全 文 ：中年菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,El·1371·
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玄参水提物对心室重构大鼠心肌纤维化的影响
顾伟梁，陈长勋‘，王樱，沈云辉
(上海中医药大学药理教研室，上海201203)
摘 要：目的探讨玄参对心室重构大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法腹主动脉缩窄法制备大鼠心室
重构模型。8周药物干预后，测定大鼠左室及全心肥厚指数(LVWI、HWI)}紫外分光光度法测心肌羟脯氨酸的量
(hydroxproline，Hyp)；病理切片HE染色观察心肌细胞横断面面积；RT—PCR测定心肌组织转化生成因子口1基因
(TGF一131mRNA)表达水平。结果玄参水提液能降低心肌肥厚指数、羟脯氨酸量，减小左心室心肌细胞的横断面
面积}显著降低TGF-pImRNA表达水平。结论玄参水提液对心肌细胞和问质胶原重构两方面都有显著的抑制
作用，抗心室重构的作用机制与抑制TGF—p1mRNA表达有关。
关键词：玄参；心室重构；羟脯氨酸，TGF—p1基因表达
中图分类号：R286．2，R285．5文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1371—04
心室重构是由一系列复杂的分子和细胞机制导
致的心肌结构、功能和表型的变化，包括心室肌细胞
数量、质量及细胞排列方式上发生改变和心肌间质
细胞(主要为成纤维细胞)及细胞外基质(主要为各
型胶原纤维)数量、质量及构型方式上发生改变。心
肌纤维化(myocardialfibrosis，MF)是指在心肌的
组织结构中胶原纤维过量积聚、胶原浓度显著升高
或胶原容积分数(CVF)显著增加[1]。心肌纤维化是
心室重构的主要表现之一，可导致心肌僵硬度增加、
心室舒张功能减退、冠状动脉储备下降，甚至引起猝
死，是导致心力衰竭发生、发展的决定性因素[2]。因
此如何逆转心肌纤维化和减轻心室重构成为国内外
共同的研究热点。
玄参为玄参科多年生草本植物玄参Scrophu—
laHaningpoensisHemsl．的根，是著名的传统中药，
始载于《神农本草经》，列为中品，性寒，味苦、甘、咸，
可入肺经、胃经、肾经，具有滋阴，降火，生津，凉血，
解毒等功效。现代药理研究发现玄参对心血管系统
具有广泛而重要的药理作用，而玄参抗心室重构的
实验研究尚未见报道。本研究旨在观察玄参有无抗
心室重构的作用并探讨其可能的作用机制。
l材料与方法
1．1 动物、仪器与试剂：SD大鼠，雄性，体质量
220～250g，购于中国科学院上海实验动物中心，合
格证号：SCXK(沪)2003--0003，饲养于上海中医
药大学实验动物中心SPF级动物实验室。
DL一50RC—L离心机(上海中科生物医学高
科技开发有限公司)，FJ一200高速分散均质机(上
海标本模型厂)，IX70倒置显微镜(日本Olympus
公司)，图像分析系统(Image—Proplus4．0media
cybernetics)，PCRSYSTERM9700(ABI美国应
用生物有限公司)，FR一250电泳仪(复旦科技有限
公司)，Tanon2500凝胶成像(上海天能科技有限
公司)，Biohit移液枪、Eppendorf移液枪、基尔森移
液枪(法国Gilson公司)。
玄参产地浙江(上海养和堂中药饮片有限公
司，批号060913)；卡托普利(上海衡山药业有限公
司，批号060804)；羟脯氨酸测试盒(消化法)(南京
建成试剂公司)；考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京
建成试剂公司)；2×PCRMasterMix(上海欣百诺
生物科技有限公司)；RevertAidtTMFirstS rand
cDNASynthesisKit，K1622(Fermentas公司上
海中晶代理)。
1．2玄参药液制备：玄参1012g用8倍量水煎煮3
收稿日期：2007—08—07
