全 文 ：牛至各生长期抗菌成分的分析
郑国华 刘焱文 陈树和 吴和珍 敖冬梅 刘刚
k湖北中医学院 武汉 wvssytl
何国旺 k湖北省黄州市方高坪医院 黄州 wvytssl
摘要 目的 }通过对牛至各个生长期抗菌有效成分挥发油的定性定量分析 o确定牛至的最佳采收
期 ∀方法 }薄层层析及气相色谱法 ∀结果与结论 }牛至的最佳采收期为 z月 o此时挥发油含量为 s qxvv °¯
#tssªo挥发油中百里香酚含量为 s qttzª# °¯ p t ∀
关键词 牛至 挥发油 百里香酚 含量测定 气相色谱
牛至系唇形科牛至属植物牛至 Οριγανυ µ
ϖυλγαρε q的全草 o具有清热 !化湿 !祛暑 !解表 !
理气的功效 ∀从牛至中提取挥发油进行了抗菌
实验 o结果表明 o其对沙门氏菌类 !大肠杆菌类 !
普通变形菌类等 vt种常见致肠炎细菌和福氏
痢疾杆菌 !宋内氏痢疾杆菌等及从临床分离的
tss株痢疾杆菌均有显著的杀菌和抑菌作用 ∀
将牛至按发油制成冲剂用于临床观察治疗细菌
痢疾患者 uss例 o有效率为 |y qw h o治愈率为
|u q{ h o未发现毒副作用 ∀鉴于牛至挥发油的
广谱抗菌作用及其临床效果 o我们对牛至各个
生长期的挥发油及其主要成分百里香酚含量进
行了分析比较 o以便确定该药材的最佳采收季
节 o保证药材的质量 ∀
1 材料与仪器
牛至药材采自湖北省黄冈县 ~百里香酚对
照品购自中国药品生物制品检定所 ~层析用硅
胶为青岛海洋化工厂产品 ~≤2z型气相色
谱仪 o日本岛津公司 o实验所用试剂均为分析
纯 ∀
2 测定方法
2 q1 牛至各个生长期挥发油的含量测定
从 t||w年 x ∗ ts月 o依次于每月 w日采集
牛至药材的地上部分 o晒干 ∀称取各月的牛至
干燥样品 v份 o每份 ussªo将单份药材置烧瓶
中 o照5中国药典6t||x年版一部附录 ÷ ⁄挥发
油测定法k甲法l测定各份样品挥发油含量 o测
定结果见表 t ∀
表 t 牛至各个生长期挥发油含量kt||w年l
药材采集时间
月2日
挥发油含量
°¯ #tssªp t
ΡΣ∆
h
sx2sw s quz{ ? s qsts v qz
sy2sw s quux ? s qssx u qv
sz2sw s qxxv ? s qsuy w q{
s{2sw s qvyv ? s qstv v q{
s|2sw s qvx{ ? s qst{ w qz
ts2sw s qt|{ ? s qssw t qz
注 }ν v ξ ? σ
2 q2 牛至各个生长期挥发油的薄层分析
2 q2 q1 供试品溶液的制备 分别取牛至各个
生长期药材所提取的挥发油适量k约 tss°ªl o
置 u °¯ 容量瓶中 o加乙醚适量溶解 o并定容至刻
度 o摇匀 o备用 ∀从 x ∗ ts月采集的牛至药材提
取挥发油制备的供试品溶液 o依次标明为供试
品 t ∗ y ∀
2 q2 q2 对照品溶液的制备 取百里香酚对照
品适量 o加乙醚制成 t°ª# °¯ p t的溶液 o即得 ∀
2 q2 q3 薄层分析 吸取上述供试品溶液和对
照品溶液各 uΛ¯ o分别点于同一硅胶 薄层析
上 o以氯仿为展开剂 o展开 o取出 o晾干 o喷以
t h香草醛浓硫酸试液 otss ε 烘至斑点显色清
晰 ∀供试品色谱中 o在与对照品色谱相应的位
置上 o显相同的桃红色斑点k©Υ s qwul ∀结果
见图 t ∀
2 q3 牛至各个生长期药材所含挥发油中百里
香酚的含量的气相色谱法测定
#yvx# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 |期
图 t 牛至各生长期挥发油薄层色谱图
t ∗ y1 供试品 z1 百里香酚
2 q3 q1 色谱条件 色谱柱 ≥∞2vs o不锈钢柱
v°° ≅ u° ~柱温 uus ε ~检测器 ƒ⁄~进样口温
度uxs ε o气体流速氮气us °¯ # °¬±p t o氢气
s qx®ª#¦°p t ~空气 s qw®ª#¦°p t ~进样器 }
s qxΛ¯ ∀
2 q3 q2 供试品溶液的制备 取牛至挥发油用
适量乙醚溶解 o加入适量无水硫酸钠 o振摇 o静
