全 文 ：黄芩汤及其代谢产物抗菌作用的比较研究
严梅桢 o左 风 o宋红月 o叶文华 o周钟鸣
k中国中医研究院 中药研究所 o北京 tsszssl
≈摘要  目的 }比较黄芩汤及其肠道菌代谢产物的抗菌作用 ∀方法 }分别用死亡保护法和琼脂稀释法进行体
内外抗菌试验 ∀结果 }黄芩汤及其代谢产物对所有试验菌均有体外抗菌作用 o而黄芩汤代谢产物对沙门氏菌 !痢疾
杆菌和变形杆菌的体外抗菌作用均明显强于黄芩汤 ∀黄芩汤代谢产物对分别由金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染
引起的伪无菌小鼠死亡有明显保护作用 o而黄芩汤对由该两种菌引起的伪无菌小鼠死亡均无明显保护作用 ∀结
论 }黄芩汤代谢产物的体内外抗菌作用均强于黄芩汤 o这表明肠道菌在黄芩汤的抗菌作用中起到了重要的作用 ∀
≈关键词  黄芩汤 ~代谢产物 ~肠道菌群 ~抗菌作用
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsv2suwv2sw
在人体肠道内栖居着大量细菌 o其中 || h为厌
氧菌 ∀中药经口服后 o在消化道中必然与肠道内菌
群接触 ∀大量文献报道 o消化道对药物中糖苷吸收
较差 o必需经肠道菌水解为相应的糖苷元才能被吸
收 ∀黄芩汤为5伤寒论6中的经典方剂 o具有清热止
痢 !缓急止痛等功效 ∀黄芩汤的主要成分为黄芩苷 !
芍药苷和甘草酸 o据文献报道≈t2v  o这 v种成分经相
应肠道菌作用发生代谢转化后 o才能被吸收发挥药
理作用 ∀为阐明黄芩汤的药理活性与肠道菌代谢作
用的相关性 o本文进行了黄芩汤及其肠道菌代谢产
物对引起腹泻有关致病菌抗菌作用的比较研究 ∀
1 实验材料
1 q1 动物 昆明种雄性动物 o购自北京大学医学部
实验动物中心 ∀
1 q2 药品 硫酸庆大霉素注射液由烟台第二制药
厂生产 o批号 ||stswy ~青霉素钠和青霉素 Š钾片为
华北制药股份有限公司产品 o批号分别为 |{sztu{
和 ssswu{ ~罗红霉素片由沈阳埃默药业有限公司生
产 o批号 }sssvtt ~头孢氨苄片由北京生物化学制药
厂生产 o批号 }ussstuu|t ~吡呱酸片为北京市曙光制
药厂产品 o批号 }sssxtz ~制霉素片由广东石歧制药
厂生产 o批号 }||syu{ ∀
1 q3 药物的制备
≈收稿日期  usst2s|2tt
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目kv|zzs|twl
≈通讯作者  ר¯ }kstslywstwwtt2u|{t ƒ¤¬}ywstv||y
∞2°¤¬¯}½«²∏½° ƒ uyv q±¨ ·
1 q3 q1 黄芩汤水煎液 黄芩汤由黄芩 | ªo芍药 !甘
草和大枣各 y ª组成 ∀头煎加水为药材总重量的 tx
倍体积 o煎煮 t qx «o药液趁热过滤 ~二煎加水为 ts
倍体积 o煎煮 t «o将两次滤液合并后浓缩至每毫升
含 tª生药的药液 o置 w ε 冰箱中待用 ∀
1 q3 q2 黄芩汤肠道菌代谢产物 取健康人新鲜粪
便 v ªo立即加到 tss °普通厌氧培养基kŠ„  l
中 o充分搅拌后用 v层纱布过滤 o将上清液置于 vz
ε 厌氧培养 uw «o再将每 t °含 t ª生药的黄芩汤
以 tΒw比例加到粪便悬液中 o继续在 vz ε 厌氧培养
uw «∀培养结束后 o将混合物离心 o取上清液浓缩成
膏状 o然后用 zs h甲醇充分溶解 ov sss µ# °¬±p t离
心 ts °¬±取出上清液 o再浓缩至实验所需体积 o即