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30572379)
作者简介：顾伟粱(1981一)，女．上海人，在读博士研究生，研究方向为中药药理学。Tel：(021)51322398E—mail：gwl22@163．corn
-通讯作者 陈长勋Tel：(021)51322200E—maill cxchen6@126．corn
万方数据
·1372· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
次，每次微沸30min，合并滤液浓缩至750mL，每
毫升含生药量1．35g，冷藏备用，给药容积为20
mL／kg。每隔4d煎煮1次。给药剂量按每千克给予
的生药量计算。
1．3模型制备及分组给药：大鼠用戊巴比妥钠30
mg／kgip麻醉，仰位固定，打开腹腔，钝性分离腹主
动脉，用内径为0．5mm的银夹不完全结扎左右肾
动脉之间的腹主动脉，使之外径狭窄至0．5mm，制
备压力超负荷性心室重构模型。术后im青霉素1×
104U／(kg·d)，共3d，预防感染。手术动物66只，手
术后死亡22只，均于一周内死于急性左心衰，解剖
发现双肺明显瘀血，部分还伴有胸腔积液，其死亡与
急性压力超负荷有关。
随机分为5组，即假手术组(仅分离腹主动脉后
不做结扎)，模型组，玄参大、小剂量(27、13．5g／kg)
组和阳性对照(卡托普利40mg／kg)组。假手术组
和模型组大鼠ig等量蒸馏水。每组11只，每天给药
1次，连续给药8周。
1．4 心脏指数测定：各组大鼠称质量取血处死后，
快速打开胸腔取心脏，去除心房组织，分离左、右心
室，冰冷的生理盐水中漂洗去血，用滤纸吸干表面水
分，准确称取左心室和全心质量。计算左心室肥厚指
数(左心室质量／体质量，LVWI)和全心肥厚指数
(全心质量／体质量，HWI)。
1．5心肌组织羟脯氨酸(Hyp)的测定：取大鼠的左
室心肌组织约200mg，加入2mL生理盐水在冰浴
环境中快速匀浆，3500r／min离心10min，取上清
200弘L加生理盐水800pL，制成2％的组织匀浆，
按羟脯氨酸试剂盒说明书操作测定Hyp，同时进行
蛋白测定。结果以每毫克蛋白中羟脯氨酸的量表示。
1．6心肌细胞横断面面积：取左心室中段，将10％
福尔马林液固定的心肌组织经乙醇梯度脱水、透明、
浸蜡包埋后，按心肌走向横断切成5弘m的切片，将
左心室心肌进行HE染色，选择横断心肌的切片
(细胞核清晰，细胞膜完整)放大200倍。用Image-
Proplus4．0图像分析软件分析HE病理图片，测
量左心室心肌细胞横断面面积。每一标本随机测量
20个心肌细胞，计算其细胞平均横断面面积。
1．7转化生成因子B1基因(TGF一61tuRNA)表达
水平的测定
1．7．1提取总RNA及逆转录反应：每组取5个心
肌标本，每个约100mg，Trizol试剂盒提取总
RNA，取2弘g总RNA逆转录合成cDNA，一20℃
保存。所有引物均由上海生物工程技术有限公司合
成。／3-actin基因的正义引物序列为：AGGCCC-
CTCTGAACCCTAAG，反义引物序列为：
TGCCACAGGATTCCATACCC，扩增片断长度为
500bp；TGF—p1基因的正义引物序列为：
ATTCCTGGCGTTACCTTGG，反义引物序列为：
CCTGTATTCCGTCTCCTTGG，扩增片断长度为
117bp。
1．7．2PCR反应：以稀释10倍的cDNA为模板，
用目的基因引物进行PCR反应，同时[3-actin作为
内参，并根据实测基因的mRNA丰度建立最佳循
环数，优化反应条件。反应体系：取0．2mLPCR
管，分别加入2×PCRMasterMix10／zL、TGF—p1
正反义引物(10vmol／L)各1弘L、paction正反义
引物(10／-mol／L)各0．1弘L、双蒸水7．8pL，配制
完毕，放人PCR仪中进行如下反应：95℃预变性5
rain，进行32个循环；95℃变性30S；55℃退火
30S；72℃延伸40S；72℃最后延伸10min。
1．7．3琼脂糖凝胶电泳检测：取PCR产物3肛L，
