全 文 :kv o¶ot|2 l¨ ot1wzky o¶otyrtz2 l¨ oz1t{kt o° o
2twl oz1uwkt o° o2tul oz1uykt o° o2ttl ou1{z
ku o° o2zl ou1utkt o§§oϑ u1s otu1x ½o2xl o
u1vzku o¥§oϑ tt1x ½o2tl ∀碳谱数据与文献
≈w ox 一致 o化合物 ¶鉴定为 tx2«¼§µ²¬¼§¨«¼§µ²¤¥¬¨·¬¦
¤¦¬§k见表 tl ∀
化合物 √ 白色针晶 o°³tv{ ∗ tws ε ∀经薄层
色谱 ©值及红外光谱对照与 Β2谷甾醇kΒ2¶¬·²¶·¨µ²¯l
标准品一致 ∀
化合物 º 白色粉末 o°³vst ∗ vsu ε ∀经薄层
色谱 ©值及红外光谱对照与胡萝卜苷k§¤∏¦²¶·¨µ²¯l
标准品一致 ∀
≈参考文献
≈t ƒ ¬°2°¬±o ≥ • ±¨2¦«∏±ªo ≤∞ ≠∏2¶«¬¤1 ƒ¯ ¤√²±²¬§¶¤±§
¶·¬¯¥¨ ±¨ ¶©µ²° ¤µ°¤±§³¬±¨ 1 Πηψτοχηεµιστρψot|{{ ouz }tv|x1
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©µ²° Πινυσ αρµανδιι
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¥∏¯¥¶²© Φριτιλλαρια| Τηυνβεργ ¬´1 Χηεµ Πηαρµ Βυλλo t|{u ovs
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¶¨¬±1 Τετραηεδρον ot||v owskvyl }z|sv1
Στυδιεσ ον χηεµιχαλ χονστιτυεντσφροµ πινε χονε οφ Πινυσ αρµανδιι
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(t1 Τηε Κεψ Λαβορατορψ οφ Ινδυστριαλ Βιοτεχηνολογψ, Μινιστρψ οφ Εδυχατιον , Σχηοολ οφ Βιοτεχηνολογψ,
Σουτηερν Ψανγτζε Υνιϖερσιτψ , Ωυξι utwsvy , Χηινα ;
u1 Ινστιτυτε οφ Μετερια Μεδιχα , Χηινεσε Αχαδεµψ οφ Μεδιχαλ Σχιενχε ανδ Πεκινγ Υνιον Μεδιχαλ Χολλεγε , Βειϕινγ tsssxs , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶©µ²° ³¬±¨ ¦²±¨ ²© Πινυσ αρµανδιι1 Μετηοδ : ׫¨ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§¥¼
¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦° ·¨«²§¤±§·«¨ ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ ¬§¨±·¬©¬¨§²±·«¨ ¥¤¶¬¶²©¶³¨¦·µ¤¯ ¤±¤¯¼¶¬¶1 Ρεσυλτ : ≥¨ √ ±¨ ¦²°³²∏±§¶º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¤¶¶¤±2
§¤µ¤¦²³¬°¤µ¬¦¤¦¬§k ´l o¬¶²§¨¬·µ²³¬°¤µ¬¦¤¦¬§k µl otu2«¼§µ²¬¼¤¥¬¨·¬¦¤¦¬§k ¶l o §¨«¼§µ²¤¥¬¨·¬¦¤¦¬§k ·l otx2«¼§µ²¬¼§¨«¼§µ²¤¥¬¨·¬¦
¤¦¬§k ∏l oΒ2¶¬·²¶·¨µ²¯ k √ l¤±§§¤∏¦²¶·¨µ²¯ k º l1 Χονχλυσιον : ≤²°³²∏±§¶´ ∗ · º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²°·«¬¶³¯¤±·©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬° 1¨
