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19 75
〔 5 ] Ab o u一 D n o i a
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R D e七 al : P h口t och e用 4 1(心 )
B M et al : T o州 e ol P A召f ed
: 32
, 19 75
: 107 7 ,
尸 h a r m a
〔 6 ] E L 一 N o e k r a s h y A S : G r a s a s A e e万t 2 1 ( 3 ) : 13 8 ,
19 70 ; A n a l 月b s t r 20 ( 5 ) a b s t r : 32 7 5 , 197 1
〔 z ] s a p a 、 H ” “ 皿 p : M u e j o 一翔 p lI p o 月 一 e 了 、 36 ( 9 ) :
12
,
19 7 0
杭白芷香豆素的薄层分离和
紫外分光光度法测定
江苏省植物研究所 丁 云 梅 张 涵庆 *
.09咖705.4叨2
吸收度
沁80765,0321000
吸度收
近年来香豆素含量测定方法 有气 相 色 谱
法 、 高压液相色谱法 、 紫外分光光度法 、 荧光
分光光度法及薄层扫描定量法 。 气相色谱法由
于气化温度高 , 容易产生变化 。 高压液相色谱
法仪器 昂贵 。 薄层 目测定量操作简单 , 不需要
特殊设备 , 但难免目测主观误差 , 方法仍欠完
善 , 需要进一步改进 。 我们利用薄层与紫外结
合 冲国医学科学院药物研究所 : 薄层层离及其在中草药分析中的应
用 , 3 4 0页 , 科学出版社 , I , 78 ; M a。 e K K : P人 a 月 阴。 e e 封 2 i c o l
A酬` e a r` 0 0 o f T h 。` 一 L a班 r Q o d p a加 r C内r o二 a t o g r o -
p丙“ , EI S e t, ` e r , p 56 4 , 19 72 ] , 应 用于杭白芷中几种香
豆素成分含 t 测定 , 得到较为满意的结果 , 现
报告如 下 。
仪器与药品
1
. 仪器 : ( l )蔡司通用分 光 光 度 计 ( A
型 ) ; ( 2 )紫外分析仪 : 2 73 7 凡, 上海科艺光学
仪器厂 ; ( 3 )层析用玻璃板 : 长 2 0 e m , 宽 s c m ;
( 4 )层析缸 : 2 4 x 8 . s e m ; ( 5 )容量瓶 : 10 m l ;
( 6 )微量注射器 1 支 。
2
. 药品 : 标准品 ( 1 )欧前胡素 、 佛手柑内
酸 (本所提供 ) ; ( 2 )中性氧化铝 ( 上海五四农
场化学试剂厂 , 2 00 目 , p H 7 土 5 ; ( 3 )硅胶
G 浙江黄岩硅胶厂出品 , 20 目以 上 , pH 6 . 5 士
0
.
5 )
, 狡甲基纤维素钠 ; ( 4 )9 5环 乙醇 ( A R ,
上海试剂一厂 ) 。
实 验
1
. 波长选择 : 精密称取标准品 · 1 m g , 用
95 % 乙醉加热溶解 , 定容成 10 m l , 作紫外分
光光度测定 , 侧得欧前胡素 、 佛手柑内醋的最
大吸收峰在 31 0 n m 处 。
2
. 标准 曲线的绘制 : 分别准确地吸取欧前
胡素 ( 13 . 6 拼 g / m l ) 和佛手柑内酷 ( 10 # g /
m l ) 各 l 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 、 7 、 8 、
9
、
10 m l 于 1 0 m l 容量瓶中 , 用9 5写乙醇定容
至 10 m l 。 在紫外分光光度计 3 1 O n m 处测定吸收
度 , 结果 : 当欧前胡素的浓度 ( 月g/ m l) 为 13 . 6 、
2 7
.
2
、
4 0
.
8
、
5 4
.
4
、
6 8
.
0
、
8 1
.
6
、
9 5
.
0
、
1 0 8
.
8
时 , 吸收度为 0 . 0 6 、 0 . 1 1 8 、 0 . 15 6 、 0 . 2 04 、 0 . 2 5 2 、
0
.
3 0 3
、
0
.
3 5 8
、
0
.
4 10
, 当佛手内醋浓度( 拼g / m l )
为 1 0 、 2 0 、 3 0 、 4 0 、 5 0 、 6 0 、 7 0 、 8 0 、 9 0 、
10 0时 , 吸收度为0 . 0 6 5 、 0 . 1 2 0 、 0 . 17 8 、 0 . 2 3 8 、
0
.
3 0 0
、
0
.
3 6 0
、
0
.
4 1 3
、
0
.
4 75
、
0
.
52 8
、
0
.
