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自噬对苯丙素苷逆转耐药作用的影响
马 强，常宗宏，邓尚新，王 维，王彪猛
兰州军区兰州总医院 消化科，兰州 甘肃 730050
摘 要：目的 探讨自噬对苯丙素苷（PPG）逆转大肠癌耐药株 LoVo/Adr 细胞耐药作用的机制。方法 MTT 法检测 PPG
对 LoVo/Adr 细胞增殖及耐药性的影响；Western-blotting 检测 P-糖蛋白（P-gp）的表达；流式细胞术测定阿霉素（ADR）在
LoVo/Adr 细胞中的摄入；单丹磺酰尸胺（MDC）染色后在荧光显微镜下观察细胞自噬体及通过流式细胞仪定量分析自噬率；
ATP 检测试剂盒测定细胞内的 ATP 水平。结果 80、160 mg/L 的 PPG 可抑制 LoVo/Adr 细胞增殖，20、40 mg/L 的 PPG 无
明显细胞毒作用；20、40 mg/L 的 PPG 对 ADR 的逆转倍数分别为 5.31 和 7.51 倍，加入自噬特异抑制剂 3-甲基腺嘌呤（3-MA）
后，2 组的逆转倍数分别增至 11.84 和 19.25 倍；20、40 mg/L 的 PPG 及 5 mmol/L 的 3-MA 均不影响 P-gp 的表达；20、40 mg/L
的 PPG 作用于 LoVo/Adr 细胞后，细胞内 ADR 荧光强度显著增加（P＜0.01），联合 3-MA 后，细胞内 ADR 的荧光强度进一步
增加；在荧光显微镜下，LoVo/Adr 细胞很少或几乎没有点状绿色荧光，自噬率为（3.17±0.52）%，20、40 mg/L 的 PPG 作用
后，均可见大量点状绿色荧光即自噬体分布于胞浆及核周，自噬率分别升至（45.82±5.47）%、（76.23±8.28）%（P＜0.01）；
当 3-MA 与 PPG 合用时，自噬泡的数量较单用 PPG 明显减少，自噬率分别降至（24.87±2.43）%、（39.56±4.64）%（P＜0.05）；
对照组 LoVo/Adr 细胞中 ATP 的浓度为（1.92±0.23）nmol/mg，20、40 mg/L 的 PPG 作用后，细胞内 ATP 的水平分别下降
至（0.97±0.14）、（0.63±0.13）nmol/mg；联合 3-MA 后，细胞内 ATP 水平分别进一步降至（0.58±0.12）、（0.33±0.10）nmol/mg。
结论 PPG 具有诱导大肠癌耐药 LoVo/Adr 细胞自噬和逆转耐药的特性，这种特性与 PPG 降低细胞 ATP 水平，激活自噬、
抑制 ATP 依赖性 P-gp 的外泵功能有关；同时抑制自噬可导致细胞内 ATP 水平进一步降低，加重抑制 P-gp 功能，提高 PPG
的逆转作用。
关键词：苯丙素苷；大肠癌；多药耐药；逆转多药耐药；自噬
中图分类号：R735.3 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2014)02 - 0238 - 06
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2014.02.016
Effect of autophagy on reversing multidrug resistance of phenylpropanoid
glycosides
MA Qiang, CHANG Zong-hong, DENG Shang-xin, WANG Wei, WANG Biao-meng
Department of Gastroenterology, Lanzhou General Hospital, Lanzhou 730050, China
Abstract: Objective To explore the mechanism of autophagy on the reversing multidrug resistance (MDR) of phenylpropanoid
glycosides (PPG) for cocorectal carcinoma resistant strains LoVo/Adr. Methods The effects of PPG on cell proliferation and MDR in
LoVo/Adr were measured by MTT assay and the expression of P-glycoprotein (P-gp) was determined by Western-blotting. The uptake
of adriamycin (ADR) in LoVo/Adr cells was detected by flow cytometry (FCM); Autophagosomes were tested by MDC staining and
