全 文 ：·1382· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
桃核承气改良方对家兔血管内皮损伤后信号转导
及转录活化因子3和NO的影响
张雨1，宫丽鸿2．，时广容2，徐琳2
(1．辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110000}2．辽宁中医药大学附属医院，辽宁沈阳110000)
冠心病是危害人类生命的最主要疾病之一。目
前心血管领域积极开展介入治疗(PCI)，以经皮冠
状动脉腔内成形术(percutaneoustransluminal
coronaryangioplasty，PTCA)为基础的介入治疗
迅速发展，成为冠心病血管重建治疗的较成熟的手
段，成功抢救许多患者生命。PCI后再狭窄率已经从
PTCA时代的20％～30％降至目前药物支架时代
的5％～8％[1]，但是PCI后再狭窄仍是影响PCI
中远期疗效的重要因素。目前常规化学药防治过程
中出现对肝、肾损害及大出血等严重问题仍未解决，
因此PCI术后再狭窄的中医药防治研究成了人们
关注的新热点。本实验旨在研究桃核承气改良方对
家兔血管内皮损伤后信号转导和转录活化因子3
(STAT3)及NO的影响来预防PCI术后再狭窄。
1材料
1．1动物及饲料：健康新西兰大耳白兔40只，体质
量2～2．5kg，雌雄不拘，由辽宁中医药大学实验动
物中心提供。家兔普通饲料、家兔高脂饲料(基础饲
料79％、15％蛋黄粉、猪油5％、胆固醇1％)均由
辽宁中医药大学动物实验中心加工。
1．2 主要试剂和仪器：鼠抗人单克隆抗体COX一2
(GT201202)，购自Gene公司；封闭用正常山羊血
清工作液，总RNA提取试剂异硫氰酸胍(Triozol
Reagent)：美国InvitrogenLifeTechnologies公司；
反转录酶(AMV)，RNA酶抑制剂，dNTP混合液，
Oligo(dT)15，TaqDNA聚合酶，目的基因引物均
购自日本TaKaRa公司；考马斯亮蓝蛋白定量试剂
盒，南京建成生物工程公司；碱性磷酸酶标记的羊抗
鼠IgG，北京中山生物技术有限公司；PCR扩增仪
(德国Biometra)，ChemiImag r5500凝胶电泳成像
分析系统(美国AlphainnotechChemiImager)；
NO免疫组化一抗购自武汉博士德生物工程有限公
司；二抗生物素标记羊抗兔IgG、辣根酶标记链霉卵
白素工作液、显色剂3，3一二氨基苯甲胺(DBA)及放
射免疫所用试剂均购自北京中山生物技术有限公司。
2方法
2．1药物制备：桃核承气改良方(大黄30g、芒硝
15g、甘草15g、肉桂15g、桃仁15g、水蛭25g、金
银花20g)，由辽宁中医药大学附属第一医院提供。
各药材用水浸泡0．5h，先武火再文火煎1h，倒出
药汁，共煎3次，将药汁合并，滤过，浓缩至100mL
(相当于生药1．35g／mL)，4℃冰箱保存。舒降之，
40rag／片，由杭州默沙东制药有限公司提供。阿司匹
林，100rag／片，批号BTA6015，由拜尔药业集团有
限公司提供。研磨后，双蒸水溶解，4℃冰箱保存。
2．2 实验分组及给药：健康新西兰大耳白兔40
只，随机分为4组，分别为模型组、桃核承气改良方
组、化学药组、对照组，每组10只动物。除对照组
外，其余各组动物高脂饲料喂养4周后行腹主动脉
内膜剥脱术造模。术后各组动物普通饲料喂养，实验
组ig桃核承气改良方6．075g／kg，化学组ig舒降
之(1．8mg／kg)和阿司匹林(4．5mg／kg)，各组均
给药4周，模型组、对照组ig生理盐水4．5mL／kg。
2．3动物造模：除对照组外的3组动物高脂饲料喂
养4周造成动脉粥样硬化模型[2]，然后行腹主动脉
内膜剥脱术造模：25％乌拉坦ip0．4mL／100g麻
醉家兔 于右侧腹股沟部进行脱毛消毒后利多卡因
少量局麻，切开皮肤，分离股动脉，两动脉夹分别夹
住股动脉近心端及远心端，暴露2cm左右，动脉剪
小口，经导丝导入直径1．5-2．0mm球囊导管(依
血管直径大小而定)，至肾动脉下方，盐水充盈球囊
(压力为4～6kPa)，缓慢回拉导管至切口处抽空球
囊内液体，使压力降至零，重复上述过程3次，达到
剥落腹主动脉内皮的目的。撤出导管，结扎股动脉，
收稿日期：2008—04—24
