全 文 ：k≤2usl ovx qxk≤2tl ovy qsk≤2uul ov| qtk≤2uwl ov| q{
k≤2tsl owu qxk≤2tul owx q{k≤2zl owy q{k≤2tvl oxs q|
k≤2twl oxx q{k≤2tzl oxy qxk≤2|l otux qwk≤2wl otyt qs
k≤2xl ot|| qxk≤2vl ousu qvk≤2yl ∀以上数据与文献
报道的豆甾2w2烯2v oy2二酮的数据一致≈v  ∀
化合物 w 白色粒状结晶 o°³ u{y ∗ u{| ε ∀
ƒ„…2  ≥ µ / ζ }xzz≈  n ‹  n ∀Œ• k Ž…µl¦°p t }
vwutk’ ‹l ou|vy ou{zsk≤ ‹l otywyk≤ € ≤l otwyv o
t v{s ot szy ot suz ∀以上数据及 ׏≤ 的 •©值均与
对照品胡萝卜苷一致 ∀
化合物 x 白色粉末 o°³ t{y ∗ t{z ε ∀tv ≤2
‘ • kzx  ‹½o ⁄u’l∆}tsy qvk≤2uχl o|w q{k≤2tl o
{w qsk≤2vχl oz| qsk≤2wχl ozy qyk≤2xχl ozx quk≤2vl o
z x qsk≤2ul ozv qzk≤2xl ozt q{k≤2wl oyx qsk≤2tχl o
yw qsk≤2yχl oyu q{k≤2yl ∀以上数据与文献数据对照
确定化合物 y为蔗糖≈x  ∀
化合物 y 白色粉末 o°³ tyz ∗ ty| ε ∀tv ≤2
‘ • kzx  ‹½ o⁄u ’l∆}|w qzk≤2tl ozx qwk≤2vl o
zw qtvk≤2ul ozw qs{k≤2xl ozu qvk≤2wl oyv quk≤2yl ~
|{ qyk≤2tl oz{ qyk≤2xl oz{ qwk≤2vl ozy q{k≤2ul ozu qv
k≤2wl oyv qwk≤2yl ∀以上数据分别与文献报道的 Α2
∆2葡萄糖和 Β2 ∆2葡萄糖一致 o为 ∆2葡萄糖在重水
中的二个互变异构体 o确定化合物 z 为 ∆2葡萄
糖≈y  ∀
≈参考文献 
≈t  江苏新医学院 q中药大辞典 q上海 }上海人民出版社 ot|zz q
tw{w q
≈u  孟艳辉 q溪黄草的化学成分研究 q天然产物研究与开发 ousss o
tukvl }uz q
≈v  陈若芸 o于德泉 q新疆藁本化学成分研究 q中草药 ot||v ouw
ktsl }xtu q
≈w  于德泉 o杨峻山 o谢晶曦 q分析化学手册 q第五分册 q化学工业出
版社 ot|{| quy oxsz q
≈x  ≥¤§·¯¨µ≥·¤±§¤µ§≤¤µ¥²±2tv ‘ • ≥³¨ ¦·µ¤qt|{s qwt o{tts¦q
≈y  陈德昌 q碳谱及其在中草药化学中的应用 q北京 }人民卫生出版
社 ot||t quzt q
≈责任编辑 李 禾 
血浆中银杏黄酮的高效液相色谱测定方法学研究
汪凤梅t ov o吴美珍u o周 莉w o姚彤炜t o虞和永v
kt q浙江大学 药学院 药物分析研究室 o浙江 杭州 vtssvt ~
u q浙江大学 医学院附属邵逸夫医院 o浙江 杭州 vtssty ~
v q浙江大学 医学院 附属妇产科医院 o浙江 杭州 vtsssy ~
w q浙江杭州市中医院 o浙江 杭州 vtssvtl
银杏科植物银杏是我国特有树种 o银杏叶提取
物中主要含两类药用活性成分 }黄酮和萜类内酯 o而
以前者为主 ∀槲皮素 !山柰酚和异鼠李素是银杏黄
酮的最重要的组成成分 o它们都含有多个羟基 o主要
以与葡萄糖 !鼠李糖等结合成糖苷的形式存在 ∀银
杏叶提取物具有降低血清胆固醇 o增加冠状动脉血
流量 o改善脑血液循环 o解除平滑肌痉挛 o松弛支气
管和抑菌等药理作用 ∀其在动脉血管和脑血管疾病
方面的疗效已被临床试验证明≈t ou  ∀当前 o银杏叶
的开发利用研究在国内外都备受关注 o尽管目前有
≈收稿日期  ussu2s{2tx
≈基金项目  浙江省自然科学基金kvsuy{ul
≈通讯作者  ר¯ }ksxztl{zsytxst2yxux
较多的银杏叶制剂投放市场 o但对于银杏黄酮在体
内含量测定的方法研究 o国内未见报道 o国外文献报
道也很少≈v2x  ∀少量的血药浓度测定法也是以测定
银杏黄酮一种成分槲皮素为主 o多采用血浆中加样
测定或癌症病人静注槲皮素后测定 ∀文献报道方法
无一例外全部采用固相提取 o所用仪器试剂不仅价