fluorescence microscope. Autophagic rate was measured by FCM and the ATP level of cells was measured by ATP assay kit. Results
PPG at high concentration (80 and 160 mg/L) inhibited the proliferation of cells while PPG at low concentration (20 and 40 mg/L) had
no cytotoxicity to cells. Reverse fold of PPG on ADR was 5.31 and 7.51 respectively when PPG was 20 and 40 mg/L, and significantly
increased to 11.84 and 19.25 respectively after adding the autophagic inhibitor 3-MA. The expression of P-gp was not affected by PPG
(20 and 40 mg/L) or 3-MA (5 mmol/L). The fluorescence intensity of ADR was increased (P < 0.01) after treatment with PPG (20 and
40 mg/L) on LoVo/Adr respectively, and after PPG combined with 3-MA, the intensity was further increased. Under fluorescence
microscopy green fluorescence dots were rarely observed in LoVo/ADR cells, and the autophagic rate was (3.17 ± 0.52) %. The green
fluorescence dots (autophagosomes) which distributed in cytoplasm and around the nucleus appeared abundantly in the LoVo/ADR

收稿日期：2013-07-05
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81374019）
作者简介：马 强（1969—），男，医学博士后，副主任医师，主要从事大肠癌疾病基础及临床防治研究工作。
Tel: 13919069328 E-mail: maqiang.45@163.com
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cells after the treatment with PPG (20 and 40 mg/L) and the autophagic rate increased to (45.82 ± 5.47)% and (76.23 ± 8.28)% (P < 0.01),
respectively. The quantity of autophagosomes was more significantly decreased after the treatment with PPG combined with 3-MA than
with PPG alone. The autophagic rates decreased to (24.87 ± 2.43)% and (39.56 ± 4.64)% (P < 0.05), respectively. The ATP level was
(1.92 ± 0.23) nmol/mg in LoVo/Adr cells and declined to (0.97 ± 0.14) and (0.63 ± 0.13) nmol/mg, respectively when PPG was 20 and 40
mg/L. The ATP levels were further declined to (0.58 ± 0.12) and (0.33 ± 0.10) nmol/mg, respectively after the treatment with PPG
combined with 3-MA. Conclusion PPG could induce autophagy and reversing MDR of the LoVo/ADR cells and this character might be