基金项目：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(05L246)
作者简介：张雨(1982一)，男(回族)，吉林省吉林市人，硕士，研究方向为中西医结合防治冠心病及PCI术后再狭窄．
Tel：13700047762E—mail：Zhangyu008．hi@163．corn．cn
*通讯作者宫丽鸿Tel：13504052332E—maillLindal975@sina．com．cn
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1383·
缝合皮肤，术后3d连续每天im青霉素8×105U／
只，预防感染。
2．4 实验取材：术后4周耳缘静脉采血，处死家
兔，切开腹壁暴露腹腔，分离腹主动脉，截取2am
长腹主动脉，用生理盐水冲洗后置10％中性甲醛
溶液中一20℃保存，待测。
2．5观测指标
2．5．1家兔血清NO水平测定：取血2mL，1500r／
min离心10min，分离血清，一30℃冰箱冻存。采用
比色法，在酶标仪570nm测定样品吸光度值，以亚硝
酸钠为对照，按标准曲线，可以间接测定NO水平。
2．5．2损伤血管中NO分布测定：采用免疫组化
方法测定，将固定好的标本经酒精脱水，二甲苯透
明，常规石蜡包埋；5弘m连续切片；3％H。0。室温孵
育5～10min，以消除内源性过氧化物酶的活性；蒸
馏水冲洗，PBS浸泡5min×2次；抗原修复；5％～
10％正常山羊血清(PBS稀释)封闭，室温孵育
10min，倾去血清勿洗。滴加一抗工作液，37℃孵育
1～2h；PBS冲洗，5min×3次；滴加适量生物素标
记二抗工作液，37℃孵育10～30min；PBS冲洗，5
min×3次；滴加适量的辣根酶标记的链霉卵白素工
作液，37℃孵育10--一30min；PBS冲洗，5min×3
次；DAB显色3-、一15min；自来水冲洗，复染，脱水，
透明，封片。PBS代替一抗作为阴性对照。阳性判断
标准：以细胞浆呈棕黄色为阳性。应用经Smart
View2001生物电泳图像分析软件(上海复日科技
有限公司)进行处理、分析，测定NO在内皮和平滑
肌细胞中阳性表达，并进行统计学处理。
2．6家兔血管内皮中STAT3的mRNA表达
2．6．1总mRNA的提取：参照Trizol说明书采取
一步法提取总RNA。
2．6．2半定量RT—PCR：取实验兔的血管内皮组织
200mg，参照说明测定mRNA。引物COX一2和p
actin内参对照引物由中国医科大学提供。参照RT—
PCR试剂盒说明书合成cDNA，参照RT—PCR试剂
盒说明书进行PCR反应。取5pLPCR产物与2肛L
上样缓冲液混合，进行1．5％琼脂糖凝胶电泳(120
V，45min)，电泳结束后，凝胶成像仪成像分析。
2．7 Westernblotting印迹分析STAT3蛋白表
达：参考试剂盒说明测定。
2．8数据处理：图像经SmartView2001生物电泳
图像分析软件(上海复日科技有限公司)进行处理、
分析I采用SPSS10．0软件包对RT—PCR和
Westernblotting结果进行方差分析和Pearson相关
分析，数据以；±s表示；免疫组化结果用列表X2检验。
3结果
3．1对家兔血清NO水平的影响：术后4周桃核承
气改良方组、化学药组家兔血浆NO水平较模型组
明显升高(P
0．05)，结果见表1。
表1各组家兔血清NO水平比较(；士s，一=10)
Table1 ComparisonofNOlevelinserumofrabbits
inallgroups(j±g，库=10)
组别 剂量／(mg·kg一1)NO／(pmol·L一1)
与对照组比较l。P<0．05，与模型组比较：o尸d0．05
。P<0．05uscontrolgroup；△P<0．057J$modelgroup
3．2 对家兔损伤血管中N0的影响：结果表明阳
性颗粒主要表达部位在腹主动脉内膜内皮细胞胞
浆，动脉中膜及内皮下的平滑肌细胞胞浆有少量表
达。N0抗原表达从免疫组化结果看，模型组NO抗
原表达明显低于其他3组(P<0．05)，两个给药组
NO抗原表达比模型组显著增强(P
皮不光滑、有增生、不连续；给药组内皮较连续、增生
减低；对照组内皮光滑、未见增生。说明桃核承气改
良方能促进NO抗原阳性表达。
3．3家兔血管内皮中STAT3的mRNA表达：在
各组家兔血管内皮中，均可见到STAT3的mRNA
