全 文 ：玄参治疗大鼠内毒素血症的
血清蛋白质组变化的初步研究
谢文光t 3 o邵宁生u o马晓昌v o丁勤学u o
赵 馨u o刘农乐u o魏钰书t o王会信u o陈可冀v
kt q川北医学院 附属医院 o四川 南充 yvzsss ~u q军事医学科学院 基础医学研究所 o北京 tss{xs ~
v q中国中医研究院 西苑医院 o北京 tsss|tl
≈摘要 目的 }研究玄参治疗大鼠内毒素血症的血清蛋白质组变化 ∀方法 }用双向电泳ku⁄∞l分析正常组 !内
毒素k¯¬³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ o°≥ ~静脉注射l组 !玄参k灌胃给药l组 !°≥k静脉注射l n玄参k灌胃给药l组之间的血清蛋白
质组表达差异 ∀结果 }≠ °≥致内毒素血症大鼠的血清在 u⁄∞胶上 ty个蛋白点k¬°µl出现非常明显的含量变化 o与
正常组比较 o°≥组的 ¬°µty o¬°µt|的点容量值均极显著降低 o¬°µt o¬°µu o¬°µv o¬°µw o¬°µx o¬°µy o¬°µz o¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o
¬°µtu o¬°µtw o¬°µt{ o¬°µuv的点容量值均极显著增高 ∀ °≥ n玄参组与 °≥组比较 o°≥引起增高的 ¬°µt o¬°µy o¬°µz o
¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o¬°µtu o¬°µtw o¬°µt{ o¬°µuv的点容量值均显著降低 ∀玄参在 ¬°µt o¬°µ{ o¬°µtt o¬°µtu o¬°µt{均表现对
°≥显著的交互作用 ∀°≥ n玄参组与正常组比较 o其中 ¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o¬°µtu o¬°µtw o¬°µuv蛋白点已被明显调节到
正常状态 o但是 ¬°µt{的点容量值显著低于正常组 o¬°µt o¬°µy o¬°µz的点容量值仍显著高于正常组 ∀ ≈ 玄参与 °≥两
因素对 ¬°µx o¬°µts o¬°µt| o¬°µus o¬°µut o¬°µuu均有明显的交互作用 ∀ …在玄参组 o¬°µtv o¬°µus o¬°µut o¬°µuu的点容量
值均比正常组显著增高 o¬°µts o¬°µtx的点容量值均比正常组显著降低 o这 y个蛋白点在 °≥组和正常组之间均未
见明显的差异 ∀结论 }通过调节 ¬°µt o¬°µy o¬°µz o¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o¬°µtu o¬°µtw o¬°µt{ o¬°µuv蛋白点 o可能是玄参治疗
内毒素血症的疗效的分子基础 ∀本研究至少有两点有意义的提示 o一是可以通过蛋白质组技术来研究中药治疗疾
病包括危急重症的疗效基础 o二是在本研究条件下玄参不能完全纠正 °≥致内毒素血症的所有蛋白点的变化 o合
理运用中药复方的协同治疗可能对内毒素血症更有效 ∀
≈关键词 玄参 ~内毒素血症 ~血清 ~蛋白质组
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{zz2sy
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的脂多糖
k¯¬³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ o°≥l o°≥在革兰氏阴性杆菌脓毒
症 !脓毒性休克的发病中起着关键性的作用 o°≥常
可导致全身炎症反应综合征和多脏器功能障碍综合
征 ∀与感染相关的 °≥ 休克的发生率和死亡率很
高 o除感染性疾病外 o许多严重疾病的病理过程中都
伴有内毒素血症 o并为许多危重症的重要致死原
因≈t2w ∀机体在因感染所致炎症反应过程中 o出现血
瘀证 ∀°≥引起的病理反应与中医学认识的热毒血
瘀证有些相似之处 o临床治疗中常用具凉血养阴 !清
热解毒作用的玄参 ∀作者报告玄参治疗大鼠内毒素
血症的血清蛋白质组k³µ²·¨²°¨ l双向电泳ku⁄∞l的蛋
≈收稿日期 ussw2st2t{
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目kvsuztyx{l
≈通讯作者 3 谢文光 oר¯ }ks{tzluuwuyvx o ∞2°¤¬¯}¬¬¨º ±¨ª∏¤±ª
«²·°¤¬¯q¦²°
白点变化 o为探讨 °≥致内毒素血症的本质及玄参