[ Κεψ ωορδσ] Πινυσ αρµανδι ~³¬±¨ ¦²±¨ ~¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶ ≈责任编辑 李 禾
≈收稿日期 ussw2tu2tx
≈基金项目 浙江省中医药科研计划资助项目kussv≤szyl
≈通讯作者 3沈朋 oר¯ }ksxztl{zuvyxxz o∞2°¤¬¯}¶«¨ ±³ ½∏1 §¨∏1¦±
逆转肿瘤细胞多药耐药性的四物合剂有效组分
沈 朋t 3 o夏 蕾u o张海江u
kt1 浙江大学 医学院 附属第一医院 o浙江 杭州 vtsssv ~
u1 浙江大学 药学院 中药科学与工程学系 o浙江 杭州 vtssuzl
≈摘要 目的 }研究四物合剂逆转人红白血病细胞株 xyur⁄ 多药耐药作用的药效活性组分 ∀方法 }用大孔吸
附树脂分离四物合剂 o并用体外细胞模型作药效评价 o寻找发现活性部位 o再用 °≤2≥方法研究活性部位的化学
组成 o进而确定其主要活性组分 ∀结果 }熟地黄粗多糖对 xyur⁄ 的耐药性有明显的逆转作用 o其逆转倍数与对照
组k无逆转剂l相比有显著差异k Π s1stl o并且与主要活性部位的逆转作用无明显差异k Π s1sxl ∀结论 }熟地黄粗
#sux#
第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
³µ¬¯oussx
多糖能逆转 xyur⁄ 细胞的多药耐药性 o是四物合剂逆转 xyur⁄ 多药耐药性的主要活性组分之一 ∀
≈关键词 四物合剂 ~逆转多药耐药 ~xyur⁄ ~多糖
≈中图分类号 u{w qt ~ u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsz2sxus2sw
四物合剂由熟地黄 !当归 !川芎和白芍组成 o是
常见的活血化瘀中药 ∀作者前期研究工作运用现代
分离分析手段 o基本阐明了其主要化学成分≈t o并证
实它对人红白血病细胞株 xyur⁄ 的多药耐药性
k°∏¯·¬§µ∏ªµ¨¶¬¶·¤±¦¨ o⁄ l具有显著逆转作用≈u ∀为
进一步探究其逆转肿瘤细胞 ⁄ 作用的关键药效
物质 o本研究使用大孔吸附树脂分离四物合剂 o并用
体外细胞药效评价法结合 °≤2≥分析方法寻找
活性组分 o结果发现四物合剂中逆转肿瘤细胞 ⁄
的主要活性组分为熟地黄粗多糖 ∀
1 材料与方法
111 仪器与材料
ª¬¯¨ ±·¼³¨µ¶¬¯ ≤t{色谱柱kw °° ≅ uxs °° ox
Λ° o批号 ≥ws∞sztxzl oª¬¯¨ ±·ttss型高效液相色谱
仪 o°≤分析方法同文献≈t ∀zuu型紫外分光光
度计k上海精密仪器厂l ∀市购四物合剂口服液 o四
川新斯顿制药有限责任公司 o生产批号 sutttx ∀熟
地为玄参科植物地黄 Ρεηµαννια γλυτινοσα ¬¥²¶¦«1
的干燥块茎炮制而成 o购于杭州胡庆余堂 o由本系栾
连军副教授鉴定 ∀葡萄糖和硫酸蒽酮为分析纯试
剂 ∀提取和分析用水购自娃哈哈公司k杭州l ∀ ⁄tst
型大孔树脂为天津树脂厂生产 ∀
药理实验材料 !仪器均同文献≈u ∀
112 四物合剂的分离及分析
以 ⁄tst型大孔树脂分离 xs °四物合剂 o水2
乙醇梯度洗脱 o每 uxs °收集为一流分 o共得到 vs
余个流分 ∀使用 °≤ 分析检测各流分 o根据其检
测结果合并流分 o分别得到 o
o≤ o⁄o∞oƒ共计 y个
部位 ∀对这 y个部位分别进行 °≤ 分析 o再根据
°≤谱图上各峰的相对保留时间 !紫外光谱并与四
物合剂成分研究结果相比较 o鉴定出各谱峰的成分 ∀
113 熟地黄粗多糖的提取与多糖含量测定
称取熟地黄药材 {s ªo加水 yss °于 ys ε 温
浸提取 t «o收集滤液 ∀重复提取 v次 o收集合并滤
液后 o于 ys ε 减压浓缩至 uws °∀加 |x h乙醇 zus
°进行醇沉 o放置 uw «沉淀 o再用 |x h乙醇按同样
操作醇沉 v次 o回收乙醇 ∀抽滤 o分别以无水乙醇 !