为黄芩汤肠道菌代谢产物 o置 w ε 冰箱中待用 ∀
1 q4 培养基 Š„  培养基购自北京市明新生物技
术研究所 ~胰酶消化大豆胨肉汤k×≥…l为英国 ’÷2
’Œ⁄产品 ~营养琼脂为北京市海淀区微生物培养基
制品厂产品 ∀
1 q5 试验菌株 本实验采用与肠道感染有关的细
菌 o包括金黄色葡萄球菌 !沙门氏菌 !痢疾杆菌 !大肠
杆菌 !绿脓杆菌和变形杆菌 o共计 y种菌 xs株临床
分离菌 ∀菌株均由北京大学第一医院细菌室鉴定并
提供 ∀菌株保存在普通营养琼脂斜面上 o试验前将
各菌分别接种于斜面培养基上 o培养 uw «后制成菌
液供试验用 ∀
2 方法和结果
2 q1 体外抗菌作用 试验采用琼脂稀释法≈w  ∀将
黄芩汤水煎液和黄芩汤代谢产物分别加在已融化的
#vwu#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qv
¤µqoussv
琼脂培养基中作系列稀释 o倾注成含不同药物浓度
的平板培养基 ∀用比浊度的方法 o将菌株用酵母稀
释液稀释至麦氏 t号标准管的 tru o再用酵母水按不
同菌种作进一步稀释 o将稀释好的菌液分别点种于
不同浓度的平板培养基上 o每点 ts ˏ∀同时设不加
药液和只含有庆大霉素的琼脂培养基分别作为细菌
生长对照和阳性药物对照 ∀将接种试验菌液后的平
板置于 vz ε 培养箱内 ouw «后观察结果 o记录各菌
株在不同药物浓度培养基上的生长情况 ∀该药物抑
制细菌生长的最低浓度即为最小抑菌浓度 ∀本实验
采用最小抑菌浓度k Œ≤l表示试验药物的抑菌强
度 ∀
结果表明k见表 tl o黄芩汤及其肠道菌代谢产
物对肠道致病菌沙门氏菌 !痢疾杆菌 !大肠杆菌 !金
葡球菌 !绿脓杆菌和变形杆菌共 y种 xs株临床分离
菌 o均有不同程度的体外抑菌作用 ∀但黄芩汤肠道
菌代谢产物对沙门氏菌 !痢疾杆菌和变形杆菌的
Œ≤ 均明显小于黄芩汤 ∀这表明黄芩汤代谢产物对
这 v种菌的体外抗菌作用均明显强于黄芩汤 ∀
2 q2 体内抗菌试验 采用动物死亡保护法进行体
内抗菌试验≈x  ∀
表 t 黄芩汤及其代谢产物的体外抑菌作用
试验菌株
菌株
数
细菌
对照
庆大霉
素对照
Œ≤ 几何均值rª#p t
黄芩汤 代谢产物
金黄色葡萄球菌 ts n p u qut t qts
大肠杆菌 ts n p v q{x u qut
沙门氏菌 ts n p v q{x t qvy
痢疾杆菌 ts n p v qtv s q{|
绿脓杆菌 x n p u qzu t qvy
变形杆菌 x n p t qsx s qv|
注 }/ n 0细菌生长 ~/ p 0细菌未生长
2 q2 q1 伪无菌动物的制备≈y  用脱污染方法建立
伪无菌动物 ∀将 tw ∗ tx ª雄性健康小鼠连续 v §灌
喂多种抗生素混合液 ∀该混合液由青霉素 ∂ 钾kyzs
°ª#®ªp tl !头孢氨苄kyzs °ª#®ªp tl !罗红霉素kww
°ª#®ªp tl !吡呱酸kyzs °ª#®ªp tl和制霉素kvvx °ª
#®ªp tl组成 ∀于停用抗生素后的第 t天和第 z天 o
分别取出一部分小鼠进行肠道菌群和代谢产物的分
析 ∀整个实验过程中 o动物饲养在无菌环境中 o水 !
饲料和垫料均经高压灭菌 ∀经肠道菌群分析表明 o
停药后第 t天和第 z天 o小鼠肠道内与黄芩汤代谢
有关的双歧杆菌 !乳杆菌和真杆菌已被消除 ∀并用
化学分析手段也没有检测到由这 v种菌对黄芩汤代
谢作用所产生的代谢产物 ∀这种小鼠称/伪无菌小
鼠0 ∀在以下体内抗菌试验中 o均以伪无菌小鼠为试
验动物 ∀
2 q2 q2 将伪无菌小鼠按体重随机分为空白对照组 !
