全 文 ：#药理#
银杏叶提取物对实验小鼠脑缺血的防护作用
汪红仪 王瑜 赵晓宁 张祖暄
k南京大学医学院 南京 utss|vl
缪煜清 k东南大学分子和生物分子电子学实验室 南京 utss|yl
摘要 银杏叶提取物k∞Š¥zytl可明显延长双侧颈总动脉结扎导致的急性脑缺血小鼠的存活时间 o
显著降低小鼠脑缺血再灌期脑组织谷胱甘肽过氧化物酶和钠2钾2„×° 酶活性的抑制 ∀预先给予
∞Š¥zyt可减轻海马缺血再灌后的亚细胞结构损伤 ∀
关键词 银杏叶提取物k∞Š¥zytl 脑缺血 谷胱甘肽过氧化物酶 钠2钾2„×°酶 亚细胞结构损
伤
∞Š¥zyt 是从银杏科植物银杏 k Γινκγο
βιλοβα 1l叶中分离纯化的提取物 o其中主要含
有黄酮糖甙类kª¬±®ª²©¯¤√²± ª¯¼¦²¶¬§¨¶l和萜烯
内酯类 k·¨µ³¨ µ¨ ¤¯¦·²±¨ ¶l 生理活性物质 ∀
∞Š¥zyt具有捕获自由基 o抗脂质过氧化 o拮抗
血小板活化因子k°„ƒl o扩张血管 o降低血管阻
力及增加血流量等多种药理活性≈t  ∀近年国内
外已将 ∞Š¥zyt制成胶丸 !片剂用于治疗心脑
血管疾病 ∀我们的工作发现 o∞Š¥zyt对兴奋性
毒素引起的脑损伤有防护作用≈u  ∀本文进一步
观察 ∞Š¥zyt对小鼠实验性脑缺血的影响 ∀
1 材料
1 q1 药物及试剂
∞Š¥zytk含总黄酮甙 uw h o总内酯 y h l由
本校医学院药物研究所制备 o以 x h乙醇作溶
剂配制 ∀ x oxχ2二硫代2双2ku 硝基苯甲酸l
k⁄× ‘…lƒ ∏¯®¤产品 ~哇巴因k ∏´¤¥¤¬±l  µ¨¦®产
品 ~三磷酸腺苷二钠k„×°2‘¤ul上海生物化学
研究所产品 ∀其余试剂均为国产分析纯 ∀
1 q2 动物
昆明系小鼠 o体重kux ? ulªo雌雄兼用 o由
南京医科大学实验动物中心提供 ∀
1 q3 仪器
超速冷冻离心机k德国 ²∏¤±公司l ozut型
分光光度计 k上海第三分析仪器厂l o∞2
uss¦¬型透射电镜k日本 ∞’公司l ∀
2 方法和结果
2 q1 小鼠脑缺血后存活时间测定
小鼠按体重均衡随机分为 v组 ∀分别灌胃
k¬ªlx h乙醇 o¬ª∞Š¥zyt xs otss°ª#®ªp t ∀每天
u次 o连续 v天后 o经乙醚麻醉 o分离双侧颈总
动脉并穿线 o线头从颈背皮肤穿出 ∀观察阻断
颈总动脉后的存活时间 ∀以提起线头完全阻断
双侧颈总动脉血流起计时 o至小鼠 ts¶内呼吸 u
次止 o为小鼠缺血后存活时间 o记录各组小鼠的
存活时间 o结果如表 t所示 o可见 ∞Š¥zyt可明
显延长小鼠脑缺血后存活时间 ∀
表 t ∞Š¥zyt对小鼠实验性脑缺血后存活时间的影响
组别 动物数
剂量
°ª#®ªp t
存活时间
°¬±
对照组 tu w1z{ ? t1y
∞Š¥zyt组 ts xs y1uv ? t1wttl
ts tss |1sy ? t1t|ul
注 } ≠ k ξ ? σ)(下同)  与对照组比较 t) Π  s1sx
u) Π s1sst
2 q2 小鼠实验性脑缺血再灌后酶活性测定
小鼠 ww只随机分为 v组 }假手术组 !缺血
组均¬ªx h乙醇 o∞Š¥zyt组同上处理 ∀末次给
药后按文献方法≈v 制备脑缺血再灌模型 ∀假手
#|yt# 中国中药杂志 t||{年第 uv卷第 v期
术组仅做手术不结扎 o缺血组及 ∞Š¥zyt组结
扎双侧颈总动脉缺血 vs°¬±后再灌流 vs°¬±o
迅速断头取双侧大脑皮层 ∀将取出的皮层置于
冰冷生理盐水中洗去浮血 o制备 u h匀浆 ∀经
vsssµ#°¬±p t及 {sssµ#°¬±p t离心后取上清液 o
用 ⁄× ‘…直接法≈w 测定 Š≥‹2°¬¤¶¨ 活性 ∀另
取匀浆经 vsssµ# °¬±p t离心取上清按实验方
法≈x 测 ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性 ∀以牛血清白蛋
白为标准品 o用 ²ºµ¼法测定各样品中蛋白质
含量 ∀实验数据采用方差分析及 τ检验进行统
计学处理 ∀结果列于表 u ∀从表 u可见 o缺血组
Š≥‹2°¬¤¶¨ 和 ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性明显低于
