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柱层析法分离制备冬凌草甲素的新工艺
袁珂 胡润淮 冀春茹
k河南中医学院 郑州 wxsssvl
殷明文
k河南医科大学 郑州 wxssxul
摘要 采用柱层析法分离制备冬凌草甲素 o与原工艺相比 o具有洗脱速度快 o溶剂无毒无污染 o安
全 !价廉 !易得等优点 ∀经重结晶后用薄层扫描法测定含量达 |z1sv h o是一种简便易行的方法 ∀
关键词 柱层析法 冬凌草甲素
冬凌草 Ραβδοσια ρυβεσχενσ k¨°¶¯ ql ¤µ¤
为唇形科香茶菜属植物 o其主要抗癌有效成分
冬凌草甲素k²µ¬§²±¬±l o是一种四环二萜类化合
物 ∀药理实验表明≈t ∗ v o它对体外培养的 ¨¯¤
细胞 o人体食管癌 ts| 细胞及肝癌
∞2zwsu
细胞有明显的细胞毒作用 o对多种移植物性动
物肿瘤如 ∞≤ o≥t{s o°v{{ otuts肝癌及 ≥有
明显抗肿瘤作用 ∀同时冬凌草甲素对食管上皮
增生有轻度抑制作用 ∀对癌前病变发展为癌有
明显的抑制作用 ∀临床上多用于肝癌 !食管癌
及胰腺癌的治疗 o并取得了一定疗效 ∀由于冬
凌草甲素具有很强的抗癌活性 o将其分离出来
制成抗癌新药 o可用于临床 o造福人类 ∀
分离冬凌草甲素的原工艺≈w 为采用乙醚
提取后浓缩至浸膏状 ψ甲醇溶解并用活性炭脱
色 ψ继续浓缩至一定量后与适量硅胶拌匀装于
柱顶进行层析分离 ψ分别以石油醚 !氯仿 !丙酮
依次洗脱 o可得到冬凌草甲素结晶 ∀该工艺中
所用的溶剂乙醚 !甲醇和氯仿均有毒 o且极易挥
发 o价格较高 o洗脱所用的溶剂系统较多 o操作
费时麻烦 ∀且该法仅适合实验室小量制备冬凌
草甲素 o不适合工业化生产 ∀因此 o我们在研究
工业化生产时 o对其分离制备工艺进行了改进 o
现将实验结果报道如下 ∀
1 仪器与试剂
≥2|vst双波长薄层扫描仪k日本岛津l o
微量分析天平k ∞× ×∞ ∞ uws瑞士l o三用
紫外线分析仪k江阴市申港电光仪器厂l o点样
定量毛细管k⁄µ∏°°²±§ ≥¦¬¨±·¬©¬¦≤ ≥l o
°
±型薄层自动铺板器k重庆南岸新力实验
电器厂l ∀
柱层析硅胶ktxs ∗ uss目 o青岛海洋化工
厂粗孔无定形硅胶l ~粉状活性炭 !石油醚 !丙
酮 !甲醇 !氯仿均为分析纯 ∀
原料冬凌草于 t||x年 |月采自河南省济
源太行山区 o由本院标本室王中会副教授鉴定 ∀
冬凌草甲素对照品k含量 |{1wy h l由中国科学
院昆明植物研究所提供 ∀
2 分离制备工艺
211 吸附剂的处理 将一定量柱层析硅胶装
入大瓷盘置于烘箱中 o于 tss ∗ tus ε 活化 u«
后 o取出放置室温即可装柱 ∀
212 装柱与上样 将冬凌草的乙醇提取物k折
合干浸膏 ussªl用适量 |x h乙醇溶解 o加入约
醇提物干浸膏 u倍量k • r • l柱层析硅胶 o再加
入适量 |x h乙醇 o使硅胶全部被乙醇湿润后置
3 河南省科技攻关资助课题k|ywsuxvssl
#{zw# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 {期
水浴上拌炒 o炒至呈干粉状后取出 o晾至室温备
用 ∀
将处理好的柱层析硅胶装入下方垫有药棉
和滤纸的玻璃柱k柱高 txs¦° o直径 {¦°l中
紧 o压上滤纸片及小石块 ∀干浸膏与分离用的
硅胶用量比例为 tΒtsk • r • l ∀
213 洗脱 以一定比例的石油醚2丙酮为洗脱
