全 文 ：【方药研究】
白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素
致肺纤维化小鼠的保护作用

刁保忠，靳维荣，陈建中
(聊城市人民医院制剂科，山东 聊城 252000)
摘要:目的:探讨白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用。方法:建立博莱霉素致小鼠肺纤维化模
型，给予白花丹参茎叶水提取物 ig 治疗后，比较各组肺指数、肺组织病理形态、羟脯氨酸(Hyp)及超氧化物歧化酶(SOD)水平的测
定，观察白花丹参茎叶水提取物对小鼠肺纤维化形成的影响。结果:白花丹参茎叶水提取物和对照组的肺指数、肺泡炎、肺纤维化
的程度、Hyp 及 SOD 均明显低于模型组(P ＜ 0. 05 或 0. 01) ，且白花丹参茎叶水提取物的高、低组接近对照组。结论:白花丹参茎叶
水提取物能减轻博莱霉素致小鼠肺纤维化程度并有一定的治疗作用。
关键词:白花丹参;茎叶;水提取物;肺纤维化
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1006-3250(2012)10-1132-02
The water extraction of Salvia miltiorrhiza for protecting
bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice
DIAO Bao-zhong，JIN Wei-rong，CHEN Jian-zhong
(Preparations Division of Liaocheng People＇s Hospital，Shandong Liaocheng 252000，China)
Abstract:Objective:To investigate therapeutic effects of water extraction of Salvia miltiorrhiza stems and leaves on
bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice． Methods:The model of bleomycin-induced pulmonary fibrosis was established，
and they were given water extraction of Salvia miltiorrhiza stems and leaves by ig，the lung index，lung tissue pathology，
hydroxyproline (Hyp)and superoxide dismutase enzyme (SOD)levels were compared in each group to observe the effects
of water extraction of Salvia miltiorrhiza stems and leaves for bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice． Results:The lung
coefficient，alveolitis，pulmonary fibrosis，Hyp and SOD in water extraction of Salvia miltiorrhiza stems and leaves group
and the control group were significantly lower than the model group (P ＜ 0. 05 or 0. 01) ，and the high or low group for
water extraction of Salvia miltiorrhiza stems and leaves were close to the control group． Conclusion:The water extraction of
Salvia miltiorrhiza stems and leaves can reduce bleomycin-induced pulmonary fibrosis mice，and it has some therapeutic
effects．
Key words:Salvia miltiorrhiza;stems and leaves;water extraction;pulmonary fibrosis
基金项目:山东省科技发展计划项目(2011YD19020)
作者简介:刁保忠(1970-) ，男，山东聊城人，主管药师，从事
药物制剂的研究。
肺纤维化是一种原因不明的慢性、弥散性肺间
质病变，可导致肺泡、肺间质纤维化并引发呼吸衰