治疗的作用机制奠定基础 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 玄参制剂 玄参 Σχροπηυλαρια νινγποενσισ °¨2
¶¯ q的干燥根来源于湖北省 o经中国中医研究院中药
研究所黄璐琦教授鉴定 ∀撞碎成小块 o加水煎煮过
滤 o合并滤液浓缩至 u ®ª#pt o由中国中医研究院西
苑医院中药制剂研究室闫小平教授制备 !灭菌 !分
装 ow ε 储存备用 ∀
1 q1 q2 健康雄性大鼠 ≥⁄≥品系 !微生物级别为
≥°ƒr∂ ƒ o体重kuus ? tsl ªo购于北京维通利华实验
动物技术有限公司 ∀
1 q1 q3 主要试剂 !器材 !分析软件 °固相线性
³梯度预制胶条k°°²¥¬¯¬±¨ × ⁄µ¼≥·µ¬³ ³ v ∗ ts o
t{ ¦° l !° ¥∏©©¨µo⁄µ¼≥·µ¬³覆盖液 !°凝胶条槽清
洁液 !低分子量蛋白质标准 !u2⁄∞蛋白质标准试剂盒
#zz{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
均购自 °¨ µ¶«¤° °«¤µ°¤¦¬¤
¬²·¨¦«公司 ~二硫苏糖醇
k⁄××l !尿素 !v2≈kv2胆酰胺丙基l2二乙胺 2丙磺酸
k≤°≥l !苯甲基磺酰氟k°≥ƒl !十二烷基磺酸钠
k≥⁄≥l !抑肽素 !亮肽素 !ν2§¨¦¼¯2 ν , ν2§¬°¨ ·«¼¯2v2¤°°²2
±¬²2t2³µ²³¤±¨ ¶∏¯©²±¤·¨ k ≥
v2tsl !叠 氮 化 钠 ! ×µ¬¶o
¯¼¦¬±¨ !丙烯酰胺 !甲叉双丙烯酰胺均购自 ≥¬ª°¤公
司 ~过硫酸铵购自 ×~Ν , Ν , Νχ , Νχ2四甲基乙二胺
k×∞∞⁄l !碘乙酰胺kl购自 ƒ¯ ∏®¤公司 ~考马斯亮
蓝 uxs购自 ∞≥≤ ~其他常用国产分析纯试剂 ∀
⁄¬¤¬|ss型组织匀浆仪k德国 ¬¨§²¯³«公司l oz p yx
型超速离心机k美国
¨ ¦®°¤±公司l o∂vvs型紫外分
光光度计k英国 ±¬¦¤°公司l o°³«²µ≈× 等电聚焦
仪 !°凝胶条槽 !∞·¤± ⁄× µ ≥¼¶·¨°垂直电泳设
备 !∞°≥ vxss ÷电源 !带 形框的玻璃板kuss °° ≅
uys °°l !玻璃板 kuss °° ≅ uys °°l !灌胶模具 !图
象扫描仪 !°¤ª¨ ¤¶·¨µu⁄ ∞¯¬·¨v qts图象分析软件k均
为 °¨ µ¶«¤° °«¤µ°¤¦¬¤
¬²·¨¦«公司l ∀
1 q2 方法
u⁄∞具体操作参照 °¨ µ¶«¤°
¬²¶¦¬¨±¦¨¶的 u⁄∞
技术原理和方法说明书 ∀
1 q2 q1 血清蛋白样品制备 大鼠实验前禁食 tu «o
自由饮水 o每组 w只 o随机分为 w组 ∀正常组 }灌胃 u
°生理盐水 ot «后尾静脉注射生理盐水 s qx °ou o
y «再分别灌胃 u °生理盐水 ∀ °≥组 }灌胃 u °
生理盐水 ot «后按 x °ª#®ªpt尾静脉注射 °≥ ou oy «
再分别灌胃 u °生理盐水 ∀玄参组 }u ª#®ªpt灌胃 u
°ot «后尾静脉注射生理盐水 s qx °ou oy «再分别
灌胃 u °玄参液 ∀°≥ n玄参组 }灌胃 u °生理盐
水 ot «后按 x °ª#®ªpt尾静脉注射 °≥ ou oy «再分别
灌胃 u °玄参液 ∀观察到 uw «后 o采集 w °腹主动
脉血液 ow ε v sssµ#°¬±pt离心 tx °¬±制备血清用于
蛋白质组测定 o每管分装 x qs °ªo各管用注射用生理
盐水补充至相同体积 op {s ε 冷藏备用 ∀
1 q2 q2 试剂配制 样品液 }x °²¯ #pt尿素 !u °²¯ #
pt硫脲 !u h ≤°≥ ou h ≥
v2ts ot h ⁄×× os qv ª#pt
∞⁄× os qz °ª#pt抑肽素 !s qx °ª#pt亮肽素 !vx °ª#
pt °≥ƒ o分装 op us ε 保存 ∀水合储液 }{ °²¯#pt
尿素 !u h ≤°≥ ot h ⁄×× ∀平衡储液 }xs °°²¯ #pt
³ { q{ ×µ¬¶2≤¯ !y °²¯#pt尿素 !vs h甘油 !u h ≥⁄≥ !
ts °ª#pt溴酚蓝 o分装 op us ε 保存 ∀临用前配制
平衡液 o将 tss °ª ⁄×× 溶于 ts °平衡储液中为平
衡液 o将 uxs °ª碘乙酰胺溶于 ts °平衡储液中为
平衡液 ∀丙烯酰胺单体储液kvs q{ h ×l }丙烯酰胺
vs qs ªo甲叉双丙烯酰胺 s q{ ªo加入 ys°纯水搅拌
完全溶解后 o用纯水定容至 tss °o过滤置 w ε 可保
存 u周 ∀凝胶缓冲液kt qx °²¯#pt ³ { q{ ×µ¬¶2≤¯ !
