全 文 ：功能的作用强弱趋势是: 山茱萸/丹皮>
三补方>
熟地/泽泻> 全方>
三泻方> 山药/茯苓;由 ADP
激活后[ Ca2+ ] i与对 ADP 诱导的家兔血小板聚集的
IC50成正相关,即药物对 Ca2+ 释放的抑制越强, 其
抑制血小板聚集的作用越强, 提示该方及其配伍抑
制血小板的 Ca2+ 释放功能,是其抑制血小板聚集的
机制之一。
综上所述, 六味地黄方及其配伍均具有抗血小
板聚集的作用, 其中山茱萸/丹皮药对的作用较其他
配伍更显著。
参考文献:
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1甲氧基钩吻碱抗慢性疼痛作用
黄志毅, 刘 铭,沈 洁,苏燕评, 许 盈,俞昌喜*
收稿日期: 20100318
基金项目:福建省改革与发展委员会产业技术开发项目 ( 2009) ; 福建医科大学重大科研项目 ( ZD009)
作者简介:黄志毅( 1984 ! ) ,男,福建省厦门市人,硕士研究生,主要研究方向为神经精神药物药理学。
T el : 15880268730 Emai l: h zybj@ 163. com
* 通讯作者 俞昌喜 T el: ( 0591) 83569311 Fax: ( 0591) 83569311 Email : chan gx iyu@ mail. f jmu. edu . cn
(福建医科大学药学院 药理学系, 福建 福州 350004)
摘 要:目的 1甲氧基钩吻碱对福尔马林足底注射所致炎性痛及小鼠坐骨神经慢性压榨性损伤 ( CCI) 所致神经
病理性疼痛的作用。方法 建立小鼠福尔马林炎性疼痛模型, 以注射福尔马林后 1 h 内小鼠舔足时间为指标, 观
察 1甲氧基钩吻碱对炎性痛第二相痛反应的影响; 建立小鼠 CCI 模型,于术后第 3 天至术后第 9 天 sc 1甲氧基钩
吻碱,每天 2 次, 连续 7 d,以双足热痛缩足潜伏期比值为指标, 观察 1甲氧基钩吻碱对小鼠足底热痛缩足潜伏期的
影响。结果 1甲氧基钩吻碱具有显著对抗小鼠福尔马林致炎性疼痛第二相痛反应作用, 作用呈剂量依赖性,
ED50为 4
59 mg/ kg。1甲氧基钩吻碱具有显著的抗 CCI 小鼠热辐射痛敏的作用 ,镇痛效应呈剂量依赖性;高剂量
组小鼠给药后 2 d 显效,镇痛疗效持续至停药后 36 h; 术后第 9 天, 1甲氧基钩吻碱镇痛效应 ED50为 3
84 mg/ kg。
结论 1甲氧基钩吻碱具有抗炎性疼痛作用与抗神经病理性疼痛作用。
关键词:钩吻; 1甲氧基钩吻碱; 炎性疼痛; 神经病理性疼痛
中图分类号: R285
5 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2034 04
严重的急、慢性疼痛困扰着数以千万计的患者,
又以慢性疼痛最为多见、最为严重。慢性疼痛主要
有两种类型:炎性疼痛和神经病理性疼痛。药物镇
痛是目前临床上减轻病人疼痛的主要手段之一, 吗
啡等阿片类镇痛药和阿司匹林等解热镇痛抗炎药最
为常用。但阿片类镇痛药易产生耐受性、成瘾性以
及呼吸抑制、减少胃肠蠕动等副作用;阿司匹林等解
热镇痛抗炎药镇痛效力弱, 胃肠道反应、胃溃疡、胃
出血等不良反应严重,其临床应用受限,效果不甚理
想[ 1]。因此,寻找能有效控制疼痛的新型镇痛药是
当前新药研发热点之一。
目前,国内外许多科学家致力于从动植物取材,
开发新型镇痛药。我国中草药资源丰富, 富含药用
天然活性成分。钩吻 Gelsemium elegans ( Gardn.
