全 文 ：细胞的量[ 6] , 这些均可促进创面的愈合。消化性溃疡
是因疮疡在体内不易干燥结痂愈合而形成的[ 7] ,使
用微粉化的白芨, 比表面积增大,使疮疡与药物得到
更大的接触, 而提高其治疗效果。
本实验将白芨超微粉与普通粉的抗溃疡效果进
行比较,结果显示, 白芨超微粉的抗溃疡效果显著。
说明白芨在微粉化后溶出度增加,生物利用度增加,
从而提高药理活性和减小用药剂量。中药不论直接
粉碎或其提取物, 往往体积大很难制备现代剂型。微
粉化后,可以减小用药剂量, 缩小药物体积, 对中药
剂型现代化有十分重要的意义。
参考文献:
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丹参总酚酸对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用
林　军2, 3, 冯一中2 ,顾振纶1, 3X 武　慧2, 3, 周文轩3, 4 ,郭次仪3, 4
( 1. 苏州大学医学院 药理教研室, 江苏 苏州　215123; 2. 苏州大学医学院 病理教研室, 江苏 苏州　215123;
3. 苏州中药研究所, 江苏 苏州　215007; 4. 香港保健协会, 香港)
摘　要: 目的　观察丹参总酚酸对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用。方法　通过气管内注射博莱霉素复制小
鼠肺纤维化模型, 给予丹参总酚酸 ig 治疗后,以肺指数、肺组织病理形态及羟脯氨酸 ( Hyp) 水平的测定,观察丹参
总酚酸对小鼠肺纤维化形成的影响。结果　丹参总酚酸治疗后肺泡炎和肺纤维化明显减轻, Hyp 水平比模型组明
显降低 (P < 0. 05、0. 01)。结论　丹参总酚酸能减轻博莱霉素致小鼠肺纤维化程度, 有一定的治疗作用。
关键词: 肺纤维化; 丹参总酚酸; 羟脯氨酸
中图分类号: R286. 1　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0400- 04
Therapeutic effect of total salvianolic acid on mice with pulmonary fibrosis
induced by Bleomycin
LIN Jun
2, 3, FENG Yi-zhong
2, GU Zhen-lun
1, 3, WU Hui
2, 3, CHOV Wen-hsien
3, 4 , Kw ok Chi-yi
3, 4
( 1. Depar tment o f Pharmacolog y, School of M edicine , Soochow U niver sity , Suzhou 215123, China ; 2. Depart ment
of Patholo gy , Schoo l o f Medicine, Soochow Univer sity , Suzhou 215123, China; 3. Soochow
Instit ut e of Chinese Mater ia Medica, Suzhou 215007, China; 4. T he Hong Kong
Association for Healt h Care LTD , Hong Kong , China)
Abstract: Obj ective　T o study the therapeut ic effects of total salvianolic acid on Bleomycin-induced
pulmonary f ibr osis in m ice. Methods　T he pulmonary f ibr osis model w as established by int rat racheal in-
ject ion of Bleomycin. T he lung index , pathomorpholog y, and level of hydroxypr oline ( Hyp) in lung t issue
w er e measured to observe the ef fect of to tal salviano lic acid on pulmonar y f ibro sis of mice. Results　T otal
salv ianolic acid could obv iously reduced alv eo litis and fibrosis. T he lung index w as signif icant ly decreased
in total salvianolic acid g roup compared w ith that in model g roup, and the level of Hyp w as signif icant ly
low er than that in model gr oup ( P< 0. 05 and 0. 01) . Conclusion　T otal salvianol ic acid could have thera-
peutic effects on Bleomycin-induced pulmonary f ibro sis in mice.