s qw h ≥⁄≥l }wx qx ª×µ¬¶ot ª≥⁄≥ o溶于 uss °纯水中 o
用 w °²¯#pt ≤¯ 调节 ³ 至 { q{ o用纯水定容至 uxs
°o加 ux °ª叠氮钠过滤后置 w β≤可保存 t月 ∀ts h
≥⁄≥ }ts ª≥⁄≥ o加水溶解至 tss °∀过硫酸铵kts h o
临用前配制l }t ª过硫酸铵 o加 ts °纯水溶解 ∀电
泳缓冲液 }×µ¬¶vs qux ªo¯¼¦¬±¨ tww ªo≥⁄≥ts ªo加水溶
解至ts∀封胶液 }用≥⁄≥2°∞电泳缓冲液配制
s qx h琼脂糖溶液 o内含 ts °ª#pt溴酚蓝 ∀固定液 }
乙醇 xss °!冰醋酸 tss °o加水至 t ∀脱色液 }乙
醇uvz qx °!冰醋酸{s °o加水至t∀染色液 }
s qu| ª考马斯亮蓝 uxs溶于 uxs °电泳胶脱色液 ∀
保存液 }含 ts h甘油 !s qst h叠氮化钠的水溶液 ∀
1 q2 q3 第一向等电聚焦 k∞ƒl 按加样量 xss Λª蛋
白的样品用水合储液稀释至终体积 vxs Λo其中含
s qx h的 °缓冲液 ~把凝胶条槽置于衬有滤纸的水
平板上 o加入稀释蛋白样品 vxs Λo戴上乳胶手套 o轻
轻揭去干胶条上覆盖膜 o胶面朝下置槽中 o反复提
放 o前后移动 o使胶条与水合液充分接触 o排除气泡 o
滴加 ⁄µ¼≥·µ¬³覆盖液 u °覆盖 o加塑料盖 o滤纸吸去
溢出的覆盖液 o置凝胶条槽于 °³«²µ电极板上 ∀盖
下安全盖 o开启仪器 o按表 t设置程序 o执行 ∀
表 t °«²µ等电聚焦电泳参数
电压r∂ 电泳时间r«
vsk再水合l tu
ussk平衡l t
xssk平衡l t
t sssk平衡l t
{ sssk梯度l s qx
{ sssk平衡l x
1 q2 q4 °胶条平衡 将完成等电聚焦或从 p zx ε
取出的凝胶条置入加有 ts °平衡液 ´带螺口盖的
长玻璃试管中 o在摇床上轻轻振摇后水平放置 tx
°¬±∀打开管口 o取出凝胶条用纯水快速淋洗后置加
入 ts °平衡液 µ的另一试管中 o在摇床上振摇 tx
°¬±∀两步平衡完成后 o先用纯水 !再用电泳缓冲液快
速淋洗胶面的平衡液 o侧放在提前润湿的滤纸上 x ∗
ts °¬±∀
1 q2 q5 第二向垂直平板 ≥⁄≥2°∞ 用清洁剂清洗
灌胶模具 !玻璃板 o纯水充分淋洗后晾干 ∀按表 u配
#{z{#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
制 ≥⁄≥2°∞溶液 ∀用磁力搅拌混匀的速度要尽量
低以免含有 ≥⁄≥的溶液产生泡沫和气泡 ∀待转子搅
拌充分混匀后 o灌入水平放置的灌胶模具中 ∀{ss °
可灌制 uxs °° ≅ uss °° ≅ t °°胶 tv张 ∀将平衡后
的一向 °胶条移至已聚合好的凝胶上方 o在距胶条
端约 t ¦°处放置准备好的低分子量蛋白质标准纸
片 o胶面接触处不可有气泡 o用封胶液封固 ∀在 ∞·¤±
⁄× µ ≥¼¶·¨°垂直电泳设备的电泳缓冲液中 o恒温
ux ε o以每块胶 u qx • 电泳 vs °¬±o再用每块胶 tu ∗
tx • 电泳至溴酚蓝到玻璃板底部 ∀
表 u ≥⁄≥2°∞均一胶配方ktu qx h ×l
试剂液 用量r°
丙烯酰胺单体储液 vvv
凝胶缓冲液 uss
• ¤·¨µ uxs
ts h ≥⁄≥ {
ts h 过硫酸铵 {
×∞∞⁄ s qtvz
1 q2 q6 染色 电泳胶用固定液固定 t «o染色液染色
s qx «o脱色液脱色 t «并重复 t次 o操作均在水平摇
床低速振摇 ∀染色后置于保存液保存 ∀
1 q2 q7 图象扫描及分析 用 °¨ µ¶«¤° °«¤µ°¤¦¬¤
¬²·¨¦«公司图象扫描仪扫描并储存图象 o使用 ¤¥2
¶¦¤±控制 °¤ª¨ ≥¦¤±±¨ µo设定扫描模式为透射 o色彩为
灰度 o扫描分辨率 vss §³¬o像素深度 { ¥¬·o预览后确
定扫描区域 o每次扫描固定凝胶的铺放位置和方向 ∀
用 °¤ª¨ ¤¶·¨µu⁄ ∞¯¬·¨图象分析软件分析电泳蛋白
点 ∀软件自动执行点检测完成后 o仍有一些点未被
识别出 o用手工修正 ∀在点检测完成后 o使用边界平
均象素值k¥¤¦®ªµ²∏±§¬¶√¨ µ¤ª¨ ²±l消减背景 ∀以要
分析比较的一组凝胶中的一张胶创建参考凝胶 o该
组所有胶分别与参考凝胶进行配比k°¤·¦«l o通过改
变向量框k√¨ ¦·²µ¥²¬l和搜索框k¶¨¤µ¦«¥²¬l的大小来
操纵匹配 o构建一套配比k°¤·¦«¶¨·l ∀蛋白点的实验
等电点k³l用 °胶条 ³ 标示范围 ¦¤¯¬¥µ¤·¨§√¤¯∏¨
与 ³¬¬¨¯ ³²¶¬·¬²±的 ¬¯±¨ ¤µ标准曲线测算 !表观分子量
kµl用低分子质量蛋白标准 ¦¤¯¬¥µ¤·¨§√¤¯∏¨ ≅ tsv与
³¬¬¨¯³²¶¬·¬²±的 ¬¯±¨ ¤µ¯ ²ª标准曲线测算 ∀
1 q2 q8 数据分析 对蛋白点的 ∂²¯∏°¨ 值k点容量
值l在 ≥≥ ≥¼¶·¨° ©²µ•¬±§²º¶软件中 o用编程法实现
两因素析因设计测定资料的定量统计分析 ∀
2 结果
2 q1 被 °≥作用后的差异蛋白点 o有 ts个能分别被
玄参显著的调节 o结果见表 v ∀ °≥ 组 ¬°µt o¬°µy o
¬°µz o¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o¬°µtu o¬°µuv的点容量值均比正
常组 !°≥ n玄参组 !玄参组显著增高 ~°≥组 ¬°µtw o
¬°µt{的点容量值均比正常组 !°≥ n 玄参组显著增
高 ~°≥ n 玄参组 ¬°µt o¬°µy o¬°µz 及玄参组 ¬°µ| o
¬°µtw o¬°µt{的点容量值均比正常组显著增高 o°≥ n
玄参组 ¬°µt{的点容量值比正常组显著降低 ~与玄参
组比较 o°≥ n玄参组 ¬°µt o¬°µy o¬°µz的点容量值均
