全 文 ：HPLC法测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元
党小平 ,毛春芹 3 ,陆兔林 ,徐佳佳 ,王 　静
(南京中医药大学 ,江苏 南京 　210046)
摘 　要 :目的 　建立测定生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的方法。方法 　分别采用 HPLC2UV 法和 HPL C2
EL SD 法测定芒果苷和菝葜皂苷元。测定芒果苷的色谱条件 : Kromasil 柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;水2乙腈2
0185 %磷酸 (100 ∶25 ∶5)为流动相 ;体积流量为 016 mL/ min ;柱温为 30 ℃;检测波长为 258 nm。测定菝葜皂苷元
的色谱条件 : Kromasil 柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;甲醇2水 (95 ∶5) 为流动相 ;体积流量为 110 mL/ min ;柱温 30
℃;用蒸发光散射检测器检测 ,漂移管温度 85 ℃。结果 　盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的量均有所升高。结论 　
本方法可用于生知母和盐知母中芒果苷和菝葜皂苷元的测定 ,并为其全面质量控制提供参考。
关键词 :知母 ;盐知母 ;芒果苷 ;菝葜皂苷元 ;高效液相色谱
中图分类号 :R28611 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220236203
　　知母具有清热泻火、生津润燥的功效 ,临床用于
外感热病 ,高热烦渴 ,肺热燥咳 ,骨蒸潮热 ,内热消
渴 ,肠燥便秘等症[1 ] 。知母中含菝葜皂苷元、芒果苷
等成分。芒果苷是知母清热作用的有效成分[ 2 ] ,同
时具有免疫活性、抗菌活性、抗单纯疱疹病毒活性 ,
有抗氧化、抗糖尿病、抗肿瘤作用 ,对血脂质有抑制
效应 ,有护肝、抗肥胖效应 ,在骨吸收方面有重要的
抑制效应等[3 ] 。菝葜皂苷元是《中国药典》2005 年
版一部规定的指标性成分。本实验采用高效液相法
对生知母和盐知母中的菝葜皂苷元和芒果苷进行了
测定 ,为筛选最佳炮制工艺、制定知母饮片的质量标
准及其临床应用提供依据。
1 　仪器与试药
L C —10A Tvp 型高效液相色谱仪 (日本岛津) ;
PL —EL SD1000 检测器 (英国 Polymer Laborato2
ries) ;2200 型超声波清洗机 (淮阴汉邦科技) ;Met t2
ler A G285 型电子天平 (瑞士梅特勒一托利多集团) 。
菝葜皂苷元 (批号 110744220040) 、芒果苷 (批
号 1116072200301) 对照品由中国药品生物制品检
定所提供。知母药材购自河北省 ,经本校鉴定教研
室鉴 定 为 百 合 科 植 物 知 母 A nem arrhena as2
p hodelol des Bunge 的干燥根茎。甲醇、乙腈为色谱
纯 ,水为重蒸水 ,其余试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
211 　知母炮制品的制备[4 ]
21111 　生知母的制备 :取原药材 ,除去毛状物及杂
质 ,洗净 ,润透 ,切厚片 ,干燥 ,筛去毛屑。
21112 　盐知母的制备 :取净知母片 ,用盐水润后 ,置
炒制容器内 ,文火加热 ,炒干 ,取出晾凉 ,筛去碎屑。
知母片每 100 kg 用食盐 2 kg。
212 　芒果苷的 HPL C 法测定
21211 　色谱条件 : Kromasil 柱 (250 mm ×416 mm ,
5μm) ;水2乙腈20185 %磷酸 (100 ∶25 ∶5) 为流动
相 ;体积流量为 016 mL/ min ;柱温为 30 ℃;检测波
长为 258 nm。
21212 　对照品溶液的制备 :精密称取芒果苷对照品