related with decreasing the level of ATP in cells, activating autophagy, and inhibiting the ATP-dependent efflux function of P-gp by PPG.
Autophagic inhibition promotes the reverse efficiency of PPG by decreasing the level of ATP and inhibiting the function of P-gp further.
Key words: phenylpropanoid glycosides; colorectal carcinoma; multidrug resistance; reversing multidrug resistance; autophagy

苯丙素苷（phenylpropanoid glycosides，PPG）
是从我国西北植物马先蒿中提取的化合物，具有
抗病毒、抗血小板凝集、抗氧化、抑制肿瘤生长
活性[1-2]。前期研究[3]发现，高质量浓度（80～160
mg/L）PPG 具有抗肿瘤作用，低质量浓度（20～40
mg/L）PPG 具有逆转大肠癌多药耐药（MDR）的
特性。自噬为新发现的一种细胞死亡形式，与肿瘤
耐药的关系越来越引起人们的关注[4-5]。近期研究表
明一些具有逆转多药耐药作用的化合物如雷帕霉
素，同时可引起肿瘤细胞的自噬现象[6]，但自噬与
药物的逆转特性之间的关系尚不清楚。本实验旨在
观察 PPG 是否诱导大肠癌多药耐药 LoVo/Adr 细胞
发生自噬，以及通过调控细胞自噬观察 PPG 逆转活
性的变化，探讨其发生机制。
1 材料
1.1 药品与试剂
PPG [ 洋丁香苷（acteoside），亦称毛蕊花糖苷
（verbascoside），质量分数＞98% ] 从红纹马先蒿
Pedicularis striata Pall. 中提取得到[7]，由兰州大学
有机化学实验室贾忠建教授分离鉴定并惠赠。
RPMI 1640，Gibco 公司产品；小牛血清，杭州
四季青生物制品研究所；3-甲基腺嘌呤（3-MA）、
单丹磺酰尸胺（MDC）、阿霉素（ADR）、噻唑蓝
（MTT），Sigma 公司产品；P-糖蛋白（P-gp）单克
隆抗体，Santaeruze 公司；ATP 检测试剂盒，上海
碧云天生物技术有限公司。
1.2 细胞
大肠癌耐药株 LoVo/Adr 细胞由本实验室传代
保存；LoVo/Adr 细胞株由本课题组采用阿霉素浓度
递增法，诱导大肠癌 LoVo 细胞株（引自美国
ATCC），历经 8 个月、传代 55 次连续培养，成功
构建[8]。
1.3 仪器
二氧化碳电热温孵箱，日本太阳株式会社；低
温离心机，Dupont 公司；超净工作台，上海阳光
实验仪器有限公司；FACS—420 型流式细胞仪，
美国 Coulter 公司，荧光倒置显微镜，Nikon；
Model680 酶标仪和垂直式电泳仪和湿转装置，美
国 Biorad 公司。
2 方法
2.1 PPG 对 LoVo/Adr 细胞增殖的影响
采用 MTT 法检测质量浓度为 20、40、80、160
mg/L 的 PPG 对 LoVo/Adr 细胞增殖的影响。取对数
生长期的 LoVo/Adr 细胞，用 RPMI 1640 培养基制
备成单细胞悬液，分别接种至 96 孔板（200 μL/孔，
约 1×105/孔），37 ℃、5% CO2 培养箱中培养 24 h
后，加入不同质量浓度的 PPG（设 3 个复孔），再
培养 24 h 后，每孔加入 2 mg/L MTT 20 μL 继续培
养 4 h，弃上清夜，加入二甲基亚砜 150 μL/孔，室
温下，将平板置于微孔板振荡器上充分振荡 5 min，
使结晶物溶解。酶标仪测定每孔的吸光度（A）值。
计算细胞存活率。
存活率＝实验孔 A 值 / 对照孔 A 值
2.2 PPG 对 LoVo/Adr 细胞耐药性的影响
用 PPG 小于 IC10（细胞存活率＞90%）的质量
浓度 20、40 mg/L 进行耐药逆转实验。实验分为对
照组、PPG 20 mg/L 组、PPG 40 mg/L 组、PPG 20
mg/L＋3-MA 组、PPG 40 mg/L＋3-MA 组。细胞接
种及实验步骤同“2.1”项，在加入 ADR 终质量浓
度为 0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、
5.12 mg/L 的 9 个梯度同时加入相应质量浓度的
PPG 及 5 mmol/L 的 3-MA，以药物浓度为横坐标，