显著增高而 ¬°µ| o¬°µtu o¬°µt{的点容量值均显著降
低 ~玄参与°≥两因素对¬°µtk Φ uu qsw oΠ
sqsst yl o¬°µ{k Φ tt qt{ oΠ s qsts ul o¬°µtt
k Φ ty qt| oΠ s qssv{l o¬°µtuk Φ u{ quy oΠ
s qsss zl o¬°µt{ k Φ wu qst oΠ s qsss ul均有非常明
显的交互作用 ∀
2 q2 被 °≥作用后的差异蛋白点 o有 y个均未见被
玄参明显的调节 o结果见表 w ∀ °≥ 组 ¬°µu o¬°µv o
¬°µw o¬°µx的点容量值均比正常组显著增高 o¬°µty o
¬°µt|的点容量值比正常组显著降低 ~°≥ n 玄参组
¬°µu o¬°µv o¬°µw及玄参组 ¬°µx的点容量值均比正常
组显著增高 o°≥ n玄参组和玄参组 ¬°µty o¬°µt|的点
容量值比正常组显著降低 ~°≥ 组和 °≥ n 玄参组
¬°µu o¬°µv o¬°µw的点容量值均比玄参组显著增高 o
°≥ n玄参组 ¬°µty的点容量值比玄参组显著降低 ~
玄参与 °≥两因素对 ¬°µxk Φ ts qtt oΠ s qstv sl o
¬°µt| k Φ tu q|z oΠ s qssz sl均有非常明显的交互
作用 ∀
2 q3 有 y个蛋白点未被 °≥引起明显的差异 o但能
因玄参的作用而变化 o结果见表 x ∀玄参组 ¬°µtv o
¬°µus o¬°µut o¬°µuu及 °≥ n玄参组 ¬°µtv的点容量值
均比正常组显著增高 o玄参组 ¬°µts o¬°µtx及 °≥ n
玄参组 ¬°µtx o¬°µus的点容量值均比正常组显著降
低 ~与 °≥ 组比较 o玄参组 ¬°µtv o¬°µus o¬°µut o¬°µuu
的点容量值均显著增高 o而 ¬°µts显著降低 o°≥ n玄
参组 ¬°µtv的点容量值极显著增高而 ¬°µus极显著降
低 ~与 °≥ n 玄参组比较 o玄参组 ¬°µus o¬°µut o¬°µuu
的点容量值均显著增高而 ¬°µts 显著降低 ~玄参与
°≥两因素对 ¬°µts k Φ uu qv{ oΠ s qsst xl o¬°µus
k Φ u| qxz oΠ s qsssyl o¬°µutk Φ y qsy oΠ
s qsv| ul o¬°µuu k Φ u| q{{ oΠ s qsss yl均有显著的
交互作用 ∀
3 讨论
实验结果表明 o°≥致内毒素血症大鼠的血清在
#|z{#
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∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
表 v 能被玄参显著调节的 °≥差异蛋白点k ξ ? σl
点编号 正常组 °≥组 玄参组 °≥ n玄参组
¬°µt ∂²¯∏°¨ ux w|v qzs ? w zy{ qty vvy t{w qux ? tz |{v qz{ul vw wz| q{u ? ts sts qwywl uvs wys q{z ? vy yzu qssu ow oyl
µ xv ytw qv| ? tx| qtu xu {uy qxs ? x|u qx{ xw zwt qyz ? uts q|z xv usv quz ? vys q|u
° v qs{v v ? s qssx { v qtwv v ? s qsvs y v qtxv v ? s qsvs y v qtvy z ? s qsxt v
¬°µy ∂²¯∏°¨ u vuv qst ? xz| qtt | utv qzy ? u uwv q|yul t |{w qvw ? wuv qzswl x wt| q{s ? t t|z qwv t ow oxl
µ v{ xz| qwu ? vyw qz| v{ wuz q|| ? |xz qxx v{ ttz qst ? tx| qws vz xu| quu ? xxv qvx
° x qt|v v ? s qsuv t x qtzs s ? s qtst x x quts s ? s qsxx z x qtuy z ? s qszx s
¬°µz ∂²¯∏°¨ t {yz q{v ? vwx qyu y yvx q{x ? t usv quxul t tvz qyt ? zs qxv wl w |yz qyy ? {xt qtyu ov oyl
µ v{ suz qv| ? vss qy{ vz {uw qss ? |xw qzz vz xux qvv ? us| qzv vy |{s qvw ? xu| qww
° x qv{s s ? s qstz v x qvwv v ? s qttv z x qv{v v ? s qswt y x qvsy z ? s qszx z
¬°µ{ ∂²¯∏°¨ yx txx qz{ ? vu tw{ qzw tvw |wu qyv ? ts yss qsuul {t |v| q{u ? tv uuz qzvvl zw sz{ qtz ? tz uww qxswl
µ uy yus qz{ ? uzw qzw uy xyu qss ? ysu qxz uy vs{ qvt ? xxt qus ux xwz q{w ? y{{ qwu
° x qwvy z ? s qstt x x qvzy z ? s qtvv u x qwws s ? s qswx { x qvxv v ? s qszy w
¬°µ| ∂²¯∏°¨ { ||v qvz ? | xuv qxv ys zzu q|w ? tt ts{ q|{ul v{ |ty qvw ? z swu q|zu ovl tv yw| q{u ? tt u|y quvw oxl
µ x| wx{ q|s ? yx{ qyu x{ ztz qxv ? t uuy quu xz v|w qy{ ? yvw qxv x {t|w qxy ? zx{ qww
