全 文 ：和蛋白表达的变化有较好一致性 ,提示木贼提取物
对细胞黏附相关基因的表达有调控作用 ,是其降低
单个核2内皮细胞黏附作用进而抑制 AS 发生、发展
的机制之一 ,其进一步的分子机制和该效应的有效
成分值得深入探讨和研究。
参考文献 :
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tion [J ]1 L i pi d Res , 1983 , 24 (3) : 9041
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茯苓多糖修饰物抗肿瘤作用及其机制研究
王爱云1 ,2 ,陈 　群1 ,李成付1 ,焦庆才1 3
(11 南京大学生命科学院 ,江苏 南京 　210093 ; 21 南京中医药大学中医药研究院 ,
江苏省方剂重点实验室 ,江苏 南京 　210029)
摘 　要 :目的 　通过对免疫功能的影响考察硫酸化茯苓多糖 ( PS) 抗肿瘤的作用及其机制。方法 　以 S180肿瘤模
型小鼠和 Yac21 肿瘤细胞株分别为体内和体外实验对象 ,研究 PS 的抗肿瘤活性和免疫调节功能。结果 　PS 体内
显著抑制移植性 S180荷瘤小鼠肿瘤生长 ,最大抑瘤率达 32122 % ( P < 0101) ;促进荷瘤小鼠脾脏和胸腺淋巴器官的
发育生长 ( P < 0105) 。体外对小鼠淋巴细胞尤其是 B 淋巴细胞的增殖有显著促进作用 ( P < 0105) 。PS 体外可显
著提高 N K 细胞杀伤活性 ( P < 01001) 。结论 　PS 可以通过增强 N K 细胞杀伤活力 ,促进淋巴细胞增殖 ,增强机
体特异性免疫功能而发挥抗肿瘤作用。PS 还可以拮抗免疫抑制药所致的免疫抑制。
关键词 :茯苓 ; 茯苓多糖硫酸酯 ; 抗肿瘤 ; 免疫
中图分类号 :R286191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220268204
　 　茯苓系多孔菌科真菌茯苓 Pori a cocos
( Schw. ) Wolf 的干燥菌核 ,是我国传统的利尿安神
药。茯苓多糖是茯苓的主要有效成分之一 ,将天然
多糖进行硫酸酯化修饰是多糖结构改造的一个研究
热点 ,多糖硫酸化后可以增强原有的生物活性或产
生新的功能 ,人工合成的硫酸化多糖除抗血栓、抗凝
血[1 ]和抗病毒[2 ]功能外 ,近年来不断发现还具有其
他生物活性 ,如抗氧化[3 ] 、抗肿瘤 ,抗细胞黏附与转
移[4 ] 。由于茯苓多糖不溶于水 ,对其进行结构改造
以发挥其生物活性势在必行。本课题组在已有工作
的基础上 ,利用碱提酸沉法提取了茯苓菌核多糖 ,分
别以氯磺酸 ( Wolf rom 法) 和氨基磺酸为磺化试剂
制备茯苓多糖硫酸酯 ( PS) [5 ] 。通过单因子和正交
实验 ,研究茯苓多糖硫酸化的反应工艺 ,通过研究茯
苓多糖硫酸化反应的热动力学过程和产品的波谱学
特征 ,探索茯苓多糖硫酸化的反应机制和产物的分
子结构信息[6 ] 。结果显示 , Wolf rom 法制备的 PS
具有取代高、相对分子质量小、制备工艺不同等特
点 ,故本实验以 PS 为实验药物 ,系统研究其体内外
抗肿瘤、免疫调节等活性及其机制 ,为其临床应用提
供依据。
1 　材料
111 　实验动物 : ICR 小鼠 ,雄性 , (20 ±2) g ,南京医
科大学实验动物中心提供。
112 　细胞株 :小鼠肉瘤 S180 、小鼠淋巴瘤细胞 Yac2
1 ,南京中医药大学药理毒理研究室保存。
113 　实验仪器 :倒置显微镜系统 ,德国 Leica ; NU2
6511 超低温冰箱 ,美国 Nuaire ; PL511402 纯水系
统 ,美国 U SF ;二氧化碳培养箱 ,美国 Forma ;台式
冷冻离心机 ,美国 Beckman ; P221000 微量移液器 ,
·862· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008205205
作者简介 :王爱云 (1974 —) ,女 ,助理研究员 ,博士生 ,研究方向为中药学。Tel : (025) 86798154 　E2mail : way9815 @163. com3 通讯作者　焦庆才　Tel : (025) 83594376 　E2mail : jiaoqc @yahoo. com
法国 Gilson ; MSI 振荡器 ,美国 I KA ; SPECTRA
MAX 190 紫外 —可见光微孔板检测仪 ,美国 MD ;
BP —310 电子天平 ,德国 Sartorius。