竭。白花丹参为唇形科丹参 Salvia miltiorrhiza Bge．
的白花变型，主要分布于泰山及其周边地区。白花
丹参除具有丹参的作用和用途外，在治疗血栓性脉
管炎方面具有独特疗效［1］。丹参总酚酸已初步证
实，对肺纤维化有一定的治疗作用［2］，而白花丹参
的茎叶中含有较高的丹参总酚酸［3］。为综合开发
利用白花丹参药物资源，探讨被废弃茎叶的药用价
值，笔者通过观察白花丹参茎叶水提取物对小鼠肺
纤维化的治疗作用，为其临床提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 药品及试剂
白花丹参于 2011 年 11 月采自泰山东麓，制备
成不同浓度(按生药含量计算)水提物供实验用;博
莱霉素(日本化药株式会社，批号 110510) ;羟脯氨
酸(Hyp)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒均购自南
京建成生物工程研究所。
1. 2 动物清洁级
昆明种小鼠 60 只，雌雄各半，体重 20g !24g，购
于山东省卫生防疫站实验动物中心(合格证号鲁动
质 110403) ，寄养于泰山医学院实验动物中心。
1. 3 分组、造模及给药
将 50 只昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型
对照组、白花丹参茎叶水提取物高、中、低剂量组
(10、20、40mg· kg － 1) ，每组 10 只。各组小鼠戊巴
比妥钠麻醉后，仰卧固定位，行颈正中切口，钝性分
离暴露气管，除对照组外，各组小鼠气管软骨环间隙
穿刺缓缓注入 5 mg·kg － 1博莱霉素，对照组注入等
体积生理盐水。注射后轻轻旋转动物，使药液在肺
内均匀分布，缝合伤口、消毒，待动物清醒后常规饲
养。次日开始灌胃给药，对照组与模型组灌胃等量
蒸馏水，1 次 / d，连续灌胃 30d。
1. 4 观察指标与方法
实验结束时，脱臼处死小鼠分离出双肺，称质量
计算肺指数。肺指数 = 肺质量(mg)/体重(g)。左
肺按常规病理学方法进行固定、包埋、切片。分别进
行 HE 及 Masson 氏三色染色，光学显微镜下观察。
其中利用 Masson 氏三色染色的切片观察肺组织切
片纤维化程度，以百分比表示。然后将肺泡炎和肺
纤维化的程度分级。右叶肺制成组织匀浆进行生化
2311
中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
2012 年 10 月第 18 卷第 10 期
October 2012 Vol． 18. No． 10

检测，制备方法参照文献［4］，称取小块肺组织参照
试剂盒说明进行 SOD 及 Hyp 测定。
1. 5 统计学处理
SPSS17. 0 统计软件处理，计量资料用均数 ± 标
准差(珋x ± s)表示，采用 t 检验，计数资料进行 2检
验，P ＜ 0. 05 表示差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 白花丹参水提取物对小鼠肺组织病理的
影响
观察表明，对照组肉眼下观察，双肺呈粉红色，
表面光滑，弹性较好;光镜观察下，肺组织结构清晰，
肺泡壁未见增厚，肺泡上皮细胞结构完整。模型组
小鼠肉眼下观察，双肺呈暗红色，体积较大，弹性差。
光镜观察下，肺泡炎明显，肺泡间隔间成纤维细胞及
基质大量增多，肺泡间隔显著增宽，可见大量成纤维
细胞及胶原纤维增生，其余各治疗组均轻于模型组。
对照组模型组白花丹参茎叶水提取物高、中、低组小
鼠肺泡间隔增宽较模型组明显减轻，巨噬细胞、淋巴
细胞和浆细胞浸润较轻(Masson 氏三色染色) ，肺泡
结构基本正常，与模型组相比纤维化程度均有不同
程度减轻。
2. 2 白花丹参水提取物对小鼠肺指数的影响
表 1 显示，白花丹参水提取物和对照组实验结
束时的体重明显高于模型组(P ＜ 0. 05) ，白花丹参
水提取物和对照组的肺指数明显低于模型组(P ＜
0. 05) ，提示白花丹参茎叶水提取物可明显降低博
莱霉素所致肺纤维化小鼠的肺指数。
2. 3 白花丹参水提取物对小鼠肺泡炎、肺纤维
化程度的影响
表 2 显示，模型组的肺泡炎和肺纤维化的程度
较对照组明显增加(P ＜ 0. 01) ;白花丹参茎叶水提
取物组各组中肺泡炎评分均明显低于模型组
图 1 各组小鼠肺组织的病理形态变化
表 1 各组实验始末小鼠体重及肺指数变化情况比较(n = 10，珋x ± s)
组 别 例数
剂量
/(g·kg － 1)
体重 /(g)
肺指数
/(mg·g － 1)
对 照 组 10 － 28. 51 ± 0. 62＊＊ 5. 69 ± 0. 45＊＊
模 型 组 10 － 20. 07 ± 1. 56 # 10. 72 ± 2. 30 #
10 10 25. 36 ± 1. 25 * 6. 31 ± 1. 16＊＊