液 ots ∗ tx °¯ r°¬±的流速进行梯度洗脱 ∀按每
份 xss °¯ 收集 o×≤ 检识≈吸附剂硅胶 2s1v h
≤ ≤2¤o展开剂氯仿2丙酮k{Βul o显色剂 xs h
硫酸乙醇液 至洗脱完全 o相同流份合并 o回收
溶剂 ∀将冬凌草甲素流份合并蒸干后 o加入适
量甲醇热溶放置 o即有冬凌草甲素结晶析出 ∀
214 结晶的处理及重结晶 当冬凌草甲素结
晶析出完全后 o进行减压过滤 o然后用少量甲醇
或丙酮洗涤 ∀将结晶在室温下晾干后置真空干
燥器中 o于 ws ε 真空干燥 v«o称重 o密封于瓶
中 o置普通干燥器中保存 ∀
若要进行重结晶 o可将冬凌草甲素再用适
量甲醇热溶后放置 o随着溶剂的挥发 oo冬凌草
甲素结晶析出 o待结晶完全后 o抽滤 o用少量乙
醚洗涤结晶 o置室温晾干后同上进行真空干燥
后置干燥器中保存 ∀
215 薄层层析分析 取适量冬凌草甲素对照
品及由上述方法得到并经重结晶的冬凌草甲素
样品用甲醇溶解后点于同一硅胶 薄层板上 o
分别以氯仿2丙酮k{Βul及氯仿2甲醇k|Βtlu种
展开系统进行展开 o取出晾干后 o喷以 xs h硫
酸显色 o于 tsx ε 烘烤 x°¬±至斑点清晰 ∀放凉
后置紫外灯kvyx±°l下检查 o结果表明在 u种
展开系统下 o冬凌草甲素样品和对照品都具有
相同的 ©值 o并呈现出同样的亮黄绿色斑点 o
在冬凌草甲素的样品中 o没有杂质斑 ∀
3 含量测定
为了考察新工艺的可靠性 o我们对由上述
方法制备的冬凌草甲素样品进行了含量测定 ∀
311 薄层层析条件及薄层扫描条件 吸附剂
硅胶 2s1v h ≤ ≤¤o搅拌均匀后涂布于
kts¦° ≅ us¦°l玻璃板上 o厚度为 s1x°° o放室
温至干后于 tsx ε 活化 t«后置干燥器中备用 ∀
展开剂氯仿2甲醇k|Βtl o上行展开 o展距 t{¦° ∀
显色剂 xs h硫酸乙醇液 o喷湿润于 tss ε 烘烤
x°¬± 至斑点清晰 o取出放凉后在紫外灯
kvyx±°l下定位 o©值在 s1x左右 ∀
采用反射法双波长锯齿扫描法 o狭缝
s1w¦° ≅ s1w¦° o线性参数 ≥÷ v o灵敏度中等 o
Κ≥ uwy±° oΚ vss±° ∀
312 对照品溶液与样品溶液的制备 精密称
取冬凌草甲素对照品 w1zx°ªo样品 w1|y°ªo分
别置 t °¯ 容量瓶中 o加甲醇溶解并稀释至刻度 o
分别为 w1zx°ªr°¯ 和 w1|y°ªr°¯ ∀
313 线性化范围试验 用定量毛细管吸取上
述对照品溶液 u1s ow1s oy1s o{1s ots1sΛ¯ 点于
同一硅胶 薄层板上 o展开 !取出 !晾干 o喷显
色剂 o烘烤 x°¬±至出现亮黄绿色斑点 ∀放置
vs°¬±后进行扫描测定 ∀以冬凌草甲素量kΛªl
为横坐标 o以斑点峰面积值为纵坐标作图 o得一
不通过原点直线 o求得回归方程 Ψ tyt .yy Ξ
n {{ .uw , ρ s .|||s( ν xl ∀结果表明冬凌草
甲素在 |1x ∗ wz1xΛª内 o与其峰面积值呈良好
的线性关系 ∀
314 含量测定 取上述样品溶液 w oyΛ¯ o点于
同一硅胶 薄层板上 o随行点对照品溶液 w o
yΛ¯ o进行展开 !显色 !扫描 o用外标两点法计算
出样品中冬凌草甲素的含量 o结果见附表 ∀
附表 样品含量测定
点样量
Λª
测得量
Λª
含量
h
ξ
h
ΡΣ∆
h
t|1{w t|1ut |y1{s
t|1{w t|1tv |y1wu |z1sv s1xv