适量 ,加甲醇制成 01354 mg/ mL 的溶液 ,作为对照
品溶液。
21213 　供试品溶液的制备 :取生、盐知母饮片 ,分别
打粉过 50 目筛 ,各取知母粉 011 g ,精密称定 ,置离
心管中 ,加入 50 %乙醇 15 mL ,超声 30 min ,离心 20
min ,用吸管吸取置蒸发皿中 ,如此操作 3 次 ,挥干
溶剂 ,用 50 %甲醇定容于 25 mL 量瓶中。过 0145
μm 微孔滤膜 ,取续滤液 ,即得。
21214 　线性关系的考察 :分别精取芒果苷对照品溶
液 0125、015、0175、110、1125 mL ,加甲醇定容至 5
mL ,在上述色谱条件下重复进样两次 ,每次 10μL ,
测定峰面积值。以峰面积平均值和质量浓度进行回
归处理 ,结果芒果苷在 1717～8815μg/ mL 线性良
好 ,回归方程为 Y = 6 764 005165 X - 69 42112 , r =
0. 999 9。
21215 　精密度试验 :取同一对照品溶液进行试验 ,
·632· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008204226　　　
基金项目 :国家“十五”攻关课题 (2001BA701A55)
作者简介 :党小平 (1983 —) ,男 ,陕西渭南人 ,南京中医药大学 2006 级硕士研究生 ,主要研究方向为中药质量控制及新药开发研制工作。
Tel :13776665267 　E2mail :dxp219 @1261com3 通讯作者　毛春芹　Tel : (025) 85811513 　E2mail :mcq63 @1631com
每次进样 10μL ,连续进样 6 次 ,测定芒果苷峰面积
值 ,计算得 RSD 为 01336 %。
21216 　稳定性试验 :取生知母供试品溶液 ,每次进
样 10μL ,在 0、2、4、6、8、10 h 各进样两次 ,测定芒果
苷峰面积平均值 ,RSD 为 2153 %。结果表明样品在
10 h 内稳定。
21217 　重现性试验 :取生知母样品 5 份 ,制备供试
品溶液 ,进样两次 ,每次进样 10μL ,测定芒果苷峰
面积平均值 ,计算求得平均质量分数为 0177 % ,
RSD 为 2165 %。
21218 　加样回收率试验 :取含芒果苷 0177 %的生
知母切片 ,打粉过 50 目筛 ,取知母粉 0105 g ,平行 9
份 ,精密称定 ,分别精密加入 01 308 0、01384 1、
01460 2 mg 芒果苷对照品 ,制备供试品溶液 ,进行
测定 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 97155 % ,
RSD 为 1162 %( n = 9) 。
21219 　芒果苷的测定 :取生知母和盐知母样品 ,分
别制备供试品溶液 ,进样测定芒果苷峰面积值 ,代入
回归方程测定芒果苷的质量分数 ,结果分别为
017686 % ,RSD 为 216 % ( n = 3) ; 0. 816 9 , RSD 为
218 %( n = 3) ,色谱图见图 1。
t/ min3 2芒果苷3 2mangiferin
图 1 　芒果苷对照品( A)和知母( B)的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of mangiferin reference
substance ( A) and Rhizoma Anemar rhense ( B)
213 　菝葜皂苷元的 H PL C 法测定
21311 　色谱条件 : Kromasil 柱 (250 mm ×416 mm ,
5μm) ;甲醇2水 (95 ∶5) 为流动相 ;体积流量为 110
mL/ min ;柱温 30 ℃;用蒸发光散色检测器检测 ,漂
移管温度 85 ℃。
21312 　对照品溶液的制备 :精密称取菝葜皂苷元对
照品适量 ,加甲醇制成 1196 mg/ mL 的溶液 ,作为对
照品溶液。
21313 　供试品溶液的制备 :取生、盐知母饮片 ,分别
