全 文 ：ΓΧ2ΜΣ αναλψσισ οφ συπερχριτιχαλ χαρβον διοξιδε εξτραχτιον προδυχτσ
φροµ Ρηοδιολα τιβετιχα
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kt qΦιρστ Μιλιταρψ Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtsxtx , Χηινα ~
u qΧολλεγε οφ Λιφε Σχιενχεσ , Ζηονγσηαν Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtsuzx , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε :ײ ¤±¤¯¼½¨ ·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶²©¶∏³¨µ¦µ¬·¬¦¤¯ ¦¤µ¥²± §¬²¬¬§¨ ¬¨·µ¤¦·¬²± ³µ²§∏¦·¶©µ²° Ρηοδιολα τιβετιχα q
Μετηοδ : ׫¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§¤±§¬§¨±·¬©¬¨§¥¼ ª¤¶¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼2°¤¶¶¶³¨¦·µ²° ·¨µ¼k≤2≥l qΡεσυλτ : uy ≤²°³²±¨ ±·¶
º µ¨¨ ¬§¨±·¬©¬¨§o¤±§·«¨¬µµ¨ ¤¯·¬√¨¦²±·¨±·¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ±²µ°¤¯¬½¤·¬²± ° ·¨«²§²©¤µ¨¤q Χονχλυσιον : ׫¬¶¶·∏§¼ ³µ²√¬§¨¶©²∏±§¤·¬²±©²µ
·«¨ ¬¨³¯²¬·¤·¬²± ²©·«¨ µ¨¶²∏µ¦¨¶²© Ρ . τιβετιχα q
[ Κεψ ωορδσ] Ρηοδιολα τιβετιχα ~ ¬¨·µ¤¦·¬²± ²©¶∏³¨µ¦µ¬·¬¦¤¯ ¦¤µ¥²± §¬²¬¬§¨ ~ª¤¶¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼2°¤¶¶¶³¨¦·µ²° ·¨µ¼
≈责任编辑 李 禾
白芷中香豆素类成分的
超临界流体萃取和 ≤2≥分析
刘红梅 3 o张明贤
k北京联合大学 生物化学工程学院 o北京 tsssuvl
≈摘要 目的 }对超临界 ≤u萃取分离白芷中香豆素类成分进行研究 ∀方法 }采用正交试验设计方法 o以提取
液中总香豆素含量为考察指标 o对总香豆素提取条件进行优化 o并用气相色谱2质谱联用技术对超临界样品进行分
析鉴定 o利用面积归一法测定其相对含量 ∀结果 }气相色谱2质谱联用技术共鉴定出 tx种香豆素类成分 o主要成分
氧化前胡素 !欧前胡素 !异欧前胡素的相对含量分别达到 wu qws h ouu qtw h和 tu qtu h ~最优萃取工艺为萃取压力 ut
°¤o萃取温度 xs ε o萃取时间 v qs «o颗粒度 us目 o分离压力 y qx °¤o分离温度 vs ε ∀结论 }萃取压力 !萃取温度 !