白花丹参 10 20 25. 71 ± 1. 36 * 6. 70 ± 1. 52△＊
水提取物 10 40 26. 25 ± 1. 19 * 6. 37 ± 1. 02 *
注:与对照组比较，△ P ＜ 0. 05，# P ＜ 0. 01;与模型组比较，* P ＜
0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
(P ＜ 0. 05) ，其中高剂量组评分降低最为明显(P ＜
0. 01)。但白花丹参茎叶水提取物各组的肺泡炎、
肺纤维化程度无显著性差异(P ＞ 0. 05)。揭示博莱
霉索可造成胶原组织在肺内的沉积而肺泡炎和肺纤
维化的程度较对照组显著增加，40 g·kg － 1剂量的
白花丹参水提取物能有效地降低博莱霉素致肺纤维
化小鼠肺组织的肺泡炎、肺纤维化程度。
表 2 各组小鼠肺泡炎、肺纤维化、Hyp 及 SOD 比较
组 别 例数
剂量
/(g·kg － 1)
肺泡炎评分
肺纤维化
/%
Hyp
/(nmol·L － 1)
SOD
/(μkat·g － 1)
对 照 组 10 － 0. 67 ± 0. 32＊＊ 4. 51＊＊ 0. 41 ± 0. 05＊＊ 1215. 61 ± 60. 92＊＊
模 型 组 10 － 2. 03 ± 0. 71 # 50. 16 # 0. 67 ± 0. 09 # 854. 70 ± 52. 83 #
10 10 1. 45 ± 1. 23△＊ 15. 35△＊ 0. 43 ± 0. 08 * 916. 49 ± 71. 16△＊
白花丹参 10 20 1. 51 ± 1. 06△＊ 14. 76△＊ 0. 53 ± 0. 06△＊ 1016. 70 ± 61. 39△＊
水提取物 10 40 1. 28 ± 1. 12△＊ 14. 29△＊ 0. 46 ± 0. 07 * 1168. 24 ± 83. 35 *
注:与对照组比较:△ P ＜ 0. 05，# P ＜ 0. 01;与模型组比较:* P ＜ 0. 05，＊＊ P ＜ 0. 01
2. 4 白花丹参水提取物对小鼠肺组织 Hyp 含
量的影响
表 2 显示，治疗 30d 后，模型组小鼠的肺组织
Hyp 含量明显高于对照组和白花丹参水提取物组
(P ＜ 0. 05 或 0. 01) ，尤其是对照组和白花丹参水提
取物组中的高、低剂量组，且白花丹参水提取物的
高、低剂量组与对照组 Hyp 含量变化无显著差异(P
＞ 0. 05)。揭示博莱霉索可造成胶原组织在肺内的
沉积而 Hyp 显著升高，20 g·kg － 1、40 g·kg － 1剂量
的白花丹参水提取物能有效地降低博莱霉素致肺纤
维化小鼠的肺组织的 Hyp 生成。
2. 5 白花丹参水提取物对小鼠肺组织 SOD 活
性的影响
表 2 显示，治疗 30d 后，与模型组比较，白花丹
参水提取物组的小鼠肺组织 SOD 活性显著升高，且
随给药浓度升高呈上升趋势，高剂量组与对照组
SOD 活性无显著差异(P ＞ 0. 05)。提示博莱霉索可
造成胶原组织在肺内的沉积而 SOD 活性显著下降，
40 g·kg － 1剂量的白花丹参水提取物能有效地升高
博莱霉素致肺纤维化小鼠肺组织的 SOD 活性。
3 讨论
根据肺纤维化临床表现，属中医学的“肺痹”、
“肺痿”范畴。目前糖皮质激素是治疗肺纤维化的
(下转第 1135 页)
3311
2012 年 10 月第 18 卷第 10 期
October 2012 Vol． 18. No． 10
中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine

0. 72%。
1. 7 重复性试验
精密移取样品溶液 6 份平行进针，Rg1 和 Rb1
的 RSD 值为 0. 479%和 0. 381%。
1. 8 回收率检查
精密称取已知含量的参苓白术散胶囊散剂，3
个批次各 3 份适量，分别精密加入人参皂苷标准品
Rg1 和 Rb1 适量，按照样品处理方法和色谱条件进
行测定，计算得 Rg1 的平均回收率 105. 69%，RSD
值为 1. 03%;Rb1 的平均回收率 97. 86%，RSD 值为
0. 98%。
2 结果
用 HPLC 方法检测参苓白术散中人参皂苷 Rg1
和 Rb1 的含量，方法的线性好，方法的精密度、稳定
性、重复性好，回收率理想，总体方法较为成熟。
3 讨论
作为方剂的定量检测工作中，君药中人参的主
要检测成分是人参皂苷［3］，茯苓的主要检测成分是
茯苓聚糖，白术的主要检测成分是挥发油，白扁豆的
主要检测成分是总磷脂，薏苡仁的主要检测成分是
薏苡仁酯，其中以人参皂苷的检测方法最为成熟，而
人参皂苷中常用检测的是 Rg1、Re、Rb1 3 种，本文则
选择其中 Rg1 和 Rb1 检测。在检测方法的选择方
面，可见-紫外分光分光度法只能检测总皂苷故予以