u|1zy u|1sw |z1x{
u|1zy u{1|y |z1vt
注 }ν u
4 讨论
新工艺与原工艺相比 o具有以下几个优点 ∀
411 由于新工艺中吸附剂与醇提物干浸膏用
量比仅为 tsΒt o所以大大节省了硅胶的用量 ∀
412 大大减小了溶剂洗脱系统 o这里仅用 u套
混合溶剂系统 o并且均是以一定比例的石油醚2
丙酮为混合溶剂 ∀因此 o新系统大大缩短了分
#|zw# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 {期
离时间 ∀
413 新工艺中所用的溶剂k工业酒精 !丙酮 !石
油醚l o与原工艺中所用溶剂k乙醚 !甲醇 !氯仿l
相比 o具有无毒 !无污染 !安全 !价廉 !易得 o适合
工业化生产应用的特点 ∀
414 新工艺中若用原料冬凌草全草 x®ª进行
冷浸提取 o则脱色后的干浸膏重约 ussªo经分
离可得到约 tsª冬凌草甲素纯品 ∀因此 o新工
艺的上样量大 o收率高 o可供工业化生产工艺参
考 ∀
5 参考文献
t 河南省医学科学研究所肿瘤药理研究组 1 河南医学院学
报 ot|zx ~tskul }|
u 河南省冬凌草研究协作组 1 河南医学院学报 ot|zy ~tt
kxl }ut
v 王绵英等 1 癌症 ot|{w ~vkul }{w
w 孙汉董等 1 云南植物研究 ot|{{ ~tskvl }vux
t||y ) ts ) tv收稿
数理实验设计在中药制剂研究中的应用
林亚平
k贵阳中医学院 贵阳 xxsssul
在中药制剂研究中 o合理的专业实验设计
和数理实验设计 !正确的数据分析及其应用 o能
够在有效减少实验次数 !节约时间和费用的基
础上 o获得对实验对象的较全面深入的认识 ∀
因此 o以数理实验设计在中药制剂研究中的应
用为考察对象 o作者收集了 t||v年以来 o国内
药学期刊中与中药制剂有关的 t{x篇实验研究
论文 o进行粗略的统计分析 ∀现将结果报告于
下 ∀
1 概况
收集的 t{x篇研究论文 o所涉及的剂型有
片剂 !注射剂 !合剂k口服液剂l !软膏剂 !滴丸
剂 !栓剂 !雾化剂 !气雾剂 !糖浆剂 !袋泡剂 !酒剂
等 tt种 o其实验设计类型和主要研究内容见附
表 ∀
2 单因素设计方法的应用
单因素设计方法是中药制剂研究中应用得
较多的一种方法 o约占采用数理实验设计论文
总数的 xy h ∀单因素设计方法是固定其他因
素 o比较某因素的不同水平对观测指标的影响 o
附表 论文实验设计类型和主要研究内容
实验设计
类型
提取
工艺
成型
工艺
质量
改进
质量
标准
溶出
度
稳定
性
合计
篇 h
专业
设计tl
vv
ww
tv
wx
w
v
twu
zy1z
数量
设计ul
t|
|
tu
s
s
v
wv
uv1v
合计 xu xv ux wx w y t{x tss1s
注 }tl指单纯据药学专业知识的设计 ul指采用数理统计
方法的设计
从而获得该因素显著性和较好水平的方法 ∀观
测指标可以仅一个 o也可以有多个 ∀如翟守道
等≈t 考察了保肾片制备工艺的 w个步骤所留样
品的总蒽醌 !游离及结合蒽醌的含量 o得到各制
备工艺步骤对大黄蒽醌影响的结论 ∀杨张谓
等≈u 考察了不同类型的超滤膜超滤人参精后 o
人参总皂甙含量 !浊度及 t周后浊度的情况 o为
超滤膜的选择提供了试验依据 ∀王冬梅等≈v
比较了相同工艺下不同批号的前列宁片的溶出
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