表达。其中，模型组中STAT3的mRAN表达上调；
桃核承气改良方组中STAT3的mRNA表达被抑
制；化学药组中STAT3的mRNA表达被抑制。结
果见图1。
M—Marker1-对照
组 2一模型组 3一
桃核承气改良方组
4一化学药组
M—Marker
1-controlg up
2-modelgroup
3-TaoheChengqi
GailiangPreserip—
tiongroup
4-chemicaldrugs
空roup
图1各组家兔血管内皮中STAT3mRNA表达
Fig．1ExpressionofSTAT3mRNAinvascular
endotheclumofrabbitsInalIgroups
万方数据
·1384· 中革喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9,El
3．4 Westernblotting结果：采用FlourChemV
2．0凝胶成像分析软件(美国)分析，记录每条蛋白
电泳带的灰度值，进行半定量分析。模型组内皮中
STAT3蛋白表达增强，与对照组比较，差异显著
(P<0．05)；两给药组STAT3蛋白表达明显抑制，
与模型组比较差异显著(P<0．05)，见图2。
对照 模型桃核承气化学药
改良方
与对照组比较：‘P<0．05I与模型组比较：Ap<0．05
。P<0．05wcontrolgroupl／P<0．05wmodelgroup
图2各组家兔血管内皮中STAT3蛋白表达
Fig．2ExpressionofSTAT3proteininvascular
endotheciumofrabbitsnallgroups
4讨论
“胞痹”病名最早见于《内经》，《内经》记载：“心
痹者脉不通。脉者，血之府也⋯⋯涩则心痛99o《金匮
要略》所言：胸痹而痛，所以然者，责其极虚故也。
PCI术后再狭窄属于中医“血瘀证”范畴。其发病理
论涉及瘀、痰、虚等多个方面，病机为脏气亏虚为本，
痰瘀阻滞为标。治法理论则主要是以活血化瘀、豁痰
去浊、兼以扶正等方面。因PCI系为外源性创伤，导
致血脉受损，瘀血内停，毒邪壅于局部，与外科的创
伤过程类似，并根据病变局部的感染因素和炎症反
应，提出PCI术后再狭窄的中医发病机制不单纯是
痰瘀和虚，局部特点应为瘀毒互结，兼以正气亏虚。
由于新旧病因的综合作用，再次心脉闭阻的可能增
加，这可能是再狭窄形成的另一主要机制。气能生
血，亦能行血，故在活血化瘀、豁痰去浊的同时兼以
补气之药则效果更佳。而本研究运用伤寒方桃核承
气汤为基础的改良方中大黄、芒硝为软坚散结要药，
防治毒邪壅于局部、防止增生，预防再狭窄共为君
药；桃仁为活血祛瘀之药，水蛭为破血逐瘀之药，金
银花为清热解毒之药共为臣药；肉桂补元阳、暖脾
胃、除积冷、通血脉为佐药；炙甘草入心经，能补益气
血以鼓动血脉，又有调和诸药之功效为使药。该方的
组成特点是活血化瘀，通下瘀毒兼扶正气。
冠脉再狭窄是一种医源性疾病，通常在PCI术
后3～6个月发生，单纯球囊扩张后发生率30％～
50％[32；冠脉金属裸支架置人术后lo％～40％的患
者可发生支架内再狭窄‘‘3；药物洗脱支架如雷帕霉
素洗脱支架的再狭窄发生率仍有5％～10％[5]。研
究表明，PCI术后再狭窄的机制主要为：血栓形成、
炎症反应、血管平滑肌增殖、细胞外基质及胶原纤维
过量增生、血管重塑等。上述各环节互相影响，最终
导致再狭窄。
目前认为血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖和
迁移、血管外膜的重塑以及细胞外基质的生成是
PCI术后再狭窄的主要机制，同时也是防治的热点
和难点[10。。研究发现，细胞内信号传导通路与
VSMCs增殖密切相关，已得以了广泛的关注口¨。
STAT3是在1994年作为白细胞介素一6(IL一
6)信号传递中的急性期反应因子(acute—phase
responsefactor，APRF)被纯化的。STAT3广泛表
达于不同类型的细胞和组织中，参与细胞生长、恶性
转化、凋亡等生理功能的调控[6]。STAT3与心肌细
胞的发育、调节心肌收缩性及血管生成等方面有密
切的关系，活化的STAT3可促进心肌保护因子、凋
亡相关基因的表达，在心肌细胞的凋亡和存活中起
重要作用。研究表明STAT3可调节心肌组织中血
管内皮生长因子(VEGF)的表达，促进血管生成以