加上样缓冲液2pL，1．5％的琼脂糖凝胶中120V
电压电泳30rain。用凝胶分析软件Tanon2500，根
据条带强度进行积分计算，以TGF一61／p-actin作为
心肌组织TGF一61mRNA表达的半定量检测。
1．8 统计学处理：实验数据以z±s表示，采用
Excel软件进行t或t7检验。
2结果
2．1对心脏指数的影响：与假手术组比较，模型组
心脏指数显著增加(P
0．05、0．01)，玄参小剂量组心脏指数虽有下降，但差
异不显著。结果见表1。
裹1 玄参对压力超负荷心窒重构大鼠心脏指数的
影响(；±s，露=11)
Table1 EffectofXuanshenonheartindexinpress—
overloadventrieularremodelingrats
(；士j，n---一11)
组别 剂量／(g·k91)LVWI／(mg·91)HWI／(mg·g-t)
与模型组比较：。P
2． 对羟脯氨酸量的影响：与假手术组比较，模型
组羟脯氨酸量显著增加(P
中草黄 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1373·
玄参大剂量组、阳性对照组羟脯氨酸量均显著降低
(P<0．01)，玄参小剂量组羟脯氨酸量虽有下降，但
差异不显著。结果见表2。
裹2玄参对压力超负荷心室重构大鼠羟脯氨酸量
的影响(；士s，厅=11)
Table2 EffectofXuanshenonHypininpress—overload
ventricularremodelingrats(x-{-s．露一11)
2．3对心肌细胞横断面面积的影响：病理切片HE
染色光镜下(200倍)观察可见压力超负荷心室重
构大鼠心肌较正常心肌细胞明显肥大、增宽，细胞间
距增大，间质增生，组织横断面心肌纤维增多，经玄
参治疗后心肌细胞接近假手术组。结果见图1和表3。
2．4 对心肌组织TGF—p1mRNA表达的影响：
TGF—p1mRNA电泳图见图2，经分析统计后的结果
见表4。与假手术组比较，模型组TGF—B1mRNA表
达显著增加。与模型组比较，玄参大、小剂量组和阳
性对照组TGF—p1mRNA表达显著降低(图2，
表4)。
假手术组 模型组 阳性对照组 玄参小剂量组 玄参大剂量组
图l玄参对压力超负荷心室重构大鼠心肌细胞的影响
Fig．1EffectofXuanshenoncardiomyocyteinpress—overloadventricularremodelingrats
表3玄参对压力超负荷，厶室重构大鼠，c、肌细胞横断面 裹4玄参对压力超负荷心室重构大鼠TGF—BlmRNA
面积的影响(；士s，尼一8) 表达的影响(；±s，甩=5)
Table3 EffectofXuanshenoncardiomyocytecross Table4 EffectofXnanshenonTGF—BlmRNA
sectionareainpress—overloadventricular expressioninpress—oVerIoadventrlcular
remodelingrats(；±s，一=8) remodelingrats(；士s，一=5)
1～5一假手术组 6～10一模型组11～15一阳性对照组16～20一玄参27．0g／kg21～25一玄参13．5g／kg
1—5一shamgroup6—10—modelgroup11—15一Captoprilgroup16—20—Xuanshen27．0g／kg21—25一Xuanshen13．5g／kg
图2 TGF—Dl电泳图
Fig．2TGF—B1Electrophoretogram
3讨论
压力超负荷心室重构模型大鼠手术后2周即可
出现心肌肥厚和心室重构，左心室质量与体质量之
比在造模12周时最高，之后逐渐下降[3]。本研究在
腹主动脉结扎手术后2周开始给药，心衰的进展速
度与结扎的狭窄程度呈正相关，由于本次实验腹主
动脉狭窄至0．5mm，过窄造成动物死亡率偏高。采
用给药8周的方案，以便更好地了解压力超负荷引
发的动物心肌肥厚和心室重构的特征以及玄参的治
疗作用。
有研究显示，在压力负荷升高的最初期，就可启
