全 文 ：陇西产黄芪药材 HPLC2DAD2ELSD 指纹图谱的研究
李 　进1 ,陈 　涛1 ,王 　洋2 ,宋洁瑾2 ,马志平2 ,孟 　萌2 3
(11 天津中医药大学第一附属医院 ,天津 　300193 ; 21 天津中医药大学 ,天津 　300193)
摘 　要 :目的 　建立陇西产黄芪药材 HPLC2DAD2EL SD 指纹图谱 ,为全面科学地控制药材质量提供方法。方法
采用 HPLC2DAD2EL SD 串联技术 ,流动相 A :10 %乙腈 ,B :90 %乙腈 ;检测波长 :265 nm ;体积流量 :1 mL/ min ,柱
温 :35 ℃;进样量 :20μL ;增益值 :20 ;漂移管温度 :55 ℃;加热器级别 :65 % ;气体压力 ;2. 068 5 ×105 Pa。以 10 批甘
肃陇西不同产地的黄芪药材建立黄酮类和皂苷类化合物指纹图谱共有模式 ,并采用“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统”软件进行数据处理 。结果 　建立的方法对黄芪药材中黄酮类成分、皂苷类成分均有良好的分离 ,一次进样
同时测定了两类不同成分的指纹图谱 ,不同批次药材间的相似度符合相关规定。结论 　该方法可用于黄芪中黄酮
类成分和皂苷类成分指纹图谱的同时测定 ,控制药材质量。
关键词 :黄芪 ;指纹图谱 ; HPLC2DAD2EL SD
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2009) 05 0804 03
HPLC2DAD2ELSD Fingerprint of Ra dix Ast ra gali in Longxi
L I J in1 , CH EN Tao1 , WAN G Yang2 , SON G Jie2jin2 , MA Zhi2ping2 , M EN G Meng2
(11 First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine , Tianjin 300193 , China ;
21 Tianjin University of Traditional Chinese Medicine , Tianjin 300193 , China)
Abstract : Objective 　To establish t he H PL C2DAD2EL SD fingerp rint of R adi x ast rag al i , provide new
met hods for science quality cont rol of t he medicinal materials1 Methods 　Application of H PL C2DAD2EL SD
techniques were connected in series1 The mobile p hase A : 10 % acetonit rile , B : 90 % acetonit rile , detec2
ting wavelengt h : 265 nm , flow rate : 1 mL/ min , column temperat ure : 35 ℃, sample size : 20μL , gain :
20 , t ube : 55 ℃, neb : 65 % , air p ressure : 2. 068 5 ×105 Pa. The mutual mode was established depending
on ten A st ra gal us samples f rom different growing areas in Gansu1 The sof tware“Similarity Evaluation
System for Chromatograp hic Fingerf rint of Chinese Materia Medica”was applied to analyzing1 Results
The established method is good for t he separation of saponins , flavonoids f rom R adi x A st ragal i , and
simultaneous determination of t he two different component s in one sample injection1 The similarity of dif2
ferent batches of medicinal materials is fit for t he requirement1 Conclusion 　The met hod is workable to
simultaneously determine saponins and flavonoids fingerp rint f rom R adi x A st ragal i , and to cont rol it s
quality1