萃取时间 !颗粒度 !分离压力对实验指标有非常显著性影响 ∀
≈关键词 超临界萃取 ~白芷 ~香豆素 ~正交试验 ~气相色谱2质谱
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsv2suwt2sw
白芷性温 o味辛 o具有祛风除湿 !通窍止痛 !消肿
排脓等功效≈t o是治疗头风眩晕效果很好的古方都
梁丸中的一味君药 o为开发治疗头痛的现代新制剂 o
现拟对古方都梁丸进行提取研究 o由于原方以药材
原粉入药 o因此对方中各药进行单独提取 o本研究对
方中的君药白芷进行提取研究 ∀
白芷的主要生理活性物质是香豆素 o其中最主
要的是氧化前胡素 !欧前胡素 !异欧前胡素≈u ∀研究
≈收稿日期 ussu2tu2sx
≈通讯作者 3刘红梅 oר¯ }kstslyzvyvvyy2usus o∞2°¤¬¯}«ª·«²±ª2
° ¬¨ ¥∏∏q¦²° q¦±
表明白芷提取物中总香豆素的含量越高 o其疗效也
越好 o因此白芷提取物中总香豆素的含量可作为白
芷提取工艺的评判指标≈v ∀传统上中药有效成分的
提取多采用水提醇沉等方法 o但这些方法存在提取
率低 !药用有效成分含量低 !存在有机残留等缺点 ∀
而超临界萃取技术是近年来发展起来的用于中草药
提取的一项新技术 o具有提取温度低 !提取物中药用
有效成分含量高 !无溶剂残留等特点 ∀因此 o本研究
以氧化前胡素 !欧前胡素 !异欧前胡素的总含量作为
试验指标 o采用正交实验设计方法 !利用超临界 ≤u
流体萃取工艺对中药白芷中香豆素物质进行提取研
究 ∀
#twu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
1 仪器和药品
≤p x型超临界流体萃取机k北京合世兴业有
限公司 ox l ~≤2≥联用仪 }×µ¤¦¨ ≤kƒlr
≤usss气相色谱2质谱联用仪 ~≥≥p uuu⁄高效液相
色谱仪k美国凯德l ∀
川白芷k北京同仁堂集团l ~氧化前胡素 !欧前胡
素 !异欧前胡素对照品k中国药品生物制品检定所l ~
二氧化碳k|| q|x h l ~甲醇为色谱纯 ∀
2 样品分析
2 q1 总香豆素含量的测定方法
采用高效液相色谱测定样品中总香豆素的含
量≈u ∀
2 q1 q1 液相色谱条件 ¼³¨µ⁄≥u ≤t{色谱柱kw qy
°° ≅ uss °°l ~流动相甲醇2水 kzsΒvsl ~检测波长
uxw ±°∀
2 q1 q2 标准曲线的绘制 精密称取氧化前胡素对
照品 x qs °ª!欧前胡素对照品 x qx °ª!异欧前胡素对
照品 x qs °ªo分别置于 xs °容量瓶中 o用甲醇溶解
定容至刻度 o摇匀 ~分别取此溶液s os qx ot qs ot qx o
u qs ou qx ov qs ov qx ow qs ow qx ox qs °o均用甲醇定容
至 ts °o按上述色谱条件测定 ∀以峰面积为纵坐
标 !浓度为横坐标绘制标准曲线 o得到如下线性回归
方程 }
氧化前胡素 } Ψ s qs|x | n s qsuw t Ξ oρ s q||| {
欧前胡素 } Ψ s qs|x | n s qsuw t Ξ oρ s q||| z
异欧前胡素 } Ψ s qs|x | n s qsuw t Ξ oρ s q||| z
2 q1 q3 样品的制备 精密称取白芷 ≥ƒ∞萃取物 x qs
°ª置于 xs °容量瓶中 o用甲醇溶解定容至刻度 o
摇匀 o于波长 uxw ±°处测定 o用标准曲线方程计算
出各样品中 v种香豆素的含量和总香豆素的含量 ∀
2 q2 ≤2≥分析气相色谱条件 ⁄
p x色谱柱 o柱
前压 xs ®°¤o分流比 txΒt o进样量 t Λo柱初始温度
ys ε o然后以 w ε °¬±pt的升温速度升温到 uux ε o
保留 t °¬±o然后以 ts ε #°¬±pt的升温速度升温到
u|s ε o保留 u °¬±∀
质谱条件 }∞离子源 o电子能量 zs ∂¨ o离子源温
度 uss ε o界面温度 uxs ε o倍增电压 t zss ∂ ∀