及心肌细胞与内皮细胞的相互作用，在心肌的代偿
性肥大中起到重要作用[7]。STAT3不仅是血管生成
的一种调节因子，还能诱导一氧化氮合酶的合成提
高N0量，以及介导抗凋亡基因bcl一2xl、超氧化物
歧化酶(SOD)的生成，提高应激条件下心肌细胞
的存活能力[8一]。NO具有扩张血管、抑制多种血细
胞对内皮的黏附和损伤、抑制血小板活化聚集及抗
血管平滑肌细胞增生等作用。
本实验研究表明，桃核承气改良方能有效地降
低PCI术后兔STAT3表达，提高血清NO量，抑
制血管内皮增生，促进损伤内膜修复，从而防止损伤
内皮增生，预防PCI术后再狭窄。本实验对桃核承
气改良方防治PCI术后再狭窄的可行性做了初步
研究，具体作用机制需要进一步探讨。
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益气通络方配合芪参益气滴丸治疗冠心病心绞痛临床观察
赵小敏
(天津第一中心医院，天津300192)
冠心病心绞痛的发生系冠状动脉粥样硬化所致
血管狭窄、阻塞不畅引起心肌缺血缺氧的临床综合
征。笔者自拟中药益气通络方配合芪参益气滴丸治
疗冠心病心绞痛，并与西药对照组进行比较，观察临
床症状，心电图的改善，现报告如下。
1临床资料
1．1一般资料：110例患者均为2004年9月至2007
年9月本院门诊及住院患者，随机分为治疗组和对
照组。治疗组55例，男34例，女21例，年龄48-79
岁，平均57．3岁，病程0．5～16年，平均6．9年，初发
劳力性心绞痛3例，稳定劳力性心绞痛52例；合并高
脂血症31例，高血压10例，陈旧性心肌梗死4例。对
照组55例，男35例，女20例，年龄47--．,80岁，平均
57．7岁，病程0．5～18年，平均6．7年，初发劳力性
心绞痛5例，稳定劳力性心绞痛50例，合并高脂血症
28例，高血压12例，陈旧性心肌梗死3例。
1．2诊断及纳入标准：参照《冠心病心绞痛疗效评
定标准》[1]的诊断标准。在病例的诊断选择上，包括
典型与不典型心绞痛，心电图检查符合心肌缺血的
冠心病诊断标准。两组病例属于稳定劳力性一U绞痛、
初发劳力性心绞痛。纳入病例不包括心肌梗死发作
期，中度以上高血压、重度心肺功能不全，频发与持
续性房颤、房扑、频发性室性早搏，室上性心动过速。
两组患者心功能分级采用纽约心脏分级(NYHA)
均为I、I级，两组患者性别、年龄、病程和心功能等
经统计处理，差异均无显著性意义(P>0．05)，具有
可比性。
中医证候诊断标准：气虚血瘀症[2]，主证：胸痹
心痛，胸闷，心悸、气短等。次证：面色觥白，气短乏
力，自汗出。舌暗有瘀斑或瘀点，脉沉细。
2方法
2．1治疗方法：治疗组采用自拟益气通络方[组成：
党参20g、丹参30g、檀香10g、血竭1g(冲)、川
芎6g、瓜蒌20g、当归12g]为基本方，阴虚者加天
花粉15g、沙参15g、麦冬10g；痰浊内阻加石菖蒲
IOg、半夏6g、薤白IOg、胆星6g；高血压者加石
决明20g、夏枯草10g、天麻6g；血脂高者加生山
楂15g、何首乌30g。每日1剂(水煎服)，分早、晚
2次温服，每次200mL，同时服用芪参益气滴丸
(天津天士力制药股份有限公司生产，批号
Z20030139)，每次1袋，每日3次。对照组服用消心
痛(天津太平洋制药有限公司生产，批号040905)
10mg，每日3次。两组均以6周为1疗程。
2．2观察方法：治疗期间每日记录血压、心率，心绞
痛次数、持续时间、部位、疼痛程序、疼痛性质、伴发
症状，心电图。
2．3疗效判定：依据文献方法[1]对治疗结果做出评定。
2．3．1症状疗效评定标准：显效，胸痛、胸闷、心悸、
气短等症状消失或基本消失，劳力性心绞痛原为I、
I级者心绞痛基本消失(即在较重的超过日常生活
收稿日期：2008—03—06
作者简介；赵小敏(1964一)，女，天津人，副主任医师，主要从事中西医结合临床及教学研究．
万方数据
桃核承气改良方对家兔血管内皮损伤后信号转导及转录活化
因子3和NO的影响
作者： 张雨， 宫丽鸿， 时广容， 徐琳
作者单位： 张雨(辽宁中医药大学,辽宁,沈阳,110000t)， 宫丽鸿,时广容,徐琳(辽宁中医药大学附属医
院,辽宁,沈阳,110000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200809034.aspx