Key words : pulmonar y f ibr osis; total salvianolic acid; hydr oxypr oline ( Hyp)
·400· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-05-21基金项目:香港保健协会基金资助项目 ( 20050916-2HK)作者简介:林　军( 1976—) ,男,安徽黄山人,硕士,主要研究方向肺纤维化,现工作单位上海市第一人民医院病理科。
E-mail: f or est s oldier @ sohu. com
* 通讯作者　顾振纶
　　肺纤维化是一种原因不明, 以弥漫性肺泡炎和
肺泡结构紊乱, 最终导致肺泡、肺间质纤维化,可引
发呼吸衰竭。丹参总酚酸是从丹参中分离得到的水
溶性部位, 是一类多酚羟基化合物, 含有丹参酚酸
A、丹参酚酸B 和迷迭香酸等成分[ 1]。丹参总酚酸具
有活血化瘀、抗氧化、调血脂及抗肝纤维化形成等多
种作用。本实验通过复制小鼠肺纤维化模型,观察丹
参总酚酸对小鼠肺纤维化的治疗作用。
1　材料
1. 1　动物: 昆明种小鼠, 180 只, 雌雄各半, 体重
18～22 g , 清洁级,由苏州大学医学院实验动物中心
提供; 实验动物生产许可证号: XCYK (苏) 2002-
0008; 实验动物使用许可证号: SYXK (苏) 2002-
0037。
1. 2　药品与试剂: 博莱霉素 A5, 日本化药株式会
社, 批号 640110, 药品进口注册证号: H20040205;
丹参总酚酸 (质量分数 68%) ,苏州中药研究所植
化室提供;醋酸泼尼松片,江苏徐州平光制药有限责
任公司, 批号: 32022681; 羟脯氨酸 ( Hyp) 测定试
剂,南京建成生物制剂公司。
1. 3　仪器: CX31 光学显微镜, OLYMPU S; 722 型
分光光度计, 上海精密科学仪器有限公司。
2　方法
2. 1　分组、造模及给药[ 2] :昆明种小鼠, 180 只, 随
机分为: 对照组,模型组, 醋酸泼尼松组 ( 6. 67 mg/
kg) , 丹参总酚酸大、中、小剂量组 ( 160、80、40 mg/
kg ) ,每组 30 只。实验小鼠用 4% 水合氯醛 ( 0. 01
mL/ g ) ip 麻醉后,取仰卧固定位,常规消毒,行颈正
中切口,钝性分离暴露气管, 除对照外,各组小鼠气
管软骨环间隙穿刺缓缓注入博莱霉素 ( 5 mg / kg ) ,
对照组注入等体积生理盐水。注药后缝合皮肤, 立即
将小鼠直立旋转 3～5 m in,使药液均匀分布于两侧
肺内, 手术前 1 天及手术后 3 d 连续 im 青霉素
( 8 000 U/只) 4 d。各治疗组造模后次日开始 ig 给
药,对照组与模型组 ig 蒸馏水。
2. 2　肺指数测定:各组动物分别于实验第 7、14、28
天经颈椎离断法处死 10 只, 分离出双肺, 称质量,
计算肺指数[肺指数= 肺质量 ( mg ) /体重 ( g) ]。
2. 3　组织病理学观察:取右肺, 按常规病理学方法
进行固定、包埋、切片。将病理切片进行 HE 染色,然
后根据 Szaopiel 等[ 3]方法将肺泡炎和肺纤维化的程
度分为4级: 0级,无明显改变; 1级,轻度改变, 病变
范围小于全肺的 20%; 2级, 中度改变,病变范围占
全肺的 20%～50%; 3级, 重度改变,病变范围占全
肺的 50% 以上。
2. 4　Hyp 测定: 称取小块肺组织测定试剂盒说明
书进行 Hyp 测定。
2. 5　统计方法:将等级资料转化为计量资料, 采用
SPSS 11. 0 软件进行分析, 实验数据以 x±s 表示,
比较组间差异性,进行 t 检验。
3　结果
3. 1　丹参总酚酸对肺指数的影响:造模后各时间点
模型组小鼠肺指数均高于对照组 ( P< 0. 01) ,第 28
天实测数值增高最显著; 丹参总酚酸及醋酸泼尼松
组小鼠肺指数均比同期模型组显著降低 ( P< 0. 05、
0. 01)。见表1。提示丹参总酚酸及醋酸泼尼松可明
显降低博莱霉素所致肺纤维化小鼠的肺指数。
表 1　丹参总酚酸对博莱霉素致肺纤维化小鼠肺指数的
影响 ( x±s, n= 10)
Table 1　Ef fects of salvianolic acid on lung index in mice
with pulmonary f ibrosis induced by Bleomycin
组别
剂量/
( mg·kg- 1)
肺指数/ ( mg·g- 1)
第 7天 第 14 天 第 28 天
对照 - 7. 318±0. 412 6. 481±0. 562 5. 775±0. 473
模型 - 10. 266±1. 552△△ 10. 030±1. 751△△ 10. 655±5. 213△△
醋酸泼尼松 6. 67 7. 705±1. 278* * 8. 109±1. 279* 6. 391±0. 926*
丹参总酚酸 160 7. 635±1. 157* * 7. 187±1. 434* * 6. 351±1. 037*
