全 文 ：物产量,又能获得最高的总皂苷和总黄酮产量。
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HPLC法测定不同生长年限杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷
王丽楠,杨美华*
(中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100193)
摘 要:目的 采用 H PLC法测定不同生长年限杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷的量。方法 色谱柱为 Agilent Zorb2
ax Eclipse XDB2C18( 250 mm@4. 6 mm, 5 Lm) , 流动相为甲醇2水 ( 25B 75) ,检测波长为 277 nm, 体积流量 1 mL/
min,柱温 25 e 。结果 13、22 年生杜仲内皮松脂醇二葡萄糖苷量相对较高; 13 年生杜仲栓皮松脂醇二葡萄糖苷
量出现最低点。从杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷总量考虑, 22 年为最佳采收期。结论 本实验建立的杜仲皮松脂醇
二葡萄糖苷量测定方法,重现性好, 结果准确可靠,为杜仲皮质量控制提供了参考。通过对不同生长年限杜仲皮松
脂醇二葡萄糖苷量的研究,为杜仲的合理采收提供了科学依据。
关键词:杜仲; 生长年限; 松脂醇二葡萄糖苷; 高效液相色谱法
中图分类号: R2821 6 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0420651203
杜仲为杜仲科植物杜仲 Eucommiae ulmoides
Oliver 的干燥树皮,别名思仲, 丝连木。杜仲是第四
纪冰川侵袭后残留下来的孑遗古老树种, 其近缘种
类都已绝灭[ 1]。我国是现存杜仲资源的唯一保存
地,至今在世界各地尚未发现其近缘植物,故有/活
化石植物0的美称, 被列为国家二类重点保护树
种[ 2]。我国第一部药物学专著5神农本草经6就记载
了杜仲皮的神奇药效, 称/杜仲味辛平0,主治/腰膝
痛、补中、益精气、坚筋骨、强志。除阴下痒湿, 小便
馀沥,久服轻身耐老0,并把杜仲列为中药上品。
杜仲的生长期较长, 一般 10年以上才能开始剥
皮。杜仲传统采剥方法采收期为 15~ 20 年, 嫩树
剥皮易死,且皮不易再生[ 3]。5中国药典62005年版
(一部)规定杜仲的初加工方法为刮去粗皮,堆置/发
汗0至内皮呈紫褐色,晒干即可[ 4]。由于杜仲独特的
药用价值和潜在的经济价值, 国内外学者对其进行
大量的研究。现已明确松脂醇二葡萄糖苷 ( pi2
noresinol diglucoside, PDG) 有明确的降压作用,是
杜仲主要活性成分[ 5]。5中国药典6 2005 年版一部
杜仲皮中松脂醇二葡萄糖苷的定量测定采用高效液
相色谱法[ 4]。本实验以5中国药典6方法为基础,并
做出改进,首次考察了不同生长年限杜仲皮中松脂
醇二葡萄糖苷,为杜仲的合理采收提供科学依据。
1 仪器与试剂
Waters 2695 ) 2996高效液相自动进样色谱仪。
松脂醇二葡萄糖苷对照品 (批号: 1115372
200502) 购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色
谱纯 ( Fisher 公司生产) ;蒸馏水为娃哈哈纯净水;
其他试剂均为分析纯。
样品于 2007 年 5月采自中国药材集团都江堰
华泰川芎药业有限责任公司三大药材基地2杜仲种
植区。采收方法:在离地 1 m 处环割,以此为起点
向上取一定高度, 割第二道切口,在两切口间纵割一
切口,用竹片沿切口将整张树皮剥下。共采集杜仲
#651#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
* 收稿日期: 2008207202 基金项目:国家科技支撑计划项目 ( 2006BAI09B05)作者简介:王丽楠,女,在读博士,研究方向为中药质量分析及新药研究开发。E2mail: wln 246@hotmail . com
* 通讯作者 杨美华 E2mai l: yangmeihua15@hotmail. com T el: ( 010) 62899730 13041071999
8、13、22、30年生 4组样品,每组 3批。将样品自然
晾干,将栓皮刮下后,内皮、栓皮分别粉碎,待用。
2 方法与结果
21 1 色谱条件:色谱柱为 Agilent Zorbax Eclipse
XDB2C18( 250 mm @4. 6 mm, 5 Lm) , 流动相为甲
醇2水 ( 25 B 75) , 检测波长为 277 nm, 进样量 10
LL, 体积流量 1 mL/ min, 柱温 25 e 。在此条件下,
样品中松脂醇二葡萄糖苷与其他相关峰能达到基线
分离,见图 1。
12松脂醇二葡萄糖苷
12pin oresin ol diglucoside