et Champ. ) Benth. 为马钱科植物胡蔓藤的全草,
俗称断肠草, 盛产于我国闽、粤、桂等地。钩吻提取
物的主要有效成分为吲哚类生物碱, 包括钩吻素子、
甲、寅、卯、辰、丙、丁、戊、己、庚以及胡蔓藤碱甲、乙、
丙、丁等 10多种单体,其毒性大小不同[ 2]。临床和
基础研究表明[ 34] ,钩吻总生物碱具有显著的镇痛作
∀2034∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
用,作用机制可能不同于阿片类或阿司匹林类镇痛
药,效能仅次于吗啡,且无成瘾性、耐受性,无明显副
作用;虽然其无累积性毒性,但治疗剂量却与中毒剂
量较接近, 因而临床应用受到限制。但其显著的临
床疗效,使国内外对其普遍关注。近年对其研发日
趋活跃,开始瞄准其中的单体。本实验室新近分离
得到 1甲氧基钩吻碱 ( gelsevirine, GV) 单体[ 5] , 本
研究探讨 GV 对小鼠坐骨神经慢性压榨性损伤所
致神经病理性疼痛及福尔马林足底注射所致炎性痛
的作用,为其开发应用提供理论依据。
1 材料
1
1 药品与试剂: GV, 本实验室制备, 质量分数为
97
3%。注射用赖氨匹林, 上海新亚药业有限公司
提供。福尔马林溶液,浙江省温州助剂厂产品。
1
2 动物:昆明种雄性小鼠, 体质量 18~ 22 g , 清
洁级, 由上海斯莱克实验动物有限公司提供。光暗
周期 12/ 12 h 的实验室饲养,自由饮食。
1
3 仪器: 小鼠活动观察箱 (自制 ) : 48 cm #
32 cm # 26 cm, 上下无盖, 共分为 12 格,材料为不
透明黑色硬质塑料; 透明观察板 (自制) 52 cm # 44
cm, 材料为透明有机玻璃。PL ! 200 热刺痛仪, 成
都泰盟科技有限公司产品。
2 方法
2
1 药物的配制: 精密称取 GV 55 mg , 加入 3
5
mL 0. 2 mo l/ L HCl 溶解, 以 5 mol/ L N aOH 100

L 调 pH 值至 7,生理盐水定容至 50 mL,配制成终
质量浓度为 10 mg/ mL 溶液;再以生理盐水稀释。
2
2 福尔马林致小鼠炎性疼痛实验: 参照文献方
法[ 6] , 建立小鼠福尔马林致炎性疼痛模型。实验环
境室温 ( 22 ∃ 1) % ,湿度 ( 55 ∃ 10) %。实验小鼠置
于观察箱内适应 3 d,每天 30 min。60 只小鼠随机
分为生理盐水对照组, GV ( 10、2、0
4 mg / kg) 3 个
剂量组,赖氨匹林 ( 100 mg/ kg) 阳性对照组, 每组
10~ 14 只动物。各组 sc 生理盐水或药物 0
5 h
后,小鼠左足底 sc 5% 福尔马林溶液 10
L, 随即录
像记录注射福尔马林后 60 m in 内小鼠的活动情况。
录制完毕后,回放录像,观察到小鼠后爪足底注射福
尔马林溶液后, 均表现出咬舔注射侧后爪、注射侧肢
体抬高、抽搐等行为反应。每组动物观察时间内咬
舔注射侧后爪反应明显分为两个时段, 第一时段从
注射福尔马林溶液后至注射后 10 min (第一相) , 第
二时段为注射后 10~ 60 min (第二相) ;以 5 min 为
一单元统计各小鼠舔足时间 (福尔马林注射足) , 并
合计第一相 ( 1~ 10 m in) 和第二相 ( 10~ 60 min)
两个时相的舔足时间作为痛反应指标 [ 7]。
2
3 小鼠坐骨神经慢性压榨损伤 ( chronic con
st riction injury of sciat ic ner ve, CCI ) 致神经病理
性疼痛实验
2
3