格昂贵 o而且有些试剂国内无法买到 o结合国内情
况 o本文建立了液2液提取血浆中微量银杏黄酮的高
效液相色谱测定方法 o并应用建立的方法对健康志
愿者口服银杏叶提取物后的血样进行了测定 o结果
表明服药后 u «浓度槲皮素为 tz qww Λª#pt o山柰
酚为 ty qxv Λª#pt o异鼠李素没有检测到 ∀
1 仪器与试剂
#|zu#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qv
¤µqoussv
岛津 ≤2ts„° ∂ °高相液相色谱仪 ~‹≥usss色
谱数据工作站k杭州英谱科技开发有限公司l ~÷ • 2
{s„旋涡混合器k上海金科实业有限公司l ~{s2t离
心沉淀机k上海手术器械厂l ~电热恒温水浴锅k上海
医疗器械五厂l ~操作过程中所用玻璃试管均经硅烷
化处理 ∀
桑色素 k|xtuusts oŠ∞‘„≠ ©µ¤±¦¨ l o槲皮素
kss{t2|vsw o中国药品生物制品检定所 o供含量测定
用l o异鼠李素ks{ys2|yst o中国药品生物制品检定
所 o供含量测定用l o山柰酚ks{yt2usssu o中国药品
生物制品检定所 o供含量测定用l ~天保宁片剂市售
k中国科学院上海药物研究所 o浙江康恩贝集团制药
有限公司联合研制 o批号 stsysw2tl ~其余试剂均为
色谱纯或分析纯 ∀
2 方法与结果
2 q1 色谱条件
‹¼³¨µ¶¬¯ ’⁄≥ 色谱柱 kw qy °° ≅ uxs °° ox
Λ°l o流动相磷酸缓冲液k³‹ ul2四氢呋喃kyxΒvxl o
流速 }t qs °# °¬±p t o紫外检测波长 v{s ±° o进样
量 us ˏ∀色谱图如图 t ∀
2 q2 样品处理方法
2 q2 q1 标准溶液的制备 精密称取槲皮素 !异鼠李
素 !山柰酚标准品适量 o用甲醇溶解并定量稀释成每
t °含槲皮素u qxΛªo异鼠李素u qxΛªo山柰酚
u qzux Λª的标准品混合液 o置冰箱保存待用 ∀精密
称取桑色素适量 o用甲醇稀释成 ts °ª#p t o冰箱保
存待用 ∀
2 q2 q2 片剂的含量测定 称取天保宁银杏叶片 ts
片 o研磨 o精密称取 v份于三角烧瓶中 o每份约 u片
重量 o分别精密加入甲醇 us °o密封膜密封 o称重 ∀
超声溶解 us °¬±后再称重 o若重量减轻 o补加甲醇 ∀
定量滤纸过滤 o弃去初滤液 o精密量取续滤液 ts °
置 tss °锥形瓶中 o加甲醇 ts °oux h 盐酸
x°o摇匀 o置水浴中加热回流 vs °¬±o在冰浴中冷
却后 o定量转移至 xs °量瓶中 o用甲醇稀释至刻
度 o混匀 o用 s qx Λ°微孔滤膜过滤 o弃去初滤液 o取
续滤液 o用外标法测定结果每片含槲皮素 t qtvw
°ªo异鼠李素 s qu{u w °ªo山柰酚 t quvv °ª∀
2 q2 q3 血样处理方法 取受试者血浆 s qx °o加
ts °ª#pt的桑色素内标液yˏov °²¯ #pt盐酸
s qx °混匀 o在 {s ε 水浴中加热水解 vs °¬±o用
冰浴迅速冷却后 o加提取液 v °k丙酮2乙醚 € tΒ
twl o旋涡振摇提取 u °¬±ov xss µ# °¬±p t离心 x
°¬±o然后在 p us ε 冰箱内放置 vs °¬±o吸取上清液
在空气流下吹干 o测定前加流动相 tss ˏ定容 ∀
2 q3 线性关系试验
精密量取标准品混合液 s ov ox ots otx ous oux o
vs ˏ加入 s qx °空白血浆中 o按血样处理方法操
作 o进样 us ˏ∀以欲测物峰高与内标峰高比为纵坐
标 o欲测物浓度为横坐标 o进行线性回归 o回归方程
分别为 }槲皮素 Ψ € s . stvv Ξ n s . s|uv , ρ €
s q||{ x o线性范围 tx ∗ txs Λª#pt ~异鼠李素 Ψ €
s .ssz t Ξ p s .stx { , ρ€ s q||z z o线性范围 tx ∗ txs
Λª#pt ~山柰酚 Ψ € s .ssw u Ξ n s .stu s , ρ€ s q|||
s o线性范围 ty qvx ∗ tyv qx Λª#pt ∀
2 q4 重现性试验
精密量取一定量的标准品混合液 o吹干后加入
s qx °空白血浆 o制成低 !中 !高浓度的标准血样溶
液k槲皮素和异鼠李素低 !中 !高浓度分别为 tx o
tss otxsΛª#p t o山柰酚低 !中 !高浓度分别为