细胞存活率为纵坐标绘制质量浓度-效应曲线，确定
ADR 的半数抑制浓度（IC50）和逆转倍数（逆转前
IC50 值/逆转后 IC50 值）。
2.3 Western-blotting 检测 P-gp 的表达
实验分为对照组、PPG 20 mg/L 组、PPG 40
mg/L 组、3-MA（5 mmol/L）组。用 RPMI 1640 培
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养基制备成单细胞悬液，根据分组加入相应终质量
浓度的 PPG 和 3-MA，37 ℃、5% CO2 培养箱中培
养 24 h 后，收集细胞，加入适量裂解液提取蛋白，
用考马斯亮蓝法测定蛋白量，并定量使各组蛋白浓
度一致，上样进行 SDS-PAGE 电泳后，将蛋白转移
至 PVDF 膜上。5%脱脂奶粉封闭一抗，4 ℃孵育过
夜，次日加入二抗孵育 1 h，以 β-actin 作为内参照，
TBST 室温洗膜 5 min 共 3 次，DAB 显色照相。用
Bio-Rad 图像分析系统照相，用 Quantity One 软件
分析，以相应蛋白条带的灰度值/β-actin 蛋白条带
的灰度值表示相对蛋白表达量，实验重复 3 次。
2.4 流式细胞仪测定 ADR 在 LoVo/Adr 细胞中的
摄入
取对数生长期的 LoVo/Adr 细胞，分别在含
ADR（5.0 mg/L）、ADR（5.0 mg/L）＋PPG（20
mg/L）、ADR（5.0 mg/L）＋PPG（40 mg/L）、ADR
（5.0 mg/L）＋PPG（20 mg/L）＋3-MA（5 mmol/L）
和 ADR（5.0 mg/L）＋PPG（40 mg/L）＋3-MA（5
mmol/L）的 RPMI 1640 培养基中孵育 60 min，然后
经胰酶消化，用预冷的磷酸盐缓冲液（PBS）终止
细胞代谢；洗涤后，调整细胞浓度为 2×107/L，立
即用流式细胞仪检测，测定 3 000 个细胞内 ADR 被
激发的相对荧光强度（激发波长 488 nm，发射波长
575 nm），以荧光任意单位表示 ADR 的量，计算机
分析结果。
2.5 PPG 对 LoVo/Adr 细胞自噬的影响
MDC 是一种荧光染料，作为自噬体的示踪剂
可选择性地聚集于细胞自噬囊泡（AVs）中，可以
根据细胞内荧光颗粒的变化来推断自噬的发生，含
点状绿色荧光的细胞即发生自噬的细胞。实验分为
对照组、PPG 20 mg/L 组、PPG 40 mg/L 组、PPG 20
mg/L＋3-MA 组和 PPG 40 mg/L＋3-MA 组，取对数
生长期 LoVo/Adr 细胞，消化后以每孔 6×104 个细
胞加入至 24 孔板（150 μL/孔）中，各组细胞加用
相应药物（3-MA 终浓度为 5 mmol/L）培养 24 h，
胰酶消化，PBS 洗 2 次后，加入 0.1 mmol/L MDC，
37 ℃培养箱孵育 2 h，在荧光显微镜下进行观察和
摄片，荧光显微镜加用 488 nm 发射滤片和 570 nm
阻断滤片。同时上流式细胞仪，以 488 nm 激发波
长测定 3 000个细胞，MDC阳性细胞率为即自噬率，
检测用 Cellquest 软件分析资料。
2.6 细胞内 ATP 水平的测定
实验分为对照组、PPG 20 mg/L 组、PPG 40
mg/L 组、PPG 20 mg/L＋3-MA（5 mmol/L）组和
PPG 40 mg/L＋3-MA（5 mmol/L）组。取对数生长
期细胞，铺 6 孔板，培养 24 h 后向每组细胞加入相
应浓度的药物，作用 48 h 后，吸弃培养液，向 6 孔
板中加入细胞裂解液，裂解后 4 ℃、1 200×g 离心
5～10 min，取上清，根据试剂盒说明书配制标准曲
线及 ATP 检测工作液，加 100 μL ATP 检测工作液
到检测孔内，室温放置 5 min，然后再向检测孔内
加入 50 μL 的样品或者标准品，间隔 2 s 后用酶标
仪测定荧光值。根据标准曲线，计算出样品中 ATP
的浓度。
2.7 数据处理
所有数据以 ±x s 表示，数据采用 SPSS 统计软
件进行方差分析或 t 检验。
3 结果
3.1 PPG 对 LoVo/Adr 细胞增殖的影响
LoVo/Adr 细胞在 PPG 20～160 mg/L 4 个倍增
质量浓度范围内存活率见表 1。PPG 质量浓度为 80、
160 mg/L 时有抑制细胞增殖的作用，且随着剂量增
加，抑制作用增强，具有量效关系。PPG 质量浓度
为 20、40 mg/L 时 LoVo/Adr 细胞存活率均＞90%，
说明此质量浓度对 LoVo/Adr 细胞无明显毒性作用，
选择此质量浓度观察逆转效果。