1 热辐射基础痛阈的测定:实验过程中,环境
室温 ( 22 ∃ 1) % , 湿度 ( 55 ∃ 10) %, 痛阈测定时间
为 9: 00 ! 16: 00 时。测定前, 将实验动物置测试环
境中适应 30 min。待动物安静后, 分别测定小鼠左
右两侧足底对热辐射刺激的缩足反应时间即热辐射
缩足反射潜伏期 ( paw w ithdraw al latency, PWL) ,
表示为 L 和 R,以 R/ L 值为指标。连续测试 2 d,
每天 2次, 筛选 4次测试结果中 R/ L 值接近 1的 3
次痛阈平均值为基础痛阈。基础痛阈不合格的动物
( R/ L 值> 1
2或< 0
8) 被剔除。将基础痛阈合格
的动物随机分成假手术组, 模型组, GV ( 10、2
0、
0
4 mg/ kg) 3 个剂量组,每组 10~ 14 只动物。
2
3
2 小鼠 CCI 模型的建立: 参照 Bennet t 等[ 8]
方法,建立小鼠 CCI 模型。小鼠 ip 戊巴比妥钠 75
mg/ kg 麻醉,俯卧位固定, 剃除大腿附近的毛发,酒
精消毒。从小鼠右后肢上部切开皮肤, 直到接近膝
部,钝性分离股二头肌, 充分暴露坐骨神经。用 50
铬制羊肠线穿过坐骨神经, 在神经上打个单结, 再轻
轻结扎第二个单结, 结扎扣的松紧程度以右后肢轻
微的颤动为宜。依次再做两个结环, 每个结环间隔
1 mm。手术完成后, 缝合肌肉和皮肤, ip 青霉素
1
12 # 104 U/ kg 预防感染。假手术组动物仅暴露
坐骨神经并进行穿线操作, 但不实施结扎。
2
3
3 观察指标与给药方法: CCI 模型建立后第 3
天,测定小鼠左右两侧足底热辐射缩足潜伏期, 计算
R/ L 值, 剔除 R/ L> 0
8 的动物。CCI 热痛阈合格
的动物于术后第 3天开始 sc 给药,给药体积为 0
1
mL/ 10 g,连续给药 7 d, 2 次/ d; 第 1次注射药物或
生理盐水 30 min 后测定各组动物左右两侧足热辐
射痛阈,以 R/ L 值为评价指标进行统计学分析。测
定时间为术后第 3、5、7、9、10、11、13天。
2
4 统计学处理: 采用统计软件 SPSS 16
0, 实验
结果用 x ∃ s 表示; 采用 NewmanKeuls 法进行样
本均数两两比较的 q 检验。
3 结果
3
1 GV 抗福尔马林致小鼠炎性疼痛的作用: 在福
尔马林致痛前 30 min sc 药物, 观察药物对小鼠福
尔马林诱发的咬/舔足时间的影响, 结果见图 1。结
果表明, GV 可显著抑制福尔马林致痛第 2相咬/舔
足痛反应,作用呈剂量依赖性(图 2)。
∀2035∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
图 1 福尔马林致痛反应时程图
Fig. 1 Time courses of formalininduced
biting/ licking behaviors
与模型组比较: * * P< 0
01
* * P< 0
01 v s m odel group
图 2 GV 对福尔马林致痛反应第 2相的影响
Fig. 2 Effect of GV against Phase 2 of formalin
induced biting/ licking behaviors
计算不同剂量药物对小鼠的疼痛抑制率[疼痛
抑制率= (对照组舔足时间- 给药组舔足时间) /对
照组舔足时间# 100%] , GV 10、2 mg / kg 剂量组的
疼痛抑制率分别为 57
14% ( P < 0
01)、35
94%
( P< 0