假手术组 o预先给予 ∞Š¥zyt可明显减轻 Š≥‹2
°¬¤¶¨ 和 ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性的抑制 ∀
表 u ∞Š¥zyt对小鼠脑缺血再灌后大脑皮层
Š≥‹2°¬¤¶¨ 和 ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性的影响
组别 动物数
剂量
°ª#®ªp t
Š≥‹2°¬¤¶¨
˜#°ªp t#°¬±p t
‘¤n2Žn2„×°¤¶¨
±°²¯ p t#°ª#«p t
假手术组 tu z1uu ? t1u{ us1tx ? u1u
缺血组 tu v1y| ? s1{vul |1|v ? t1zzul
∞Š¥zyt
n缺血组 ts xs w1{x ? t1uyu ovl ts1wu ? u1t|ul
ts tss z1u| ? t1wtwl tw1yz ? t1{zt owl
注 }≠与假手术组比较 tl Π s1sx u) Π s1sst  与
缺血组比较 vl Π s1sx w) Π s1sst
213 缺血再灌后亚细胞形态学观察
小鼠预处理同 212 ∀实验处理后迅速取海
马按常规方法制备电镜切片 o在 ∞2uss¦¬型
透射电镜下观察细胞亚显微结构 ∀正常小鼠海
马神经元细胞器形态结构无变化 o线粒体膜及
嵴完整 o核膜清晰 o染色质分布均匀 ∀缺血组细
胞膜模糊 o粗面内质网脱颗粒 o线粒体嵴消失 o
甚至脱基质 !空泡化 o核膜模糊 o核内染色质多
聚集呈块状 o有的核呈分枝状 ∀ ∞Š¥zytktss°ª
#®ªp tl处理后 o亚细胞结构损毁明显改善 o线粒
体膜完整 o嵴清晰可见 o核形正常 o染色质仅少
量聚集k见附图l ∀
3 讨论
本文实验结果显示 o∞Š¥zyt可明显延长小
附图 小鼠缺血再灌后海马超薄切片
„ q示假手术组海马神经元线粒体正常 k ≅
xssssl …q示缺血组海马线粒体嵴消失k…tl
空泡化k…ulk ≅ xssssl ≤ q示 ∞Š¥zytktss°ª#
®ªp tl处理后 o海马线粒体损伤明显减轻 k ≅
xssssl
鼠脑缺血后存活时间 o说明 ∞Š¥zyt 对小鼠脑
缺血具有保护作用 ∀小鼠脑缺血再灌后 o由于
大量自由基产生 o导致膜脂质发生过氧化 o破坏
了膜脂质的代谢和结构 o从而改变酶蛋白的微
环境 ∀另一方面 o自由基也可直接氧化酶蛋白
氨基酸残基 o引起酶蛋白构象改变 o使酶失活 ∀
Š≥‹2°¬¤¶¨ 在细胞浆中直接参与清除 ‹u’u o易
受氧自由基 ’ Αu 攻击而失活 ∀本文结果也证实
了小鼠脑缺血后 oŠ≥‹2°¬¤¶¨ 活性明显低于正
常k Π s1sstl ∀ ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 为细胞膜上
重要的离子泵 o脑缺血再灌后 o离子转运紊乱 o
脑组织水肿 o‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性明显下降 o
细胞发生损伤 ∀受损细胞清除自由基能力进一
步下降 o导致恶性循环 o细胞严重损伤 ∀
从本文结果看 o∞Š¥zytkxs°ª#®ªp tl处理
组的 Š≥‹2°¬¤¶¨ 活性显著高于缺血组 k Π 
s1sxl ∀ ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性与缺血组相比无
显著差异 ∀ ∞Š¥zytktss°ª#®ªp tl处理组的
Š≥‹2°¬¤¶¨ 和 ‘¤n2Žn2„×°¤¶¨ 活性明显高于
缺血组k Π  s1sstl ∀ Š≥‹2°¬¤¶¨ 活性与假手
术组相比无差异 o‘¤n2 Žn2 „×°¤¶¨ 活性仍低
于正常k Π s qsxl ∀说明 ∞Š¥zyt对酶活性的
保护具有剂量依赖性 ∀ ’¼¤°¤等发现 o银杏叶
提取物中的黄酮甙类化合物是 ’ Αu 捕捉剂和
’ Αu 淬灭剂 o参与清除超氧阴离子 o抑制脂质过
氧化反应≈y  ∀本文实验也提示了 ∞Š¥zyt可通
过抑制脂质过氧化反应而保护酶活性 ∀另据林