3 实验结果与分析
3 q1 正交试验设计
经预实验认为影响超临界 ≤u萃取中药白芷有
效成分的主要因素包括萃取压力 !萃取温度 !萃取时
间 !药材的粉碎度 !分离压力和分离温度等 ∀本实验
采用正交试验设计方法 o以萃取压力 !温度 !时间 !药
材的颗粒度 !分离压力和分离温度为因素 o取三水
平 o选用 t{ku ≅ vzl正交表安排实验 o因素水平如表
t所示 ∀
表 t 超临界 ≤u萃取白芷有效成分的因素水平表
水平
Α
分离温度
r ε
Β
萃取温度
r ε
Χ
萃取压力
r°¤
∆
时间
r«
Ε
分离压力
r°¤
Φ
颗粒度
r目
t vs ws ut u qx y qs x
u ws wx ux v qs y qx ts
v xs vs v qx z qs us
3 q2 正交试验结果
称取 u qx ®ª白芷生药 o粉碎 o过 x ots ous目标准
筛 o然后置于萃取釜中 o根据选定的 t{ku ≅ vzl正交
表安排试验 o并按上述方法测定总香豆素的含量 o结
果如表 u所示 ∀
表 u 正交试验方案及结果
试验号 总香豆素含量r°ªqªpt 试验号 总香豆素含量r°ª#ªpt
t u q{tz ts z qvt{
u z qt{x tt u qwst
v w qtx| tu t qsuw
w x qx|z tv t qv|u
x u qsvz tw t qxyz
y t qyzt tx t qvyz
z tt quvv ty ts quyx
{ y qzvy tz t qtvu
| t q|tv t{ x qtvy
3 q3 正交实验结果分析
对表 u实验数据的极差分析结果表明 o在实验
条件范围内 o各试验因素对白芷中总香豆素提取率
的影响程度依次为 Χ Β Φ ∆ Ε Αo最优萃
取方案是 Αt Βv Χt ∆v Εu Φv o即萃取压力为 ut °¤o萃
取温度为 xs ε o萃取时间为 v qx «o颗粒度 us目 o分
离压力 y qx °¤o分离温度 vs ε ∀但极差分析不能
反映实验因素对结果是否有显著性影响 o为此进行
方差分析 o结果如表 v所示 ∀
表 v的方差分析结果表明 o因素 对白芷中总
香豆素的超临界萃取率有较显著影响k Π s qtsl o因
素
o≤ 对萃取结果有极为显著性影响k Π s qstl o
因素 ⁄o∞oƒ对萃取结果有显著性影响k Π s qsxl ∀
3 q4 正交实验的验证实验
取 t qux ®ª粉碎的白芷药材按最优化工艺条件
Αt Βv Χt ∆v Εu Φv进行验证试验 o以总香豆素含量为
实验指标进行考察 o测得总香豆素的平均含量为
#uwu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
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表 v 方差分析结果
方差来源 Σϕ φ ςϕ Φ Π
Α z qzuy t z qzuy x qswy s qts
Β wv quzs u ut qyvx tw qtu{ s qst
Χ w| qvxw u uw qyzz ty qttx s qst
∆ ux qtt{ u tu qxx| { qust s qsx
Ε ty q{{z u { qwww x qxtw s qsx
Φ uy qx{v u tv qu|u { qy{s s qsx
误差 | qt{{ y t qxvt
注 }Φs qsxkt oyl x q|| oΦs qtskt oyl v qz{ oΦs qsxku oyl x qtw oΦs qst
ku oyl ts q|u
tt qwyw °ª#ªptk ν vl o大于正交实验方案中的最高
值 o说明优化是成功的 ∀
3 q5 ≤2≥分析
对最佳萃取条件萃取得到的萃取产物按上述条
件进行 ≤2≥分析 o总离子谱图如图 t ∀经计算机
检索及人工解析图谱 o共鉴定出 tx个香豆素类成
分 }主要成分有欧前胡素 !氧化前胡素 !异欧前胡素 !