排除，在薄层扫描法和 HPLC 的选择中，由于 TLCS
操作环节繁琐，且容易受反应时间温度等外界条件
影响，相比之下 HPLC 的分离过程系统较为封闭，受
外界环境影响很小、操作简单、重复性高，多采用高
效液相色谱联和 UV 检测方法。在实验过程中，曾
对比甲醇-水和乙腈-水作为流动相，在 C18 柱中，
60%甲醇或者 15% 乙腈能够洗脱 Rg1，80% 甲醇或
者 40%乙腈能够洗脱 Rb1，分离度都超过了 1. 1，但
Rg1 的峰形和总共所用的分析时间来说，乙腈-水的
流动相更优越。另外，在浓缩提取过程中皂苷容易
起泡，所以加装防爆头并回收溢出液重蒸，或者可以
在泡沫表面滴加正丁醇用以压制。
在 UV 检测时，人参皂苷以 548nm 处为标志峰，
而甘草、茯苓、桔梗、砂仁、白术都会有干扰，尤其是
甘草的影响最大，可用氧化铝柱、聚酰胺柱或者大孔
树脂来净化，除去部分干扰。
总的来说，人参总皂苷在高效液相色谱检测过
程中，受参苓白术散中其他药物的检测干扰不大，方
法可行。
参考文献:
［1］ 谢久彬 ．参苓白术散临床新用概况［C］．全国第十一次中医药
新技术、新成果、新经验学术交流会论文集，2010:197-198．
［2］ 周篙煜，刘吉成，林琼芳，等 ． HPLC 法测定正骨 1 号片中三七
皂苷 R_1、人参皂苷 Rg _1 及 Rb_1 的含量［J］． 中国药师，
2010，13(8) :1122-1124．
［3］ 王艳杰，越皓，王淑敏，等 ． 高分离度快速液相色谱法检测人
参皂苷的研究［J］． 长春中医药大学学报，2010，26(6) :824-
826．
收稿日期:2012-01-19
(上接第 1133 页)
首选方法，但长期应用可引发感染和呼吸衰竭。丹
参总酚酸是丹参主要的水提取物，具有抗氧化、调血
脂及抗纤维化形成作用。现代实验研究表明，丹参
总酚酸在抗肺纤维化中作用确切、效果显著，其机制
可能与其抗氧化活性抑制成纤维细胞分泌胶原蛋白
有关［5］。
肺纤维化的发生和发展与多种因素有关，脂质
过氧化是肺纤维化发病机制中的关键因素。SOD
是超氧阴离子自由基的清除剂，可抑制自由基启动
的过氧化反应，间接反映了机体清除自由基的能力。
博莱霉素致肺纤维化的重要机制是自由基损伤，氧
自由基可刺激成纤维细胞增生。成纤维细胞是分泌
胶原蛋白的主要细胞。Hyp 是机体胶原蛋白的主要
成分之一，可作为其胶原组织代谢的重要指标。
本研究结果显示，各组小鼠的体重在实验起始
时与实验结束时均有显著差异(P ＜ 0. 05 或 0. 01)。
白花丹参水提取物和对照组实验结束时的体重明显
高于模型组(P ＜ 0. 05)。白花丹参水提取物和对照
组的肺指数明显低于模型组(P ＜ 0. 05) ，且白花丹
参水提取物的高、低组接近对照组。模型组小鼠的
肺组织 Hyp 含量明显高于对照组和白花丹参水提
取物组(P ＜ 0. 05 或 0. 01) ，尤其是对照组和白花丹
参水提取物组中的高、低剂量组，且白花丹参水提取
物的高、低剂量组与对照组 Hyp 含量变化无显著差
异(P ＞ 0. 05) ;白花丹参水提取物组的小鼠肺组织
SOD 活性显著升高，且随给药浓度升高呈上升趋
势，高剂量组与对照组 SOD 活性无显著差异(P ＞
0. 05)。提示高剂量的白花丹参水提取物能明显降
低博莱霉素所致肺纤维化小鼠肺指数，有效地降低
博莱霉素致肺纤维化小鼠肺组织的 Hyp 生成，有效
地升高博莱霉素致肺纤维化小鼠肺组织的 SOD 活
性。因此，白花丹参水提取物能减轻博莱霉素致小
鼠肺纤维化程度，有一定的治疗作用。
参考文献:
［1］ 李允尧，赵华其，陈沪宁，等 ． 山东省白花丹参的植物资源
［J］．中药材，2000，23(2) :69-70．
［2］ 林军，冯一中，顾振纶，等 ． 丹参总酚酸对博莱霉素致肺纤维
化小鼠的治疗作用［J］． 中草药，2008，39(3) :400-403．
［3］ 李正国，石俊英，张中湖 ． 丹参茎、叶中丹酚酸 B 的 HPLC 法
比较分析［J］． 药学实践杂志，2007，25(5) :307-309．
［4］ 陈佰义，姜莉，侯显明 ． 实验性肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞脂
质过氧化先于其细胞因子的释放［J］． 中国病理生理杂志，
2006，16(11) :1228-1230．
［5］ 张瑞，宋建平，李瑞琴，等． 大黄虫丸对肺纤维化大鼠形成阶段
的影响［J］．中国实验方剂学杂志，2011，17(4):131-133．
收稿日期:2012-02-25
5311
2012 年 10 月第 18 卷第 10 期
October 2012 Vol． 18. No． 10
中国中医基础医学杂志
Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