凌等报道 o∞Š¥zyt可减弱谷氨酸神经毒性作
#szt# 中国中药杂志 t||{年第 uv卷第 v期
用 ∀脑缺血再灌后 o兴奋性氨基酸过度释放 o引
起细胞内 ≤¤u n 超载 o也是细胞受损的原因之
一 ∀ ∞Š¥zyt是否也通过拮抗兴奋性氨基酸毒
性作用减轻细胞损伤 o正在进一步研究 ∀
4 参考文献
t 李新岗等 q国外医学#脑血管疾病分册 ot||x ~vkyl }vts
u 林凌等 q南京大学学报 ot||x ~vtkvl }xtw
v 周敏 q中药药理与临床 ot|{| ~xkxl }uz
w 夏栾明等 q卫生研究 ot|{z ~tykwl }u|
x 徐叔云等 q药理实验方法学 q第二版 q北京 }人民卫生出版
社 ot||t }w||
y ≠¤¶∏² ’¼¤°¤ ·¨¤¯ q…µ¤¬± • ¶¨ot||w ~yvx }tux
t||z2st2sy收稿
啤酒酵母多糖抗病毒作用研究
李凡 石艳春 关显智 张绍伦
k白求恩医科大学 长春 tvssutl
田同春 k山西临汾卫校 临汾 swtsssl
摘要 采用从酵母泥中提取的酵母多糖对 tv种 • ‘„ 及 ⁄‘„ 病毒在不同种细胞上进行抗病毒作
用研究及机理探讨 ∀结果表明 o酵母多糖具有明显的抗脊髓灰质炎病毒 ¶型 !埃可病毒 y型 !柯萨奇病
毒 „ty o…v o新型肠道病毒 zt型 o水泡性口炎病毒 !腺病毒 ¶型 !单纯疱疹病毒 ´ oµ型的活性 ∀表现为能
显著抑制细胞病变的发生 o使组织培养的细胞得到保护 ∀
关键词 酵母多糖 抗病毒 细胞病变
早在 t{|w年 ≥¤¯®²º¶®¬就开始了从事酵母
多糖的研究 ∀近年来发现酵母多糖具有免疫活
性≈t 和抑制肿瘤生长等作用≈u  ∀本文研究了从
啤酒酵母泥中提取的酵母多糖抗病毒效应 o就
其体外抗病毒作用及其机制进行了初步探讨 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 细胞 人宫颈癌细胞k‹¨¯¤l o小鼠成纤
维细胞k|u|l为本室保存 ∀人羊膜细胞kƒl由
长春生物制品研究所提供 ∀
1 q1 q2 病毒 水泡性口炎病毒k∂ ≥∂ l o仙台病
毒k≥∂ l o柯萨奇病毒 …v k ≤ ∂ …vl o风疹病毒
k• ∂ l o为本室保存 ∀脊髓灰质炎病毒 ¶型k°∂
¶l由北京生物所提供 ∀埃可病毒k∞≤ ‹ ’y ∂ l
由本校流行病教研室提供 ∀腺病毒k„§∂ ¶l来
自本校一院儿科 ∀单纯疱疹病毒 ´ oµ型k‹≥∂
´ oµl牛痘病毒k∂ ∂ l来自本校地方病研究所 ∀
麻疹病毒k  ∂ l为长春生物制品所冻干疫苗 ∀
新型肠道病毒 zt 型k∞zt ∂ l柯萨奇病毒 „ty
k≤ ∂ „tyl由日本仙台国立医院赠 ∀
1 q1 q3 酵母多糖 从啤酒酵母泥中用稀碱提
取出一水溶性多糖 o称啤酒泥酵母多糖
k°²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨¶²© …µ¨ º µ¨¶ ≠ ¤¨¶·°…≠l o由东
北师范大学生物系张翼伸教授惠赠 ∀
1 q1 q4 培养基 Œ ⁄ k美国产品l ∀
1 q1 q5 仪器 国产 ws孔微量培养板 o国产特
制 zut型分光光度计等 ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 细胞的筛选与制备 所用 tv种病毒分
别接种于 ‹¨¯¤o|u|及 ƒ细胞以测定敏感性 o
细胞按常规方法传代 ∀同时制成 u ≅ tsxr °¯ 细
胞悬液 o每孔 s qt °¯ ouw«后形成单层细胞备用 ∀
1 q2 q2 病毒毒力测定 采用 × ≤Œ⁄xs微量
法≈v  o本实验采用不同病毒的tss × ≤Œ⁄xs r
s qt °¯ ∗ uss× ≤Œ⁄xsrs qt °¯ ∀
1 q2 q3 初筛 形成单层的细胞孔弃去培养液 o
加入 °…≠ 作用 uw«o吸出药液加入病毒液 o按一
般病毒吸附时间 o均采用 vz ε 吸附 t«o吸出 o加
入含 °…≠ 的维持液 o置 vz ε x h ≤ ’u恒温箱培
养 w{«∗ |y«o待病毒对照孔病变 7 p 8 o细胞
#tzt# 中国中药杂志 t||{年第 uv卷第 v期