打粉过 50 目筛 ,各取知母粉 015 g ,精密称定 ,置具
塞锥形瓶中 ,精密加入乙醇 25 mL ,称定质量 ,浸泡
过夜 ,超声处理 (功率 200 W ,频率 30 k Hz) 40 min ,
放冷 ,再称定质量 ,用乙醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤
过。精密量取续滤液 10 mL ,蒸干 ,加水 10 mL ,盐
酸 1 mL ,加热回流 2 h ,取出 ,冷至室温 ,边振摇边滴
加 40 %氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄变为橙红 ,
用三氯甲烷振摇提取 2 次 ,每次 30 mL ,合并三氯甲
烷液 ,蒸干 ,残渣加甲醇溶解 ,转移至 10 mL 量瓶
中 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
21314 　线性关系的考察 :分别精取菝葜皂苷元对照
品溶液 0125、015、110、115、210 mL ,加甲醇定容至
5 mL ,在上述色谱条件下重复进样 2 次 ,每次 10
μL ,测定峰面积值。以峰面积平均值对数和质量浓
度的对数进行回归处理 ,结果菝葜皂苷元在 0198～
7184μg 线性关系良好 ,其回归方程为 Y = 11604 9
X + 21528 2 , r = 01999 5。
21315 　精密度试验 :取同一菝葜皂苷元对照品溶液
进行试验 ,每次进样 10μL ,连续进样 6 次 ,测定菝
葜皂苷元峰面积值 ,计算得其 RSD 为 1132 %。
21316 　稳定性试验 :取生知母样品溶液进行试验 ,
每次进样 10μL ,在 0、2、4、6、8、10 h 各进样两次 ,测
定菝葜皂苷元峰面积 ,计算得其 RSD 为 2192 %。
结果表明供试品溶液在 10 h 内稳定。
21317 　重现性试验 :取生知母样品 5 份 ,制备供试
品溶液 ,各进样两次 ,每次进样 10μL ,测定菝葜皂
苷元峰面积 ,计算求得平均质量分数为 1133 % ,
RSD 为 2195 %。
21318 　加样回收率试验 :取生知母饮片 ,打粉过 50
目筛 ,取知母粉 0125 g ,平行 9 份 ,精密称定 ,置具塞
锥形瓶中 ,再加入 5192、6156、712 mg 菝葜皂苷元
对照品 ,制备供试品溶液 ,进行测定 ,计算回收率 ,结
果平均回收率为 96181 % ,RSD 为 1138 %。
21319 　菝葜皂苷元的测定 :取生知母和盐知母样
品 ,分别制备供试品溶液 ,进样测定菝葜皂苷元峰面
积值 ,代入回归方程测定菝葜皂苷元的质量分数 ,结
果分别为 1134 % , RSD 为 213 % ( n = 3) ; 1182 % ,
RSD 为 217 %( n = 3) ,色谱图见图 2。
3 　讨论
本实验采用 HPL C 法对知母中芒果苷进行了
方法学考察 ,并考察了知母芒果苷的最佳提取溶剂 ,
提取方式。从实验结果来看 ,用 50 %乙醇超声提取
的方式提取的比较完全且简便易行 ,且快速准确 ,重
现性好。
·732·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
t/ min3 2菝葜皂苷元3 2sarsasapogenin
图 2 　菝葜皂苷元对照品( A)和知母( B) HPLC图谱
Fig. 2 　HPLC Chromatograms of sarsasapogenin reference
substance ( A) and Rhizoma Anemar rhenae ( B)
　　知母为临床常用药 ,文献报道其有效成分大多
为皂苷类成分。为寻找与临床功效相对应的活性成
分已进行了许多基础研究。本实验选择知母中的代
表性成分菝葜皂苷元、芒果苷为指标 ,比较可知炮制
后知母中芒果苷和菝葜皂苷元的量均有不同程度的
升高 ,但至于其炮制机制目前还不是很清楚 ,其炮制
后量的改变机制及其与功效的关系需要进一步研究
探讨。
参考文献 :
[ 1 ] 　中国药典[ S] . 一部. 2005.