动大鼠心肌细胞mRNA转录，肌动蛋白和胶原蛋
白合成增加H]。心肌间质中胶原的增加及其类型的改
变可导致心肌纤维化，影响心脏的顺应性，严重的引
万方数据
·1374· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
起心肌僵硬，使心脏舒缩功能受损，引起心力衰竭。
羟脯氨酸主要存在于胶原蛋白中，其量可反映
组织纤维化的程度。本研究结果显示，造模10周
后，模型组动物左心室组织羟脯氨酸量比假手术组
明显增加，表明心肌间质胶原沉积是压力超负荷心
肌肥厚和心室重构的特征之一。
TGF—pl是成纤维细胞的强趋化因子，直接刺
激其细胞外基质蛋白的合成，抑制胶原降解，使细胞
外基质大量沉积于心肌细胞周围，从而导致心肌纤
维化[5]。在心肌纤维化过程中，许多促纤维化因子均
通过TGF—p1起作用，因此调控TGF一卢1的代谢可
能影响心肌的纤维化过程，对抑制心肌肥大、心室重
构有重要作用。据文献报道，大鼠左心室压力超负荷
可使心肌细胞TGF—p1tuRNA水平上调3～4
倍[6]，本实验结果与报道一致。
本实验研究发现玄参水提液能降低大鼠心肌
Hyp的量，抑制心肌细胞的肥大，减小左心室心肌
细胞的横断面面积，对心肌细胞和间质胶原重构两
方面都有显著的抑制作用。而且玄参具有显著降低
TGF一61基因表达的作用，该作用也许与玄参降低
胶原蛋白的合成、抑制心肌肥厚有关，可能是玄参抗
心室重构的作用机制之一。本实验提示玄参能通过
抑制心肌间质纤维化而改善心室重构，对于改善衰
竭心脏的心功能具有积极意义。
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和胃饮合剂促胃动力作用实验研究
白长川1，孙旭娟2，李卫平2’战丽彬2，韩国柱2，宫德正2，周琴2，李 楠3
(1．大连长川中医药研究中心有限公司，辽宁大连116021；2．大连医科大学，辽宁大连1160441
3．大连理工大学分析化学教研室，辽宁大连 116021)
摘要：目的研究和胃饮合剂(HWYM)在不同试验模型中的促胃动力作用。方法采用不同工具药复制小鼠
胃排空功能障碍模型，观察不同剂量HWYMig给药对胃排空作用的影响。采用激怒法复制功能性消化不良大鼠
模型，观察HWYM对动物一般状况及在体胃活动频率的影响。利用离体大鼠胃平滑肌条，观察HWYM对正常及
多巴胺、异丙肾上腺素作用下离体胃平滑肌活动的影响。结果HWYM可以明显对抗阿托品及多巴胺引起的小鼠
胃排空障碍。HWYM可明显改善功能性消化不良大鼠机能状态，增加功能性消化不良大鼠胃活动频率。HWYM可
明显增强正常大鼠胃平滑肌活动，并对抗多巴胺及异丙肾上腺素对大鼠离体胃平滑肌活动的抑制作用。结论
HwYM具有显著的促胃动力作用。
关键词：和胃饮合剂；促胃动力；功能性消化不良，胃平滑肌
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1374—04
随着人们生活节奏的加快，加之精神情志、饮食
结构改变等诸多因素影响，导致胃动力障碍疾病发
病率日益增多，若不能得到及时有效的治疗，还可能
发展为食管溃疡、梗阻、慢性出血、营养不良和贫血
等严重病症，已经成为现代社会中一个备受关注的
问题。目前，I晦床对于此类患者的治疗以促胃动力药
收稿日期：2008—01—25
摹拿项目：大连市2005年科技计划项目(2005E1ISF062)
作者简介：白长川I(1944一)，男，辽宁大连人，主任医师，硕士生导师，研究方向为中医脾胃病。
Tell 13352256969E—mail：bee@bcctem．corn
。通讯作者李卫平E—maill liwp@yahoo．cn
万方数据
玄参水提物对心室重构大鼠心肌纤维化的影响
作者： 顾伟梁， 陈长勋， 王樱， 沈云辉
作者单位： 上海中医药大学药理教研室,上海,201203
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
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