表 1 PPG 对 LoVo/Adr 细胞存活率的影响 ( ± = 3x s , n )
Table 1 Effect of PPG on survival rate of LoVo/Adr cells
( ± = 3x s , n )
组别 ρ / (mg·L−1) 细胞存活率 / %
对照 — 97.45±4.17
PPG 20 96.12±3.23
40 92.04±3.20
80 67.89±2.87**
160 34.96±2.14**
与对照组比较：**P＜0.01
**P < 0.01 vs control group
3.2 PPG 对 LoVo/Adr 细胞 ADR 耐药性的影响
PPG 可不同程度地降低 ADR 对 LoVo/Adr 细
胞的 IC50 值，PPG 为 20、40 mg/L 时对 ADR 的逆
转倍数分别为 5.24 和 7.51 倍，随着 PPG 剂量增加，
逆转倍数增加。加入自噬特异性抑制剂 3-MA 后，
2 组的逆转倍数分别增至 11.84 和 19.25 倍，说明
抑制自噬可显著提高 PPG 逆转耐药活性。结果见
表 2。
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表 2 PPG 对 LoVo/Adr 细胞耐药性影响 ( ± = 3x s , n )
Table 2 Effects of PPG on drug resistance of LoVo/Adr
cells ( ± = 3x s , n )
组别
ρ /
(mg·L−1)
ADR的 IC50值 /
(mg·L−1)
逆转倍数
对照 — 3.08±0.40 —
PPG 20 0.58±0.13** 5.31
40 0.41±0.10** 7.51
PPG＋3-MA 20 0.26±0.09**∆ 11.84
40 0.16±0.05**# 19.25
与对照组比较：**P＜0.01；与 PPG 20 mg/L 组比较：∆P＜0.05；
与 PPG 40 mg/L 组比较：#P＜0.05
**P < 0.01 vs control group; ∆P < 0.05 vs PPG 20 mg/L group;
#P < 0.05 vs PPG 40 mg/L group
3.3 PPG 对 LoVo/Adr 细胞 P-gp 蛋白表达的影响
当 PPG 的质量浓度为 20、40 mg/L、3-MA 浓
度为 5 mmol/L 时，对 P-gp 蛋白的表达均没有影响，
说明逆转耐药与 P-gp 表达无关，结果见图 1 及表 3。
3.4 PPG 对 LoVo/Adr 细胞摄入 ADR 的影响
20、40 mg/L 的 PPG 作用于 LoVo/Adr 细胞后，
可以显著提高细胞中 ADR 的量（P＜0.05），分别联
合 3-MA 后，ADR 的摄入增加更为显著，说明 PPG
抑制了 P-pg 的外排功能，联合自噬抑制剂后，对
P-gp 的外排功能抑制更为明显。结果见表 4。
3.5 PPG 对 LoVo/Adr 细胞自噬的影响
在荧光显微镜下，对照组 LoVo/Adr 细胞很少


图 1 PPG 对 LoVo/Adr 细胞 P-gp 蛋白表达的影响
Fig. 1 Effect of PPG on protein expression of P-gp
in LoVo/Adr cells
表 3 LoVo/Adr 细胞中 P-gp 表达量 ( ± = 3x s , n )
Table 3 Expression of P-gp in LoVo/Adr cells ( ± = 3x s , n )
组别 ρ / (mg·L−1) P-gp / β-actin
对照 — 0.95±0.15
PPG 20 0.91±0.12
40 0.87±0.13
3-MA 5 mmol·L−1 0.93±0.11
表 4 LoVo/Adr 细胞内 ADR 荧光强度 ( ± = 3 000x s , n )
Table 4 Fluorescence intensity of ADR in LoVo/Adr
cells ( ± = 3 000x s , n )
组别 ρ / (mg·L−1) 荧光强度
ADR 5.0 2.04±0.70
ADR＋PPG 5.0＋20 2.68±0.93*
5.0＋40 2.89±1.01*
ADR＋PPG＋3-MA 5.0＋20＋5 mmol·L−1 3.42±1.07*∆
5.0＋40＋5 mmol·L−1 3.67±1.14*#
与 ADR 组比较：*P＜0.05；与 PPG 20 mg/L 组比较：∆P＜0.05；
与 PPG 40 mg/L 组比较：#P＜0.05
*P < 0.05 vs control group; ∆P < 0.05 vs PPG 20 mg/L group;