x2甲氧基2{2羟基2补骨脂内酯 !|2≈氧化kw2羟基2v2甲
基2u2丁烯基l 2z2呋喃≈v ou2ª ≈t 苯并吡喃2z2酮
等 o用峰面积归一法得到相对含量 o结果见表 w ∀
图 t 白芷总香豆素的总离子流图
表 w 白芷总香豆素化学成分分析结果
峰号 化合物名称 分子式 分子量 相对含量r h
t {2羟基2补骨脂内酯 {2«¼§µ²¬¼2³¶²µ¤¯ ±¨ ≤ttyw usu t qut
u x2甲氧基2{2羟基2补骨脂内酯 ≤tu{x uvu z quz
x2 °¨ ·«²¬¼2{2«¼§µ²¬¼³¶²µ¤¯ ±¨
v w2甲氧基2z2呋喃≈v ou2ª ≈t 苯并吡喃2z2酮 ≤tu{w uty s q|z
w2 °¨ ·«²¬¼2z2©∏µ²≈v ou2ª ≈t ¥¨ ±½²³¼µ¤±2z2²±¨
w 别欧前胡素 ¤¯ ²¯¬°³¨µ¤·²µ¬± ≤tytww uzs t quz
x x oy oz o{2四氢2u2甲氧基2x ox2双甲基2t ow2蒽双酮 ≤tzt{v uzs s qvs
x oy oz o{2·¨·µ¤«¼§µ²2u° ·¨«²¬¼2x ox2§¬° ·¨«¼¯2
t ow2±·«µ¤¦¨±¨ §¬²±¨
y 氧化前胡素 ²¬¼¬°³¨µ¤·²µ¬± ≤tytwx u{y wu qws
z 异欧前胡素 ¬¶²¬°³¨µ¤·²µ¬± ≤tytww uzs tu qtu
{ |2≈氧化kw2羟基2v2甲基2u2丁烯基l 2z2呋喃 ≤tytwx u{y y q{u
≈v ou2ª ≈t 苯并吡喃2z2酮
|2≈kw2«¼§µ²¬¼2v2° ·¨«¼¯2u2¥∏·¨±¼¯ l²¬¼
2z2©∏µ²≈v ou2ª ≈t ¥¨ ±½²³¼µ¤±2z2²±¨
| 欧前胡素 ¬°³¨µ¤·²µ¬± ≤tytww uzs uu qtw
ts 异氧化前胡内酯 ¬¶²²¬¼³¨ ∏¦¨§¤±¬± ≤tytwx u{y s qyy
tt 氧化前胡内酯 ²¬¼³¨ ∏¦¨§¤±¬± ≤tytwx u{y t qt|
tu 黄原醇丁醚 ³µ¤±ª¨ ±¬± ≤tytwx u{y s q{s
tv 白当归脑 ¥¼¤®¤±ª¨ ¬¯¦²¯ ≤tztyy vty s q|y
tw 白当归素 ¥¼¤®¤±ª¨ ¬¯¦¬± ≤tzt{z vvw s qzz
tx x o{2双ku ov2双羟基2v2甲基丁氧基l2补骨脂内酯 ≤utuz| vx| t qtu
x o{2§¬ku ov2§¬«¼§µ²¬¼2v2 °¨ ·«¼¯¥∏·²¬¼l2³¶²µ¤¯ ±¨
#vwu#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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4 讨论
从超临界萃取物的样品中共鉴定出 tx种香豆
素 o其中主要成分为氧化前胡素 !欧前胡素 !异欧前
胡素等 o其相对于总香豆素的百分含量分别达到
wu qws h ouu qtw h和 tu qtu h ∀正交实验方差分析结
果表明萃取压力 !萃取温度 !萃取时间 !药材颗粒度 !