黄芩汤 v个剂量组kx ots ous ª#®ªp tl !黄芩汤代谢
产物 v个剂量组kx ots ous ª#®ªp tl和阳性药物对照
组k青霉素或庆大霉素l共计 {组 o每组 us只小鼠 ∀
阳性对照药青霉素以 ux ≅ tsw ˜#®ªp t剂量肌肉注射
给药 o庆大霉素按 { ≅ tsw ˜#®ªp t剂量肌肉注射给
药 o均相当于人临床用药量的 us倍 ot天给药 u次 o
上下午各 t次 ∀感染前 w{ «动物灌胃给药 o连续给
药 x §o空白对照组动物每日灌喂与药液同体积的蒸
馏水 ∀阳性药物组动物感染后半小时开始给药 o连
续给药 v §∀
2 q2 q3 感染菌液的制备 取金黄色葡萄球菌或大
肠杆菌培养物 o接种于 u °×≥…中 ovz ε 培养 z «o
取 z «培养物 s qt °转种 ts °×≥…中 o继续培养
tz «o将上述 z ∗ tz «培养物用 x h干酵母粉悬液根
据预试验作适当稀释 o以引起 |s h ∗ tss h感染动
物死亡的最低感染量为感染菌液的浓度 o将此菌液
腹腔感染小鼠 ∀
2 q2 q4 感染动物 将上述金葡球菌或大肠杆菌的
菌悬液分别腹腔注入小鼠 o每鼠 s qx °o感染后连
续观察 z §o并记录动物发病及死亡结果 o计算各组
动物死亡率 o用简化直接概率法统计各用药组与对
照组间的差异性 ∀
从表 u和 v可知 o分别感染金黄色葡萄球菌和
大肠杆菌的小鼠服用黄芩汤水煎液后 o其死亡率和
对照组小鼠相比没有显著性差异 ∀而当黄芩汤肠道
菌代谢产物以 us ª#®ªp t剂量灌喂小鼠时 o对腹腔感
染金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的小鼠均有明显的保
护作用 o其死亡保护率分别为 vs h和 vx h ∀结果证
实 o黄芩汤对由金葡菌和大肠杆菌腹腔感染引起的
小鼠死亡没有明显的保护作用 o而黄芩汤经肠道菌
群作用后的代谢产物对由以上两种菌分别引起的小
鼠死亡均具有明显的保护作用 ∀
3 讨论
国内外大量文献报道了肠道菌对中药主要成分
代谢的作用 o已经发现在机体肠道内的大量细菌 o在
其生命活动过程中能产生许多代谢药物的酶 o经酶
的作用后产生的代谢产物可能增强药物的药理活
性 o或可能增强药物的毒性作用 ∀许多药物吸收以
#wwu#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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¤µqoussv
表 u 黄芩汤及其代谢产物对
金黄色葡萄球菌感染小鼠的死亡保护作用
组别
剂量
rª#®ªp t
动物
数
动物
死亡数
死亡保护
百分率
对照组 p us us s
青霉素组 uxtl us tvl |x
黄芩汤 x us us s
ts us us s
us us us s
黄芩汤代谢产物 x us us s
ts us t| x
us us wul vs
注 }tl剂量单位为 ≅ tsw ˜#®ªp t 与对照组比较 ul Π  s .sx
v) Π s qsstk表 u同l
表 v 黄芩汤及其代谢产物对大肠杆菌感染小鼠的死亡保护作用
组别
剂量
rª#®ªp t
动物
数
动物
死亡数
死亡保护
百分率
对照组 p us us s
庆大霉素组 {tl us svl tss
黄芩汤 x us us s
ts us us s
s us us s
黄芩汤代谢产物 x us us s
ts us t| s
us us tvwl vx
注 }wl与对照组比较 Π s qst
后在肝内转化为葡萄糖醛酸并随胆汁进入肠内 o这
类化合物需经肠道中葡萄糖醛酸苷酶水解后 o才能
由肠壁再次吸收进入血液循环 o形成所谓的/肝肠循
环0 ∀综上所述肠道菌在药物的代谢中所起作用的
重要性是显而易见的 ∀
抗菌试验研究证实 o黄芩汤及其肠道菌代谢产
物对所试验的 xs株肠道致病菌均有体外抑菌作用 o
但黄芩汤肠道菌代谢产物对沙门氏菌 !痢疾杆菌和
变形杆菌的体外抗菌作用明显强于黄芩汤 o对金葡
球菌 !绿脓杆菌和大肠杆菌的抑菌作用有增强的趋
势 ∀这表明黄芩汤经肠道菌代谢以后的产物能增强
其对所试验的肠道致病菌的体外抗菌活性 ∀又黄芩
汤对腹腔感染金葡球菌 !大肠杆菌引起的伪无菌小
鼠死亡没有保护作用 o而黄芩汤肠道菌代谢产物对