#P < 0.05 vs PPG 40 mg/L group
或几乎没有点状绿色荧光分布，PPG 20、40 mg/L
组均可看到 LoVo/Adr 细胞中点状绿色荧光即自噬
体分布于胞浆及核周，说明 PPG 可诱导细胞自噬；
当 3-MA 与 PPG 合用时，自噬泡的数量较 PPG 组
减少，说明 3-MA 在一定程度上能够抑制 PPG 诱
导的细胞自噬，结果见图 2。通过流式细胞仪对各
组细胞自噬率进行定量分析，结果与荧光显微镜下
观察基本一致：对照组 LoVo/Adr 细胞自噬率很低，
仅为（3.17±0.52）%，PPG 20、40 mg/L 组自噬率
分别为（45.82±5.47）%和（76.23±8.28）%，均
较对照组显著增高（P＜0.01），PPG 联合 3-MA 后，
相应各组的自噬率降低至（24.87±2.43）%和
（39.56±4.64）%（P＜0.01），说明 PPG 可诱导细
胞发生自噬，自噬抑制剂 3-MA 可抑制 PPG 诱导
的自噬现象。
3.6 PPG 对 LoVo/Adr 细胞内 ATP 水平的影响
对照组 LoVo/Adr 细胞中 ATP 的浓度为（1.92±
0.23）nmol/mg，20、40 mg/L PPG 作用 24 h 后，细
胞内 ATP 的水平分别下降至（0.97±0.14）、（0.63±
0.13）nmol/mg（P＜0.05），当联合 3-MA 阻断 PPG
引起的自噬作用后，细胞内 ATP 水平进一步降低，
分别降低至（0.58±0.12）、（0.33±0.10）nmol/mg
（P＜0.05）。
4 讨论
化疗是大肠癌治疗的主要手段之一，而多药耐
药（MDR）的产生则是化疗中最大的难点，寻找高
效、毒副作用小的 MDR 的逆转剂具有十分重要的
意义。马先蒿在我国西北称“土人参”，具有活血、
健脾胃、安神益气等功效，PPG 为从中分离的天然
产物，前期研究发现 PPG 具有逆转大肠癌 MDR 的

P-gp



β-actin
对照 PPG 20 mg·L−1 PPG 40 mg·L−1 3-MA
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图 2 荧光显微镜下观察细胞自噬体形成
Fig. 2 Fluorescence microscopy of formation of autophagosomes in cells
特性。本实验结果也表明 20、40 mg/L PPG 具有逆
转 LoVo/Adr 细胞对 ADR 的耐药性。
P-gp 是耐药细胞膜上过度表达的一种跨膜大
分子糖蛋白，由 mdr1 基因编码，相对分子质量为
170 000，主要功能是在细胞膜上形成一个通道，水
解 ATP 获得能量，将已进入胞内的药物泵出胞外，
使细胞内药物浓度降低，免遭化疗药物的杀伤[9-10]。
本研究结果表明，PPG 作用于大肠癌耐药
LoVo/Adr 细胞后，并未改变 P-gp 蛋白的表达，说
明 PPG 不是通过降低 P-gp 的表达而逆转耐药。进
一步观察 PPG 对耐药细胞中 ADR 摄入的影响，发
现 PPG 可引起 ADR 在耐药细胞中的明显蓄积，并
且呈浓度依赖性。本研究证实 PPG 逆转耐药不是通
过抑制 P-gp 的表达，而是抑制 P-gp 的外泵功能，
导致药物在细胞内蓄积发挥逆转作用。
PPG 除了具有逆转 MDR 的活性外，本研究结
果表明，当 PPG 质量浓度为 20～40 mg/L 时并未引
起大肠癌 LoVo/Adr 细胞的死亡，而是在荧光显微
镜下观察到细胞出现大量的自噬小体，说明 PPG 诱
导了细胞自噬现象。细胞自噬过程是细胞在遇到应
激时，将细胞质内多余的蛋白和细胞器隔离到自噬
体中并与溶酶体结合降解过程，一方面通过自噬降
解自身的物质，清除损伤的大分子和细胞器，为细
胞提供能量，促进细胞生存；另一方面当细胞面对
过多的应激而产生过强的自噬作用时，导致细胞死
亡即自噬性死亡[11]。根据本研究结果初步推测 PPG
诱导细胞自噬的意义在于促使细胞在细胞毒性药物
应激状态下存活，对细胞起到保护作用。
PPG 诱导的细胞自噬与 PPG 逆转耐药活性之间
的关系是本研究的主要研究目的之一，用自噬特异
抑制剂 3-MA[12]抑制耐药细胞自噬后，发现 PPG 逆
转活性明显增强，耐药细胞死亡显著增多，与国外
文献报道一致[13]。进一步说明 PPG 诱导的自噬对肿
瘤细胞起到了保护作用，降低了 PPG 的逆转作用。
P-gp 蛋白把化疗药物泵出细胞的过程中需要
降解细胞内 ATP，给自身提供能量，进一步测定了
细胞内 ATP 水平，结果发现，PPG 可引起 LoVo/Adr
细胞内的 ATP 水平降低。一方面细胞内 ATP 水平
下降，可诱导自噬发生，细胞通过自噬体包裹细胞