01)。以疼痛抑制率大于 50% 为镇痛有效,
Bliss法计算得到 GV 对第 2 相疼痛抑制作用的
ED 50为 4
59 mg/ kg , 95% 可信区间为 3
60~ 5
96
mg/ kg。GV 对第 1相疼痛反应亦有抑制作用, 10、
2 mg/ kg 剂量组的累计舔足时间与模型组比较差异
显著 ( P< 0
01)。
3
2 GV 对 CCI 致神经病理性疼痛小鼠的治疗作
用:以热辐射缩足痛阈为指标, 观察 GV 对 CCI 致
神经病理性疼痛小鼠的治疗作用, 结果见图 3、4。
图 3显示, GV 10 mg/ kg 剂量组自给药开始, 小鼠
热痛敏逐渐减弱, 痛阈逐渐升高, 其中术后第 9 天
R/ L 值显著增加 ( P< 0
01) , 停药后 36 h 即术后
第 11天, 小鼠手术侧足热辐射诱发的疼痛依然显著
减轻; GV 2 mg / kg 剂量组小鼠术后第 9天的 R/ L
值增加,与模型组相比差异显著 ( P< 0
05)。术后
第 9天, GV 具有显著的抗 CCI 小鼠热辐射痛敏的
作用,镇痛效应呈剂量依赖性 (图 4)。计算不同剂
量药物组小鼠的疼痛抑制率[疼痛抑制率= (给药组
R/ L 均值- 模型组 R/ L 均值) / (假手术组 R/ L 均
值- 模型组 R/ L 均值) # 100% ] , GV 10、2、0
4
mg/ kg 剂量组疼痛抑制率分别为 54
2%、35
7%、
23
3%。以疼痛抑制率大于 50% 为镇痛有效, 按
照 Bliss 法计算得到 GV 的 ED50为 3
84 mg/ kg,
95% 可信区间为 2
73~ 5
07 mg/ kg。
与模型组比较: * P < 0
05 * * P < 0
01,图 4同
与假手术组比较: # # P < 0
01
* P < 0
05 * * P< 0
01 v s m odel group, Fig. 4 is same
# # P < 0
01 v s Sham group
图 3 GV 对 CCI 致痛反应的影响
Fig. 3 Ef fect of GV on CCIinduced thermal hyperalgesia
图 4 GV 对术后第 9天 CCI 致痛反应的影响
Fig. 4 Ef fect of gelsevirine on CCIinduced thermal
hyperalgesia on day 9 af ter operation
4 讨论
研究表明, sc 福尔马林能立即导致 C 纤维自发
活动剧增,经快速的单突触递质传递到脊髓投射神
经元,并继以第二相传入爆发,反映为广动力背角神
经元激活,引发疼痛[ 5] 。该模型能较好模拟临床慢
性严重疼痛, 因而应用广泛。第一相反应主要是直
接刺激 C 纤维所致, 若药物能减少第一相舔足时
间,则提示该药可能具有中枢性镇痛作用。第二相
反应有炎症机制参与, 若药物能降低第二相舔足时
间,则可有具有镇痛抗炎活性。本实验采用该法进
行 GV 对慢性炎性疼痛的镇痛作用研究, 结果表
明, GV 具有抑制该炎性疼痛第一相痛反应与第二
相痛反应的效应, 提示其具有镇痛抗炎活性,镇痛作
用部位可能涉及中枢神经系统。
本实验室建立的小鼠慢性坐骨神经结扎模型,
于术后第 3天出现痛反应, 术后第 9、10天疼痛效应
最为明显,疼痛反应维持至术后 2周以上,与文献报
∀2036∀ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
道的 CCI[ 8] 模型特点相吻合。本实验采用该模型进
行 GV 对神经病理性疼痛的镇痛作用研究, 结果表