置 u«o滤过 o滤渣用少量乙醚洗涤 o合并滤液 o
低温回收乙醚至尽 o得无水挥发油 ∀精密吸取
上述挥发油 s qsv °¯ 置 ux °¯ 量瓶中 o加适量乙
醚溶解 o稀释至刻度 o摇匀 o即得 ∀从 x ∗ ts月
份采集的牛至药材提取的挥发油制备的供试品
溶液 o依次标明为供试品 t ∗ y ∀
2 q3 q3 对照品溶液的制备 精密称取百里香
酚对照品 w°ªo置 ux °¯ 容量瓶中 o加适量惭醚
溶解 o稀释至刻度 o摇匀 o即得对照品溶液 ~精
密吸取百里香酚对照品溶液 x°¯ o置 ts °¯ 容
量瓶中 o加乙醚稀释至刻度 o摇匀 o得百里香酚
对照品溶液
∀
2 q3 q4 线性关系考查 精密吸取百里香酚对
照品溶液 s qux os qx ot ot qx ou °¯ 分别置 u °¯
容量瓶中 o加乙醚稀释至刻度 o摇匀 o配制成每
t °¯ 含百里香酚s qsu os qsw os qs{ os qtu o
s qty°ª的溶液 ~吸取上述溶液各 s qxΛ¯ o注入
气相色谱仪 o测定 ~以浓度k Ξ oΛªl为横坐标 o峰
面积 Ψl为纵坐标 o绘制标准曲线 o百里香酚线
性范围为 s qst ∗ s qs{Λª∀回归方程为 }Ψ
vtsxuw qzy Ξ p tvx| q|{ oρ s q|||z ∀
2 q3 q5 精密度试验 取同一供试品溶液连续
进样 x次 o每次 s qx Λ¯ o得峰面积的 ΡΣ∆ n
s q{u h o表明仪器精密度较好 ∀
2 q3 q6 重现性试验 取本品同一挥发油样品 o
每天一份 o连续 x§o按供试品溶液制法同法制
备 o测定并计算含量 o得挥发油中百里香酚含量
的 ΡΣ∆ u qtv h o表明方法的重现性较好 ∀
2 q3 q7 稳定性试验 取挥发油样品于配制后
s ot ou ov ow ox oy o{«测定 o结果供试品溶液在 {«
内基本稳定 oΡΣ∆ t qyz h ∀
2 q3 q8 加样回收率试验 精密吸取已知含量
的挥发油样品 x 份 o每份 s qsv °¯ o分别置于
ux °¯ 容量瓶中 o再分别精密加入标准品溶液
各 u °¯ o加乙醚定容 o测定 o结果平均回收率 ÷
tst quw h oΡΣ∆ u qs{ h ∀
2 q3 q9 样品含量测定 取牛至各个生长期挥
发油供试品溶液和百里香酚对照品溶液
o在
上述色谱条件下 o每份用微量进样器进样 v次 o
每次 s qxΛ¯ o测定峰面积 o并用外标法计算含量 ∀
所测图谱见图 u o百里香酚含量见表 u ∀
图 u 牛至挥发油各个生长期气相色谱图
s q百里香酚 t ∗ y q供试品 1 乙醚吸收峰
1 百里香酚峰
表 u 各个生长期牛至挥发油中百里香酚含量
药材采集时间
月2日
百里香酚含量
ª# °¯ p t
ΡΣ∆
h
sx2sw s qs{z{ ? s qssuz v qs{
sy2sw s qs{wy ? s qssv| w qzt
sz2sw s qttzv ? s qsstu s q||
s{2sw s qtsws ? s qssuv u qu{
s|2sw s qs|yx ? s qssv| w qtu
ts2sw s qsy{w ? s qsstt t qxv
注 }ν v ξ ? σ
3 讨论
3 q1 从 x ∗ ts月份采集不同生长期牛至挥发
k下转第 xyx页l
#zvx# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 |期
组 t{只 ∀ 组给予 s qu h甘草酸注射液 xs°ª#
®ªp t o¬³~
组给予 s qu h甘草酸注射液 xs°ª#
®ªp t o¬ª~≤ 组为正常对照组 o给予等量 s q| h生
理盐水 o¬ªo连续诱导 t周 ∀于末次给药后 uw«
静注 s qw h甘草酸注射液 xs°ª#®ªp t o间隔 x o
tx ovs oys o|s otxs°¬±o眶后动脉取血 o每个时间
点取 v只小鼠 ∀血液置于肝素抗凝管内 ovsssµ
#°¬±p t离心 ts°¬±o取血浆 p zs ε 保存 ∀用我