114 　药物与试剂 : PS ,自制 ,以无菌生理盐水配成
10 % 溶液 ,用于体内动物实验 ; PS 以 RPMI 1640
培养液配成 50 mg/ mL 溶液 ,用于体外细胞培养实
验 ;52氟尿嘧啶 (52Fu) ,天津金耀氨基酸有限公司 ,
批号 0411101 ; RPMI 1640 , Gibco 公司 ;小牛血清 ,
杭州四季青生物工程材料研究所产品。Hank′s 液
配制参考文献方法[7 ] 。刀豆蛋白 A (ConA) ,Sigma
公司 ;脂多糖 (L PS) , Sigma 公司 ; M T T , Sigma 公
司 ; Tris2N H4 Cl 缓冲液配制参考文献方法[ 8 ] 。
2 　方法
211 　对实体瘤生长和免疫器官的影响 :小鼠适应性
饲养 1 周后 ,常规接种 S180 细胞到左前肢腋下。动
物造模后随机分 6 组 ,每组 10 只 :模型组、52Fu (25
mg/ kg) 组、PS 高剂量 (500 mg/ kg) 组 ( PS500 ) 、PS
低剂量 (250 mg/ kg) 组 ( PS250 ) 、PS 高剂量 (500
mg/ kg) + 52Fu (25 mg/ kg) 组 ( PS500 + 52Fu) 、PS
低剂量 (250 mg/ kg) + 52Fu (25 mg/ kg) 组 ( PS250 +
52Fu) 。另取 10 只健康小鼠不造模作为对照组。
小鼠接种 S180细胞 24 h 后开始给药 ,52Fu 按 0105
mL/ 10 g ip 给药 , PS 按 011 mL/ 10 g ig 给药 ,对照
组和模型组 ig 等量蒸馏水 ,每日给药 1 次 ,连续
10 d ,每日观察小鼠肿瘤生长情况。末次给药后第 2
天 ,小鼠称体质量 ,脱颈处死。分离瘤块 ,称瘤质量 ,
计算抑瘤率。取脾脏和胸腺称质量 ,计算脏器指数。
抑瘤率 = (模型组瘤质量 - 给药组瘤质量) / 模型组瘤质
量 ×100 %
脏器指数 = 脏器质量 ×100/ 体质量
212 　对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖反应的影响 :
将正常小鼠脱颈处死 ,置于盛 75 % 乙醇的烧杯中
浸泡 5 min。超净台上开腹取脾 ,按文献方法制备
脾细胞悬液[8 ] 。脾细胞计数 ,按 5 ×105 个/ 孔接种
至 96 孔培养板中 ,加 ConA (终质量浓度 5 μg/
mL) 或 L PS (终质量浓度 10μg/ mL ) ;分别加入
PS (终质量浓度 015～500 μg/ mL ) 和 (或) 52Fu
(终质量浓度 10μg/ mL) ,每个剂量设 4 个复孔 ,置
CO2培养箱中培养 72 h ,用 MTT 法 ,酶标仪于波长
490 nm 处测吸光度 ( A) 值 ,以不加药物处理的正常
脾细胞为对照组。按下列公式计算淋巴细胞增殖率。
淋巴细胞增殖率 = 实验组 A 值/ 对照组 A 值 ×100 %
213 　对正常小鼠 N K 细胞杀伤活性的作用 :取正
常小鼠脾细胞悬液 ,用含 10 % 小牛血清的 RPMI
1640 培养液调脾细胞浓度 1 ×107 / mL ,于 96 孔板
每孔加入 011 mL ,并加入 1 ×105 / mL Yac21 细胞
0. 1 mL/ 孔 (效靶比 100 ∶1) ;加入 PS (终质量浓度
5、50、500μg/ mL) 和 (或) 52Fu (终质量浓度 10、50
μg/ mL) ,每个剂量组设 4 个复孔 ,混合培养 16 h。
用 M T T 法 ,酶标仪于 490 nm 处测 A 值。以正常
脾细胞不加药物处理为效应细胞组 ,以 Yac21 细胞不
加药物处理为靶细胞组 ,以正常脾细胞 + Yac21 细胞
为对照组 ,按下列公式计算 N K 细胞杀伤率。
N K 细胞杀伤率 = [靶细胞组 A 值 - (药物组 A 值 - 效
应细胞组 A 值) ]/ 靶细胞组 A 值 ×100 %
214 　统计学处理 :数据以 x ±s 表示 ,组间比较采
用 t 检验。
3 　结果
311 　对实体瘤生长和免疫器官的影响 :结果见
表 1。小鼠接种 S180后 ,体质量无明显变化 ,而给予
52Fu 组小鼠的平均体质量偏低 , PS 对小鼠体质量
无明显影响。PS 对 S180 荷瘤小鼠肿瘤生长有显著
抑制作用 ,且有剂量依赖关系。造模后小鼠脾脏和
胸腺指数增加 ,说明肿瘤刺激了淋巴器官的发育 ;免
疫抑制剂 52Fu 则显著抑制脾脏和胸腺的生长 , PS
对荷瘤小鼠的脾脏和胸腺的生长均有显著促进作
用 ,PS 对 52Fu 抑制脾脏和胸腺生长有明显改
善作用。