80 7. 328±1. 288* * 7. 630±1. 068* * 6. 661±1. 412*
40 8. 028±1. 165* * 8. 464±1. 425* 6. 343±1. 148*
　　与对照组比较: △△P < 0. 01
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　△△P < 0. 01 v s cont rol group
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 v s m odel group
3. 2　丹参总酚酸对肺病理形态的影响:大体观察表
明,对照组双肺呈粉红色,表面光滑,弹性较好。模型
组小鼠第7天双肺呈暗红色,体积较大, 弹性差; 第
14、28天时双肺苍白,体积缩小,硬度增加。其余各
治疗组均轻于模型组。光镜观察所见,对照组肺组织
结构清晰, 肺泡壁未见增厚, 肺泡上皮细胞结构完
整。模型组第7天时肺泡炎明显,肺泡腔见大量巨噬
细胞、中性粒细胞、浆细胞渗出,肺泡间隔增宽,可见
少量成纤维细胞及其基质增生; 第14天时肺泡炎减
轻,肺泡间隔见成纤维细胞及基质大量增多; 第 28
天时肺泡炎轻微,肺泡间隔显著增宽,可见大量成纤
维细胞及胶原纤维增生, 少量巨噬细胞、淋巴细胞和
浆细胞浸润。丹参总酚酸及醋酸泼尼松治疗组小鼠
肺泡间隔增宽较各时间点模型组明显减轻,巨噬细
胞、淋巴细胞和浆细胞浸润较轻, 肺泡结构基本正
常,与模型组相比纤维化程度均有不同程度减轻。第
28天时肺组织改变见图1。评分结果见表2。提示丹
·401·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
图 1　第28天时小鼠肺组织的病理形态变化
Fig. 1　Pathomorphological changes of lung tissue in mice at day 28
表2　丹参总酚酸对肺纤维化小鼠肺泡炎和肺纤维化程度的
影响 ( x±s, n= 10)
Table 2　Effects of salvianolic acid on degree of alveolitis
and pulmonary f ibrosis in mice with pulmonary
f ibrosis ( x±s, n= 10)
组别
剂量/
( mg·kg- 1)
肺泡炎和肺纤维化程度/级
第 7 天 第 14天 第 28天
对照 - 0. 10±0. 32 0. 10±0. 32 0. 2 0±0. 42
模型 - 2. 30±0. 68△△ 2. 10±0. 74△△ 2. 7 0±0. 48△△
醋酸泼尼松 6. 67 1. 00±0. 94* * 1. 20±0. 63* * 1. 2 0±0. 42* *
丹参总酚酸 160 1. 50±0. 71* 0. 90±0. 74* * 1. 7 0±0. 68* *
80 1. 40±0. 70* * 1. 40±0. 52* 2. 0 0±0. 82*
40 1. 50±0. 71* 1. 20±0. 63* * 2. 0 0±0. 82*
　　与对照组比较: △△P < 0. 01;
　　与模型组比较: * P< 0. 05　* * P < 0. 01
　　△△P< 0. 01 v s cont rol group
　　* P < 0. 05　* * P< 0. 01 v s model group
参总酚酸及醋酸泼尼松早期可减轻博莱霉素致小鼠
肺泡炎,晚期可减轻肺纤维化程度。
3. 3　丹参总酚酸对肺 Hyp 水平的影响: 模型组小
鼠肺 Hyp 水平和对照组相比于第 14天开始升高,
第 28天最显著; 丹参总酚酸大剂量治疗后各时间
点 Hyp 水平均比模型组明显降低 ( P < 0. 05、
0. 01) ;丹参总酚酸中、小剂量治疗小鼠后第7、28天
肺 Hyp 水平显著降低 ( P< 0. 01)。给药第14天时
小鼠肺 Hyp 有下降趋势;醋酸泼尼松治疗后虽可见
Hyp 水平比模型组降低, 但无显著差异。见表3。提
表3　丹参总酚酸对肺纤维化小鼠肺组织 Hyp 水平的
影响 ( x±s, n= 10)
Table 3　Ef fects of salvianolic acid on Hyp level
in lung tissue of mice with pulmonary
fibrosis ( x±s, n= 10)
组别
剂量/
( mg·kg- 1)
Hyp / ( Lg·mg- 1)
第 7天 第 14 天 第 28 天
对照 - 0. 40±0. 06 0. 43±0. 19 0. 44±0. 09
模型 - 0. 37±0. 05 0. 61±0. 14△ 0. 66±0. 07△△
醋酸泼尼松 6. 67 0. 34±0. 04 0. 56±0. 10 0. 60±0. 14
丹参总酚酸 160 0. 30±0. 04* * 0. 46±0. 07* 0. 52±0. 14*