Key words : R adi x A st ragal i ; fingerp rint ; HPL C2DAD2EL SD
　　黄芪为豆科植物蒙古黄芪 A st ragl us membra2
naceus ( Fisch1 ) Bunge var1 mon g hol icus (Bunge)
Hsiao 或 膜 荚 黄 芪 A st ra gal us membranaceus
( Fisch1 ) Bunge 的干燥根。具补气固表、利尿托毒、
排浓、敛疮生肌的作用[1 ] 。黄芪中的化学成分主要
有黄酮类、皂苷类和多糖等。黄酮类成分具有清除
氧自由基 ,抑制脂质过氧化和维持血中一氧化氮浓
度 ,保护缺血再灌注损伤的作用[2 ] 。皂苷类成分具
有抗衰老、抗病毒、抗风湿、降压、强心、保护心肌细
胞、抗生物氧化、抗肿瘤、抗肝纤维化、抗血栓等作
用[3 ] 。丹芪偏瘫胶囊为国家中药 6 类新药 ,黄芪为
其处方中的主药。丹芪偏瘫胶囊中黄芪药材的有效
成分为皂苷类成分 ,黄酮类成分为辅助成分。现有
控制黄芪药材质量的方法为检测其有效成分黄芪甲
苷的量 ,此方法不能很好地反映药材的全貌。指纹
图谱技术是近年来发展起来的质量控制新方法 ,其
·408· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
3 收稿日期 :2008208223　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :天津市科技创新专项资金项目 (06FZZDSH00408)
作者简介 :李　进 (1958 —) ,男 ,天津人 ,学士学位 ,主任药师 ,硕士生导师 ,主要从事中药制剂与质量标准的研究工作。
Tel : (022) 23970930 　E2mail :yf @shitian. com
特点为能全面客观地反映药材的质量[4 ,5 ] 。此外 ,
由于黄芪品种较为混乱 ,为了保证丹芪偏瘫胶囊质
量的稳定、可控 ,黄芪的产地应做到相对固定。甘肃
陇西为丹芪偏瘫胶囊中黄芪的主产地 ,多年来黄芪
药材一直来源于此 ,本实验通过研究 10 批陇西地区
的黄芪药材 HPL C2DAD2EL SD 指纹图谱 ,为企业
遴选并固定黄芪药材的产地提供了依据。
1 　仪器与试药
111 　仪器 : Waters 高效液相色谱仪 , 包括 Wa2
ters600 型 H PL C 泵 , 2420 蒸发光散射检测器
( EL SD) , 2998 二级管阵列检测器 ( DAD) , Wters
In2Line 脱气机 , Waters Empower 工作站 ,色谱柱 :
Waters SunfireTM C18 (250 mm ×4. 6 mm ,5μm) 。
112 　试剂 :乙腈 (色谱纯) ,重蒸水 (自制) 。
113 　试药 :芒柄花素对照品 (批号 1117032200501) 购
自中国药品生物制品检定所 ,黄芪甲苷对照品 (批号
1117032200501)购自中国药品生物制品检定所。黄芪
药材均采自甘肃陇西县 10 个不同地区 ,均来源于豆
科植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus ( Fisch1 )
Bunge1 var1 mongolicus (Bunge1) Hsiao 的干燥根 ,由
天津中医药大学第一附属医院主任药师崔维利对以
上品种进行鉴定。黄芪具体产地见表 1。
表 1 　甘肃陇西不同地区的黄芪药材
Table 1 　Radix Ast ragali′s origin in Gansu
Longxi from different habitats
编号 产地 编号 产地
1 巩昌镇　 6 双泉乡
2 首阳镇　 7 齐峰镇
3 菜子镇　 8 和平乡
4 权家湾乡 9 宏伟乡
5 渭阳乡　 10 德关乡
2 　方法与结果
211 　黄芪药材 HPL C2DAD2EL SD 指纹图谱方法
的建立
21111 　色谱条件 :流动相 A :10 %乙腈 ,B :90 %乙
腈 ,梯度洗脱 ,梯度时间 60 min ,流动相变化 B :
5 %～100 %。检测波长 :265 nm ;柱温 : 35 ℃;进样
量 :20μL ;增益值 :20 ;漂移管温度 :55 ℃;加热器级
别 :65 % ;气体压力 :2. 068 5 ×105 Pa。
21112 　对照品溶液的制备
黄芪甲苷对照品溶液 :取黄芪甲苷对照品适量 ,
精密称定 ,加甲醇制成 0. 1 mg/ mL 的溶液 ,摇匀 ,
即得。　　
　　芒柄花素对照品溶液 :取芒柄花素对照品适量 ,精
密称定 ,加甲醇制成 0. 2 mg/ mL 的溶液 ,摇匀 ,即得。
21113 　供试品溶液的制备 :取黄芪药材粉末 (过二
号筛) ,精密称定 4 g ,甲醇 50 mL 索氏提取 4 h ,滤
过 ,滤液蒸干 ,加入 60 ℃水 25 mL 溶解 ,转移至分
液漏斗中 ,用水饱和正丁醇振摇提取 3 次 (每次 25
mL) ,合并正丁醇液 ,氨试液 40 mL 洗涤 2 次 ,弃去
氨试液 ,正丁醇液水浴蒸干 ,残渣加适量甲醇使溶