° x qz{v v ? s qsws w x qy|y z ? s qtu| s x qztv v ? s qs|s z x qywv v ? s qsyv x
¬°µtt ∂²¯∏°¨ tx uwv qzv ? { x{z qyt v| xww qys ? | u|x qz|ul t| yus qzz ? w sww qyywl tt vst qxy ? w xv| quwwl
µ u| |u{ qss ? utw qsu u| w{w qwu ? uut qyw u| uuz qw{ ? v{{ qty u{ zz{ qvy ? yuw qtsy
y qytv v ? s qsuv t y qxus s ? s qt{t | y qyzs s ? s qswv y y qxyy z ? s qszs u
¬°µtu ∂²¯∏°¨ vz ux| qxw ? uu {vy qtv {| yws q{u ? z tty qwyul x{ w|v qz| ? y x|w qwxxl uw |u| qvv ? tu |{v qwww oxl
µ u{ uux qxs ? t|| qwv uz |{| qzy ? wty qv| uz uzy qxx ? usz qtx uz s{t quv ? yyz qxz
° y qtxs s ? s qsuy w y qsys s ? s qtyw y y qt|v v ? s qsxs v y qs{y z ? s qszz z
¬°µtw ∂²¯∏°¨ { uyx qww ? u yts qsw tz xvv qwx ? v y{w qwztl tx {tu qs{ ? x uz| qw{tl ts uvz qzz ? t ss{ qyyvl
µ wt yzy qtw ? vyw qzy wt zxy qv| ? |ys qvu wt ssy qtu ? tyu qz| ws {wx q{{ ? yv{ quu
° w q{sv v ? s qsvz { w qz{s s ? s qs|t y w q{ty z ? s qsvx t w qzys s ? s qsys s
¬°µt{ ∂²¯∏°¨ xw zx| qtu ? tz uvz q|| zw zzs q|u ? u yu| qwvtl zz xxt qtt ? x v{x qt{tl uz xvv qyw ? w tvy q{xu ow oyl
µ wv xxz qy{ ? vus qw{ wv z{s qwx ? t twx qw{ wv uty qvs ? tvu qsw wv tuv q|| ? zyx q{u
° w q|uy z ? s qsuv t w q{{v v ? s qs{y u w q|ty z ? s qswt y w q{xy z ? s qsxx t
¬°µuv ∂²¯∏°¨ ux {zx q{z ? uv {|t qty yy wz{ q{| ? tt ttw q{|tl vw tw{ qxx ? tx xuz quvvl vu tuu qtu ? tv {{t qtxvl
µ uu sux q{z ? tyv qtt ut xx| qtw ? uvu qs| ut utu qw{ ? |s quv us wvx qu| ? w|{ qw|
° { qusv v ? s qsxz z { quuv v ? s qtxx s { qvxs s ? s qsuy w { qt|v v ? s qsvx t
注 }与正常组比 tlΠ s .sx , u) Π s qst ~与 °≥组比 vlΠ s .sx , w) Π s qst ~与玄参组比 xlΠ s .sx , y) Π s qst
表 w 未见被玄参显著调节的 °≥差异蛋白点k ξ ? σl
点编号 正常组 °≥组 玄参组 °≥ n玄参组
¬°µu ∂²¯∏°¨ zx t{y qu{ ? t{ x{z qt{ tvw z{y qy{ ? x yxv qw{u owl |s x{v q|{ ? tx ty{ qzy tu{ wuy q{z ? ty {ys qvvu ovl
µ wu xxy qys ? utt qsz wu yvy q|{ ? t ts{ q|y wu sz{ qwx ? u|{ qwv wt {wx qsu ? zwu qvz
° x qvyy z ? s qstt x x qu|y z ? s qttu w x qvvy z ? s qszx s x quzv v ? s qszu v
¬°µv ∂²¯∏°¨ yw uuz qw| ? t {zx qv{ tuz zvs q{w ? ut x{{ qvvu owl yx svz qt| ? tt tuv qxs tvs v{| quy ? tv zsy q{vu owl
µ wu uuv qut ? tvy quu wu uuv qzu ? ||s qws wt x|u qxw ? xv{ qts wt vuv qs| ? y|s qw|
° x qyuy z ? s qsu{ | x qxwy z ? s qtuy y x qx{v v ? s qszv z x qxts s ? s qszs s
¬°µw ∂²¯∏°¨ us uzv qyu ? t |x| qy| yt yz{ q|y ? x tx| q|zu owl tw w|y quv ? x {tt qxv yy ysy q{| ? tz uwz qxwu owl
µ wt {vz q{x ? {x qz| wt xtw qwt ? ztz qty ws {|y q{x ? ys| qs| ws xzz q{t ? ys{ qwx
° x q|vy z ? s qswy u x q{xs s ? s qtv{ | x q|ss s ? s qszu t x q{sy z ? s qsyy y