80 0. 29±0. 04* * 0. 57±0. 10 0. 52±0. 10* *
40 0. 25±0. 04* * 0. 56±0. 16 0. 45±0. 09* *
　　与对照组比较: △P < 0. 05　△△P < 0. 01;
　　与模型组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　△P < 0. 05　△△P < 0. 01 v s cont rol group
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01 v s m odel group
示丹参总酚酸可降低博莱霉素所致肺纤维化小鼠的
肺 Hyp 水平。
4　讨论
　　经气管注入博莱霉素造成动物肺纤维化, 其病
理过程与人类特发性肺间质纤维化相似,作为肺纤
维化的经典动物模型而被广泛应用[ 4]。博莱霉素致
肺纤维化机制尚未阐明, 但自由基损伤是目前已知
的重要机制 [ 5]。Murrel等 [ 6]报道氧自由基可刺激成
纤维细胞增生。成纤维细胞是分泌胶原蛋白的主要
细胞,其合成与分泌胶原能力的增强或成纤维细胞
·402· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
的大量增殖, 都可能导致胶原总量的增加。因此博莱
霉素致肺纤维化病理过程分两个阶段:早期为肺泡
炎,晚期为肺纤维化。肺泡炎阶段,博莱霉素刺激大
量炎性细胞产生氧自由基、细胞因子和酶参与了肺
损伤, 随后氧自由基刺激成纤维细胞分泌胶原蛋白
形成肺纤维化 [ 7]。Hyp 是机体胶原蛋白的主要成分
之一, 约占其氨基酸总量的 13%, 其他除弹性蛋白
含有少量 Hyp (约1% ) 外,均不含 Hyp。因此组织
中 Hyp 水平可作为其胶原组织代谢的重要指标 [ 8]。
本实验应用博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,
观察发现模型组第7天肺泡炎明显,第14、28天形成
纤维化, 且第 14、28 天 Hyp 水平显著高于对照组
( P< 0. 05、0. 01) , 主要病变与指标都与文献报道一
致[ 9] ,说明动物模型复制成功。
在肺纤维化的治疗上,目前公认疗效确切的糖
皮质激素,早期应用效果好, 中晚期则疗效不佳,且
长期应用有不良反应, 严重影响机体免疫功能, 增加
继发感染和呼吸衰竭的可能性。临床资料显示仅少
于 30% 的患者激素治疗有效 [ 10]。现代实验研究及
临床应用均表明, 丹参在抗肺纤维化中作用确切、效
果显著 [ 11] ,其防治肺纤维化的作用机制与氧自由基
清除有关[ 12]。作为丹参的有效成分丹参总酚酸,同
样具有很强的抗氧化活性[ 1] ,是否也具有抗肺纤维
化的作用尚不清楚。本研究用丹参总酚酸治疗小鼠
肺纤维化,观察发现与模型组相比肺指数明显降低;
病理形态学上早期肺泡炎减轻, 晚期纤维化程度减
轻;肺组织 Hyp 水平显著低于模型组。表明丹参总
酚酸对博莱霉素所致小鼠肺纤维化的发生发展有一
定的抑制作用,其作用机制可能与其抗氧化活性及
抑制成纤维细胞分泌胶原蛋白有关。提示丹参总酚
酸对小鼠肺泡炎及肺纤维化有一定的抑制作用, 为
丹参总酚酸预防和治疗肺纤维化提供了实验依据。
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羟基红花黄色素A促内皮细胞增殖的机制研究
张　岭1 ,宋　艳2 ,李长龄2 ,朱美才3,王　卉4,刘　珂5,朱海波1X
( 1. 中国医学科学院 中国协和医科大学药物研究所,北京　100050; 2. 北京大学药学院 分子与细胞药理系,
北京　100083; 3. 中国人民解放军空军总医院 分子生物学中心 ,北京　100036; 4. 军事医学科学院
微生物流行病研究所,北京　100071; 5. 烟台大学药学院,山东 烟台　264003)
摘　要: 目的　探讨羟基红花黄色素 A ( HSYA ) 对低氧条件下犬血管内皮细胞 ( VEC ) 血管内皮生长因子
( VEGF) 相关信号传导通路的影响。方法　在低氧条件下以 ELISA 法观察 VEGF 抗体及其两种酪氨酸受体 ( F lt -
1 和 KDR) 的抗体对 HSYA 促 VEC 增殖作用及分泌 VEGF 水平的影响; 生物分子相互作用分析法检测 HSYA
与 VEGF、Flt-1 和 KDR 的相互作用;硝酸还原酶法测定 VEC 培养液中 NO、NOS 的量。结果　10 Lg / mL VEGF、
·403·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-06-10基金项目:国家自然科学基金资助项目 ( 30370720) ; 国家“863”计划 ( 2004AA2Z3815)
* 通讯作者　朱海波　Tel: ( 010) 63188106　Fax : ( 010) 63017757　E-mai l: z huhaibo@ imm . ac. cn