图 1 对照品( A)和样品( B) HPLC 色谱图
Fig. 1 Chroma togram of r ef er ence substance ( A)
and sample (B)
21 2 对照品溶液的制备:精密称取松脂醇二葡萄糖
苷对照品适量, 加甲醇制成 01 5 mg/ mL 的溶液, 摇
匀,即得。
21 3 供试品溶液的制备:取药材 2 g,精密称定, 精
密加入三氯甲烷适量,超声提取 30 min,弃去三氯
甲烷液,药渣挥去三氯甲烷,再加入甲醇适量, 分别
超声提取 45 min, 提取液回收甲醇至适量, 转移至
10 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤
液,即得。
21 4 精密度试验:取一定质量浓度松脂醇二葡萄糖
苷对照品溶液连续测定 5 次, 计算质量分数, 其
RSD 为 01 04% ,表明仪器精密度良好。
21 5 稳定性试验:取对照品溶液于室温放置 0、2、
4、6、8 h 测定质量分数, RSD 为 01 21%。表明对照
品在 8 h 内稳定。
216 重现性试验:精密称取杜仲内皮样品 (批号:
20070501) 6份,按上述定量测定方法进行测定, 质量
分数为 01 12% , RSD为 11 90%,表明重现性良好。
21 7 加样回收率:精密称取杜仲内皮样品 (批号:
20070501) 11 0 g,分别精密加入对照品 11 2 mg, 各
份均按上述定量测定方法进行测定, 平均回收率
1001 56% , RSD 为 11 85% (n= 6)。
21 8 样品测定:分别将杜仲栓皮、内皮样品按照
21 3 项所述处理后,测定质量分数。结果见表 1。
3 讨论
31 1 提取方法的考察 :取杜仲内皮样品(批号:
表 1 不同生长年限杜仲栓皮、内皮松脂醇二葡萄糖
苷测定结果
Table 1 Determina tion of pinoresinol diglucoside
from E. ulmoides bark and endodermis
in var ious growing year s
生长年限/年 批号 栓皮/ % 内皮/ %
8 20070501 01 04 01 12
20070502 01 06 01 17
20070503 01 11 01 20
13 20070504 01 00 01 23
20070505 01 00 01 44
20070506 01 01 01 31
22 20070507 01 12 01 37
20070508 01 11 01 33
20070509 01 14 01 38
30 20070510 01 07 01 22
20070511 01 17 01 26
20070512 01 05 01 19
20070501) 21 0 g (n= 2) , 精密称定, 精密加入三氯
甲烷适量,分别采用索氏提取 6 h、超声提取 1 h,弃
去三氯甲烷,药渣挥去三氯甲烷, 再加入甲醇适量,
再依次分别采用索氏提取 6 h、超声提取 1 h,提取
液滤过,蒸干, 流动相定容至 10 mL, 即得。按 21 1
项色谱条件进行定量测定。实验结果表明,超声提
取与索氏提取效果基本一致,故采用超声提取方法。
31 2 提取时间的考察: 取杜仲内皮样品 (批号:
20070501) 21 0 g (n= 6) , 精密称定, 精密加入三氯
甲烷适量,超声提取 30 min, 弃去三氯甲烷, 药渣挥
去三氯甲烷, 再加入甲醇适量, 分别超声提取 15、
30、45、60 min, 提取液回收甲醇至适量, 转移至 10
mL 容量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 取续滤
液,即得。按 21 1项色谱条件进行定量测定。实验
结果表明,超声提取 45 min 效果最佳。
31 3 由表 1看出,各组杜仲样品栓皮松脂醇二葡萄
糖苷量明显低于内皮。5中国药典6规定杜仲去栓皮
入药,而笔者了解市场上杜仲存在不去栓皮入药的
情况。就本实验结果分析,仅从松脂醇二葡萄糖苷
量角度考虑,杜仲去栓皮入药更具科学性。
表 1中 4组杜仲样品内皮松脂醇二葡萄糖苷量
变化不明显, 13、22年生杜仲内皮松脂醇二葡萄糖
苷量相对较高。由表 1分析, 4组杜仲样品栓皮松
脂醇二葡萄糖苷的量 13 年生杜仲松脂醇二葡萄糖
苷量出现最低点, 由于杜仲皮松脂醇二葡萄糖苷总
量 22年生最高, 因此, 从杜仲皮中松脂醇二葡萄糖
苷总量考虑, 22年为最佳采收期。
31 4 本实验对5中国药典6中杜仲皮松脂醇二葡萄
糖苷定量测定方法进行改进, 与5中国药典6方法比
#652# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
较,测定结果相似,方法简便, 重现性好,为杜仲皮质
量控制提供了参考。同时, 通过对不同生长年限杜
仲皮松脂醇二葡萄糖苷量的研究,为杜仲的合理采
收提供了科学依据。
致谢:感谢中国药材集团都江堰华泰川芎药业
有限责任公司在采集药材方面提供的支持和帮助!