表 1 　PS 对 S180小鼠肿瘤生长和免疫器官生长的影响 ( x ±s)
Table 1 　Effect of PS on tumor growth and immune organs growth in S180 mice ( x ±s)
组别
剂量/
(mg ·kg - 1 )
动物数/
只
体质量/
g
瘤质量/
g
抑瘤率/
%
脾脏指数 胸腺指数
对照 - 10 291 29 ±1170 　　- - 01 628 ±01143 01 215 ±01 066
模型 - 9 281 14 ±7123 21 742 ±01378 - 01 704 ±01185 01 241 ±01 069
52Fu 25 7 241 83 ±3142 11 341 ±01135 3 3 3 45173 01 398 ±01280 3 01 098 ±01 041 3 3 3 # # #
PS250 250 9 301 63 ±2125 11 972 ±01399 3 20123 01 888 ±01128 3 # # 01 275 ±01 065 #
PS500 500 8 261 19 ±3105 11 675 ±01412 3 3 32122 01 885 ±01146 # 01 264 ±01 079
PS250 + 52Fu 250 + 25 9 241 51 ±4114 11 413 ±01394 3 3 3 42183 01 483 ±01122 3 # 01 160 ±01 099
PS500 + 52Fu 500 + 25 9 231 02 ±4185 11 283 ±01483 3 3 3 48111 01 452 ±01120 3 3 # 01 134 ±01 077 3 #
　　与对照组比较 : # P < 0105 　# # P < 0101 　# # # P < 01 001 ; 　与模型组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　# P < 01 05 　# # P < 01 01 　# # # P < 01001 vs cont rol group ; 3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs model group
·962·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
312 　对正常小鼠脾淋巴细胞体外增殖反应的影响 :
结果见表 2。PS 体外有显著的促脾脏淋巴细胞增
殖的作用 ,在没有有丝分裂原刺激的情况下 ,也可以
促进脾淋巴细胞增殖。脾细胞中加入刺激原 L PS
后 ,B 淋巴细胞增殖显著增加 , PS 仍然可以在 L PS
刺激的基础上继续刺激脾脏 B 淋巴细胞的增生。
PS 也可以促进 ConA 促进的 T 淋巴细胞的增殖。
313 　对正常小鼠 N K 细胞杀伤活性的促进作用 :
结果见表 3。PS 体外可显著提高 N K 细胞的
杀伤率。
表 2 　PS 对正常小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响( x ±s , n = 4)
Table 2 　Effect of PS on proliferation of spleen lymphocyte i n vit ro in normal mice ( x ±s , n = 4)
组别
ρ/
(μg ·mL - 1 )
A 值
淋巴细胞
增殖率/ %
对照 - 01106 ±01 019 -
PS 5 01107 ±01 015 1011 47
50 01111 ±01 028 1051 17
500 01138 ±01 009 3 1301 75
L PS 10 01185 ±01 022 3 3 1751 27
PS + L PS 01 5 + 10 01154 ±01 012 831 13
5 + 10 01226 ±01 017 # 1221 28
50 + 10 01212 ±01 009 # 1141 53
500 + 10 01145 ±01 009 781 26
52Fu + L PS 10 + 10 01060 ±01 009 # # # 321 56
PS + 52Fu + L PS 01 5 + 10 + 10 01062 ±01 011 1031 74
