤¬±q
Σχι Τοταλ Ενϖιρον ot|{{ oz }x| q
Στυδιεσ ον εφφεχτσ οφ αλυµινυµ χοµ πουνδσ ον αλυµινυµ χοντεντσ
ινσερυµ ανδ βραιν οφ µιχε ωιτη ηιγη περφορµανχε χαπιλλαρψ ελεχτροπηορεσισ
• ≠¬±ª2«²±ªo «²±ª2°¬±ªo • ≠¤±2¯¬
kΙνστιτυτε οφ Ματερια Μεδιχαo Χηινα Αχαδεµψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε o Βειϕινγ tsszss o Χηιναl
≈Αβστραχτ Οβϕεχτιϖε}ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·¶²©¤¯∏° o¤¯∏°¬±∏° ¦«¯²µ¬§¨ ¤±§¤¯∏°¬±∏° «¼§µ²¬¬§¨ ²± ¤¯∏°¬±∏° ¦²±·¨±·¶¬± ¶¨µ∏° ¤±§
¥µ¤¬±²© °¬¦¨ º¬·« «¬ª« ³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¦¤³¬¯¯¤µ¼q Μετηοδ }ys §¤¼¶¤©·¨µ·«¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ª¬√ ±¨ §¤¬¯¼ ¤¯∏° o ¤¯∏°¬±∏° ¦«¯²µ¬§¨ ¤±§ ¤¯∏°¬±∏°
«¼§µ²¬¬§¨ º¬·«·«¨ ¶¤°¨¤¯∏°¬±∏° ¦²±·¨±·²©tw qux oxz °ª#®ªpt#§pt oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ o·«¨ ¤¯∏°¬±∏° ¦²±·¨±·¬± ¶¨µ∏° ¤±§¥µ¤¬± ²© °¬¦¨ º µ¨¨
§¨·¨µ°¬±¨ §º¬·««¬ª«³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼q Ρεσυλτ }׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©¶¨µ∏° ¤¯∏°¬±∏° §¨·¨µ°¬±¤·¬²± º¤¶|y qx h ∗
tsv h q׫¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¬¨¶²©¥µ¤¬± ¤¯∏°¬±∏° ¤¶¶¤¼ º¤¶|u qu h ∗ tsx qv h q∞¬¦¨³·¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o¶¨µ∏° ¤¯∏°¬±∏°¬±¦µ¨¤¶¨§²¥√¬²∏¶¯¼ q
µ¤¬± ¤¯∏°¬±∏°¬±¦µ¨¤¶¨§¬± ¤¯¯·«¨ ¤¯µª¨ §²¶¨¶ªµ²∏³¶qu º¨¨ ®¶¤©·¨µ·«¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ¶·²³³¨ §¥¨¬±ªª¬√ µ¨·«¨ ¶¨ §µ∏ª¶o¶¨µ∏° ¤±§¥µ¤¬± ¤¯∏°¬2
±∏° µ¨¦²√ µ¨¨§·²±²µ°¤¯ ¯¨ √¨¯ o ¬¨¦¨³·¤¯∏°¬±∏° ¦«¯²µ¬§¨ ¤¯µª¨ §²¶¨¶ªµ²∏³qΧονχλυσιον }׫¨ ° ·¨¤¥²¯¬¶° ¤±§ ¬¨¦µ¨·¬²± ° ¦¨«¤±¬¶° ²©¤¯∏°¬2
±∏°¬± °¬¦¨ §¨ ³¨ ±§¶²±·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¶·¤·¨¶²©·«¨ ¤¯∏°¬±∏° ¦²°³²∏±§ q
≈Κεψ ωορδσ «¬ª«³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶~¤¯∏° o¤¯∏°¬±∏° ¦«¯²µ¬§¨ o¤¯∏°¬±∏° «¼§µ²¬¬§¨ ~¶¨µ∏° ~¥µ¤¬±~¤¯∏°¬±∏° ~
§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©¦²±·¨±·¶
≈责任编辑 方文贤
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第 u|卷第 t期
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