ty qvx ots| otyv qx Λª#ptl o按血样处理方法操作 o
t §内分别测定 x份样品 o计算日内精密度 ∀每天各
测定 t份样品 o连测 x §o计算日间精密度 ∀结果见
表 t ∀
表 t 银杏黄酮日内及日间精密度
浓度
日内精密度r h
槲皮素 异鼠李素山柰酚
日间精密度r h
槲皮素 异鼠李素 山柰酚
低 z q| { qw y qx ts qx | qt | qw
中 x qt x qu t qv tu qx y qw y qs
高 x qv w qv t qt tt q{ y qy { q|
2 q5 回收率试验
配制低 !中 !高浓度的标准血样溶液k槲皮素和
异鼠李素低 !中 !高浓度分别为 tx otss otxs Λª#
pt o山柰酚低 !中 !高浓度分别为 ty qvx ots| otyv qx
Λª#pt o按血样处理方法操作 o测定 ∀由血样标准
曲线算得方法回收率 o结果见表 u ∀
表 u 银杏黄酮方法回收率试验结果k ν € x oξ ? σl h
浓度 槲皮素 异鼠李素 山柰酚
低 tsx qs ? ts qv tsv qw ? | qz tsw qz ? tu qy
中 || q| ? v qv| tsv q| ? x qy{ tsv qt ? z qts
高 tsw q| ? v qxs tsw qw ? y qzv tss qy ? { qzu
2 q6 定量限与检测限试验
当信噪比为 ≥r‘∴v 时 o测得槲皮素 !异鼠李
素 !山柰酚的最低检测浓度分别为 | qs o| qs o| q{ Λª#
pt血浆 o槲皮素 !异鼠李素 !山柰酚的定量限k ν €
#s{u#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qv
¤µqoussv
xl分别为 ty q{ ? u qz otx qs ? w qu oty qv ? w qy Λª#
pt血浆 ∀
2 q7 稳定性试验
考察不同浓度的标准血样在室温 !p us ε 冰箱
储存条件下的稳定性 o结果表明 }样品在室温下放置
s ow o{ «测定样品与内标峰高比值的 • ≥⁄ v q| h o
表明样品在室温下放置 { «稳定 ~在 p us ε 的冰箱
内放置 s ot ou周 o测定结果表明样品在 p us ε 的冰
箱内放置 t周内稳定 ∀
图 t 银杏黄酮色谱图
„ q空白血浆 …q标准溶液 ≤ q空白血浆加样品提取液 ⁄q人服药后血浆 t q桑色素 u q槲皮素 v q异鼠李素 w q山柰酚
2 q8 血药浓度测定
应用上述建立的方法 o测定了健康志愿者口服 y
片天保宁银杏叶片后的血样 o服药后 u «槲皮素浓
度为 tz qww Λª#pt o山柰酚浓度为 ty qxv Λª#p t o
异鼠李素没有检测到 ∀色谱图如图 t⁄所示 ∀
3 讨论
3 q1 水解条件的选择 以芦丁为代表比较了盐酸
的浓度ku ov ow ox °²¯#ptl !水解时间kus oux ovs ows
°¬±l和水解温度kzs o{s o|s ε l对黄酮苷水解的影
响 o结果表明盐酸浓度为 v °²¯#pt o在 {s ε 水浴水
解 vs °¬±可使 uxs Λª#pt的芦丁水解完全 ∀
3 q2 提取溶剂的选择 在提取溶剂的选择中 o曾用
甲醇 !乙腈 !丙酮 !四氢呋喃 !甲苯 !二氯甲烷 !三氯甲
烷 !乙酸乙酯 !丙酮 !乙醚等进行了比较 o结果与水混
溶的有机溶剂浓缩挥干困难 o而极性小的溶剂提取
率低 o相比之下 o乙醚提取效果最好 o因此选用乙醚
为提取溶剂 o并对乙醚 !用水饱和的乙醚 !乙醚加丙
酮等进行了比较 o结果发现乙醚中加入少量丙酮提
取效果最好 o在操作过程中 o由于乙醚的沸点低 o极
易挥发 o故在冰浴中进行提取操作 ∀为减少玻璃试
管的吸附 o我们对所用的试管进行了硅烷化 ∀
3 q3 色谱柱的选择 我们试用了 ≤{ o≤t{ o‘‹u 柱 o
结果表明 ≤t{柱柱效最好 ∀
3 q4 检测波长的选择 考察了 vys ovzs ov{s ov|s
±°检测波长下各成分的峰面积 o结果表明在 v{s
±°时 v种样品均有较大的峰面积 ∀
3 q5 流动相的选择 流动相中加入磷酸盐缓冲液 o
可抑制黄酮苷元的酚羟基的电离 o改善分离效果 o防
止拖尾 o使峰形尖锐 ∀在 ³‹ z ∗ u o随酸性增强 o峰形
逐渐改善 o所以最后选择 ³‹ u的磷酸盐缓冲液与四
氢呋喃kyxΒvxl为流动相 ∀
在上述选定的实验条件下 o槲皮素 !异鼠李素 !