5 + 10 + 10 01068 ±01 007 1121 80 组别 ρ/(μg ·mL - 1 ) A 值 T 淋巴细胞增殖率/ %PS + 52Fu + L PS 50 + 10 + 10 01 079 ±01007 △ 1301 99500 + 10 + 10 01 066 ±01013 1091 51ConA 5 01 214 ±01017 3 3 3 2031 08PS + ConA 015 + 5 01 201 ±01004 931 705 + 5 01 198 ±01006 921 3450 + 5 01 167 ±01028 781 00500 + 5 01 097 ±01007 # 451 1052Fu + ConA 10 + 5 01 071 ±01004 # # # 321 96PS + 52Fu + ConA 015 + 10 + 5 01 072 ±01005 1011 845 + 10 + 5 01 069 ±01002 981 3750 + 10 + 5 01 081 ±01006 △ 1151 20500 + 10 + 5 01 051 ±01015 711 48
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001 ; 　与 L PS 或 ConA 组比较 : # P < 0105 　# # # P < 01 001
　　与 52Fu + L PS 或 52Fu + ConA 组比较 : △P < 01 05
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group ; # P < 01 05 　# # # P < 01001 vs L PS group or ConA group
　　△P < 01 05 vs 52Fu + L PS group or 52Fu + ConA group
表 3 　PS 对体外正常小鼠 NK细胞杀伤活性的影响
( x ±s , n = 4)
Table 3 　Effect of PS on killing activity of NK cells
in vit ro in normal mice ( x ±s , n = 4)
组别 ρ/ (μg ·mL - 1 ) A 值 杀伤率/ %
靶细胞 - 21 067 ±01 141 -
效应细胞 - 01 091 ±01 016 -
对照 - 11 906 ±01 054 121 16
PS 5 11 597 ±01 137 3 271 10
50 11 685 ±01 114 3 221 85
500 11 095 ±01 130 3 3 3 511 42
52Fu 10 01 615 ±01 090 3 3 3 741 63
PS + 52Fu 5 + 10 01 655 ±01 046 3 3 3 721 68
50 + 10 01 722 ±01 071 3 3 3 691 44
500 + 10 01 620 ±01 037 3 3 3 741 41
52Fu 50 01 763 ±01 121 3 3 3 671 45
PS + 52Fu 5 + 50 01 851 ±01 062 3 3 3 631 22
50 + 50 01 930 ±01 021 3 3 3 # 591 40
500 + 50 01 789 ±01 169 3 3 3 661 22
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 3 P < 01 001
　　与 52Fu (50μg/ mL) 组比较 : # P < 01 05
　　3 P < 01 05 　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group
　　# P < 01 05 vs 52Fu (50μg/ mL) group
4 　讨论
　　从中药中分离出的化学成分很多 ,但因其毒性
太大或活性不够高 ,或生物利用度不高 ,能深入研究
开发成新药的很少。以这些中药成分为先导化合
物 ,通过结构修饰来提高活性、降低毒性并改善生物
利用度 ,就有可能开发成新药。因此结构修饰在新
药研发中越来越受到重视。中药多糖生物学功能与
结构密切相关 ,中药多糖的分子修饰和结构改造对
提高其生物活性具有重要意义。因此本课题组对中
药茯苓的主要成分茯苓多糖进行了结构修饰 ,获得
了取代度高、相对分子质量小、制备工艺简单的 PS。
茯苓能补气益元 ,祛邪扶正 ,现代医学研究也证
实 ,茯苓可调节机体免疫功能[9 ] 。大量的动物实验
证明茯苓多糖有非常显著的抗肿瘤作用。本实验结
果表明 PS 体内显著抑制移植性 S180 肿瘤生长 ,显
著促进荷瘤小鼠脾脏和胸腺淋巴器官的发育生长 ,
体外对小鼠淋巴细胞尤其是 B 淋巴细胞的增殖有