们建立的 °≤ 方法≈u o测定血浆中甘草酸浓
度 ∀上述实验重复 v次 ∀
2 q2 数据处理 每组各时间点 v只小鼠 o甘草
酸血浓度取平均值 o用尹忠铭编制的 °2
° 药代动力学程序计算各组药代动力学
有关参数 ∀ ¤µ´∏¤µ§·法自动曲线拟合 otr≤ 权
重 o以一室模型对各组药代动力学参数作统一
处理分析 ∀
3 结果
从表 t可见 o与对照组相比 o甘草酸灌胃组
小鼠 ×tru缩短 yv qx h o≤增加 xy q| h o ≤
减少 xz qx h k Π s qstl ~甘草酸腹腔注射组小
表 t 甘草酸不同给药途径预处理后的小鼠甘草酸药代动力学参数
组别 ×tru °¬± ≤ #®ªp t#°¬±p t °¬±p t ≤ °ª#°¬±p t#p t
对照组 tsv qw ? tv qy s qsstztv ? s qssst{z s qssyzy ? s qssszs wwsxz q{ ? wyvx qx
甘草酸腹腔注射组 |{ qw ? ts q| s qssuttu ? s qsssu{x s qssyxy ? s qssts{ v{zzs qu ? w{ts qx
甘草酸灌胃组 vz qz ? { qutl s qssv|zx ? s qssszxwtl s qst|uz ? s qssuzutl t{zty qy ? u{sz qvtl
注 }ξ ? σ tl Π s .st
鼠的药代动力学参数无明显差异 ∀
4 讨论
虽然近年来研究发现 o甘草酸能诱导小鼠
肝微粒体氧化酶 o使其含量及活性增加 o但甘草
酸是否能诱导其自身代谢 o作者未见报道 ∀本
实验结果表明 o甘草酸确能诱导其自身代谢 o但
该作用与甘草酸的给药途径有关 o甘草酸灌胃
能产生自诱导作用 o腹腔注射无效 ∀
甘草酸口服给药时 o在消化道经细菌及消
化酶作用 o水解成葡萄糖醛酸和甘草次酸 o然后
吸收入门静脉 ∀因此 o口服甘草酸与注射给药
不同 o最终进入血液的是甘草次酸 o而非甘草
酸≈v ∀另外 o文献报道甘草酸诱导小鼠肝微粒
体酶含量增加的实验 o也是用甘草酸灌胃进行
诱导的≈t ∀可见 o小鼠甘草酸代谢自诱导作用
与给药途径有关 o说明甘草次酸可能才是 °2wxs
诱导剂 o其确切机理有待进一步研究 ∀
5 参考文献
t 谭毓治 o陈锦英 o兰小平 o等 1 甘草对小鼠肝药酶的影响 1
中药通报 ot|{y ottktsl }xx
u 张和平 o贺平 o李琳方 o等 1 血液中微量甘草酸的 °≤ 测
定 1 中国医药工业杂志 ot||z ou{k{l }vzv
v 吴锡铭 1 甘草酸铵的药动学和药效学等的研究进展 q药学
通报 ot|{z ouuk{l }ww|
t||{2s|2sz收稿
k上接第 xvz页l
油含量测定结果表明 oz月份牛至药材中挥发
油含量为 s qxxv °¯ #tssªp t o明显高于其他月
份 ∀各个生长期牛至挥发油中所含成分大体一
致 ∀
3 q2 牛至挥发油中百里香酚含量测定结果表
明 oz月份采集的牛至挥发油中百里香酚的含
量最高为 s qttzvª# °¯ p t ∀
3 q3 7 月份正值牛至花叶茂盛的季节 o结合本
文实验结果和民间采集牛至药材的经验 o认为
牛至药材应在当年 z月份采集作为药用 o其质
量最佳 ∀
4 参考文献
t 江苏新医学院 1 中药大辞典k上册l q上海 }上海科学技术
出版社 ot|{y q|w
u 姚茵丽 o陈琴淇 o胡孝国 1 牛至体外抑菌及抗感染作用研
究 1 湖北中医杂志 ot|{x ozkyl }ww
v 刘焱文 o刘本 1 牛至有效部分的剂型和质量标准 1 中草
药 ot|{y otzkzl }tv
w 林清华 o刘焱文 o张楚富 o等 1 牛至挥发油对小鼠特异性免
疫功能的影响 q应用与环境生物学报 ot||z ovktl }zy
x 杨培明 o刘焱文 o王少华 o等 1 牛至冲剂治疗急性菌痢临床
疗效观察 1 湖北中医杂志 ot||s otukvl }tx
y 中国药典 q一部 1t||x1 附录
t|||2sv2uw收稿
#xyx# 中国中药杂志 t|||年第 uw卷第 |期