由该两种菌引起的伪无菌小鼠的死亡有明显的保护
作用 ∀由于伪无菌小鼠肠道内没有能代谢黄芩汤的
细菌 o故它没有使药物代谢转化的能力 o黄芩汤对这
种动物由细菌感染引起的死亡无保护作用 o而黄芩
汤经肠道菌作用产生的代谢产物 o对由相同细菌感
染引起的伪无菌动物的死亡具有明显的保护作用 ∀
这表明黄芩汤必需经相应肠道菌转化后 o所产生的
代谢产物才能发挥其抗菌作用 o本文的研究表明 o肠
道菌在黄芩汤的代谢中起了重要的作用 ∀
研究肠道内厌氧菌对中药代谢作用对药物的研
究和发展很重要 o对于阐明传统中药的作用机理有
十分重要的意义 o同时也为中药新药的开发开辟了
一个新的领域 ∀目前引起国内外许多学者的注意 o
已有许多研究者投入到了这一领域的研究之中 ∀
≈参考文献 
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Χοµ παρατιϖε Στυδψ ον Αντιβαχτεριαλ Εφφεχτσ οφ Ηυανγθιν2Τανγ ανδ
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¦²°³¤µ¨ ·«¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ©¨©¨ ¦·¶²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª º¬«·¬·¶° ·¨¤¥²¯¬·¨¶³µ²§∏¦¨§¥¼¬±·¨¶·¬±¤¯ ©¯²µ¤q
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第 u{卷第 v期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Μετηοδ : × «¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ·¨¶·¶ιν ϖιτρο ¤±§ ιν ϖιϖο º µ¨¨ ³¨µ©²µ° §¨¥¼ ¤ª¤µ§¬¯∏·¬²± ° ·¨«²§¤±§¯¨·«¤¯ ³µ²·¨¦·¬²± ²©¤±¬°¤¯ µ¨¶³¨ ¦2
·¬√¨¯¼ q Ρεσυλτ : ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª¤±§¬·¶° ·¨¤¥²¯¬·¨¶«¤§¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬²± ²± ¥¤¦·¨µ¬¤ ιν ϖιτρο o«²º √¨ µ¨·«¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬√¬·¼ ²©
° ·¨¤¥²¯¬·¨¶²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª ²± ≥¤¯ °²°¨¯ ¤¯o ⁄¼¶¨±·¨µ¼ ¥¤¦¬¯¯∏¶¤±§ °µ²·¨∏¶ ιν ϖιτρο º¤¶¶·µ²±ª¨µ·«¤± ‹∏¤±ª´¬±2פ±ªq ׫¨
° ·¨¤¥²¯¬·¨¶²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª«¤§³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨ ¦·²±·«¨ ¤±¬°¤¯¶¬±©¨ ¦·¨§¥¼ ≥·¤³«¼¯ ²¦²¦¦∏¶¤∏µ¨∏¶¤±§∞¶¦«¨µ¬¦«¬¤¦²¯¬µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼
©µ²° §¨¤·«o¥∏·‹∏¤±ª´¬±2פ±ª «¤§±² ¯¨·«¤¯ ³µ²·¨¦·¬²± ¤¦·¬²±q Χονχλυσιον : × «¨ ¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ©¨©¨ ¦·¶²© ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶²© ‹∏¤±ª´¬±2