山柰酚理论板数分别为 v ty{ ov syw ov v|z o各峰基
线分离 o色谱图见图 t ∀
3 q6 测定结果 服药后 u «未检测到异鼠李素 o主
要因异鼠李素含量较低 o根据片剂含量分析结果 oy
片天保宁相当于槲皮素 y q{sw °ªo异鼠李素 t qy|w
°ªo山柰酚 z qv|{ °ª∀
≈参考文献 
≈t  ƒ∏±©ª¨ §¯ ∞ • o • ²®¤± Š¬±®ª² ¥¬¯²¥¤q • ¶¨¨±·• ¶¨∏¯·¶¬± °«¤µ°¤2
¦²¯²ª¼ ¤±§ ≤ ¬¯±¬¦q≥³µ¬±ª¨µ2√ µ¨¯¤ª …¨ µ¯¬± o ‹ ¬¨§¨ ¥¯¨µªo ‘¨ º ≠²µ®o
²±§²±o°¤µ¬¶o ײ®¼²ot|{{ q
≈u  ¦Ž¨±±¤ ⁄o²±¨ ¶Žo ‹∏ª«¨ ¶Žq ∞©©¬¦¤¦¼ o≥¤©¨·¼ ¤±§ ˜¶¨ ²©
Š¬±®ª² …¬¯²¥¤¬± ≤ ¬¯±¬¦¤¯ ¤±§°µ¨¦¯¬±¬¦¤¯ „³³¯¬¦¤·¬²±¶q„ ·¯¨µ± ׫¨ µ
‹ ¤¨¯·«  §¨ousst ozkxl }zs o{{ q
≈v  ¬∏…o „±§¨µ¶²± ⁄oƒ µ¨µ¼ ⁄• o ·¨¤¯ q⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© ± ∏¨µ¦¨·¬±
¬± ‹∏°¤± °¯ ¤¶°¤ ˜¶¬±ª • √¨ µ¨¶¨§2³«¤¶¨ ‹¬ª«2³¨ µ©²µ°¤±¦¨ ¬´∏¬§
≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¼q  ≤«µ²°¤·²ªµ… …¬²° §¨ „³³¯ o t||x oyyy }t o
tw| q
≈w  • ¤·¶²± ⁄ Š o ’ ¬¯√ ¬¨µ¤ ∞ q≥²¯¬§2³«¤¶¨ ∞¬·µ¤¦·¬²± ¤±§ Š¤¶≤«µ²2
°¤·²ªµ¤³«¼2°¤¶¶≥³¨ ¦·µ²° ·¨µ¼ ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© Ž¤¨ °³©¨µ²¯ ¤±§
±∏¨µ¦¨·¬±¬± ‹∏°¤± ˜µ¬±¨ „©·¨µ ≤²±¶∏°³·¬²± ²© Γινκγο βιλοβα
פ¥¯ ·¨¶q¦«µ²°¤·²ªµ… …¬²° §¨≥¦¬„³³¯ ot||| ozuvkt2ul }usv q
≈x  ‘¬¨ ¶¯¨± ≥ ∞o ⁄µ¤ª¶·¨§’ q ≤²¯∏°±2¶º¬·¦«¬±ª ‹¬ª«2° µ¨©²µ°¤±¦¨
¬´∏¬§≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦„¶¶¤¼ ©²µ·«¨ ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© ± ∏¨µ¦¨·¬±
¬± ‹∏°¤± ˜µ¬±¨ º¬·« ˜ ·¯µ¤√¬²¯ ·¨„¥¶²µ¥¤±¦¨ ⁄¨ ·¨¦·¬²± q ≤«µ²2
°¤·²ªµ… …¬²° §¨≥¦¬„³³¯ ot||{ ozszkt2ul }{t q
≈责任编辑 李 禾 
#t{u#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qv
¤µqoussv