¬°µx ∂²¯∏°¨ xy zw| qyx ? tx {ty q{s {x {s{ qty ? us xx| q|stl tss wws qyy ? ts xws qtuul zy {wv qtt ? y uwt qsz
µ v| yu{ qvs ? vxy qsv v| zuz qz{ ? {|| qt{ v| sxu qv| ? tut qsv v{ zyu qyx ? yz{ qss
° x qstv v ? s qstt x w q|zy z ? s qs|x s x qsts s ? s qsuy w w q|xv v ? s qsys v
¬°µty ∂²¯∏°¨ uv xv| qux ? t vyy qv{ tv yys qt| ? v sux qywul ty wv{ qwx ? v suw qv{ul ts |zx qwu ? t sz{ q|uu ovl
µ uv |wt q{x ? ts| qwz uv yut qsx ? tzt qzu uv vx| qty ? txz qxy u vsyv qsu ? wzw qxs
° y qyuy z ? s qsus { y qxvs s ? s qt|s { y qyzs s ? s qswv y y qxxs s ? s qs{t {
¬°µt| ∂²¯∏°¨ yy |ws qys ? tt xww quu u{ wss qv{ ? x v{w qwxul vx uyv qsy ? ts vvy qvt ul vy txv qsw ? | xtz quxul
µ tw xts qwx ? uzt qwz tw wuw qww ? || qtw tw yzz quv ? uwu qu| tw xtt qss ? v|u qsz
° y qvuy z ? s qsu{ | y qutv v ? s quuv z y qv|v v ? s qszs u y quys s ? s qszx x
注 }与正常组比 tlΠ s .sx ,u) Π s .st ;与玄参组比 v) Π s .sx ,w) Π s qst
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第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
表 x 单用玄参后出现的显著差异蛋白点k ξ ? σ)
点编号 正常组 °≥组 玄参组 °≥ n玄参组
¬°µts ∂²¯∏°¨ wx {ts qwx ? v uvw q|| vw t{{ q|z ? uw twy qvtwl t u{x q|y ? vyt qxuul xy vzv qy{ ? t zu| q|zwl
µ yt xxx q{z ? xxz q|z yt {ss qsx ? t xxz quw ys vut qxs ? yzx qwy ys ytz qxu ? {xt qsw
° x qvts s ? s qsts s x quws s ? s qttt w x quws s ? s qs{x w x qusv v ? s qsyy y
¬°µtv ∂²¯∏°¨ us zvv quv ? t u{y qzw vw w{| qzv ? y zvs qsxwl yw yvx qz{ ? x uyv qzxul z| suw qzs ? tx zzx qysu ovl
µ yw utv q{t ? |uv qtz yv vxw q{w ? t stv qwy yt |{| qsu ? ux{ qsy yv tss qsy ? |ys qzu
° y qxxs s ? s qsts s y qwxy z ? s qtwx z y qxwy z ? s qsys v y qxsy z ? s qsws w
¬°µtx ∂²¯∏°¨ xz wvz qs| ? | {wv quz w{ zzs q|u ? v suw qtw vy tsu qw| ? ts t|w q|w tl vy vzx qv| ? z wxw q{{ tl
µ u| xw{ qzy ? uvw qvx u| zsz q|s ? xvy qus u| wyu qvy ? uzw qwt u| s{z qsz ? yxw q{y
° x qyyy z ? s qsu{ | x qx{v v ? s qtww z x qywy z ? s qsx{ y x qxxv v ? s qszy w
¬°µus ∂²¯∏°¨ zt {zy q{w ? ts szz qy| x| xzv qz{ ? { x|z q|xwl |u sw{ q{v ? w vxx q{yul u| uvv qvx ? { suw qvwt ov owl
µ wx xxw qux ? u|z qwv wx z{v qus ? t u|t qw{ ww zy{ q|{ ? txu qwt w w{w{ q|| ? {x| qwu
° x qt{s s ? s qsss s x qtvs s ? s qtss s x qtys s ? s qsys s x qs|y z ? s qsx{ y
¬°µut ∂²¯∏°¨ wu xwx qy{ ? t w|w quv vx u|t qzv ? y s{t qu{wl ys t|s qtx ? tx yyw qw{tl uz uxt q{s ? y wyu quswl
µ ww sxz qsy ? uz qzs wv |w| q{v ? {zv qxv wu z|z qsu ? xxu qty wu zwz quv ? zxu qvv
° x q{ys s ? s qswv y x qzzv v ? s qtvy x x q{tv v ? s qszv z x qzwv v ? s qsxx t
¬°µuu ∂²¯∏°¨ ts wt{ qtz ? z sxx qt| t| wyz qyv ? w ty| q|ywl v| |xw qvw ? { {|w qytul { ts| q||x ? w yxu qywwl