明, GV 具有抗神经病理性疼痛所致的热痛敏作用。
综上所述, GV 具有显著对抗小鼠神经病理性
疼痛作用与炎性疼痛作用。GV 的结构与钩吻素
甲、N甲基钩吻素甲极为相似, 因此推测 GV 的半
数致死量可能与钩吻素甲、N甲基钩吻素甲相近
(钩吻素甲和 N甲基钩吻素甲对小鼠的 LD50分别
为 56
2、63
1 mg/ kg[ 10] )。但本实验研究表明, GV
抗炎性疼痛第二相痛反应与抗神经病理性痛反应的
ED 50分别为 4
59、3
84 mg/ kg ,提示 GV 用于治疗
慢性疼痛的治疗指数远大于钩吻总生物碱, 安全性
强,具有开发应用前景。其作用机制有待于进一步
研究。
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苦参碱对小鼠 Lewis 肺癌的影响
郭 斌1 ,申洪波2 , 李 智3
收稿日期: 20100409
基金项目:辽宁省科技厅第二批药物源头创新研究课题 ( 2006226031217)
作者简介:郭 斌( 1969 ! ) ,男,辽宁锦州人,副主任药师,博士,硕士生导师,辽宁医学院附属第一医院药学部主任,主要从事药用资源
开发和筛选研究,已发表论文 5篇。Tel: ( 0416) 4197079 Email : jygu obin@ 126. com
( 1
辽宁医学院附属第一医院, 辽宁 锦州 121000; 2
辽宁医学院附属第二医院,辽宁 锦州 121000;
3
中国医科大学 天然药物研究室, 辽宁 沈阳 110001)
摘 要:目的 研究苦参碱对小鼠 Lew is 肺癌的作用,并初步探讨其作用机制。方法 建立小鼠 Lew is 肺癌模型,
实验分为模型组、不同剂量苦参碱组、环磷酰胺组,计算原发瘤抑制率及肺转移灶数;采用 West ern blott ing 检测原
发瘤组织基质金属蛋白酶 ( MM P2、MMP9) 蛋白表达。结果 苦参碱各剂量组小鼠原发瘤抑制率、肺转移灶数
与模型组比较差异显著 (P < 0
05、0
01) ; 与模型组比较,苦参碱各剂量组 MMP2、MMP9 蛋白表达水平显著降
低 ( P< 0
01)。结论 苦参碱明显抑制小鼠 Lew is 肺癌原发瘤的生长和转移, 可能与其抑制肿瘤组织 MM P2 和
MMP9 蛋白表达有关。
关键词:苦参碱; Lew is 肺癌; M MP2; MM P9
中图分类号: R286
91; R979
1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2037 03
苦参碱 ( matrine) 是从苦豆子中提取的一种生
物碱。多年来的研究证明, 苦参碱具有广泛的药理
学作用,除了具有抗心律失常、抗炎、抗病毒等作用
外,体内外的抗肿瘤活性受到极大关注[ 14] 。研究表
明,苦参碱能抑制人肺癌 SPCA1 细胞的生长和人
肺癌 A549 细胞的增殖, 抑制作用呈浓度依赖
性[ 57] ,但仅局限于体外研究。本实验研究了苦参碱
对小鼠 Lew is 肺癌的抑制作用, 进一步研究其对
Lew is 肺癌原发瘤组织基质金属蛋白酶 2 ( M atrix
metalloproteinases 2, MMP2) 和基质金属蛋白酶
9 ( MMP9) 蛋白表达的影响,以探讨苦参碱对实体
瘤的抑制作用,并初步揭示其体内抗癌作用的分子
机制,为苦参碱应用于肺癌临床治疗提供实验基础
及理论依据。
1 材料
1
1 试药: 苦参碱 (自制,质量分数 98
3%) ;环磷
∀2037∀中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月