丙酮和乙醚连续洗涤至无醇味 oys ε 真空干燥恒重
后得到 |1z ª熟地黄粗多糖 ∀同法提取川芎粗多
糖 ∀称取粗多糖样品 t ªo溶解于水 o以 tss °量瓶
定容 ∀再以一定比例稀释后 o采用同文献≈v 的硫酸
蒽酮比色法测定其中多糖含量 ∀
114 各部位逆转 xyur⁄ 细胞 ⁄ 作用的药效
评价
实验方法同文献≈u ∀
2 结果
211 四物合剂及其各部位对 xyur⁄ 细胞 ⁄
的逆转作用
四物合剂和部位 o∞oƒ的半数抑制率k≤xsl为
x1z °ª#pt左右 o部位
o≤ o⁄的 ≤xs为 tu1y °ª#pt
左右 o无耐药性 ∀阿霉素k⁄l对 xyur⁄ 细胞
的 ≤xs为 x1u{ °ª#pt左右 o但对 xyu细胞的≤xs为
s1sx{ °ª#pt左右 o耐药性kµ¨¶¬¶·¤±·©¤¦·²µo ƒl≈u 为
|t1vx倍k见表 tl ∀为确保无细胞毒性 o本实验将四
物合剂和 y个部位的含量选取为 u1{ °ª#pt ∀逆转
倍数kµ¨√¨ µ¶¤¯ ¬±§¨¬ol实验≈u 表明 o四物合剂的 o
部位具有较显著的逆转作用 o≤ o∞部位逆转作用
不明显 o而 ⁄和 ƒ 部位没有逆转作用 ~其中 及
部位与 ⁄ 合用时 o对 xyu细胞影响不明显k Π
s1sxl o但对 xyur⁄ 细胞的耐药性有明显逆转 o
逆转倍数分别为 w1|w倍和 u1tx倍k见表 ul o相比无
逆转剂的对照组有显著差异k Π s1stl ∀不过 o四
物合剂与 部位的逆转效果亦存在显著差异k Π
s1stl ∀
表 t 药物的细胞毒性和细胞耐药性k ξ ? σoν |l
药物
≤xsr°ª#pt
xyu xyur⁄
ƒ
r倍数
组分 x1zs| | ? s1szy { x1yzt | ? s1sxz x s1||v
组分
tu1{s{ u ? s1vsz w tu1xvz t ? s1xz{ t s1|z|
组分 ≤ tu1yuy | ? s1xvu z tu1zwz u ? s1yy| v t1ss|
组分 ⁄ tu1xsx u ? s1wst w tu1y|v | ? s1wyu v t1stx
组分 ∞ x1zsy u ? s1s{v { x1zvy | ? s1sz{ w t1ssx
组分 ƒ x1zvy v ? s1sz| y x1zvy t ? s1ttw t s1|||
四物合剂 x1x|{ | ? s1uxu u x1{sy | ? s1tvt | t1svz
⁄ s1sxz { ? s1ssx t x1uz| | ? s1txv u |t1vw{
考虑到中药多成分作用的特点 o本研究对各部
位进行不同组合后作了药效实验 ∀结果发现 o除了
和
部位混合后 o逆转作用有所增强外 o其余组合
#tux#
第 vs卷第 z期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
³µ¬¯oussx
表 u 四物合剂及其各部位对 xyur⁄ 细胞耐药性的逆转作用k ξ ? σoν |l
药物组成
≤xsr°ª#pt
xyu xyur⁄
r倍数
xyu xyur⁄
⁄k无逆转剂l s1sxz { ? s1ssx t x1uz| | ? s1txv u p p
⁄ n四物合剂 s1sxz t ? s1ssz vtl s1yxu z ? s1stx xul t1st {1s|
⁄ n s1sxx v ? s1ssz |tl t1sy{ y ? s1tuu yul t1sx w1|w
⁄ n
s1sxw y ? s1ssz ztl u1wxt | ? s1v{| xul t1sy u1tx