显著促进作用 ,且可显著提高正常小鼠 N K 细胞杀
伤活性 ,提示 PS 可以通过促进淋巴细胞增殖 ,增强
机体特异免疫功能而发挥抗肿瘤作用。PS 还可能
通过自身携带的负电荷阻止肿瘤细胞向宿主组织浸
润起到抑制肿瘤块生长的作用[6 ] 。而且 PS 可以拮
抗免疫抑制药 52Fu 所致的免疫抑制。
茯苓的年产量以万吨计 ,茯苓多糖是茯苓的主
要成分之一 ,而 PS 制备工艺较为简单 ,抗肿瘤疗效
明确 ,因此开发利用茯苓多糖资源有极大的经
济价值。
·072· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
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阿魏胶囊对模型动物血脂、微循环及血液流变学的影响
薛 　洁 ,韩 　荣 ,张海英 3
(新疆医科大学附属中医医院 ,新疆 乌鲁木齐 　830000)
摘 　要 :目的 　探讨阿魏胶囊对大鼠血脂、小鼠微循环及血瘀模型大鼠血液流变学的影响。方法 　以高脂饮食建
立高脂血症大鼠模型 ,将大鼠随机分为模型组 ,阿魏胶囊低、中、高剂量组 ,阳性对照组和对照组 ,给药 5 周后 ,测定
胆固醇 ( TC) 、甘油三酯 ( T G) 、高密度脂蛋白 ( HDL2C) 、低密度脂蛋白 (LDL2C) 等指标。小鼠注射重酒石酸去甲
肾上腺素 (Adr) ,观察给予 Adr 前后 8 min 小鼠耳廓微循环情况。大鼠给药 12 d ,以高分子右旋糖酐建立大鼠血
瘀证模型 ,测定血液流变学各项指标。结果 　阿魏胶囊可降低血清 TC、T G、LDL2C ,升高血 HDL2C/ TC 值 ,与模
型组相比差异有统计学意义 ( P < 0105) 。阿魏胶囊中、高剂量组与模型组比较 ,A、V 血管收缩率和毛细血管网交
叉点减少明显降低 ( P < 0101、0105) 。阿魏胶囊能显著降低小鼠全血黏度和红细胞压积 ,与模型组比较有显著性
差异 ( P < 0105、0101) 。结论 　阿魏胶囊能降低高脂血症大鼠的血脂水平 ,并对小鼠耳廓微循环和大鼠血液流变
学有明显改善作用。
关键词 :阿魏胶囊 ; 血脂 ; 微循环 ; 血液流变学
中图分类号 :R28611 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220271204
　　阿魏胶囊由阿魏、拳参、厚朴、白茅根等药材组
成 ,具有健脾除湿、化瘀泄浊之功效 ,主治痰湿内阻
证、瘀血内阻证及脾虚湿盛证 ,临床用于高脂血症的
治疗 ,疗效显著。根据其功能主治 ,本研究观察阿魏
胶囊对高脂血症动物模型、血瘀证动物模型的影响 ,
为其临床应用提供依据。
1 　材料
111 　仪器 : YDA —Ⅳ型血液粘度计 (北京宏润达科
技发展有限公司) , TMS —1024i 型全自动生化仪
(日本 TO KYO BO E KI 公司) ,M E K—6318 K 血液
分析仪 (日本光电公司) , T GL —16 G 高速冷冻离心
机 (上海科鑫仪器有限公司) ,B I —2000 医学图像
分析系统 (成都泰盟科技有限公司) ,B K1000 生物
显微镜 (重庆光电仪器有限公司) ,M E K—5216 血
细胞分析仪 (上海光电医用电子仪器有限公司) 。
112 　试药 :阿魏胶囊 ,新疆维吾尔自治区中医医院
提供 ,批号 20071016 ;辛伐他汀 ,哈药集团三精制药
有限公司 ,批号 0709204 ;复方丹参片 ,陕西利君恒
心堂药业有限公司 ,批号 050601 ;地奥心血康胶囊 ,
成都地奥制药集团有限公司 ,批号 702013。
113 　试剂 :总胆固醇 ( TC) (批号 71210 K021) 、甘
油三酯 ( T G) (批号 80103L021) 、高密度脂蛋白胆
固醇 ( HDL2C) (批号 71017I011) 、低密度脂蛋白胆
固醇 (LDL2C) (批号 711125011) 检测试剂盒 ,购
自北京利德曼生化技术有限公司。溶血剂 (上海东
湖生物科技有限公司 ,批号 20071107) 、稀释液 (上
·172·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008208210
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划项目 (2007BAI20B07)
作者简介 :薛　洁 (1962 —) ,女 ,陕西人 ,教授 ,在读博士 ,研究方向为中药新药研发。
Tel : (0991) 5801584 　E2mail : kjkxuejie @163. com