פ±ª ιν ϖιτρο ¤±§ ιν ϖιϖο ¤µ¨ ¶·µ²±ª¨µ·«¤±·«¤·²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª o º«¬¦«¶«²º¶·«¤·¬±·¨¶·¬±¤¯ ©¯²µ¤³¯¤¼ ¤√ µ¨¼¬°³²µ·¤±·µ²¯¨¬±
¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ©¨©¨ ¦·¶²© ‹∏¤±ª´¬±2פ±ªq
[ Κεψ ωορδσ] ‹∏¤±ª´¬±2פ±ª~ ° ·¨¤¥²¯¬·¨¶~¬±·¨¶·¬±¤¯ ©¯²µ¤~¤±·¬¥¤¦·¨µ¬¤¯ ¤¦·¬√¬·¼
≈责任编辑 方文贤 
大黄多糖对 × ‘…≥ 诱导大鼠结肠炎的治疗作用
刘 莉 o梅其炳 o周四元 o韩凤华 o龙 铟 o刘家云 o
李 晨 o孟静茹 o王志鹏
k第四军医大学 药理教研室 o陕西 西安 ztssvul
≈摘要  目的 }探讨大黄多糖k×  °l对 u ow oy2三硝基苯磺酸k× ‘…≥l诱导大鼠结肠炎的治疗作用 ∀方法 }采
用大黄多糖组分k×  °2tl治疗 × ‘…≥ 诱导的大鼠结肠炎 o以地塞米松k⁄÷l为阳性药 ∀每天 t 次 o共 x §o给药结束
后 o尾静脉采血行白细胞计数并分类 o在乙醚麻醉下腹主动脉采血 o并处死动物取结肠 o画取结肠的溃疡面积 o结肠
称重 o分离肠黏膜以测定 ≥’⁄o  °’ 活性 ~胸腺 !脾脏称重 ∀结果 }×  °2t 能明显降低结肠炎大鼠的死亡率 o减轻
结肠重量 o缩小溃疡面积 o对抗脾脏肿大和胸腺萎缩 ~降低  °’ 活性 o升高 ≥’⁄水平 o与 ⁄÷ 相比 o其疗效无显著差
异 o也没有 ⁄÷ 的免疫抑制副作用 ∀结论 }×  °2t 对 × ‘…≥ 诱导的大鼠结肠炎呈现出良好的治疗效果 o其机制可能
与抗炎和免疫调节有关 ~×  ° 可能是大黄治疗溃疡性结肠炎的有效成分之一 ∀
≈关键词  u ow oy 三硝基苯磺酸 ~结肠炎 ~唐古特大黄多糖 ~地塞米松
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsv2suwy2sw
溃疡性结肠炎k˜≤l是一组与免疫系统有关的
自身免疫性疾病 o由于其发病机制未阐明 o目前尚无
特异性的治疗方法 ∀临床常用糖皮质激素和 x2氨基
水杨酸类药物治疗溃疡性结肠炎 o但因其副作用较
多 o限制了长期使用 ∀据报道 o中医中药治疗 ˜≤ 具
有较好的疗效 o以中药大黄为主药的复方治疗 ˜≤
有效率可达 |w q{ h ≈t  ∀大黄多糖是中药大黄的水
溶性主要成分之一 o本实验室研究发现 o大黄多糖具
有对抗化学性肝损伤以及抗氧化损伤的作用≈u ov  o
是否也具有 ˜≤ 治疗作用 o尚未见报道 ∀本实验将
×  °2t 用于 × ‘…≥ 诱导的大鼠实验性结肠炎的治
≈收稿日期  ussu2su2uz
≈基金项目  国家自然科学基金资助项目k批准号 vstssvu|l
≈通讯作者  刘 莉 ר¯ }ksu|lvvzwxxx ƒ¤¬}ksu|lvvzwxxu
∞2°¤¬¯}° ¬¨­¬¤­¬¤ƒ tyv q±¨ ·
疗 o以期探讨大黄治疗 ˜≤ 的有效成分和作用机理 ∀
1 材料和方法
1 q1 药品和动物 二级 ≥⁄雄性大鼠 o体重 uus ∗
uxs ªo由本校实验动物中心提供 ∀×  °2t 由本实验
室自行提取 o经硫酸2苯酚法测得糖含量为 |z qw h o
硫酸2咔唑法测糖醛酸含量为 uz qx h o分子量范围为
y ≅ tsx ∗ { ≅ tsx ~⁄÷ 购于天津药业公司 ~ × ‘…≥ 购
于 ≥¬ª°¤~十六烷基三甲基溴化胺 !邻联二茴香胺购
于 ƒ ∏¯®¤~≥’⁄试剂盒购于南京建成 ∀
1 q2 模型复制及动物分组 大鼠 zu只 o随机分为 y
组 o每组 tu 只 o即正常对照组 o模型组 o×  °2t tss o
uss owss °ª#®ªp t和 ⁄÷ 组 ∀大鼠禁食 uw «o乙醚
麻醉 o除生理盐水组外 o用 × ‘…≥和 ws h 乙醇灌肠 o
复制实验性结肠炎模型≈w  o造模 y «后 o分别给予生
理盐水 o×  °2t 和 ⁄÷ ∀给药第 x 天 o尾静脉取血行
#ywu#
第 u{卷第 v期
ussv年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qv
¤µqoussv