⁄ n 2
s1sxv v ? s1ssw wtl t1suy | ? s1tvx {ul t1s{ x1tw
⁄ n ≤ s1sxv z ? s1ss{ utl u1{z{ y ? s1u|u wul t1s{ t1{v
⁄ n ⁄ s1sxy u ? s1stt ttl x1uzs | ? s1uzy ytl t1sv t1ss
⁄ n ∞ s1sxy | ? s1sts ttl v1uvt y ? s1vxy wul t1su t1yv
⁄ n ƒ s1sxz x ? s1stx ttl x1uyu t ? s1v|t wtl t1st t1ss
注 }与无逆转剂的对照组相比tl Π s1sx oul Π s1st
均无明显的逆转作用增益现象 ∀由此可以认为 o
部位是主要活性部位 o而
部位是次要活性部位 ∀
据此 o本研究针对 部位作进一步实验 ∀
212 主要活性部位的成分分析
使用文献≈t 的 °≤2≥方法分析 部位k见
图 tl o并与四物合剂的研究结果比较 o确定出 部
位的 u个主要成分分别为没食子酸和苯甲酸≈t ∀然
而 o对这 u个化合物作药效测定实验发现 o二者均未
表现出显著 ⁄ 逆转作用 ∀考虑到 部位为大孔
树脂的水洗脱物 o其中应含有较多极性大的水溶性
成分 o故推测其主要活性成分为多糖 ∀从文献研究
得知 o四物合剂中的多糖主要来源为熟地黄和川芎 ∀
213 熟地黄粗多糖和川芎粗多糖对 xyur⁄ 细
胞耐药性的逆转作用
在本实验中 o熟地黄粗多糖和川芎粗多糖的
≤xs为 uw °ª#pt左右 ∀如表 v所示 o熟地黄粗多糖
及川芎粗多糖含量均为 tu °ª#pt的 均与对照组
k无逆转剂l有显著差异k Π s1stl o故 u种粗多糖
均具有明显的 ⁄ 逆转作用 o前者优于后者 ∀从表
v还可见 o熟地黄粗多糖的逆转作用与 部位相比 o
二者没有显著差异k Π s1sxl o故可认为熟地黄粗
多糖能够代表 部位所具有的 ⁄ 逆转作用 o是四
物合剂逆转肿瘤细胞 ⁄ 的主要活性组分之一 ∀
四物合剂中 部位的 °≤谱图
t1 没食子酸 ~u1 苯甲酸
表 v 熟地黄粗多糖 !川芎粗多糖及 部位对 xyur⁄ 细胞耐药性的逆转作用k ξ ? σoν |l
药物组成
≤xsr°ª#pt
xyu xyur⁄
r倍数
xyu xyur⁄
⁄k无逆转剂l s1sxz { ? s1ssx t x1uz| | ? s1txv u p p
⁄ n熟地黄粗多糖 s1sxx v ? s1ssw |tl t1sz{ u ? s1t{t |ul t1sx w1|s
⁄ n川芎粗多糖 s1sxy s ? s1ssz vtl u1uyy t ? s1xsw sul t1sv u1vv
⁄ n s1sxx v ? s1ssz |tl t1sy{ y ? s1tuu yul t1sx w1|w
⁄ n四物合剂 s1sxz t ? s1ssz vtl s1yxu z ? s1stx xul t1st {1s|
注 }与无逆转剂的对照组相比tl Π s1sx oul Π s1st
214 熟地黄粗多糖的多糖含量测定
用硫酸蒽酮比色法测定多糖含量 o于 yux ±°波
长处测定吸收度 o其浓度在 ts1ss ∗ xs1ss °ª#pt与
吸收度呈良好线性关系 o拟合回归方程为 Α
tu1v|Χn s1twv vkρ s1||| w oν xl o实测熟地黄
粗多糖样品中的多糖含量为 vu1vs h o ≥⁄ s1|w h
k ν xl ∀
3 结论
本研究运用大孔树脂分离 !体外细胞模型药效