浆成分或者细胞器在溶酶体作用下进行降解，通过
降解氨基酸、游离脂肪酸等合成 ATP 提供能量；另
一方面细胞内 ATP 水平下降，可导致 ATP 依赖性
P-gp 的外泵功能抑制，这可能是 PPG 同时引起自噬
和逆转耐药的原因。当 PPG 诱导的自噬被抑制后，



对照 PPG 20 mg·L−1 PPG 40 mg·L−1
PPG 20 mg·L−1＋3-MA PPG 40 mg·L−1＋3-MA
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细胞内 ATP 的水平进一步降低，加重抑制 P-gp 外
排功能，从而使 PPG 逆转活性进一步提高。PPG 降
低细胞内 ATP 水平机制尚不清楚，需进一步探讨。
综上所述，PPG 具有诱导 LoVo/Adr 细胞自噬
和逆转耐药的特性，抑制自噬可导致细胞内 ATP 水
平进一步降低，加重抑制 P-gp 功能，提高 PPG 的
逆转活性。
参考文献
[1] 李 忌, 郑 耘, 郑荣梁, 等. 苯丙素甙化合物的抗瘤
活性 [J]. 中国药学杂志, 1995, 30(5): 269-270.
[2] 刘 婕, 许 浚, 张铁军. 苯丙素苷类化合物防治神经
退行性疾病的研究进展 [J]. 药物评价研究 , 2009,
32(1): 62-66.
[3] 马 强, 张方信, 吕志诚. 苯丙素甙化合物逆转大肠癌
LoVo/Adr 细胞多药耐药性 [J]. 第四军医大学学报,
2009, 30(22): 1569-1571.
[4] Kong D, Ma S, Liang B, et al. The different regulatory
effects of p53 status on multidrug resistance are
determined by autophagy in ovarian cancer cells [J].
Biomed Pharmacother, 2012, 66(4): 271-278.
[5] Bristol M L, Emery S M, Maycotte P, et al. Autophagy
inhibition for chemosensitization and radiosensitization in
cancer: do the preclinical data support this therapeutic
strategy? [J]. Pharmacol Exp Ther, 2013, 344(3):
544-552.
[6] Zaytseva Y Y, Valentino J D, Gulhati P, et al. mTOR
inhibitors in cancer therapy [J]. Cancer Lett, 2012,
319(1): 1-7.
[7] 康金国, 贾忠建. 藓生马先蒿化学成分研究 [J]. 兰州
大学学报: 自然科学版, 1997, 33(1): 71-76.
[8] 马 强, 张振书, 张亚历, 等. 结肠癌细胞多药耐药模
型 LoVo/Adr 的建立及其耐药相关基因的表达 [J]. 中
华消化杂志, 2002, 22(7): 412-415.
[9] Sharom F J. The P-glycoprotein multidrug transporter [J].
Essays Biochem, 2011, 50(1): 161-178.
[10] Breier A, Gibalova L, Seres M, et al. New insight into
p-glycoprotein as a drug target [J]. Anticancer Agents
Med Chem, 2013, 13(1): 159-170.
[11] Choi A M, Ryter S W, Levine B, Autophagy in human
health and disease [J]. N Engl J Med, 2013, 368(7):
651-662.
[12] Kimmelman A C. The dynamic nature of autophagy in
cancer [J]. Genes Dev, 2011, 25(19): 1999-2010.
[13] Ahn J H, Lee M. Suppression of autophagy sensitizes
multidrug resistant cells towards Src tyrosine kinase
specific inhibitor PP2 [J]. Cancer Lett, 2011, 310(2):
188-197.