分离压力等因素对萃取结果都有非常显著的影响 o
分离温度的影响较小 ∀超临界 ≤u萃取中药白芷有
效成分的最佳条件为 }萃取压力 ut °¤o萃取温
度 xs ε o萃取时间v qs «o颗粒度us目 o分离压力
y qx °¤o分离温度 vs ε ∀
白芷中的主要药用有效成分为香豆素类化合
物 o具有一定的极性 o加入夹带剂可以适当降低萃取
压力 o提高萃取率 o但夹带剂的加入会带来夹带剂和
有效成分的 u次分离问题 o因此正交试验没有将夹
带剂作为一个试验因素进行考虑 ∀为了考察夹带剂
对萃取率的影响 o将 zx h的乙醇加入最佳萃取条件
下的萃余物中作为夹带剂 o在萃取压力 ut °¤!萃
取温度 xs ε !颗粒度 us目 !分离压力 y qx °¤!分离
温度 vs ε 下的条件下进行 u次萃取 t «o结果几乎
没有得到萃取液 ∀这说明在最佳萃取条件下 o白芷
的药用有效成分已萃取的比较完全 o无需加入夹带
剂 ∀
≈参考文献
≈t 郑虎占 q中药现代研究与应用kul q北京 }文苑出版社 ot||{ q|{ q
≈u 张玉芳 o余红梅 q硫熏对白芷香豆素类成分含量的影响研究 q中
国中药杂志 ot||z ouuk|l }xvy q
≈v 魏玉平 o刘 俊 o严小林 o等 q白芷治疗头痛的提取工艺评价指
标的研究 q中草药 ousst ovukwl }vt{ q
Εξτραχτιον οφ χουµαρινσφροµ Ανγελιχα δαηυριχα βψσυπερχριτιχαλ
εξτραχτιον ανδ ΓΧ2ΜΣ αναλψσισ
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k Βιοχηεµιχαλ Ενγινεερινγ Χολλεγε οφ Βειϕινγ Υνιον Υνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tsssuv , Χηιναl
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¦²∏°¤µ¬±¶º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼ ≤2≥ o¤±§·«¨¬µµ¨ ¤¯·¬√¨¦²±·¨±·¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §¥¼ ±²µ°¤¯¬½¤·¬²± ° ·¨«²§²©¤µ¨¤¶qΡεσυλτ : ײ·¤¯ tx ¦²∏°¤µ¬±¶
º µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§o·«¨ µ¨ ¤¯·¬√¨¦²±·¨±·¶²©²¬¼¬°³¨µ¤·²µ¬±o¬°³¨µ¤·²µ¬± ¤±§¬¶²¬°³¨µ¤·²µ¬± ¥¨¬±ª∏³·²wu qws h ouu qtw h ¤±§tu qtu h µ¨¶³¨¦2
·¬√¨¯¼q ³·¬°∏° ¬¨·µ¤¦·¬²± ³µ²¦¨¶¶º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §}ut °¤¤¶ ¬¨·µ¤¦·¬²± ³µ¨¶¶∏µ¨ oxs ε ¤¶ ¬¨·µ¤¦·¬²± ·¨°³¨µ¤·∏µ¨ ov «¤¶·¬°¨©²µ ¬¨·µ¤¦2
·¬²±ous ° ¶¨«¤¶³∏¯√ µ¨¬½¨ §§¨ªµ¨¨oy qx °¤¤¶¶¨³¤µ¤·¬²± ³µ¨¶¶∏µ¨ ¤±§vs ε ¤¶¶¨³¤µ¤·¬²±·¨°³¨µ¤·∏µ¨ qΧονχλυσιον : ≤«¤±ª¨¶¬± ¬¨·µ¤¦·¬²±
³µ¨¶¶∏µ¨ o·¨°³¨µ¤·∏µ¨ o·¬°¨o³∏¯√ µ¨¬½¨ §§¨ªµ¨¨¤±§¶¨³¤µ¤·¬²± ³µ¨¶¶∏µ¨ ¤©©¨¦··«¨ ¬¨·µ¤¦·¬±ªµ¨¶∏¯·¶µ¨°¤µ®¤¥¯¼ q
[ Κεψ ωορδσ] ¶∏³¨µ¦µ¬·¬¦¤¯ ¬¨·µ¤¦·¬²±~ Ανγελιχα δαηυριχα ~¦²∏°¤µ¬±¶~²µ·«²ª²±¤¯ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ §¨¶¬ª±~ª¤¶¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼2°¤¶¶¶³¨¦2
·µ²° ·¨µ¼
≈责任编辑 李 禾
本刊启事
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刊用 o本刊即拥有其在上述及所有媒介再次发表的权利 o作者如不同意可作声明 ∀作者著作权使用费与本刊
稿酬将在我刊刊用后一次性给付 o并赠样刊 t本 o单行页若干份 ∀
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