评价及 °≤2≥ 分析方法寻找四物合剂中逆转
xyur⁄ 细胞 ⁄ 作用的主要活性组分 o研究结
果表明 o熟地黄粗多糖是其主要活性组分之一 o对
#uux#
第 vs卷第 z期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vs o¶¶∏¨ z
³µ¬¯oussx
xyur⁄ 细胞 ⁄ 具有明显的逆转作用 o显示了
良好的临床应用前景 ∀本研究亦证实 o四物合剂逆
转肿瘤细胞 ⁄ 的药效为多成分协同增效作用的
结果 o其他活性成分的发现和各活性成分协同作用
规律还有待于进一步深入研究 ∀
≈参考文献
≈t o≥∞° o≤∞ ≠ ≠1 §¨±·¬©¬¦¤·¬²±¤±§§¨·¨µ°¬±¤·¬²±
²©·«¨ °¤²µ¦²±¶·¬·∏¨±·¶¬± ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ≥¬2 • ∏2פ±ª
¥¼ °≤ ¦²∏³¯ §¨ º¬·« ⁄⁄ ¤±§ ∞≥2≥1 ϑ Πηαρµαχευτ Βιοµεδ o
ussw ovw }zsx1
≈u 夏 蕾 o沈 朋 1 四物合剂对人红白血病细胞株 xyur⁄ 多
药耐药性的逆转作用研究 1 中国中药杂志 oussw ou|k{l }z|u1
≈v 魏小明 o符 红 o万幼平 1 硫酸蒽酮比色法测定鹿龟酒中多糖
的含量 1 中成药 ousss ouukxl }v{s1
∆ισχοϖερψ οφ τηε µαιν αχτιϖε χονστιτυεντσ οφ Σιωυ µιξτυρεφορ ρεϖερσινγ τηε
µ υλτιδρυγ ρεσιστανχε οφ ηυµαν ερψτηροχψτελευκεµιχ χελλλινε Κxyu/ Α∆ Μ
≥∞°¨ ±ªt o ÷ ¨¬u o ¤¬2¬¤±ªu
(t1 Τηε Φιρστ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ, Χολλεγε οφ Μεδιχινε , Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtsssv , Χηινα ;
u1 ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Μεδιχινε Σχιενχε ανδ Ενγινεερινγ , Χολλεγε οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ ,
Ζηεϕιανγ Υνιϖερσιτψ, Ηανγζηου vtssuz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ °¤¬± ¤¦·¬√¨¦²±¶·¬·∏¨±·¶²©≥¬º∏ °¬¬·∏µ¨ ©²µµ¨√ µ¨¶¬±ª·«¨ °∏¯·¬§µ∏ªµ¨¶¬¶·¤±¦¨ k⁄ l ²©«∏°¤±
µ¨¼·«µ²¦¼·¨ ¯¨ ∏®¨ °¬¦¦¨¯¯ ¬¯±¨ xyur⁄1 Μετηοδ : ¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± º¤¶∏¶¨§·²¶¨³¤µ¤·¨ ≥¬º∏°¬¬·∏µ¨ ¤±§¤± ιν ϖιτρο °²§¨¯ º¤¶∏¶¨§·²