59 0
。
见图 1 . 2 。
而石如 30 叨 50 印 70 80 卯 一伪 一 。 一30
浓度 { 尸尺 m ! )
图 l 欧前胡素浓度与吸收度的关系
10 20 30 40 印 印 , 0 豁 叩 1的 11 0 130浓度 { 户又 m l ,
2 佛手柑内醋浓度与吸收度的关系
16 f 4 6 4 ) 药学通报 19 81 年雍 16百落丽瓦
3
. 标准品薄层定量及 回收率测定
( l )板的制备 : 称取硅胶 G 5 5 g,加 l 峨o m l
1% 竣甲基纤维素钠溶液调匀 , 铺板 . 室温干燥
后 , 80 ℃烘箱中活化 1 小时 , 取出 , 放干燥器
备用 。
( 2 ) 点样 : 取 Z m g 标准品欧前胡素 .溶解
在 2 m l9 5% 乙醇中 , 用微量 注射器 点样 , 点 样
量分别为 2 0 、 3 0 、 40 、 5 0 川 , 相当标准品欧前
胡素 2 0 、 3 0 、 4 0 、 50 拼 g 。
( 3 ) 展开 : 上行法 , 展开剂 : 石油醚 : 乙
酸 乙醋 ( l : 1 ) 。
( 4 ) 定位 : 展开结束后 , 在紫外光 下观察
荧光斑点 。
( 5 ) 洗脱 : 在紫外光灯下观察荧光并刮下
荧光斑点 , 用 95 % 乙醇加热回流提取 , 定容至
Z m !
, 作紫外分光光度测定 。
( 6 ) 在波长 3 10 n m 处测定欧前胡素 , 用硅
胶 G 板薄层定量 , 测得欧前胡素平均回收率 ( 四
次 ) 为 90 % ; 用中性氧化铝板薄层定量 , 测得
欧前胡素的平均回收率 (四次 ) 为 94 % 。
4
. 白芷中几种香豆 素成分含量测定
( l) 植物样品的制备 : 称 取 杭 白 芷 根 粉
8 0 9
, 用 9 5% 乙醇回流加热提取 , 定容至 10 m l 。
( 2 ) 点样量 : 1 0 拼 l 相当原生药 8 0 m g 。
(3 ) 样品的测定 : 精密吸取溶液 10 川 点在
硅胶 G 板上 , 用石油醚 : 乙酸乙酷 (1 : 1) 展开 ,
在紫外光灯下观察荧光后 , 刮下斑点 , 用 95 %
乙醇回流提取 , 最后定容至 10 m l , 作紫外分光
光度测定 。 在波长 3 1 0 ” m 测定 , 测得白芷根 中.
含欧前胡素 0 . 153 % , 佛手柑内酷 0 . 10 % , 见
表 2 、 3 。
讨 论
1
. 标准品欧前胡素经薄层 、 洗脱 、 紫外定
t 的结果 比同一浓度标准品欧前胡素直接测定
结果稍为偏低 。 主要原因可能是点样时欧前胡
素乙醉液在注射器针头上有挥发现象和吸附剂
对欧前胡素有吸附作用 , 致使洗脱不完全 。 从
_
L述实验的结果可以看出 , 使用硅胶 G 板和使
用中性氧化铝板的回收率也稍有不同 , 使用硅
表 1 白芷中欧前胡 素含量
编 取样 t 相当原生 吸收度 含 t 《% ) 按回归方程法
号 州! 药 m g数 ( E ) 计算含 t { % )
l l 0 80 0
.
4 33 0 14 5 0
.
14 5
2 l 0 80 0
.
4 76 0
.
16 0 0
.
16 0
3 l 0 80 0
.
4 4 3 0
.
14 8 0
.
14 8
4 l 0 8 0 0
.
45 5 0
.
15 4 0
.
152
5 l 0 8 0 0
.
45 8 0
.
15 6 0 153
0
.
153士 0 . 00 6 0 . 15 2 土 0 . 006
由表 t 求出回归方程 : 夕 = 2 73 . 74 6 E 一 2 . 62 6
欧前胡素% = 27 3
.
74 6 E 一 2 . 6 26一 X 10 0%80 X表 2 白芷中佛手柑内酷含 t
0
.
47 7
0
.
49 0
0
.
5 1 0
0
.
45 0
0
.
45 9
编 取样 t 相当原生 吸收度 含 t ( % ) }按回归方程计
号 召 l 药 m g教 ( E ) } 算含 t (% )
l l 0 80 0
.
47 7 ! 0
.
100
2 l 0 80 0
.
49 0 … : :: 0 . 103
3 l 0 80 0
.
1 1 0
.
108
4 l 0 80 0
.
0 95 0
,
09 5
几 10 8 0 0 . 4 59 0 . 096 0 . 09 7
0
.
100 2 士 0 . 0 06 0 . 10 】士 0 . 00 5
由表 2 求出回归方程 : 刀 = 16 9 . 3 53 E 一 。 . 325
佛手柑内确% = 169
.
353 E 一 0 . 3 2 5— Xs o x 一上 - 、 10 。1 0 0 0胶 G 板所得结果偏低 , 这可能因为使用的中性氧化铝的粒度较细 , 薄板层较疏松 , 容易洗脱 ,使 用的硅胶 G 粒度细 , 薄板层密 , 不易洗 脱 。
因此 , 这 两种吸附剂对欧 前胡素的吸附影响有
些差别 。
2
. 标准品经层离后 , 回收率为90 一 94 环 ,
洗脱 可用 95 写乙醇在试管中加热进行 , 也 可用
回流提取 方法 。 二个方法对 回收率 影响不 大 。
致谢 : 原植物经袁吕 齐同志 鉴 定 , 表示 谢意 。
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