µ yt xvx qsw ? w{{ qzy yt tx{ quw ? t tvs qy{ x| {wu qtv ? y{z qxu ys y|u qx{ ? z|v q{|
° x qz|y z ? s qsvz { x qzty z ? s qtu| s x qzuy z ? s qs|w x x qyys s ? s qsys {
注 }与正常组比 tlΠ s .sx ,u) Π s qst ~与 °≥组比 vlΠ s .st ;与玄参组比 w) Π s qst
u⁄∞胶上 ty个蛋白点出现非常明显的含量变化 o其
中 u个蛋白点的点容量值均极显著降低 otw个蛋白
点的点容量值均极显著增高 ∀研究这些蛋白点的变
化及其相互作用 o可能进一步认识机体对 °≥的分
子病理反应 ∀作者正在用生物质谱等技术对差异蛋
白点做进一步的分析 ∀
玄参治疗能使 °≥引起增高的 ¬°µt o¬°µy o¬°µz o
¬°µ{ o¬°µ| o¬°µtt o¬°µtu o¬°µtw o¬°µt{ o¬°µuv的点容量
值均显著降低 ∀玄参在 ¬°µt o¬°µ{ o¬°µtt o¬°µtu o¬°µt{
均表现对 °≥显著的交互作用 o可能是玄参和内毒
素之间的功能拮抗作用 ∀玄参治疗后 o¬°µ{ o¬°µ| o
¬°µtt o¬°µtu o¬°µuv o¬°µtw已被明显调节到正常状态 o
¬°µt{的点容量值已显著低于正常组 o¬°µt o¬°µy o¬°µz
的点容量值仍均显著高于正常组 ∀玄参组与正常组
比较 o¬°µ| o¬°µtw o¬°µt{的点容量值均显著增高 ∀说
明通过调节这 ts个蛋白点 o可能是玄参治疗内毒素
血症的疗效的重要的分子基础 ∀
玄参与 °≥两因素对 ¬°µx o¬°µt|均有明显的交
互作用 ∀这种作用的出现及意义尚待探明 ∀在玄参
组 o¬°µtv o¬°µus o¬°µut o¬°µuu的点容量值均比正常组
显著增高 o¬°µts o¬°µtx的点容量值均比正常组显著
降低 ∀这 y个蛋白点在 °≥组和正常组之间均未见
明显的差异 ∀玄参与 °≥ 两因素对 ¬°µts o¬°µus o
¬°µut o¬°µuu 均有显著的交互作用 ~°≥ n 玄参组
¬°µtv的点容量值比正常组显著增高 ~°≥ n玄参组
¬°µtx o¬°µus 的点容量值均比正常组显著降低 ~与
°≥组比较 o玄参组 ¬°µtv o¬°µus o¬°µut o¬°µuu的点容
量值均显著增高而 ¬°µts 显著降低 o°≥ n 玄参组
¬°µtv的点容量值极显著增高而 ¬°µus极显著降低 ∀
这些变化是玄参在生物分子网络中发挥治疗作用所
必须的呢 o还是药物偏性所致副作用的分子特征
还需进一步证明 ∀
≈参考文献
≈t °¤µµ¬¯¯² ∞o°¤µ®¨µ o ¤·¤±¶²± ≤ o ετ αλ. ≥ ³¨·¬¦¶«²¦®¬± «∏2
°¤±¶} §√¤±¦¨¶¬± ·«¨ ∏±§¨µ¶·¤±§¬±ª ²© ³¤·«²ª¨ ±¨ ¶¬¶¦¤µ§¬²√¤¶¦∏¯¤µ
§¼¶©∏±¦·¬²± ¤±§·«¨µ¤³¼q Ανν Ιντερν Μεδ , t||s ottvkvl }uuz q
≈u ∏µ¯¨ ¼ ≤ o²∏¬¶ • oײ¶²¯¬±¬ƒ o ετ αλ. ±·¬¥¬²·¬¦2¬±§∏¦¨§µ¨2
¯¨ ¤¶¨ ²© ±¨§²·²¬¬±}¤µ¨¤³³µ¤¬¶¤¯ q Χλινιχαλ Ινφεχτιουσ ∆ισεασεσ , t||u o
txkttl }{ws q
≈v 姚咏明 o王丽芳 o董 宁 o等 q脓毒症大鼠循环及组织内毒素的
动态变化 q中华急诊医学杂志 ousss o|kyl }vyz q
≈w 姚咏明 o盛志勇 q我国创伤脓毒症基础研究新进展 q中华创伤杂
志 oussv ot|ktl }| q
Στυδψ ον σερυµ προτεοµε οφ ρατ ενδοτοξεµια τρεατεδ βψφιγ ωορτ ροοτ
÷∞ • ±¨2ª∏¤±ªt o≥ ¬±ª2¶«¨ ±ªu o ÷¬¤²2¦«¤±ªv o⁄ ±¬±2¬∏¨u o
÷¬±u o ²±ª2¯ u¨ o • ∞ ≠∏2¶«∏t o • ∏¬2¬¬±u o≤∞¨2¬v
(t . Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ, Νορτη Σιχηυαν Μεδιχαλ Χολλεγε , Νανχηονγ yvzsss , Χηινα ;
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第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
u . Ινστιτυτε οφ Βασιχ Μεδιχαλ Σχιενχεσ , Αχαδεµψ οφ Μιλιταρψ Μεδιχαλ Σχιενχεσ, Βειϕινγ tss{xs , Χηινα ;
v . Ξιψυαν Ηοσπιταλ, Χηινα Αχαδεµψ οφ Χηινεσε Τραδιτιοναλ Μεδιχινε , Βειϕινγ tsss|t , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼ ·«¨ ¶¨µ∏° ³µ²·¨²°¨²©µ¤· ±¨§²·²¬¨ °¬¤·µ¨¤·¨§¥¼ ©¬ªº²µ·µ²²·kƒ l q Μετηοδ : ׫¨ §¬©©¨µ¨±¦¨¶²©
¶¨µ∏° ³µ²·¨²°¨¤°²±ªµ¤·¶·µ¨¤·¨§º¬·« ¬¯³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ k°≥l o ƒ o°≥ n ƒ ¤±§¶¤¯¬±¨ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ º µ¨¨ ¤±¤¯¼½¨ §¥¼ ·º²2§¬° ±¨·¬²±¤¯
¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶ku⁄∞l ¤¶¶¤¼q Ρεσυλτ : ׫¨ √²¯∏° ¶¨²©¶¬¬·¨ ±¨ ¶¨µ∏° ³µ²·¨¬±¶k¬°µl ¬± °≥ ¬±§∏¦¨§2 ±¨§²·²¬¨ °¬¤ªµ²∏³ º µ¨¨ ªµ¨¤·¯¼ ¦«¤±ª¨§
¦²°³¤µ¨§º¬·«·«²¶¨ ²©·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³q°²±ª·«¨ ° o·«¨ √²¯∏° ¶¨²©¬°µty ot| º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¨¦µ¨¤¶¨§o¤±§·«¨ √²¯∏° ¶¨²©¬°µt ou o
v ow ox oy oz o{ o| ott otu otw ot{ ouv º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±¦µ¨¤¶¨§q • «¨ ±·µ¨¤·¨§º¬·«ƒ o·«¨ √²¯∏° ¶¨²©¬°µt oy oz o{ o| ott otu o
tw ot{ ouv º µ¨¨ ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ §¨¦µ¨¤¶¨§o¤±§·«¨ √²¯∏° ¶¨²©¬°µ{ o| ott otu ouv otw º µ¨¨ ¥¤¦®·²±²µ°¤¯ ¯¨ √¨¯ q׺²©¤¦·²µ¶¶·¤·¬¶·¬¦¤±¤¯¼¶¬¶
¶«²º §¨·«¤·ƒ «¤§¬±·¨µ¤¦·¬²± º¬·«°≥ ©²µ¬°µt ox o{ ots ott otu ot{ ot| ous out ouu o¤±§ƒ °¬ª«·¥¨ ·«¨ ©∏±¦·¬²±¤¯ ¤±·¤ª²±¬¶·²©
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¦µ¨¤¶¨§q Χονχλυσιον : ׫¨ °²¯ ¦¨∏¯¤µ¥¤¶¬¶²©·«¨µ¤³¨ ∏·¬¦ ©¨©¨¦·²©ƒ ²± ±¨§²·²¬¨ °¬¤ °¬ª«·¥¨ ·«µ²∏ª«·«¨ µ¨ª∏¯¤·¬²± ²©¬°µt oy oz o{ o| o
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·«¨ ¦²°¥¬±¤·¬²± ²©§¬©©¨µ¨±·«¨µ¥¶¬¶±¨ ¦¨¶¶¤µ¼©²µ·«¨ ·µ¨¤·° ±¨·²© ±¨§²·²¬¨ °¬¤o¤¶ƒ ¦¤± ±²·µ¨ª∏¯¤·¨§¤¯¯·«¨ ¦«¤±ª¨§³µ²·¨¬±¶¬±§∏¦¨§¥¼
°≥ q
[ Κεψ ωορδσ] ©¬ªº²µ·µ²²·~ ±¨§²·²¬¨ °¬¤~¶¨µ∏° ~³µ²·¨²°¨ ≈责任编辑 方文贤
藏药紫金标抗 ≥∂2t的作用机理研究
陈 恬t o贾文祥t 3 o杨发龙t o谢 轶t o杨维青t o曾 蔚t o张再容t o
李 晖u o蒋思萍u o央 珍u o陈金瑞u
kt q四川大学 华西基础医学与法医学院 微生物学教研室 o四川 成都 ytsswt ~
u q西藏高原生物研究所 o西藏 拉萨 {xsssul
≈摘要 目的 }探讨紫金标抗单纯疱疹 ´型病毒k≥∂2tl的作用及机理 o为进一步开发该药提供理论依据 ∀方
法 }采用不同剂量的紫金标作用于适量 ≥∂2t感染的 ∂ µ¨²细胞 o以 xs h组织细胞感染量k×≤⁄xsl o细胞病变效应
k≤°∞l o ××法和核酸分子杂交作为评价指标 ∀结果 } ××法测得紫金标的 xs h抑制浓度k≤xsl为 u| qwy °ª#pt o
xs h中毒浓度k×≤xsl 为 t szz °ª#pt o治疗指数k×l为 vy qxy o结果表明紫金标有明显抑制 ≥∂2t的作用 o其作用强
度和有效时间与药物浓度成正比 ∀紫金标无直接灭活 ≥∂2t的作用 o也不能影响病毒的释放 ~但可干扰 ≥∂2t对
宿主细胞的吸附 ∀不同浓度的紫金标能明显抑制 ≥∂2tª⁄基因复制和 ° 表达 ∀结论 }紫金标具有显著的抗
≥∂2t的作用 o能抑制 ≥∂2t对宿主细胞的吸附以及抑制 ≥∂2tª⁄基因复制与转录 ∀
≈关键词 紫金标 ~单纯疱疹病毒 型 ~××法 ~斑点杂交 ~²µ·«¨µ±杂交
≈中图分类号 u| ~ u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{{u2sx
紫金标是蓝雪科 °¯ ∏°¥¤ª¬±¤¦¨¤¨ 紫金标属 Χερ2
ατοστιγ µα小灌木≈t o容易人工栽培 o含有多种有益成
分 o分布于我国西南地区 o其中西藏自治区资源最为
丰富 ∀西藏自治区高原生物研究所已从紫金标中分
≈收稿日期 ussv2sv2s|
≈基金项目 西藏自治区科委重点项目kussv2tu2wl
≈通讯作者 3贾文祥 oר¯ }ksu{l{xxstuyz oƒ¤¬}ksu{l{xxsvusw o
∞2°¤¬¯}¬¤º ±¨¬¬¤±ª ¶¬±¤q¦²°
离出 uv种化合物 o其中蓝雪醌k³¯∏°¥¤ª¬±l和蓝雪酸
k³¯∏°¥¤ª¬¦¤¦¬§l为主要成分 o在抗菌方面表现出了
较强的作用≈u o但国内外均未见其抗病毒方面的研
究 ∀作者以 ∂ µ¨²细胞作为体外筛选细胞模型检测
不同剂量西藏紫金标对 ≥∂2t的抑制作用 o发现西
藏紫金标浓度达 yux °ª#pt时能完全抑制感染
≥∂2t的 ∂ µ¨²细胞产生病变 o而对 ≥∂ 和 ≤∂
v无
明显抑制作用 ∀由此初步得到藏药紫金标具有抗
#u{{#
第 u|卷第 |期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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