√¨¤¯∏¤·¨·«¨ µ¨√ µ¨¶¤¯ ¬±§¨¬²© ¤¨¦«©µ¤¦·¬²±©²µ§¬¶¦²√ µ¨¼ ²©¤¦·¬√¨©µ¤¦·¬²±1 °≤2≥ º¤¶∏¶¨§©²µ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¬±ª·«¨ °¤¬± ¤¦·¬√¨¦²±¶·¬·∏¨±·¶²©
≥¬º∏ °¬¬·∏µ¨1 Ρεσυλτ : ׫¨ µ¨√ µ¨¶¤¯ ¬±§¨¬²©·«¨ ªµ²¶¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²© Ρεηµαννια γλυτινοσα º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ «¬ª«¨µ·«¤±·«¤·²©¥¯¤±®¦²±·µ²¯
k Π s1stl1 ׫¨ µ¨ º¤¶ ¬¯·¯¨§¬©©¨µ¨±¦¨ ¥¨·º¨¨ ±·«¨ µ¨√ µ¨¶¤¯ ©¨©¨¦·²©·«¨ ªµ²¶¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²© Ρεηµαννια γλυτινοσα ¤±§·«¤·²©·«¨ ¤¦·¬√¨
©µ¤¦·¬²± k Π s1sxl1 Χονχλυσιον : ׫¨ ªµ²¶¶³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²© Ρεηµαννια γλυτινοσᬶ²±¨ ²©·«¨ °¤¬± ¤¦·¬√¨¦²±¶·¬·∏¨±·¶²©≥¬º∏°¬¬·∏µ¨1
[ Κεψ ωορδσ] ≥¬º∏ °¬¬·∏µ¨ ~µ¨√ µ¨¶¬²± ²© ⁄ ~¦¨¯¯ ¬¯±¨ xyur⁄ ~³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨
≈责任编辑 李 禾
°2°≤测定石蒜中加兰他敏含量
吴芳丽 3 o李爱珍 o毛慧芳
k浙江一新制药股份有限公司 o浙江 兰溪 vuttssl
≈摘要 目的 }建立测定石蒜中加兰他敏含量的 °≤ 方法 ∀方法 }采用 ⁄≥色谱柱kw1y °° ≅ txs °° ox Λ°l o
以磷酸盐缓冲液k³ v ∗ wl2甲醇k|vΒzl为流动相 o流速 t1s °#°¬±p t o二极管阵列检测器于 u{| ±°测定 ∀结果 }加
兰他敏在 v ∗ vs Λª#°pt线性关系良好kρ s1||| zl o最低检测限为 s1vs ±ªo测定加兰他敏的平均回收率为 ||1x h o
≥⁄s1x h ∀结论 }方法操作简便 o结果可靠 o重复性好 o专属性强 o将为石蒜的质量控制提供科学依据 ∀
≈关键词 高效液相色谱法 ~加兰他敏 ~石蒜
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlsz2sxuv2sv
≈收稿日期 ussv2tt2ts
≈通讯作者 3吴芳丽 oר¯ }ksxz|l{{yxtyt
石蒜为石蒜科植物 o虽然目前尚未被5中国药
典6收载 o但其中生物活性成分较多 o特别是生物碱
类 o加之石蒜的品种繁多 o每种中各成分含量不一 o
因此对石蒜中具生物活性成分建立合适的含量测定
方法是必要的 ∀石蒜中加兰他敏具治老年痴呆症功
能之功效≈t o文献报道有采用分光光度法≈u !薄层扫
#vux#
第 vs卷第 z期
ussx年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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