[2 ] 　郑民实 ,陆仲毅. 芒果苷与异芒果苷的抗单纯疱疹病毒作用
[J ] . 中国药理学报 ,1989 ,10 (1) :85.
[ 3 ] 　李好文 ,邓家刚 ,邓　静. 芒果苷国外研究进展[J ] . 广西中医
学院学报 ,2003 ,6 (4) :62.
[ 4 ] 　叶定江. 中药炮制学[ M] . 北京 :人民卫生出版社 1999.
多指标正交试验优选复方五仁醇胶囊含药血清的制备方法
罗 　琳1 ,窦志华2 ,丁安伟3 ,黄金华1 ,陈 　洁1 ,徐济良1 3
(1. 南通大学 ,江苏 南通 　226001 ;2. 南通大学附属南通第三医院 ,江苏 南通 　226006 ;
3.南京中医药大学 ,江苏 南京 　210029)
摘　要 :目的 　药效与化学指标相结合优选复方五仁醇胶囊含药血清制备方法。方法 　建立 CCl4 诱导的大鼠肝
细胞损伤模型 ,采用 L 8 (27 )正交设计给药和取血方案 ,制备大鼠含药血清或血浆 ,考察含药血清或血浆对损伤肝细
胞增值 (M TT)和培养上清液中丙氨酸氨基转移酶 (AL T) 的影响 ,高效液相法测定含药血清或血浆中五味子乙素
含量 ,并对结果综合加权评分和方差分析。结果 　给药方式及采血时间对结果有显著影响 ,且两者之间有交互作
用 ,血浆优于血清 ,但综合加权评分无统计学意义 ,动物是否造模无明显影响。结论 　复方五仁醇胶囊含药血清较
优的制备方法为正常大鼠连续 ig 给药 3 d ,上、下午各 1 次 ,末次给药后 2 h 采血分离血浆。
关键词 :复方五仁醇胶囊 ;含药血清 ;五味子乙素 ;正交试验
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0220238204
　　中药血清药理学是指在动物灌胃给药一段时间
内采血分离血清 ,用此含药物成分的血清 (含药血
清)进行体外药理试验的实验方法。该方法能反映
中药经胃肠道消化吸收 ,再经生物转化 ,最后产生药
理效应的过程 ,不仅反映药物中可吸收部分的直接
作用 ,且能反映药物成分在机体作用下形成的代谢
产物和药物诱生的机体内同源物质的间接效果 ,体
现了体外和体内实验较好的结合[1 ] 。近年来中药血
清药理学研究取得的成果表明 ,该方法值得推广应
用 ,但也存在一些问题与局限性 ,其中含药血清制备
技术的规范化亟待解决 ,包括供体动物的选择、给药
方案、采血时间、含药血清的处理、体系中含药血清
的加入量等[2 ] ,若忽视这些问题或处理不当 ,都会影
响研究的真实性和可信性 ,从而使研究的重复性降
低[3 ] 。复方五仁醇胶囊是以五味子为主的中药复方
制剂 ,治疗急慢性肝炎疗效确切[4 ] 。笔者拟以该制
剂为对象 ,探讨采用血清药理学与血清药化学方法
相结合研究中药复方药效物质基础的可行性。本实
验将药效与化学指标相结合 ,采用正交设计综合考
察动物是否造模、给药方案、采血时间和取血成分 4
个因素 ,优选含药血清的制备方法 ,为该制剂血清药
理学和血清药化学研究提供参考。
·832· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 2 期 2009 年 2 月
3 收稿日期 :2008203216　　　
基金项目 :江苏省中医药局科研项目 ( H05173) ;江苏省高校研究生科技创新计划项目 (140)
作者简介 :罗　琳 (1976 - ) ,女 ,江苏南京人 ,讲师 ,硕士 ,从事药理学研究。Tel : (0513) 85051726 　E2mail :luolin @ntu. edu. cn3 通讯作者　徐济良　Tel : (0513) 85051727 　E2mail :jlxu @ntu. edu. cn