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HPLC法测定滨蒿中对羟基苯乙酮
叶 娉1 ,万 丽1* ,周 立2 ,王 敏1 ,王 凌1
( 11 成都中医药大学,四川 成都 611137; 21 贵阳市农业局, 贵州 贵阳 550000)
摘 要:目的 从滨蒿中分离得到对羟基苯乙酮并建立其定量测定方法。方法 采用硅胶柱色谱和 Sephadex LH2
20 从滨蒿的三氯甲烷部位分离得到对羟基苯乙酮; 采用 DiamonsilTM C18色谱柱 ( 250 mm@4. 6 mm, 5 Lm) , 甲醇2
2% 醋酸溶液 ( 30B 70) 为流动相, 检测波长为 275 nm,对不同产地滨蒿中对羟基苯乙酮的量进行测定。结果 对
羟基苯乙酮在 01 098~ 01 786 Lg 线性关系良好,精密度、稳定性、重现性、加样回收率试验的 RSD 均小于 2% , 平均
加样回收率为 991 80%。结论 该方法准确、快速、重现性好, 可用于滨蒿中对羟基苯乙酮量的测定。
关键词:滨蒿; 对羟基苯乙酮; 定量测定
中图分类号: R2821 6 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0420653202
滨蒿为5中国药典62005 年版一部茵陈项下收
载品种之一, 为菊科植物滨蒿 Ar temisia scopa ria
Waldst. et Kit. 的干燥地上部分, 具有清湿热, 退
黄疸的功效[ 1] , 为利胆退黄的要药[ 2] , 现代研究表
明,对羟基苯乙酮具有明确的利胆活性[ 3] ,是滨蒿的
有效成分之一, 而茵陈的现行质量标准中没有定量
测定项, 相关文献报道[ 4~ 8]也尚未见关于滨蒿中对
羟基苯乙酮定量测定方面的报道。本实验运用硅胶
柱色谱从滨蒿的三氯甲烷部位中分离得到对羟基苯
乙酮, 1H2NMR、13C2NMR 光谱数据与对羟基苯乙
酮文献值一致[ 9]。采用 H PLC法测定了 10 个产地
滨蒿中对羟基苯乙酮, 为滨蒿的质量控制以及茵陈
药材质量标准的建立奠定基础。
1 仪器与试药
Varian ProStar 210 高效液相色谱仪 ( Varian
Model 325检测器) :美国瓦里安公司; BP211D (万
分之一、十万分之一) 型电子天平:德国 Sartorius
公司;对羟基苯乙酮对照品: 自制, 质量分数大于
98% ;滨蒿药材购自四川、山西、辽宁、广西、陕西、河
南、安徽、新疆, 经成都中医药大学严铸云教授鉴定
为滨蒿 A. scopar ia Waldst . et Kit . 的干燥地上部
分;甲醇为色谱纯,水为重蒸水, 其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
21 1 色谱条件: DiamonsilTM C18色谱柱 ( 250 mm@
4. 6 mm, 5 Lm) ;以甲醇22% 醋酸溶液 ( 30B 70) 为
流动相; 体积流量为 1 mL/ min;检测波长为 275
nm;柱温: 30 e 。理论塔板数按对羟基苯乙酮峰计
算应不低于 3 000。色谱图见图 1。
图 1 对羟基苯乙酮对照品(A)和样品(B)的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatogram of p2hydroxyacetophen2
one refer ence substance (A) and sample (B)
21 2 对照品溶液的制备:精密称取对羟基苯乙酮对
照品适量, 加甲醇制成含 01 1 mg/ mL 的溶液作为
对照品溶液。
21 3 供试品溶液的制备:取滨蒿药材约 2 g, 精密
称定,加入甲醇 30 mL,回流提取 2 次,每次 1 h,滤
#653#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
* 收稿日期: 2008207218 作者简介:叶 娉( 1984 ) ) ,女,南宁市人,在读硕士研究生,研究方向为中药药效物质基础与质量标准的研究。
T el : ( 028) 61801628 E2mail: yep 130@163. com
* 通讯作者 万 丽