解 ,转移至 5 mL 量瓶中 ,定容至刻度 ,摇匀 ,过 0. 45
μm 微孔滤膜 ,取续滤液 ,即得。上述样品置 0～4
℃保存。
212 　干扰试验 :进样供试品溶液 20μL ,记录 120
min 的色谱图 ,发现 60 min 后无色谱峰。因此分析
时间定为 60 min。吸取甲醇溶液 20μL ,进样 ,运行
60 min ,没有发现影响指纹图谱共有峰的溶剂峰。
213 　方法学考察
21311 　精密度试验 :取黄芪 8 号供试品溶液 ,连续
进样 6 次 ,对共有峰的相对保留时间和相对峰面积
进行考察。结果表明 ,皂苷类、黄酮类各共有峰的相
对保留时间的 RSD 均小于 3 % ;皂苷类相对峰面积
的 RSD 小于 5 % ,黄酮类相对峰面积的 RSD 小于
3 % ,符合指纹图谱的技术要求。
21312 　稳定性试验 :取黄芪 8 号供试品溶液 ,于 0、
2、4、6、12、24、48 h 进样 ,对共有峰的相对保留时间
和相对峰面积进行考察。结果表明 ,皂苷类、黄酮类
各共有峰的相对保留时间的 RSD 均小于 3 % ;皂苷
类相对峰面积的 RSD 小于 5 % ,黄酮类相对峰面积
的 RSD 小于 3 % ,符合指纹图谱的技术要求。
21313 　重现性试验 :选取黄芪 8 号药材粉末 6 份 ,
按供试品制备方法制备 ,分别进样 ,对共有峰的相对
保留时间和相对峰面积进行考察。结果表明 ,皂苷
类、黄酮类各共有峰的相对保留时间的 RSD 均小于
3 % ;皂苷类相对峰面积的 RSD 小于 5 % ,黄酮类相
对峰面积的 RSD 小于 3 % ,符合指纹图谱的技术
要求。　　
214 　黄芪药材 HPL C2DAD2EL SD 指纹图谱 :取 10
批陇西黄芪药材供试品溶液 ,分别进样 ,色谱图见
图 1、2。　
215 　共有峰的标定 :根据 10 批陇西产黄芪药材
HPL C2DAD2EL SD 指纹图谱 ,分别标定共有峰皂苷
类 12 个 ,黄酮类 9 个。
216 　相似度的计算 :采用《中国药典》委员会出版的
中药色谱指纹图谱相似度评价软件 (版本 200A) 进
行相似度计算。设置样品 5 图谱为参照谱 ,自动匹
配 ,生成对照。相似度计算 ,结果见表 2、3。
·508·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 5 期 2009 年 5 月
表 2 　皂苷类成分指纹图谱相似度
Table 2 　Fingerprint similarity of saponins
样品号 相似度 样品号 相似度
S1 0. 973 S6 0. 910
S2 0. 952 S7 0. 868
S3 0. 829 S8 0. 965
S4 0. 990 S9 0. 951
S5 0. 973 S10 0. 981
对照 1. 000
3 　讨论
311 　对超声、回流、索氏 3 种提取方法和不同的提
取溶剂甲醇、70 %乙醇、95 %乙醇以及不同的提取时
间进行了考察 ,以整体峰型、总峰数、分离度为考察
表 3 　黄酮类成分指纹图谱相似度
Table 3 　Fingerprrint similarity of flavonoids
样品号 相似度 样品号 相似度
S1 0. 957 S6 0. 909
S2 0. 964 S7 0. 961
S3 0. 991 S8 0. 957
S4 0. 943 S9 0. 966
S5 0. 990 S10 0. 966
对照 1. 000
对象 ,通过比较发现本实验最终确定的提取方法可
同时有效提取供试黄芪药材中黄酮类、皂苷类成分。
312 　选择了几组不同的流动相 ,A :水 ,B :甲醇 ;A :
10 %甲醇 ,B : 90 %甲醇 ; A : 10 %甲醇 ,B :甲醇 ; A :
水 ,B :乙腈 ;A :10 %乙腈 ,B :90 %乙腈进行考察 ,并
对不同的梯度条件进行了系统考察 ,通过对皂苷类
成分和黄酮类成分指纹图谱的综合考虑 ,选择了现
有的流动相和梯度条件。
313 　10 批陇西黄芪皂苷类成分的相似度中除黄芪
3 号、7 号药材外均符合相似度大于 0. 9 的要求 ,分
析原因可能与药材的生长年限不同有关 ,另外
EL SD 条件不稳定 ,也是原因之一 ,而黄酮类成分指
纹图谱的相似度符合要求。甘肃陇西大部分批次药
材均符合规定 ,考虑今后黄芪药材指纹图谱比较时 ,
可相应对照 DAD 指纹图谱来考察。此外 ,药材采
集时 ,尽量统一生长年限 ,并重点采集相似度高的地
域的黄芪。
314 　对黄芪药材黄酮类成分指纹图谱进行了 190～
400 nm 的全波长扫描 ,重点考察了 203、230、254、
265、280 nm 进行检测。结果显示 ,265 nm 条件下 ,黄
酮类成分整体峰型、分离度良好 ,且总峰数多。
315 　EL SD 的设定参数包括漂移度温度、载气压
力、加热器级别和增益值。对上述参数条件进行了
优化 ,选定了本试验所用条件。
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